Культивирование вирусов в ветеринарии

Обновлено: 15.04.2024

3. Использование для вирусологического метода куриного эмбриона

4. Основные способы заражения куриных эмбрионов

–на хорион-аллантоисную
оболочку
–в хорион-аллантоисную полость
–в полость желточного мешка
–в полость амниона
–в тело эмбриона

5. Обнаружение вирусов в курином эмбрионе

• индикация:
– гибель эмбриона
– морфологические изменения
эмбриона/оболочек
– РГА с жидкостью из полостей куриного
эмбриона
• идентификация:
– РН (в т.ч. РТГА)
– РСК

6. Использование культур клеток

Культуры клеток = соматические или
эмбриональные клетки человека или
животных, культивируемые в лабораторных
условиях.
Подразделяют по числу жизнеспособных
генераций на:
- первичные,
- перевиваемые,
- полуперевиваемые.

7. Первичные культуры клеток

• получают из тканей (эмбриональных или
нормальных) многоклеточных организмов.
Такие клетки не способны к делению –
используются однократно.
• В основе получения лежит обработка
протеолитическими ферментами (трипсином)
= первично-трипсинизированные.
• Н-р, эмбриональная ткань человека, почечная
ткань эмбрионов человека и обезьян.

8. Перевиваемые культуры клеток

Перевиваемые = стабильные = готовят из
опухолевых клеток, способных длительно
размножаться in vitro не меняя своих свойств.
Н-р,HeLa – выделены из карциномы шейки матки,
Hep-2 – из карциномы гортани,
Hep-3 – лимфокарцинома,
KB – эпидермоидная карцинома полости рта,
Детройт-6 – костный мозг больного раком
легкого.

9. Полуперевиваемые культуры клеток

– диплоидные клетки различных тканей и
органов, способные к ограниченному
размножению in vitro.
Они сохраняют свои свойства в течение
20-50 пассажей (пересевов) = до года.
При культивировании не претерпевают
злокачественного перерождения –
преимущество перед перевиваемыми →
могут использоваться в производстве
вакцин.

10. Преимущества перевиваемых культур клеток перед первичными:

• продолжительность культивирования – десятки
лет,
• высокая скорость размножения,
• меньшая трудоемкость,
• сохраняют свои свойства в замороженном
состоянии много лет,
• возможность использования международных
линий культур.
• Но: злокачественный характер и возможность
мутаций ограничивает применение для
производства вакцин.

11. Использование культур клеток

Чаще – перевиваемые монослойные
• индикация:
– ЦПД (цитопатическое действие вирусов – любое
изменение клеток монослоя, включая
бляшкообразование и цветную пробу)
– гемадсорбирующая активность монослоя (РГАдс)
– РИФ (= идентификация)
• идентификация:
– РН (в т.ч. РТГАдс)
– РСК
– РИФ

12. Условия культивирования клеток:

Питательные среды сложного состава (среда 199,
Игла), сод-т источники энергии (глюкозу),
минеральные вещества, аминокислоты, витамины,
сыворотку крови, факторы роста.
Клетки чувствительны к изменениям рН – для
контроля рН добавляют индикатор и буферные
растворы.
Соблюдение правил асептики.
Использование лабораторной посуды из
нейтрального стекла – пробирки, флаконы, матрасы
(=флакон 4-х гранной формы)
Добавление антибиотиков к питательной среде для
подавления роста бактерий
Соблюдение оптимальной температуры
культивирования (36-38,5о).

13. Условия культивирования клеток:

14. Обнаружение = индикация вирусов в культуре клеток

• проводят на основе следующих феноменов:
- цитопатогенного действия (ЦПД) вирусов
или цитопатического эффекта,
- образования внутриклеточных включений,
- образования “бляшек”,
- реакции гемагглютинации, гемадсорбции
или “цветной” реакции.

15. ЦПД = видимые под микроскопом морфологические изменения клеток (вплоть до их отторжения от стекла), возникающие в результате

16. Виды ЦПД

• округление и сморщивание клеток –
пикорнавирусы,
• нарастающая деструкция – герпесвирусы,
• пролиферация (образование дырок) –
поксвирусы,
• образование гигантских многоядерных
клеток = симпласты – парамиксовирусы.

17. ЦПД вирусов

18. Включения

= скопление вирионов или отдельных их
компонентов в цитоплазме или ядре
клеток, выявляемые под микроскопом при
специальном окрашивании.
• Н-р, вирус натуральной оспы образует
цитоплазматические включения - тельца
Гварниери;
• вирус бешенства в цитоплазме образует
тельца Бабеша-Негри,
• вирусы герпеса и аденовирусы внутриядерные включения.

19. Тельца Бабеша-Негри

20. Бляшки, или “негативные” колонии

= ограниченные участки разрушенных вирусами
клеток, культивируемых на питательной среде
под агаровым покрытием, видимые как светлые
пятна на фоне окрашенных живых клеток.
• Один вирион образует потомство в виде одной
бляшки.
• “Негативные” колонии разных вирусов
отличаются по размеру, форме, поэтому метод
бляшек используют для дифференциации
вирусов, а также для определения их
концентрации.

21. Реакция гемагглютинации (РГА)

• основана на способности некоторых
вирусов вызывать агглютинацию
(склеивание) эритроцитов за счет вирусных
гликопротеиновых шипов –
гемагглютининов.

22. Реакция гемадсорбции =РГАдс = способность культур клеток, инфицированных вирусами, адсорбировать на своей поверхности

23. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

24. Использование лабораторных животных

взрослые или новорожденные белые мыши,
хомяки, кролики, обезьяны
применяется для выделения тех вирусов, которые
плохо репродуцируются в культуре клеток или
курином эмбрионе,
Вид и способ заражения – от вируса
индикация:
заболевание животного
его гибель
идентификация:
РН

25. Способы заражения лабораторных животных

26. Обнаружение вируса при заражении лабораторных животных

обнаруживают вирус по:
- развитию видимых клинических проявлений – параличи
– рабдовирусы,
-патоморфологическим изменениям органов и тканей –
пикорна-, тогавирусы
- в реакции гемагглютинации с суспензией из органов,
недостаток:
- высокая вероятность контаминации организма
животных посторонними микробами,
- необходимость заражения культуры клеток для
выделения чистой культуры вируса.

27. Прионы

• – белковые молекулы, способные
вызывать разрушение клеток организма
человека и животных.
• Они характеризуются устойчивостью:
- к высоким температурам,
- ионизирующей радиации,
- ультрафиолету.

28. Прионы

Прионный белок может существовать в двух
формах:
нормальная клеточная форма(РrPc) обнаруживается в организме всех
млекопитающих.
Ген, кодирующий этот белок, расположен
в коротком плече 20 хромосомы.
РrPc участвует в передаче нервных
импульсов, в поддержании циркадных
ритмов клетки,

29. Прионы

инфекционная форма (PrPs) –
характеризуется:
- измененной вторичной и третичной
структурой молекулы,
- высокой устойчивостью к нагреванию,
ультрафиолетовому свету, проникающей
радиации и переваривающему действию
протеаз.

35. БАКТЕРИОФАГИ

36. БАКТЕРИОФАГИ

39. Строение бактериофагов

• икосаэдрическая головка,
• хвостовой отросток: внутри – полый
цилиндрический стержень, сообщающийся с
головкой, а снаружи - чехол отростка,
заканчивающийся шестиугольной базальной
пластинкой с шипами, от которых отходят
фибриллы (нити),
• капсид головки и чехол хвостового отростка
бактериофага состоят из полипептидных
субъединиц, уложенных по икосаэдрическому
(головка) или спиральному (отросток) типу
симметрии.

41. Нуклеиновая кислота фага

• Бактериофаги (фаги) содержат ДНК или
РНК:
- двунитевые
- однонитевые
- линейные,
- -кольцевые.
• Большинство – двунитевую ДНК,
замкнутую в кольцо

42. В состав головки входит:

• полипептид, состоящий из аспарагиновой,
глутаминовой кислот и лизина,
• - у некоторых – гистоноподобный белок →
суперспирализация ДНК.

43. В состав сокращающегося чехла входит:

44. Морфологические типы бактериофагов

• I тип (нитчатые)
– без головки (только отросток)
• II тип
– без отростка (только головка)
• III тип
– головка и отросток, короткий без чехла
• IV тип
– головка и отросток, длинный с чехлом, не
сократительный
• V тип
– головка и отросток, длинный с чехлом, сократительный

46. Классификация бактериофагов по спектру действия

• полифаги
– поражают несколько видов
• монофаги (видовые)
– поражают один вид
• типовые фаги
– поражают часть вида (фаговар)

47. Классификация фагов в зависимости от эффекта действия на бактериальную клетку

48. Классификация фагов в зависимости от эффекта действия на бактериальную клетку

49. Классификация фагов в зависимости от эффекта действия на бактериальную клетку

умеренный фаг
лизогения
• без изменения фенотипа бактерии
• с изменением фенотипа бактерии (фаговая конверсия)
лизис
умеренный
дефектный
специализированная трансдукция

50. Взаимодействие фагов с бактериями

• может происходить:
- по продуктивному типу – вирулентные
фаги→фаговое потомство, бактерии
лизируются
- интегративному – умеренные →встраиваются
в геном клетки и сосуществуют с ней,
- абортивному типу →фаговое потомство не
образуется, бактерии сохраняют свою
жизнедеятельность

51. Вирулентные бактериофаги

• попав в бактерию, реплицируются,
формируя 200-300 фаговых частиц, и
вызывают гибель (лизис) бактерии = это
продуктивный тип взаимодействия

52. Взаимодействие вирулентного фага с бактериальной клеткой

53. Этапы взаимодействия вирулентного фага с бактериальной клеткой =продуктивный тип взаимодействия

• 1. Бактериофаги с сокращающимся чехлом
адсорбируются на клеточной стенке с помощью
фибрилл хвостового отростка.
• 2. Чехол хвостового отростка сокращается, и
стержень с помощью ферментов (лизоцима)
просверливает оболочку клетки.
• 3. Через канал стержня бактериофага
нуклеиновая кислота инъецируется из головки
в бактериальную клетку, а капсид бактериофага
остается снаружи бактерии.

54. Взаимодействие бактериофага с оболочкой клетки

55. Этапы взаимодействия вирулентного фага с бактериальной клеткой =продуктивный тип взаимодействия

• 4. Инъецированная внутрь клетки нуклеиновая
кислота подавляет биосинтез компонентов
клетки, заставляя ее синтезировать
нуклеиновую кислоту и белки бактериофага:
- происходит полный распад ДНК бактерии и ее
утилизация.
- если ДНК бактерии не хватает для образования
фаговой ДНК – она синтезируется из компонентов
среды.

56. Этапы взаимодействия вирулентного фага с бактериальной клеткой =продуктивный тип взаимодействия

• 5. Образовавшиеся в разных частях клетки
компоненты бактериофага собираются в
фаговые частицы путем заполнения фаговой
нуклеиновой кислотой пустотелых капсидов
головки
• 6. Сформированная головка соединяется с
хвостовой частью, образуя новый фаг.
• Затем в результате лизиса клетки бактериофаги
выходят из нее.

57. Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой

адсорбция фага на специальных рецепторах КС
(на протопластах не происходит)
проникновение НК
(депротеинизация)
интеграция фаговой НК в геном бактерии
профаг
(фаговый репрессор блокирует транскрипцию)
лизогенная культура
ЛИЗОГЕНИЗАЦИЯ
в дальнейшем – может
индукция профага
продуктивная инфекция

58. Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой

• Умеренные бактериофаги
взаимодействуют с бактериями:
- либо по продуктивному,
- либо по интегративному типу.
• Продуктивный цикл умеренного фага идет
как и у вирулентных фагов, и заканчивается
лизисом бактерий.

59. Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой

• При интегративном типе ДНК умеренного
фага встраивается в хромосому бактерии:
- приобретает форму кольца,
- интегрируется в гомологичную область,
- реплицируется синхронно с геномом
бактерии, не вызывая ее лизиса
(передается при делении бактерии).

60. Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой

• ДНК фага, встроенная в хромосому
бактерии, называется профагом,
• культура бактерий — лизогенной;
• сам процесс – лизогенией
(от греч. lysis – разложение, genea –
происхождение).

61. Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой

• При лизогении фаги не образуются в результате
“выключения“ фаговых генов репрессором
(=низкомолекулярный белок), кодируемым одним
геном фага.
• Профаги могут спонтанно или под действием
индуцирующих агентов (УФ-лучи, митомицин С и
др.) дерепрессироваться, исключаться из
хромосомы. Этот процесс заканчивается
продукцией фагов (индукция профага) и лизисом
бактерий.

62. Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой

• Профаг придает бактерии новые свойства, что
получило название фаговой конверсии (лат.
conversio – превращение).
• Конвертироваться могут:
- морфологические,
- культуральные,
- биохимические,
- антигенные и другие свойства бактерий.
• Например, наличие профага в дифтерийной
палочке обусловливает ее способность
продуцировать дифтерийный экзотоксин.

63. Применение фагов

• для профилактики,
• для лечения инфекций,
• в генной инженерии в качестве векторов для
получения рекомбинантной ДНК,
• для диагностики (например, для
фаготипирования с целью выявления
источника инфекции или внутривидовой
идентификации).

64. Практическое применение бактериофагов

65. Практическое применение бактериофагов

66. Практическое применение бактериофагов

Фагодиагностика
1. Выявление определённого вида бактерий в
патологическом материале
–
реакция нарастания титра фага
2. Идентификация чистой культуры
–
определение вида
–
фагоиндикация
определение фаговара
фаготипирование

67. Выделение бактериофага

материал
• объект внешней среды
• бактериальная культура
бактериальный фильтр
фильтрат
МПБ + чувствительная бактерия
Инкубация 24 час
роста нет – фаг присутствует (очищают фильтрованием)
рост есть – фаг отсутствует

68. Определение активности бактериофагов = фагоиндикация

69. Определение активности бактериофагов = фагоиндикация

71. Определение активности бактериофагов = фагоиндикация

72. Титрование фага по Грациа

• МПА + разведение
фагосодержащего
материала +
чувствительная
культура
• МПА (подложка)
чашка Петри со средой
(в разрезе)

74. Определение активности бактериофагов = фагоиндикация

–Количественные методы:
Б) Метод Аппельмана: готовят десятикратные
разведения фага в питательном бульоне
от 10-2 до 10-8.
• Затем в каждую пробирку добавляют по 0,2мл
бульонной культуры и ряды ставят в термостат.
• После инкубации в термостате учитывают результаты:
= в положительном случае наблюдается
просветление среды.
Разведение в последней пробирке, где произошел
полный лизис культуры, называется титром фага.

75. Титрование фага по Аппельману

76. Фаготипирование бактерий

78. Фаготипирование стафилококков

79. Определение спектра литического действия фага

При изучении темы необходимо обратить внимание на то, что для репродукции вирусов нужна живая клетка, поэтому используют три основные модели: культуру клеток, организм чувствительных животных, ткани развивающихся эмбрионов птиц. Для успешного культивирования вирусов в лабораторных условиях необходимо освоить эти методы.

Культивирование вирусов в организме естественно-восприимчивых животных.

Данный метод имеет ограниченное применение; он используется в случаях, когда для изучаемого вируса нет биологической системы, на которой данный вирус успешно бы репродуцировался, минуя стадию адаптации, и когда есть заинтересованность сократить у выделенного вируса все исходные свойства (преимущественно патогенность и антигенные свойства).

Культивирование вирусов в организме лабораторных животных.

Многие виды лабораторных животных часто невосприимчивы в естественных условиях к определенному вирусу, однако при серийном пассировании и последующей адаптации он изменяет свои первоначальные свойства впроцессе репродукции в организме лабораторного животного. Этот метод до сих пор широко используется при диагностике и изучении ряда заболеванийживотных и человека, вызванных вирусами.

Однако надо иметь в виду, что пассирование ряда эпизоотических штаммов вирусов на лабораторных животных ведет к изменению исходных биологических свойств и в первую очередь к утрате исходной патогенности и иммуногенности для естественного хозяина. Кроме того, этот метод требуетзначительных материальных затрат и создания специальных условий для организации опытов и поддержания эпизоотической безопасности.

Культивирование вирусов в развивающихся эмбрионах птиц.

Использование эмбрионов птиц (главным образом куриных) для изоляции и культивирования вирусов - наиболее доступный и удобныйметод. В эмбрионах способны размножаться многие вирусы, а для некоторых эта система может быть единственной. Эта система содержит четыре субстрата (амнион, аллантоис, хорион-аллантоисная мембрана, желточный мешок), способные обеспечить репродукцию вирусов с различным тропизмом.

На размножение вирусов в эмбрионе оказывают влияние ряд факторов, из которых наиболее существенное значение имеют температура инкубации яиц, возраст эмбрионов, метод заражения, величина заражающей дозы вируса.

Для размножения большинства вирусов температура от+35до + 37 0 С является оптимальной.

Заражающая доза вируса оказывает существенное влияние на его размножение. Наиболее активное его накопление происходит при введении 1000 - 10000 ЭИД 50/мл.

Культивирование вирусов в культуре клеток.

Для выделения вирусов, их идентификации, накопления в качестве антигенов при изготовлении диагностикумов и противовирусных вакцин в вирусологических лабораториях и на биофабриках широко используют культуры клеток.

Культуры клеток применяются в исследованиях по генетике вирусов, при клонировании, получении ts - мутантов вирусов, селекции, контроле живых противовирусных вакцин, изучении проблемы вирус — клетка. Внедрение метода культур клеток в вирусологическую практику отодвинуло на задний план преимущественное использование лабораторных животных и эмбрионов птиц.

Культура тканей - понятие более широкое, включающее и понятие культура клеток, но главным образом отражающее методики культивирования переживающих тканей, т. е. не подвергнутых ферментативной обработке.

Наиболее широко распространено культивирование клеток в монослое, состоящее в том, что с помощью ферментативной обработке (раствором трипсина) выделяют живые клетки из свежих тканей (почечной, легочной,тестикулярной и др.), переносят их в специальные сосуды для культивирования в условиях подкормки этих клеток соответствующей питательной средой. Метод монослойной культуры позволяет выращивать клетки на стенках сосудов. Существует также метод культивирования разъединенных клеток всуспензии.

О наличии вирусных агентов в культуре клеток можно судить по цитопатическому действию, вызываемому этим или другим вирусом.

Вопросы для самоконтроля

Правила подбора естественно-восприимчивых и лабораторных животных для проведения биопробы.

Правила отбора, получения, транспортировки, хранения вируссодержащего материала.

Техника заражения, методы введения инфекционного материала.

Патологические изменения в тканях лабораторных животных под воздействием вирусного агента.

Условия инкубации яиц.

Методы заражения эмбрионов птиц.

Результаты воздействия вирусов на различные ткани эмбрионов птиц.

Условия для культивирования клеток, изолированных из организма.

9.Растворы и питательные среды для приготовления культуры клеток.

10.Виды монослойных культур клеток:

а) первично-трипсинизированные культуры клеток;

в) перевиваемые культуры клеток;

г) диплоидные культуры клеток;

д) суспензионные перевиваемые клетки

11. Хранение культур клеток.

Цитопатическое действие вирусов на клетки, виды цитопатического действия.

Культивирование зоопатогенных вирусов – выращивание зоовирусов в искусственных условиях, проводится путем заражения животных или культурных клеток и тканей [2] .

Культивирование зоовирусов производится в процессе изучения клинической картины и патогенеза вирусных заболеваний, при необходимости диагностики вирусных инфекций, для изготовления диагностических и вакцинных препаратов [3] .

Вирус иммунодефицита человека

История

Впервые культивирование вируса бешенства осуществил В. Гальтье в 1879 году. Для этого кролик был заражен мозгом больной собаки. А. Левенштейн в 1919 году впервые опубликовал данные об успешной передаче вирусов герпеса к кролику от человека [2] .

В. Грютер в 1920 году доказал, что вирус герпеса возможно культивировать на кроликах. Ф. Паркер и В.Н. Най в 1925 году доказали способность вируса коровьей оспы репродуцироваться в тканевой культуре. А.М. Вудрафф и Э. Гудпасчер продемонстрировали возможность культивирования зоовирусов, в частности, вируса оспы птиц, на хорионаллантоисной оболочке эмбрионов кур [2] .

В 1954 году американские вирусологи Дж. Эндерс и Т. Уэллер получили Нобелевскую премию за разработку техники культивирования полиомиелита в тканевых культурах [3] .

Технологии культивирования

Известно, что вирусы способны репродуцироваться только в живых клетках. Установлено существование трех биологических систем в которых возможно культивирование вирусов вообще и зоовирусов в частности:

организм лабораторных животных;
развивающиеся куриные эмбрионы;
культуры клеток [4][3] .

В целях заражения биологической системы конкретным видом вируса из исследуемого материала готовят суспензию. Для освобождения от посторонней микрофлоры (грибов и бактерий) в нее добавляют антибиотики. Готовый материал вводят в биологическую систему [3] .

Лабораторные животные

В качестве лабораторных животных в вирусологических исследованиях используют белых крыс, белых мышей, морских свинок, золотистых хомячков, кроликов и другие виды [3] .

Заражение животных вируссодержащим материалом проводится различными способами: внутримышечно, подкожно, внутривенно, интраназально и прочее. Способ заражения выбирается в зависимости от ткани, поражаемой данным видом вируса (тропизм вируса) [3] .

Репродукцию вируса в организме животного оценивают: по развитию видимых клинических симптомов или по патоморфологическим изменениям тканей и органов. Интенсивность репродукции вирусов показывают реакции гемагглютинации (РГА) с суспензией из органов, содержащих вирусы. Данная реакция основана на способности вирусов вызывать склеивание (агглютинацию) эритроцитов человека, птиц и млекопитающих при взаимодействии вирусных белков с рецепторами эритроцитов [3] .

Заражение развивающегося куриного эмбриона

1. На хорионаллантоисную оболочку; 2. На аллантоисную полость; 3. В амниотическую полость; 4. В желточный мешок; 5. В тело эмбриона [3] .

Развивающиеся куриные эмбрионы

Развивающиеся куриные эмбрионы (РКЭ) пригодные для вирусологических исследований имеют возраст 5–12 дней. Их использование дает возможность изготовить большое количество вируссодержащего материала и используется при производстве вакцин [3] .

Заражения РКЭ производят различными способами:

на хорионаллантоиносную оболочку (ХАО);
на аллантоисную полость;
в амниотическую полость;
в желточный мешок;
в тело эмбриона [3] .

Репродукцию вирусов устанавливают по гибели эмбриона, патологическим изменениям в оболочках и тканях, положительной реакции гемагглютинации (РГА). Гибель эмбриона определяют при прекращении его движения, выявляемое при овоскопировании (просвечивании) [3] .

Погибшие эмбрионы вскрывают. Извлекают их содержимое и проводят патологоанатомическое исследование. Эмбриональную жидкость смешивают с эритроцитами для определения гемагглютинации [3] .

Внутриклеточные включения

1. Цитоплазматические включения при оспе [3] .

2. Внутриядерные включения при аденовирусной инфекции [3] .

Культура клеток

Культура клеток является широко используемой биологической системой для культивирования вирусов. Ее получают из органов и тканей животных, птиц, человека. Клетки, полученные из разнообразных тканей и органов теплокровных животных, размножают вне организма в специальной лабораторной посуде на искусственных питательных средах [3] .

Питательные среды, используемые для данной цели делят на:

ростовые – применяются для выращивания клеточных культур и обогащены сыворотками крови;
поддерживающие – применяются для сохранения монослоя клеток после заражения вирусами[3] .

При выращивании клеточных культур соблюдаются требования строгой антисептики. Кроме того, используется посуда только из стекла нейтрального состава и сложные по составу питательные среды, содержащие минеральные соли, витамины, аминокислоты, глюкозу, сыворотку крови, буферные растворы. Для успешного выращивания клеточных структур в питательную среду добавляют антибиотики для подавления нежелательной микрофлоры. Оптимум температуры культивирования – + 36ºC–38,5ºC [3] .

При заражении культур из сосудов с выросшим монослоем клеток удаляют остатки питательной среды. Затем монослой отмывают раствором Хенкса и вносят в него материал содержащий вирус. Спустя час – полтора остатки вируссодержащего материала удаляют, вносят поддерживающую питательную среду и инкубируют культуру в термостате [3] .

В
настоящее
время
существуют
следующие методы культивирования
вирусов:
■ на
восприимчивых
домашних
и
лабораторных
животных
(телята,
мыши, белые крысы, кролики, морские
свинки, хомяки, цыплята);
■ на развивающихся куриных эмбрионах,
деэмбрионированных яйцах и эмбрионах
других видов птиц;
■ в культурах ткани и клеток.

3. Восприимчивость лабораторных животных к вирусам

4. Восприимчивость лабораторных животных к вирусам

На чувствительность животных к вирусам влияют
следующие факторы.
1. Возраст.
Наиболее
восприимчивы
молодые
животные (мышата, крольчата и др.), так как у них
нет совершенной системы защиты организма.
Однако эмбрионы некоторых животных, находясь в
утробе
матери,
начинают
вырабатывать
специфические антитела.
2. 2. Наличие неспецифических ингибиторов, которые
выполняют защитную функцию организма. В
организме молодых животных низкое содержание
ингибиторов, но с возрастом их концентрация
увеличивается и соответственно повышается
сопротивляемость организма к вирусам.
3. Пол животных. Наиболее чувствительны особи
женского пола — самки (болезнь Марека), менее —
мужского пола (самцы).

1.
2.
3.
4.
На чувствительность животных к вирусам влияют
следующие факторы.
Возраст. Наиболее восприимчивы молодые животные
(мышата, крольчата и др.), так как у них нет
совершенной системы защиты организма. Однако
эмбрионы некоторых животных, находясь в утробе
матери,
начинают
вырабатывать
специфические
антитела.
2. Наличие неспецифических ингибиторов, которые
выполняют защитную функцию организма. В организме
молодых животных низкое содержание ингибиторов, но с
возрастом
их
концентрация
увеличивается
и
соответственно
повышается
сопротивляемость
организма к вирусам.
Пол животных. Наиболее чувствительны особи женского
пола — самки (болезнь Марека), менее — мужского пола
(самцы).
Генетические
линии.
Одни
животные
более
чувствительны, другие — резистентны.

По
генетическим
качествам
лабораторных животных делят на
четыре группы:
1) животные смешанного происхождения,
полученные от разных животноводов,
такие животные гетерогенны;
2)животные,
полученные
непосредственно из одного источника,
однако генетически такие животные
вариабельны;
3) инбредные линии животных
4) однородные гибриды F1

8. Важнейшие вирусные заболевания лабораторных мышей

9. Важнейшие вирусные заболевания лабораторных мышей

В настоящее время безмикробные
животные по динамике роста делятся
на три группы:
I — обезьяны, поросята, цыплята
растут лучше обычных животных
или наравне с ними;
II — крысы, мыши, собаки, кошки
растут
наравне
с
обычными
животными;
III — морские свинки, кролики,
козлята, ягнята растут хуже обычных
животных.

СПФ-животные
-это
животные,
свободные только от патогенных
микроорганизмов.
В
их
организме
имеются
все
необходимые
для
нормальной
жизнедеятельности
бактерии
и
вирусы,
которые
в
совокупности создают группу так
называемой резидентной (полезной)
микрофлоры.
В
настоящее
время
получены
лабораторные
СПФживотные — крысы, морские свинки,
кролики, поросята, птицы

13. Внутримозговое заражение

14. Способы заражения лабораторных мышей. Заражение через желудочно-кишечный тракт

15. Внутрибрюшинное заражение

16. Внутривенное заражение в хвостовую вену

17. Схема внутривенного заражения

18. Подкожное заражение

19. Заражение в яремную вену

20. Условия, влияющие на размножение вирусов в куриных эмбрионах.

1. Температура от 35 до 37 °С является оптимальной для
размножения вирусов гриппа.
2. Возраст эмбриона. В зависимости от вида вируса, способа
заражения и задач исследования используют эмбрионы в
возрасте 8—12 дней.
3.Концентрация введенного вируса существенно влияет на
размножение вируса. Наиболее активное накопление вируса
гриппа А2 отмечается при введении 10000—100000 инфекционных
доз. Введение неразведенного вируса вызывает менее обильное
накопление инфекционного вируса.
4.Метод заражения. При заражении в амнион и желточный мешок
вирус осповакцины накапливается медленно и в низких титрах, а
эмбрионы погибают через 48 ч, поражения на оболочках
появляются в меньшем количестве.

21. Культивирование вирусов на куриных эмбрионах

22. Недостатки метода культивирования вирусов в куриных эмбрионах: ■ куриные эмбрионы могут быть носителями микроорганизмов

(сальмонеллы, туберкулезная палочка), в
том числе вирусов (лейкоз птиц, бронхит
кур и др.) и противовирусных антител;
■
не все вирусы культивируются в
куриных
эмбрионах.

24. Флаконы, чашки и планшеты для клеточных культур

25. Сформировавшиеся бляшки вируса желтой лихорадки на культуре клеток

26. Бляшки вируса животных на клеточной культуре

27. Работа с культурами клеток в стерильной комнате

28. Культура тканей — сборное понятие, обозначающее систему, в которой клетки, ткани или органы сохраняют жизнеспособность или

способность размножаться in vitro более 24 ч. В
зависимости от вида биологического объекта
различают: культуру клеток— термин, который
обозначает рост клеток in vitro и включает в себя
также рост единичных клеток (клетки в культуре не
образуют ткань); культуру тканей или органов —
термин, который обозначает поддержание роста
тканей, зачатков органов или их частей in vitro при
сохранении их дифференцировки, структуры и (или)
функции.

29. 1. Культуры переживающих тканей в жидкой среде и на агаре, которые или вообще не размножаются in vitro, или дают очень слабый

рост, т. е. в них отсутствует
процесс
размножения
клеток.
2. Культуры растущих клеток – клетки
активно
делятся
и
размножаются

30. Недостатки культур тканей

31. Наиболее вероятные эндогенные вирусные контаминанты первичных культур клеток домашних животных (по Сергееву В.А. и авт., 2007)

Происхождение клеток
крупный
рогатый скот
свиньи
куры
собаки
овцы
вирус парагриппа-3
вирус класвирус
сической чумы ньюкаслской
свиней
болезни
вирус чумы
плотоядных
панвирус
пара- вирус
лейкопении
гриппа-3
кошек
реовирус-1
реовирус-1
вирус
ин- вирус
ин- реовирус-1
фекционного
фекционного
бронхита птиц гепатита собак
реовирус-1
вирус ринотрахеита
аденовирус
вирус
лейкоза птиц
вирус
катаральной
лихорадки
пикорна- вирус
кошек
вирус диареи
вирус
болезни
Ауески
вирус
энце- реовирус-1
фаломиелита
птиц
вирус
пограничной
болезни
синцитиальный
вирус кошек
аденовирус
парвовирус
СЕЬО-вирус
лентивирусы
овец
вирус лейкемии
и
саркомы
кошек
герпес-вирус
аденовирус
кошки

Читайте также: