Коронавирус кошек эпизоотология патогенез

Обновлено: 19.04.2024

Интерпретация результатов серологических тестов у перитонита кошек. Уничтожение коронавируса в местах содержания кошек. Профилактика инфекционного перитонита у здоровых кошек, зараженных коронавирусом. Фоспренил как препарат противовирусного действия.

Рубрика Медицина
Вид отчет по практике
Язык русский
Дата добавления 21.04.2012
Размер файла 575,2 K

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Эффективность вакцины составляет 50-75% (то есть можно ожидать, что из 100 инфицированных коронавирусом кошек перитонит разовьется у 10, но если вакцинировать все 100 животных, заболеют только 2-5). Вакцина лицензирована только для котят старше 16 недель; однако, многие породистые котята могут к этому времени оказаться инфицированными коронавирусом. Очень важно оградить маленьких котят от инфекции содержанием в изоляции и ранним отъемом, а также использованием для разведения наименее восприимчивых кошек.

Большинство экспериментальных и полевых данных свидетельствует, что эта вакцина является одновременно безопасной и эффективной. Экспериментальные данные также показывают, что эта вакцина в некоторых случаях утяжеляет лечение инфекции, но это станет видно только при последующем естественном заражении.

Собственные исследования

Остановлюсь более подробно на одном случае.

Персидский кот, возрастом два с половиной года, рыжего окраса.

Первоначально поступил в клинику с симптомами легкого недомогания, апатии, при прощупывании живота можно было предположить наличие жидкости в брюшной полости,

Однако аппетит и жажда сохранены. Я взял клинический и биохимический анализ крови, который показал небольшое увеличение АСТ, АЛТ и билирубина.

Примерно через неделю повысилась температура до 40ъ С, количество жидкости в брюшной полости увеличилось, общее состояние угнетенное, слизистые оболочки и кожа иктеричны.

Такая температура держалась несколько дней, аппетит практически отсутствовал, зато была усиленная жажда.

Стали подозревать ИПК, я взял кровь на серологическое исследование, результат оказался положительным.

Хозяйке подробнейшим образом было объяснено, что это за инфекция и что лечение бессмысленно, так как исход практически в 100% случаев летальный, но она настаивала на лечении и, хотя бы, на поддерживающей терапии.

Нами было предложено сделать диагностическую лапаротомию. При вскрытии обнаружено большое количество узелков на брыжейке, сальнике, на серозной поверхности большинства внутренних органов. Перитониальная жидкость соломенного цвета, содержала большое количество белка.

Дальнейшее лечение, а точнее поддерживающая терапия заключалась в внутривенном введении питательных растворов, но в минимальном количестве, витаминотерапия (аскорбиновая кислота, препараты группы В и т.д.), препараты для поддержания печени - эссенциале; для поддержания сердечной и дыхательной деятельности - рибоксин, кокарбоксилаза и т.д.; обязательно иммуностимулятор - фоспренил, кроме того было назначено мочегонные препараты, а также антимикробные средства.

Капельница ставилась 2 раза в день.

Перитониальная жидкость, через несколько дней, вновь стала скапливаться в брюшной полости.

Была очень сильная жажда. Аппетит отсутствовал.

Спустя пять дней начались нервные явления, животное пало.

Фоспренил (Рhosрrenyl)

Фоспренил (Рhosрrenyl) является продуктом фосфорилирования полипренолов хвои. Основной его компонент - динатриевая соль фосфата полипренолов.

Фоспренил обладает широким спектром противовирусного действия как in vitro так и in vivo; повышает устойчивость организма к заболеваниям, вызванным парвовирусами, калицивирусами, герпесвирусами, парамиксовирусами, а также к ряду других вирусов животных.

Препарат модулирует в физиологических пределах функционирование системы естественной резистентности, обладает противовоспалительной активностью, усиливает иммунный ответ на вакцины, является гепатопротектором и детоксикантом, стимулирует рост и развитие животных.

Показания к применению:

Препарат применяют с целью профилактики и лечения вирусных инфекций собак (чумы плотоядных, вирусных энтеритов, инфекционного гепатита и аденовирозов), кошек (панлейкопении, калицивироза и инфекционного ринотрахеита), поросят, молодняка крупного рогатого скота, лошадей, домашней птицы, голубей в составе комплексной терапии. Для предотвращения распространения инфекции в условиях вспышки острого вирусного заболевания. Для неспецифической профилактики заболевания в случае возможных контактов с носителями возбудителей вирусных инфекций.

Дозировка и способ применения:

Фоспренил применяют внутримышечно, подкожно, перорально (при этом дозу следует увеличить вдвое), ректально, внутривенно (при этом дозу следует уменьшить вдвое), при необходимости использовать для промывания глаз и носа.

При лечении вирусных инфекций разовая лечебная доза фоспренила для внутримышечного введения составляет: 0.1мл на 1,0 кг массы тела

Суточная доза - 0,3- 0,4 мл на кг массы тела.

При тяжелых и среднетяжелых клинических формах вирусных инфекций разовая лечебная доза фоспренила для внутримышечного введения должна быть увеличена в два и более раз.

Взаимодействие с другими лекарственными препаратами

При тяжелых и среднетяжелых формах вирусных инфекций необходимо применять препарат в сочетании с антибиотиками, противогистаминными препаратами и симптоматической терапией, направленной на коррекцию водно-солевого и кислотно-щелочного равновесия, детоксикацию организма, нормализацию температуры тела и поддержание функций жизненно важных органов.

Сочетание с препаратами интерферона и индукторами интерферона повышает эффективность лечения.

Не следует применять фоспренил в сочетании со стероидными противовоспалительными средствами (глюкокортикоидными гормонами).

Форма выпуска:

Препарат представляет собой прозрачный или слабо опалесцирующий раствор без механических примесей, бесцветный или с желтоватым оттенком.

Геном всех коронавирусов обладает одинаковой структурой. На 5’ конце 20-22 т.п.о. содержат ген репликазы, в котором закодированы многочисленные ферментативные активности. Продуктами этого гена являются два больших полипептида, pp1a и pp1ab. Структурные белки закодированы на 3’ конце генома и занимают одну треть от всего генома.
Жизненный цикл вируса. Коронавирусы, попав в организм, контактируют со специфическими клеточными рецепторами хозяина с помощью своего spike-белка. Это запускает изменения структуры spike, что в свою очередь приводит к слиянию между вирусной и клеточной мембраной, а это заканчивается введением нуклеокапсида в клетку хозяина. При проникновении в клетку хозяина начинается активная трансляция гена репликазы на рибосомах в цитоплазме. Получающиеся многочисленные ферменты, как считается, играют роль в метаболизме РНК коронавируса и/или во взаимодействии с процессами, происходящими в клетке хозяина.
При инфицировании коронавирусами, так же как и для всех остальных РНК- содержащих коронавирусов, должна происходить репликация генома вируса и транскрипция РНК. Репликация генома вируса включает синтез полноразмерной отрицательной нити РНК, которая присутствует в низкой концентрации и служит матрицей для полноразмерной геномной РНК. После трансляции всех вирусных белков собирается нуклеокапсид вируса, который одевается оболочкой. Затем вирусные частицы транспортируются на поверхность клетки, где они покидают клетку.

Роль белков коронавируса в патогенезе Spike. С помощью spike-белка коронавирусы прикрепляются к специфическим клеточным рецепторам. Это запускает изменения структуры spike, что в свою очередь приводит к слиянию между вирусной и клеточной мембраной. Spike-белок коронавируса играет существенную роль в проникновении вируса в клетку, распространении от клетки к клетке, а также определяет тропизм к ткани. Способность коронавируса реплицироваться в определенных типах клеток зависит только от способности взаимодействовать с рецепторами этого типа клеток. Также было показано, что spike является главной детерминантой патогенности.
Мембранный белок. М-белок является основным белком мембраны вириона. Считается, что М-белок, кроме выполняемой им роли в сборке вирусных частиц, влияет на взаимодействие с клеткой хозяина. Белок нуклеокапсида. Является структурным белком, но также принимает участие в транскрипции и патогенезе. Экспрессия N-белка необходима для эффективного образования вирусных частиц из копий ДНК. Маленький белок оболочки. Е-белок является интегральным мембранным белком. Вместе с М-белком он играет важную роль в сборке вирусных частиц. Возможно, из-за активности катион-селективного ионного канала он может усиливать интенсивность вирусного морфогенеза и сборку вирусных частиц. Предполагается, что Е-белок играет роль во взаимодействии вируса и клетки хозяина, индуцируя апоптоз. Белки-репликазы. Эти белки способны влиять на тропизм и патогенез с помощью определения степени вирусной репликации, возможно, через взаимодействие с некодирующими последовательностями вирусного генома, специфическими факторами клеточных типов или с факторами иммунного ответа. Некоторые ферментативные активности могут быть вовлечены в разрушение многих аспектов метаболизма клетки хозяина.

Коронавирусная инфекция кошек

Коронавирусы кошек (FCoVs; семейство Coronaviridae, порядок Nidovirales) представляют собой важные патогены кошек. Они существуют в виде двух разных патотипов. Кишечный коронавирус кошек (FECV) является обычным патотипом, который, как кажется, инфицирует только кишечный тракт и вызывает слабый, часто сложно идентифицируемый энтерит. Вирус эффективно распространяется через зараженные фекалии, и инфекция может проходить бессимптомно в течение года или более (Chang et al., 2010). Частота встречаемости FECV очень высока, достигает до 90% в больших скоплениях кошек по данным, полученным при исследовании сыворотки. Другой патотип, которым был назван вирус инфекционного перитонита кошек (FIPV), возникает только от случая к случаю. Он развивается менее чем в 10% случаев у серопозитивных животных (Brown et al., 2009). В противоположность FECV, FIPV является плохо передающимся и высоковирулентным. Путем эффективного инфицирования макрофагов и моноцитов FIPV может вызывать летальное системное заболевание, вовлекающее многие органы, и в классических случаях сопровождающееся накоплением брюшного экссудата (или асцита).
Специфические генетические детерминанты такого исхода болезни все еще не описаны. На настоящий момент не существует эффективного лечения, вакцины или диагностического протокола, который помог бы разделить авирулентный FECV и FIPV. Генетические вирусные факторы, гипотетически связанные с патогенезом FIPV, уже описаны. Гипотеза мутации in vivo постулирует, что происходит мутация de novo, которая и дает начало вирулентности. Точная природа мутации, отвечающей за патогенез, не была идентифицирована, хотя в опубликованных исследованиях были выдвинуты предположения о различиях в последовательностях spike-белка, а также неструктурных белках 7b и 3с, как детерминантах заболевания (Brown et al., 2009). Также есть данные, что геном коронавирусов, которые способны приводить к инфекционному перитониту, был короче приблизительно на 300 п.о. . После проведения исследований in vitro, описывающих аффинность к макрофагам штаммов FIPV в противоположность штаммов FECV, гипотеза была расширена до предположения, что в геноме кишечного коронавируса (FECV) происходит мутация в желудочно-кишечном тракте, которая дает возможность ему инфицировать макрофаги, распространяться по всему организму и, следовательно, приводить к развитию смертельного заболевания. Однако попытки использовать химерные вирусы, созданные с помощью методов биоинженерии, чтобы идентифицировать вирулентные детерминанты, не увенчались успехом (Haijema et al., 2003). Более того, FCoVs, обнаруженные в различных тканях кошек, зараженных коронавирусом, но у которых инфекция не проявлялась, были неразличимы (Brown et al., 2009).
Гипотеза мутации in vivo патогенеза FIPV широко цитируется, хотя она не была точно подтверждена. Альтернативная гипотеза существования вирулентных и авирулентных штаммов вирусного патогенеза предполагает наличие различных неопасных и патогенных штаммов FECV, присутствующих в популяции, а также прогнозирует развитие заболевания только у тех животных, которые заражены вирулентным штаммом. Также в литературе можно встретить сведения, что вирус может присутствовать не только в кишечнике, но и в других органах клинически здоровых животных.

Диагностика кошачьего коронавируса

Основные диагностические тесты

Серология

Измерение уровня антител в сыворотке является важным диагностическим инструментом для обнаружения FCoV. Однако, поскольку большой процент здоровых кошек обладает антителами к FCoV, тестирование на наличие антител скорее помогает при мерах по избавлению от инфекции, вызванной FCoV (например, выведения из питомника зараженных животных).
Исследование уровня антител у кошек, которые предположительно больны FIP, обладает ограниченным значением для подтверждения диагноза, и результаты следуетинтерпретировать с осторожностью. У некоторых кошек с влажной формой FIP наблюдаются низкие титры или даже полное отсутствие антител к FCoV. Это происходит из-за того, что большое количество вируса в организме кошки связывается с антителами и делает их недоступными для антигена или из-за того, что антитела отсутствуют в асцитной жидкости. Использование анти-7b белков для серологических исследований не имеет какого-либо значительного преимущества.
Поскольку FIP является заболеванием, опосредованным иммунной системой, комплексы антиген-антитело могут циркулировать в сыворотке и асците. Циркулирующие комплексы можно обнаружить с помощью конкурентного ИФА. Однако ценность этого исследования ограничена, поскольку прогностичность положительного результата невысока (67%) и наблюдается очень много ложноположительных результатов (Sharif et al., 2010).

Полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой (RT-PCR) Существует множество публикаций, в которых описано обнаружение FCoV с помощью RT-PCR. Некоторые авторы используют праймеры, комплементарные консервативным участкам вирусного генома, таким как Pol, ген 7b, а также 3' нетранслируемый участок (3' UTR). Тесты RT-PCR, в которых используются такие праймеры, способны обнаружить большинство, если не все штаммы FCoV, и являются значимым инструментом для скрининга вируса в популяциях кошек. В связи с тем что последовательность гена S различается у серотипов I и II, некоторые тест-системы RT￾PCR конструируют таким способом, чтобы различить эти серотипы FCoV.
Поскольку специфические генетические детерминанты биотипов FCoV неизвестны и геном содержит различные однонуклеотидные замены (SNPs), невозможно создать праймеры для ПЦР, с помощью которых можно различать FIPV и FECV и таким образом определять случаи FIP- и FCoV-положительных здоровых кошек. Тест-системы ПЦР, которые используются для обнаружения FCoV в образцах фекалий, являются и чувствительными, и полезными для информации, что у кошки в кишечнике присутствует FCoV. Интенсивность сигнала RT-PCR в фекалиях коррелирует с количеством вируса, присутствующего в кишечнике. Сравнения между образцами РНК, выделенными из суспензии фекалий и суспензии культивированных FCoV- инфицированных клеток, продемонстрировали наличие в фекалиях факторов, которые ингибируют реакцию обратной транскрипции.
Вирус может быть обнаружен в различных тканях и асцитной жидкости. Как считается, наиболее вероятно обнаружение FCoV в печени (48%) и селезенке (42.3%), чем в почках (21.1%). Вдобавок количество РНК, выделенное из свежих тканей, значительно выше, чем из тканей, зафиксированных формалином, этанолом или раствором Буэна. Было обнаружено, что праймеры, сконструированные таким способом, чтобы обнаруживать FIP у больных кошек, способны амплифицировать FCoV у здоровых кошек. Таким образом, результаты RT-PCR следует интерпретировать в соответствии с клиническим статусом кошки, и ПЦР нельзя использовать как единственный тест для диагностики FIP. Существует несколько правдоподобных объяснений ложноотрицательных результатов RT-PCR, включая деградирование РНК, непрохождение реакции обратной транскрипции, а также различия в нуклеотидных последовательностях FCoVs. Инфицирование CCV (коронавирус собак) или TGEV также может объяснить ложноположительные результаты, поскольку эти вирусы обладают высококонсервативными участками.

Гистопатология и иммуноцитохимия

Коронавирусная инфекция собак

Коронавирусный энтерит собак. В настоящее время известно 2 генотипа коронавируса, вызывающего энтерит у собак, CCoV-I и CCoV-II. Гомология этих генотипов составляет 96%, однако у них весьма различаются последовательности гена белка spike. Проведенный анализ выявил, что оба этих генотипа одновременно присутствуют в кишечнике зараженной собаки. В 2005 г. в Италии был описан высоковирулентный пантропический штамм CCoV-II, вызывающий в отличие от обычных генотипов системное заболевание, сопровождающееся летаргией, потерей аппетита, рвотой, кровавой диареей, тяжелой лейкопенией и неврологическими симптомами с последующей смертью через два дня после проявления симптомов. Вскрытие показало наличие тяжелых обширных повреждений легких, печени, селезенки и почек. Респираторный коронавирус собак. Идентифицирован в 2003 г. в респираторном тракте собак из английского питомника. Наиболее близок к бычьему коронавирусу, а гомология с кишечным коронавирусом собак составляет всего 21%. Заражение этим коронавирусом вызывает умеренные респираторные симптомы. Вирус является одним из этиологических агентов питомникового кашля.

Автор: Крылова Дарья Дмитриевна, молекулярный биолог, заведующая отделением ПЦР диагностики независимой ветеринарной лаборатории “Поиск”, г. Санкт-Петербург.

Коронавирусы способны заражать многие виды животных и человека. Эти вирусы были описаны более чем 50 лет назад (описание мышиного коронавируса датировано 1949 г.)

Геном всех коронавирусов обладает одинаковой структурой. На 5’ конце 20-22 т.п.о. содержат ген репликазы, в котором закодированы многочисленные ферментативные активности. Продуктами этого гена являются два больших полипептида, pp1a и pp1ab. Структурные белки закодированы на 3’ конце генома и занимают одну треть от всего генома.
Жизненный цикл вируса. Коронавирусы, попав в организм, контактируют со специфическими клеточными рецепторами хозяина с помощью своего spike-белка. Это запускает изменения структуры spike, что в свою очередь приводит к слиянию между вирусной и клеточной мембраной, а это заканчивается введением нуклеокапсида в клетку хозяина. При проникновении в клетку хозяина начинается активная трансляция гена репликазы на рибосомах в цитоплазме. Получающиеся многочисленные ферменты, как считается, играют роль в метаболизме РНК коронавируса и/или во взаимодействии с процессами, происходящими в клетке хозяина.
При инфицировании коронавирусами, так же как и для всех остальных РНК- содержащих коронавирусов, должна происходить репликация генома вируса и транскрипция РНК. Репликация генома вируса включает синтез полноразмерной отрицательной нити РНК, которая присутствует в низкой концентрации и служит матрицей для полноразмерной геномной РНК. После трансляции всех вирусных белков собирается нуклеокапсид вируса, который одевается оболочкой. Затем вирусные частицы транспортируются на поверхность клетки, где они покидают клетку.

Роль белков коронавируса в патогенезе Spike. С помощью spike-белка коронавирусы прикрепляются к специфическим клеточным рецепторам. Это запускает изменения структуры spike, что в свою очередь приводит к слиянию между вирусной и клеточной мембраной. Spike-белок коронавируса играет существенную роль в проникновении вируса в клетку, распространении от клетки к клетке, а также определяет тропизм к ткани. Способность коронавируса реплицироваться в определенных типах клеток зависит только от способности взаимодействовать с рецепторами этого типа клеток. Также было показано, что spike является главной детерминантой патогенности.
Мембранный белок. М-белок является основным белком мембраны вириона. Считается, что М-белок, кроме выполняемой им роли в сборке вирусных частиц, влияет на взаимодействие с клеткой хозяина. Белок нуклеокапсида. Является структурным белком, но также принимает участие в транскрипции и патогенезе. Экспрессия N-белка необходима для эффективного образования вирусных частиц из копий ДНК. Маленький белок оболочки. Е-белок является интегральным мембранным белком. Вместе с М-белком он играет важную роль в сборке вирусных частиц. Возможно, из-за активности катион-селективного ионного канала он может усиливать интенсивность вирусного морфогенеза и сборку вирусных частиц. Предполагается, что Е-белок играет роль во взаимодействии вируса и клетки хозяина, индуцируя апоптоз. Белки-репликазы. Эти белки способны влиять на тропизм и патогенез с помощью определения степени вирусной репликации, возможно, через взаимодействие с некодирующими последовательностями вирусного генома, специфическими факторами клеточных типов или с факторами иммунного ответа. Некоторые ферментативные активности могут быть вовлечены в разрушение многих аспектов метаболизма клетки хозяина.

Коронавирусная инфекция кошек

Коронавирусы кошек (FCoVs; семейство Coronaviridae, порядок Nidovirales) представляют собой важные патогены кошек. Они существуют в виде двух разных патотипов. Кишечный коронавирус кошек (FECV) является обычным патотипом, который, как кажется, инфицирует только кишечный тракт и вызывает слабый, часто сложно идентифицируемый энтерит. Вирус эффективно распространяется через зараженные фекалии, и инфекция может проходить бессимптомно в течение года или более (Chang et al., 2010). Частота встречаемости FECV очень высока, достигает до 90% в больших скоплениях кошек по данным, полученным при исследовании сыворотки. Другой патотип, которым был назван вирус инфекционного перитонита кошек (FIPV), возникает только от случая к случаю. Он развивается менее чем в 10% случаев у серопозитивных животных (Brown et al., 2009). В противоположность FECV, FIPV является плохо передающимся и высоковирулентным. Путем эффективного инфицирования макрофагов и моноцитов FIPV может вызывать летальное системное заболевание, вовлекающее многие органы, и в классических случаях сопровождающееся накоплением брюшного экссудата (или асцита).
Специфические генетические детерминанты такого исхода болезни все еще не описаны. На настоящий момент не существует эффективного лечения, вакцины или диагностического протокола, который помог бы разделить авирулентный FECV и FIPV. Генетические вирусные факторы, гипотетически связанные с патогенезом FIPV, уже описаны. Гипотеза мутации in vivo постулирует, что происходит мутация de novo, которая и дает начало вирулентности. Точная природа мутации, отвечающей за патогенез, не была идентифицирована, хотя в опубликованных исследованиях были выдвинуты предположения о различиях в последовательностях spike-белка, а также неструктурных белках 7b и 3с, как детерминантах заболевания (Brown et al., 2009). Также есть данные, что геном коронавирусов, которые способны приводить к инфекционному перитониту, был короче приблизительно на 300 п.о. . После проведения исследований in vitro, описывающих аффинность к макрофагам штаммов FIPV в противоположность штаммов FECV, гипотеза была расширена до предположения, что в геноме кишечного коронавируса (FECV) происходит мутация в желудочно-кишечном тракте, которая дает возможность ему инфицировать макрофаги, распространяться по всему организму и, следовательно, приводить к развитию смертельного заболевания. Однако попытки использовать химерные вирусы, созданные с помощью методов биоинженерии, чтобы идентифицировать вирулентные детерминанты, не увенчались успехом (Haijema et al., 2003). Более того, FCoVs, обнаруженные в различных тканях кошек, зараженных коронавирусом, но у которых инфекция не проявлялась, были неразличимы (Brown et al., 2009).
Гипотеза мутации in vivo патогенеза FIPV широко цитируется, хотя она не была точно подтверждена. Альтернативная гипотеза существования вирулентных и авирулентных штаммов вирусного патогенеза предполагает наличие различных неопасных и патогенных штаммов FECV, присутствующих в популяции, а также прогнозирует развитие заболевания только у тех животных, которые заражены вирулентным штаммом. Также в литературе можно встретить сведения, что вирус может присутствовать не только в кишечнике, но и в других органах клинически здоровых животных.

Диагностика кошачьего коронавируса

Основные диагностические тесты

Серология

Измерение уровня антител в сыворотке является важным диагностическим инструментом для обнаружения FCoV. Однако, поскольку большой процент здоровых кошек обладает антителами к FCoV, тестирование на наличие антител скорее помогает при мерах по избавлению от инфекции, вызванной FCoV (например, выведения из питомника зараженных животных).
Исследование уровня антител у кошек, которые предположительно больны FIP, обладает ограниченным значением для подтверждения диагноза, и результаты следуетинтерпретировать с осторожностью. У некоторых кошек с влажной формой FIP наблюдаются низкие титры или даже полное отсутствие антител к FCoV. Это происходит из-за того, что большое количество вируса в организме кошки связывается с антителами и делает их недоступными для антигена или из-за того, что антитела отсутствуют в асцитной жидкости. Использование анти-7b белков для серологических исследований не имеет какого-либо значительного преимущества.
Поскольку FIP является заболеванием, опосредованным иммунной системой, комплексы антиген-антитело могут циркулировать в сыворотке и асците. Циркулирующие комплексы можно обнаружить с помощью конкурентного ИФА. Однако ценность этого исследования ограничена, поскольку прогностичность положительного результата невысока (67%) и наблюдается очень много ложноположительных результатов (Sharif et al., 2010).

Полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой (RT-PCR) Существует множество публикаций, в которых описано обнаружение FCoV с помощью RT-PCR. Некоторые авторы используют праймеры, комплементарные консервативным участкам вирусного генома, таким как Pol, ген 7b, а также 3' нетранслируемый участок (3' UTR). Тесты RT-PCR, в которых используются такие праймеры, способны обнаружить большинство, если не все штаммы FCoV, и являются значимым инструментом для скрининга вируса в популяциях кошек. В связи с тем что последовательность гена S различается у серотипов I и II, некоторые тест-системы RT￾PCR конструируют таким способом, чтобы различить эти серотипы FCoV.
Поскольку специфические генетические детерминанты биотипов FCoV неизвестны и геном содержит различные однонуклеотидные замены (SNPs), невозможно создать праймеры для ПЦР, с помощью которых можно различать FIPV и FECV и таким образом определять случаи FIP- и FCoV-положительных здоровых кошек. Тест-системы ПЦР, которые используются для обнаружения FCoV в образцах фекалий, являются и чувствительными, и полезными для информации, что у кошки в кишечнике присутствует FCoV. Интенсивность сигнала RT-PCR в фекалиях коррелирует с количеством вируса, присутствующего в кишечнике. Сравнения между образцами РНК, выделенными из суспензии фекалий и суспензии культивированных FCoV- инфицированных клеток, продемонстрировали наличие в фекалиях факторов, которые ингибируют реакцию обратной транскрипции.
Вирус может быть обнаружен в различных тканях и асцитной жидкости. Как считается, наиболее вероятно обнаружение FCoV в печени (48%) и селезенке (42.3%), чем в почках (21.1%). Вдобавок количество РНК, выделенное из свежих тканей, значительно выше, чем из тканей, зафиксированных формалином, этанолом или раствором Буэна. Было обнаружено, что праймеры, сконструированные таким способом, чтобы обнаруживать FIP у больных кошек, способны амплифицировать FCoV у здоровых кошек. Таким образом, результаты RT-PCR следует интерпретировать в соответствии с клиническим статусом кошки, и ПЦР нельзя использовать как единственный тест для диагностики FIP. Существует несколько правдоподобных объяснений ложноотрицательных результатов RT-PCR, включая деградирование РНК, непрохождение реакции обратной транскрипции, а также различия в нуклеотидных последовательностях FCoVs. Инфицирование CCV (коронавирус собак) или TGEV также может объяснить ложноположительные результаты, поскольку эти вирусы обладают высококонсервативными участками.

Гистопатология и иммуноцитохимия

Коронавирусная инфекция собак

Коронавирусный энтерит собак. В настоящее время известно 2 генотипа коронавируса, вызывающего энтерит у собак, CCoV-I и CCoV-II. Гомология этих генотипов составляет 96%, однако у них весьма различаются последовательности гена белка spike. Проведенный анализ выявил, что оба этих генотипа одновременно присутствуют в кишечнике зараженной собаки. В 2005 г. в Италии был описан высоковирулентный пантропический штамм CCoV-II, вызывающий в отличие от обычных генотипов системное заболевание, сопровождающееся летаргией, потерей аппетита, рвотой, кровавой диареей, тяжелой лейкопенией и неврологическими симптомами с последующей смертью через два дня после проявления симптомов. Вскрытие показало наличие тяжелых обширных повреждений легких, печени, селезенки и почек. Респираторный коронавирус собак. Идентифицирован в 2003 г. в респираторном тракте собак из английского питомника. Наиболее близок к бычьему коронавирусу, а гомология с кишечным коронавирусом собак составляет всего 21%. Заражение этим коронавирусом вызывает умеренные респираторные симптомы. Вирус является одним из этиологических агентов питомникового кашля.


Коронавирусы содержат плюс-цепи РНК и обладают уникальным механизмом репликации. У них отсутствует нейраминидазная активность и они не связываются с рецепторами, содержащими сиаловую кислоту (сюрин).

В состав коронавирусов входят нуклеокапсид и липопротеидная оболочка, на поверхности которой имеются характерные редко расположенные булавовидные выступы. Высота этих выступов составляет 12-24 нм. Вирионы сферической формы, диаметром 75-160 нм. В вирионах обнаружены также липиды и углеводы клеточного происхождения [2].

Возбудитель относится к семейству Coronaviridae, которое включает два рода:

1) Torovirus: торовирусы лошадей, крупного рогатого скота, свиней и человека;

2) Coronavirus: антигенная группа 1 – вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней и др.; антигенная группа 2 – гемагглютинирующий вирус энцефаломиелита свиней и др.; антигенная группа 3 – вирус инфекционного бронхита кур и др. [1].

Инфекционный перитонит кошек

Коронавирусы кошек (FCoVs; семейство Coronaviridae, порядок Nidovirales) представляют собой важные патогены кошек. Они существуют в виде двух разных патотипов. Кишечный коронавирус кошек (FеCV) является обычным патотипом, который, как кажется, инфицирует только кишечный тракт и вызывает слабый, часто сложно идентифицируемый энтерит. Вирус эффективно распространяется через зараженные фекалии, и инфекция может проходить бессимптомно в течение года или более. Частота встречаемости FеCV очень высока, достигает до 90% в больших скоплениях кошек по данным, полученным при исследовании сыворотки. Другой патотип, которым был назван вирус инфекционного перитонита кошек (FIPV), возникает только от случая к случаю. Он развивается менее чем в 10% случаев у серопозитивных животных. В противоположность FeCV, FIPV является плохо передающимся и высоковирулентным. Путем эффективного инфицирования макрофагов и моноцитов FIPV может вызывать летальное системное заболевание, вовлекающее многие органы, и в классических случаях сопровождающееся накоплением брюшного экссудата (или асцита) [3].

Антигенная структура. Изучена недостаточно. Антигенных вариантов вирус не имеет [2].

Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Во внешней среде вирус инактивируется в течение одного дня. Нагревание и большинство дезинфицирующих средств быстро инактивируют его. Довольно устойчив вирус к фенолам, низкому pH, хорошо сохраняется при низких температурах [2].

Культивирование вируса проводят в культурах клеток легкого эмбриона кошки [2].

Эпизоотология. Инфекционный перитонит кошек часто поражает маленьких котят в питомниках, но наблюдается и у более старших кошек домашнего содержания. Главным источником инфекции являются инфицированные кошки-матери.

Патогенез. Путь передачи коронавируса главным образом алиментарный, через зараженные фекалии. При заражении через ротовую или носовую полость первоначальная репликация вируса происходит в эпителиальных клетках глотки, дыхательного тракта или кишечника. Большинство инфекций на этой стадии протекают бессимптомно. Могут наблюдаться признаки легкого энтерита, но возможна хроническая или тяжелая диарея. Большинство кошек со временем избавляются от вируса, и перитонит не развивается.

Мутация коронавирусного энтерита кошек в перитонит. Споры о происхождении вируса FIPV продолжаются до сих пор, но сегодня доказано, что FIPV возникает в результате мутации возбудителя коронавирусного энтерита кошек (FECV), хотя некоторые авторы до сих пор относят FIPV к высоковирулентному штамму FECV. Теория о мутантном происхождении FIPV также хорошо объясняет спорадичность и неэпидемичность возникновения вирусного перитонита кошек в больших популяциях [10, 11].

Коронавирусы кошек делят на два серотипа, которые определяются антигенными свойствами. Наиболее распространен в кошачьих популяциях вирус серотипа I. Вирусы серотипа II, которые, в отличие от первого, могут хорошо размножаться в культуре клеток, являются рекомбинантами между FCoVs типа I и собачьим коронавирусом. В дополнение к двум серотипам существует большое количество штаммов в каждом серотипе кошачьих коронавирусов. Различия между изолятами в пределах одной группы кошек редко превышают 1–2 %, но в географически удаленных регионах они могут составлять до 20 %. Важно отметить, что обе мутации FECV в FIPV могут произойти в любом штамме каждого из серотипов [12].

При изучении FIPV, выделенных из патологического материала, более чем в 70 % случаев обнаруживалась мутация в гене 3С, который кодирует небольшой белок с неизвестной функцией. Потеря функции этого гена не мешает репликации вируса в естественных условиях или invitro, но, как полагают, радикально меняет клеточный тропизм от клеток эпителия кишечника на макрофаги [4, 7].

Также группой ученых из Утрехтского университета после секвенирования генома большого числа FIPV и FECV была обнаружена вторая мутация, возникающая практически во всех FIPV. Эта мутация состояла из одной или нескольких нуклеотидных замен в гене полипептида S, которые вызывают незначительные изменения в аминокислотном составе последнего. Стоит обратить внимание на то, что комплекс мутаций, вызывающих превращение FECV в FIPV, уникален для каждого животного! Различия вируса имеются даже при возникновении клинической формы вирусного перитонита у котят из одного помета [10].

Диагностика. Предложены реакции РЗГА и РН. Помимо того, разработан метод ELISA для определения АТ к вирусу перитонита кошек. Для этого получены и испытаны монАТ к трем мажорным вирусным компонентам: гликопротеину и протеину пепломера. Положительно реагирующих в конкурентном ELISA 98,5% проб сывороток имели АТ ккапсидному протеину и 4,8% - к протеину пепломера [6].

Лечение. Специфического лечения инфекционного вирусного перитонита кошек не существует. Лечение симптоматическое и может носить только поддерживающий характер. По некоторым данным жизнь животного может быть продлена на несколько месяцев при приме- нении комплекса кортикостероидов, противовирусных и иммуносупрессирующих препаратов [10].

Специфическая профилактика. Предложена вакцина. Биомассу вируса получают путем культивирования клеток селезенки инфицированных животных в суспензионных условиях. Вакцина против инфекционного перитонита кошек разработана на основе температурно-чувствительного мутанта виру­са. При интраназальном введении ее вирус реплицируется только в верхних дыхательных путях и инактивируется в других органах. При испытании его на кошках в эксперименталь­ных условиях из 20 вакцинированных животных после контрольного заражения заболело 3, а в группе невакцинированных - все 12, из них погибло 10. У вакцинированных кошек обра­зовались сывороточные и секреторные ВНА, а также развился клеточный иммунный ответ. Полевые испытания подтвердили безопасность и эффективность вакцинации. В Англии применяется живая вакцина Primucell IPV из ts-мутанта F I PV шт.D F -2. Её вводят в нос. Ре­комендуется иммунизировать котят в возрасте 16 нед и через 3-4 нед.[5].

Коронавирусный энтерит собак

Коронавирусный энтерит собак - высококонтагиозная вирусная болезнь собак, характеризующаяся геморрагическим воспалением желудочно-кишечного тракта, обезвоживанием и общим истощением организма.

Возбудитель. РНК-содержащий вирус, семейства коронавирусов (Caninecoronavirus). Коронавирус собак (КВС) имеет антигенное родство с коронавирусом кошек, свиней и может их инфицировать. КВС не устойчив во внешней среде и сохраняется в каловых массах при комнатной температуре не более 2 суток.

Заражение фекально-оральное заражение наиболее типично, но может быть и орально назальное.

Инкубационный период составляет обычно 1-5 дней, при экспериментальном заражении - не более 2 дней [9].

Патогенез. КВС после внедрения в организм поражает в первую очередь эпителий слизистой оболочки тонкого кишечника и ободочной кишки (при фекально-оральном заражении) или слизистую носоглотки собак (при орально назальном заражении). КВС выделяется с калом в течение 3-16 недель после заражения, иногда дольше.

Клинический признаки. Болезнь может проявляться в 3 формах: сверхострой, острой и скрытой.

Сверхострую форму отмечают в основном при смешанных кишечных вирусных инфекциях (корона-, парво-, ротавирусных и др.) у щенят в возрасте 2-8 недель. Животные погибают в течение 24 - 48 ч.

Острую форму наблюдают также у щенят в раннем возрасте. Болезнь сопровождается рвотой, длительным поносом, анорексией, резким обезвоживанием организма и сердечно-сосудистой недостаточностью. Каловые массы сначала кашицеобразные слизистые, затем водянистые с примесью крови и резким зловонным запахом.

Скрытая (латентная) форма болезни характеризуется длительным бессимптомным течением, при этом могут наблюдаться отдельные маловыраженные клинические признаки вирусных кишечных инфекций: депрессия (угнетенное состояние), потеря аппетита, хронический понос, снижение ритма сердечной деятельности, истощение и др. Скрытая форма может проявляться у собак-вирусоносителей, а также у животных с ослабленной иммунной системой [9].

Диагноз. При коронавирусном энтерите, как и при других вирусных кишечных инфекциях, точный (окончательный) диагноз ставят на основании лабораторных исследований свежих каловых масс. В частности, метод люминесцентной диагностики позволяет установить точный диагноз в течение 2 ч.

При дифференциальной диагностике исключают вирусные и бактериальные кишечные инфекции (парво-, ротавирусные энтериты, чуму плотоядных, вирусный гепатит собак и др.).

Лечение. При коронавирусном энтерите собак проводят комплексное лечение, аналогичное терапии при парвовирусном энтерите.

Иммунитет при коронавирусном энтерите собак непродолжительный, поэтому возможно повторное заражение.

Профилактика. Для активной иммунопрофилактики используют ассоциированные вакцины против корона-, парвовирусного энтерита и других болезней: отечественные - Мультикан-4, Мультикан-6, Мультикан-7 и др.; зарубежные - Нобивак и др.[9].

Библиографический список

Барышников, П. И. Ветеринарная вирусология [Текст] : учебное пособие для студ. вузов, обучающихся по спец. 111201 - "Ветеринария" : рек. УМО по образованию / П. И. Барышников. - М. : ФОРУМ, 2009. – 95 с.

Белоусова, Р.В. Ветеринарная вирусология [Текст]: учебник / Р.В.Белоусова, Э.А Преображенский, И.В. Третьякова - М.: КолосС, 2007.-293 с.

Крылова Д.Д. Инфекционный перитонит кошек // Ветеринарный Петербург [Текст]: / Крылова, Д.Д. – 2012. - №3.

Старченков, C. В. Заразные болезни собак и кошек / Старченков C. В. – СПб. : СПС, 2001. – 368 с.

Супотницкий, М. Феномен антителозависимого усиления инфекции у вакцинированных и переболевших / М. Супотницкий, А. Миронов, Е. Лебединская // Биопрепараты. – № 3. – 2013. – С. 12–25.

Сюрин В. Н. Вирусные болезни животных / А. Я. Самуйленко, Б. В. Соловьев, Н. В. Фомина – Москва, ВНИТИБП, 1998 – С. 162-212.

Терехова, Ю. О. Выявление антител к вирусу инфекционного перитонита кошек (ИПК) иммуноферментным методом / Ю. О. Терехова, Н. А. Рахманина // Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние и дикие животные. – № 1. – 2012. – С. 24–28.

Pedersen, N. C. Feline infectious peritonitis: Newer findings from around the world / N. C. Pedersen // Center for Companion Animal Health, School of Veterinary Medicine,University of California, 2011. – С. 11

Pedersen, N. C. A synopsis of feline infectious peritonitis virus infection // Center for Companion Animal Health, School of Veterinary Medicine, University of California, 2010. – 41 c.

Pedersen, N. C. A review of feline infectious peritonitis virus infection: 1963—2008 / N. C. Pedersen // Journal of Feline Medicine and Surgery, 2009. – 82 c.


Возбудитель . Кошачийкоронавирус (FCoV) – этооднонитчатыйположительныйРНК - вирус ((+) ss RNA), относящийсяксемейству Coronaviridae, роду Alphacoronavirus, вид Alphacoronavirus 1, подвид Feline coronavirus. Имеет две формы: FECV (коронавирус кошачьего энтерита) и FIPV (вирус кошачьего инфекционного перитонита).

Морфология и химический состав. Коронавирусы — РНК-содержащие вирусы, имеющие липопротеиновую оболочку. Коронавирусы содержат плюс-цепи РНК и обладают уникальным механизмом репликации. У них отсутствует нейраминидазная активность и они не связываются с рецепторами, содержащими сиаловую кислоту.

Основным структурным белком коронавирусов является нуклеотидный белок (N), мембранный гликопротеид (МЕ1) и спайковый (отростчатый) гликопротеид (S, E2). Кроме этих белков, присущих всем коронавирусам, у коронавирусов человека и КРС обнаружен дополнительный гликопротеид (gp 65), который не связан ни с S , ни с N полипептидами. У прототипного штамма коронавируса человека ОС43 и коронавируса, вызывающего диарею у новорожденных телят, имеются общие АГ-детерминанты, что установлено в РН, РСК и подтверждено обнаружением сероконверсии у лиц с коронавирусной инфекцией, причем для шт. ОС43 и NCDCV (коронавируса телят) они более близки по внутренним, чем по поверхностным АГ.

Антигенная структура, антигенные свойства, антигенная активность. Имеются 4 группы коронавирусов, различающихся по своим АГ-свойствам. Внутри каждой группы вирусов имеют место постоянные АГ перекресты, однако, вирусы одной группы легко различаются по спе­цифичности к хозяину и клиническим синдромом.

Первый коронавирус кошек (возбудитель инфекционного перитонита) проявляет антигенное родство с коронавирусом собак, тогда как второй коронавирус кошек FICV (возбудитель энтерита кошек) отличен от вируса инфекционного перитонита (FIPV) и не имеет родства с коронавирусами собак. Патогенность двух вариантов вируса довольно четко различается. Так, известны две группы коронавирусов кошек, которые очень близки по биологическим и биохимическим свойствам, но резко различаются по патогенности in vivo. Энтеропатогенные коронавирусы кошек (FCoV) поражают эпителий кишечника и вызывает у молодых животных легко протекающие, но высококонтагиозные энтериты. У переболевших кошек развивается иммунитет, но иногда наблюдается персистенция возбудителя. АТ к вирусу не создают устойчивость, даже ухудшают течение болезни. Характерным является развитие васкулита. По титру АТ нельзя с достоверностью дифференцировать обе формы коронавирусной инфекции.

Сравнивали антигенные свойства двух коронавирусов кошек: инфекционного перитонита (ИПК) и энтерита кошек (ЭК). Особенно большие различия в антигенной структуре выявлены с антителами к белку S в реакции нейтрализации вируса.

Выявлена интересная зависимость между вирулентностью коронавирусов кошек и клеточным тропизмом. Вирулентные штаммы в основном поражают моноциты, авирулентные — реплицируются в эпителии кишечника. Возможно, эти два коронавируса кошек являются биотипами одного и того же вируса. Моноклональные антитела к вирусу инфекционного перитонита кошек (ИПК) типа II нейтрализовали коронавирусы энтерита кошек, собак и вирус ТГС, но не реагировали с вирусом инфекционного перитонита кошек типа I. Иными словами, межвидовое антигенное родство оказалось более тесным, нежели типоспецифическая дивергенция. На примере вируса гепатита мышей показано, что основным местом персистенции вируса является передняя часть верхнего отдела спинного мозга. Реактивация персистирующей вирусной РНК приводила к возникновению клинически выраженного заболевания.

Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Кошачий коронавирус чувствителен к эфиру и детергентам, ультрафиолетовому облучению, температуре свыше 56 0 С, большинству дезинфектантов. Во внешней среде вирус инактивируется в течение одного дня. Нагревание и большинство дезинфицирующих средств быстро инактивируют его. Довольно устойчив вирус к фенолам, низкому pH, хорошо сохраняется при низких температурах.

Культивирование и экспериментальная инфекция. Кошачий коронавирус довольно сложно культивировать. Другие коронавирусы размножаются в клеточных культурах трахеи плода человека. В среду культивирования вносят аминопептидазу. Данные вирусы плохо растут в клеточных культурах. Некоторые варианты адаптированы к культурам клеток почек зеленых мартышек, клеткам Vero, органным культурам, лабораторным животным (мышам-сосункам) [1, 2, 3, 4].

Читайте также: