Лейкоз крупного рогатого скота вирус лейкоза крупного рогатого скота

Обновлено: 24.04.2024

от 11 мая 1999 года N 359

Об утверждении Правил по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота

____________________________________________________________________
Утратил силу с 1 сентября 2021 года на основании
приказа Минсельхоза России от 24 марта 2021 года N 156
____________________________________________________________________

Срок действия соответствующего пункта в указанном Перечне - до 1 сентября 2021 года.

Дополнительно см. ярлык "Примечания".

- Примечание изготовителя базы данных.

* Собрание законодательства Российской Федерации, 1998, N 38, ст.4808.

Утвердить и ввести в действие прилагаемые Правила по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота.

в Министерстве юстиции

4 июня 1999 года,

регистрационный N 1799

УТВЕРЖДЕНЫ
Приказом
Минсельхозпрода России
от 11 мая 1999 года N 359

ПРАВИЛА
по профилактике и борьбе с лейкозом
крупного рогатого скота

1. Общие сведения о лейкозе

Лейкоз крупного рогатого скота - хроническая инфекционная болезнь, вызываемая РНК-содержащим вирусом семейства Retroviridae. Инфекционный процесс при лейкозе крупного рогатого скота характеризуется стадийностью. Различают 3 стадии или периода в развитии инфекции: инкубационную, гематологическую и опухолевую. Источником возбудителя болезни являются инфицированные вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС) животные на всех стадиях инфекционного процесса. Животные заражаются при проникновении в организм лимфоцитов, содержащих вирус лейкоза, энтерально и парентерально.

Факторами передачи вируса являются: кровь, молоко и другие материалы, содержащие лимфоидные клетки животных, зараженных вирусом лейкоза крупного рогатого скота.

2. Требования по профилактике лейкоза крупного рогатого скота

2.1. Организации, граждане Российской Федерации, иностранные граждане и лица без гражданства - владельцы животных и продуктов животноводства (далее хозяйства и граждане) обязаны:

- продажу, сдачу на убой, выгон, размещение на пастбищах и все другие перемещения и перегруппировки животных, реализацию животноводческой продукции проводить только с ведома и разрешения ветеринарных специалистов;

- карантинировать в течение 30 дней вновь поступивших животных для проведения серологических, гематологических и других исследований и обработок;

- своевременно информировать ветеринарную службу о всех случаях заболевания животных с подозрением на лейкоз (увеличение поверхностных лимфоузлов, исхудание);

- предъявлять по требованию ветеринарных специалистов все необходимые сведения о приобретенных животных и создавать условия для проведения их осмотра, исследований и обработок;

- обеспечивать проведение предусмотренных настоящими Правилами ограничительных, организационно-хозяйственных, специальных и санитарных мероприятий по предупреждению заболевания животных лейкозом, а также по ликвидации эпизоотического очага в случае его возникновения.

2.2. Ветеринарные специалисты хозяйств обязаны проводить на обслуживаемой территории ветеринарные мероприятия по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота в соответствии с настоящими Правилами.

Контроль за выполнением мероприятий по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота осуществляют государственные ветеринарные инспекторы районов (городов), главные государственные ветеринарные инспекторы субъектов Российской Федерации.

3. Эпизоотологический контроль и постановка диагноза на лейкоз

3.1. Благополучными по лейкозу считают фермы, населенные пункты и административные территории (районы, области, края, республики), в которых при проведении плановых диагностических исследований, а также при убое животных на мясокомбинате не выявляются больные лейкозом животные.

3.2. Контроль за благополучием поголовья скота осуществляют ветеринарные специалисты хозяйств, государственной ветеринарной службы и мясокомбинатов на основании:

- показателей послеубойной экспертизы на мясокомбинатах;

- данных экспертизы при внутрихозяйственном убое животных, вскрытиях трупов животных;

- результатов плановых серологических и гематологических исследований на лейкоз;

- результатов контрольного убоя животных с повышенным содержанием лимфоцитов в 1 мкл крови и патоморфологических исследований материалов (лимфоузлы, селезенка, почки, сердце и др.).

3.3. Первичный диагноз в благополучном по лейкозу хозяйстве устанавливается на основании положительных результатов серологического и гематологического или патоморфологического исследований.

3.4. Для определения благополучия поголовья скота руководители племенных и нетелиных комплексов, владельцы, занимающиеся реализацией животных, обязаны обеспечить ежегодное однократное проведение клинических осмотров и серологических исследований всех животных старше 6-месячного возраста, а в остальных хозяйствах контроль за благополучием по лейкозу осуществляют путем ежеквартального клинического осмотра и по результатам ветсанэкспертизы при убое или патолого-анатомическом вскрытии павших животных.

Быки-производители всех категорий хозяйств подлежат исследованию на лейкоз серологическими методами не менее двух раз в год с интервалом 6 месяцев.

Животных-продуцентов крови, эндокринного сырья, коров - доноров эмбрионов, а также животных, используемых для получения гипериммунных сывороток и сывороток крови для культивирования клеток, исследуют два раза в год с интервалом 6 месяцев.

3.5. Животных, принадлежащих гражданам, проживающим на территории хозяйств или в отдельных населенных пунктах, исследуют на лейкоз одновременно с проведением этой работы на фермах, а также в случаях подозрения на заболевание животных лейкозом.

3.6. В случаях выявления в благополучных хозяйствах животных, инфицированных ВЛ КРС, их изолируют от общего стада в отдельную группу и проводят клинико-гематологические исследования по уточнению диагноза. При отсутствии у инфицированных животных клинико-гематологических изменений, характерных для лейкоза, остальное поголовье данного хозяйства исследуют серологическим методом через 6 месяцев.

3.7. Из благополучных по лейкозу хозяйств (отделение, ферма) животные реализуются без ограничений. При этом за 30 дней до вывода животных из хозяйства их подвергают серологическому исследованию на лейкоз.

4. Ограничительные мероприятия в пунктах,
неблагополучных по лейкозу

4.1. Хозяйства, в том числе хозяйства граждан, в которых установлено заболевание животных лейкозом, в соответствии с пунктом 3.3, по представлению главного государственного ветеринарного инспектора района (города) решением местной администрации объявляют неблагополучными и вводят в них комплекс ограничений, препятствующих распространению инфекции. Одновременно утверждается комплексный план оздоровления неблагополучного хозяйства, фермы, стада и др.

4.2. В плане оздоровительных мероприятий отражают эпизоотическое состояние хозяйства или населенного пункта (степень распространения инфекции, наличие больных животных и т.д.), предусматривают масштабы и сроки проведения хозяйственных, специальных ветеринарных и других необходимых мероприятий, определяют методы и сроки оздоровления неблагополучных стад, назначают ответственных за проведение отдельных видов работ.

4.3. По условиям ограничений не допускается:

- перегруппировка крупного рогатого скота внутри хозяйства без разрешения ветеринарного специалиста, обслуживающего хозяйство (населенный пункт);

- использование быков-производителей для вольной случки коров и телок;

- использование нестерильных инструментов и аппаратов при ветеринарных и зоотехнических обработках животных;

- вывод (вывоз) животных из стада, фермерского и индивидуального хозяйства для племенных и репродуктивных целей без разрешения ветеринарного специалиста, обслуживающего данное хозяйство или населенный пункт.

4.4. Молоко от инфицированных и остальных коров оздоравливаемого стада (фермы, индивидуального подсобного хозяйства, фермерского хозяйства) сдают на молокоперерабатывающий завод или используют внутри хозяйства после пастеризации в обычном технологическом режиме. После обеззараживания молоко используется без ограничений.

5. Оздоровительные мероприятия в неблагополучных
по лейкозу животноводческих хозяйствах

5.1. Оздоровительные мероприятия в неблагополучных по лейкозу хозяйствах, в т.ч. фермерских (отделение, ферма, скотный двор), проводят путем изоляции зараженных ВЛ КРС и немедленной сдачи на убой больных животных.

По результатам серологического исследования, полученным перед началом оздоровительных мероприятий, определяют варианты борьбы с лейкозом.

5.2. В хозяйствах, где выявлено до 10% зараженных и больных лейкозом животных, их немедленно сдают на убой.

Последующие серологические исследования животных этого стада проводят через каждые 3 месяца с обязательным удалением инфицированных животных.

5.3. В хозяйстве, где выявлено до 30% коров и нетелей, зараженных ВЛ КРС, последних размещают отдельно от здоровых животных на отделении, ферме, скотном дворе.

Инфицированных животных через каждые 6 месяцев исследуют гематологическим методом на лейкоз. Животных с изменениями крови, характерными для лейкоза, признают больными, изолируют и сдают на убой.

Коров и нетелей, не инфицированных вирусом лейкоза, в последующем исследуют только серологическим методом с интервалом 3 месяца. После каждого исследования вновь выявленных положительно реагирующих животных переводят в группу инфицированных коров.

5.4. В хозяйстве, где выявляют более 30% коров и нетелей, зараженных ВЛ КРС, и нет условий проводить оздоровительные мероприятия согласно п.7.3, всех взрослых животных исследуют только гематологическим методом через каждые 6 месяцев.

Одновременно организуют работу по созданию стада, свободного от ВЛ КРС, путем замены инфицированных коров здоровыми животными.

5.5. Во всех категориях хозяйств, где установлена инфекция, вызываемая вирусом лейкоза, организуют выращивание племенных и ремонтных телок отдельно от взрослого поголовья на специализированных фермах или в обособленных телятниках, контролируя их благополучие по отношению к инфекции серологическим методом.

Первое серологическое исследование сывороток крови животных проводят в 6-месячном возрасте, а последующие - через каждые 6 месяцев.

При выявлении животных, зараженных ВЛ КРС, их переводят в группу откорма.

5.6. Из отделений, ферм, хозяйств, оздоравливаемых от лейкоза, разрешается реализация животных в возрасте не моложе 9 месяцев при условии, что их выращивали изолированно от взрослых животных в обособленных помещениях и исследовали их серологическим методом с получением отрицательных результатов.

5.7. Для трансплантации зигот отбирают коров-доноров и реципиентов, свободных от вируса лейкоза крупного рогатого скота.

5.8. При выявлении больных животных в индивидуальных хозяйствах их подвергают убою, а остальное поголовье содержат изолированно от животных, принадлежащих другим владельцам неблагополучного населенного пункта.

Молоко и молочные продукты запрещается реализовывать в свободной продаже.

5.9. В оздоравливаемых от лейкоза хозяйствах (фермах) проводят дезинфекцию животноводческих помещений и оборудования согласно установленному порядку проведения ветеринарной дезинфекции объектов животноводства. Для дезинфекции применяют 2%-ный горячий раствор формальдегида, 2%-ный горячий раствор едкого натра и др. Особое внимание обращают на места и предметы, загрязненные кровью.

Навоз и сточные воды утилизируют в установленном порядке.

5.10. Хозяйства, в том числе хозяйства граждан, считают оздоровленными после вывода всех больных и инфицированных животных и получения двух подряд, с интервалом в 3 месяца, отрицательных результатов при серологическом исследовании всего поголовья животных старше 6-месячного возраста, а также выполнения мер по санации помещений и территории ферм.

6. Оздоровительные мероприятия в племенных хозяйствах

6.1. При выявлении больных и инфицированных вирусом лейкоза животных их немедленно выводят из хозяйства. Запасы спермы, полученные от инфицированных быков за 2 месяца до выявления у них антител к ВЛ КРС, подлежат уничтожению.

6.2. Через каждые 3 месяца всех животных старше 6-месячного возраста подвергают серологическим исследованиям. После каждого исследования положительно реагирующих выводят из хозяйства.

6.3. Свободным от инфекции ВЛ КРС признают племенное хозяйство (станцию) при получении двух подряд, с интервалом 3 месяца, отрицательных результатов серологических исследований на лейкоз всех животных старше 6-месячного возраста.

6.4. Комплектование племенных хозяйств (станций) проводят животными только из благополучных хозяйств.

Всех животных, поступивших на профилактическое карантинирование, исследуют на лейкоз серологическим методом дважды (в начале и в конце срока карантинирования).

Для лейкоза у коров характерно инфицирование РНК онкологическим вирусом. Злокачественные образования поражают кроветворную систему, распространяясь на остальные внутренние органы. Заболевание относится к группе неизлечимых.

Причины возникновения и как передается вирус?

Вирусоноситель лейкоза является измененной макромолекулой рибонуклеиновой кислоты самого животного. После проникновения в организм крупного рогатого скота (КРС) он изменяет строение клеток кровеносной системы, чем нарушает ее функциональность. На этом фоне вырабатывается излишнее количество лимфоцитов, разрастаются ткани и образуются опухоли.

Скрытый инкубационный период достаточно большой – до 7-ми лет. Этот период может протекать совершенно бессимптомно. При этом корова является вирусоносителем. Поэтому может заражать других особей.

Пути передачи вируса:

прямой контакт с больным животным;
через рабочую утварь и инструменты;
посредством спермы от инфицированного быка;
через кровь и слюну;
вирус разносят кровососущие насекомые – комары, клопы и пр.;
через молоко, молозиво, околоплодные воды, плаценту.

Факторы, влияющие на инфицирование:

низкий уровень иммунитета, когда хозяева дают некачественный корм, содержат КРС в ненадлежащих условиях;
скученность содержания;
стрессы (когда животных бьют);
наличие любых патологий и отсутствие адекватного лечения;
генетическое воздействие.

Вирус передается различными способами, на него не влияют климатические условия, время года и внешние факторы. Однако микроорганизм уязвим перед разогревом до 60-ти градусов и обработкой хлором, едким натром (3%).

Узнайте из данного видео более подробную информацию о коровьем лейкозе и способах передачи вируса:

Стадии болезни

Формы болезни:

Энзоотический вид обнаруживается преимущественно у взрослого КРС, протекает длительное время.
Спорадический тип поражает молодняк до 3-х летнего возраста. Встречается редко.

Стадии коровьего лейкоза:

Стадия № 1 – инкубационная (скрытая) характеризуется моментом проникновения инфекции в организм животного. Продолжительность различная – чем крепче у коровы иммунная система, тем дольше длится скрытая степень. Симптоматика отсутствует.
Стадия № 2 – гематологическая. Кровяная жидкость КРС изменяет структуру, увеличивается концентрация лейкоцитов, на фоне чего развивается белокровие. Симптомы проявляются только со стороны органов желудочно-кишечного тракта. Обнаружить болезнь можно на основании собранных анализов.

Возбудители лейкоза, в первую очередь, обнаруживаются в молоке, поэтому фермеры обязаны регулярно отвозить образцы жидкости в микробиологическую лабораторию для исследования. Нужно помнить, что инфекция передается мгновенно.

Симптомы

Симптоматика начинает проявляться со 2-ой стадии, по мере прогрессирования патологии признаки усиливаются и дополняются. Определить лейкоз можно по таким симптомам:

У коровы появляется постоянный понос, который может резко сменяться запором. При этом в каловых массах могут обнаруживаться кровяные сгустки.
Увеличиваются лимфатические узлы, вплоть до размера мяча. Также увеличиваются и глазные яблоки – они выпячиваются (развивается пучеглазие).
Животное становится подверженным любым заболеваниям. Малейшее переохлаждение приводит к его простуде.
Корова становится бесплодной (яловой). Если стельная самка оплодотворилась, то у нее происходят выкидыши.
Инфицированные телята постоянно болеют – им тяжело дышать, обнаруживаются проблемы с пищеварением.
Крупный рогатый скот стремительно теряет вес, быстро утомляется. Происходит истощение.
Корова становится ослабленной, её дыхание учащается.
Если рассматривать вымя, то становится заметным перекос в размерах долей. Подгрудка, живот и вымя отекают.
Качество молока становится хуже, а количество значительно снижается.
Животное начинает хромать на задние конечности.
На теле образуются видимые новообразования.

Возможные осложнения и последствия для животного

Среди ветеринаров и фермеров бытует мнение, что лейкоз однозначно приводит к смерти животного. Да, это так, потому что до сегодняшнего дня не было разработано ни одной эффективной вакцины, хотя исследования проводились неоднократно на протяжении многих десятилетий. Поэтому при заражении одной особи владелец фермы должен заботиться об остальном поголовье.

Существует ли опасность для человека?

Как стало понятно, лейкоз у коровы опасен для всего крупного рогатого скота. А как влияет патология на человеческий организм? Ведь мы потребляем мясо и молоко. Как оказалось, после многочисленных испытаний, человеческий организм не восприимчив к штаммам коровьего лейкоза. В мировой практике не были выявлены случаи инфицирования.

Однако медики рекомендуют с осторожностью относиться к продуктам животноводства. Дело в том, что данные вирусы легко приспосабливаются ко всем условиям, они гибкие и мутирующие. А это не дает никакой гарантии того, что в любой момент не может появиться новый, неизвестный человеку штамм ВЛКРС, представляющий опасность для жизни и здоровья человека.

Пить необработанное термически молоко и есть мясо зараженного животного противопоказано. Причина кроется в том, что онкологические вирусы, находясь в организме коровы, накапливают в себе токсические и прочие вредные вещества. Поэтому человек может получить заболевание токсического характера.

Известно, что возбудитель гибнет при термической обработке, поэтому инфицированные продукты питания нужно кипятить. Но с другой стороны, токсины уничтожить высокой температурой невозможно. Следовательно, такое мясо и молоко принимать в пищу категорически нежелательно.

Диагностика

Для постановки диагноза необходимо осуществить забор крови у животного, так как вирус изначально поражает кровеносную систему. Следовательно, и локализуется там же. Поражению подвергаются лейкобластические клетки. Исследование основано на таких методиках:

Если результат положительный и наблюдается дважды по обоим методам, животное подвергается уничтожению. Если плюс отмечается только по гематологическому анализу, то можно считать корову здоровой. Дополнительно может проводиться гистологический, серологический и вирусологический анализ.

Лечение лейкоза

Лейкоз вылечить невозможно. Причина заключается в том, что возбудитель поражает лимфоцитные клетки. Чтобы уничтожить вирус, пришлось бы нейтрализовать лимфоциты, а это чревато иммунодефицитом. Если говорить проще, то развивается состояние, как при ВИЧ и СПИДе.

Если на ферме обнаружено 2 и более зараженные коровы, хозяйство относят к неблагополучному по лейкозу. На основании этого предписывают ограничения и разрабатывают план по оздоровлению поголовья.

Ограничения:

Отделение зараженного крупного рогатого скота от здоровых особей. Больных животных нельзя содержать вместе с остальным поголовьем, их нужно утилизировать.
Даже если животное находится на начальной стадии развития лейкоза, категорически запрещено собирать удой и употреблять в пищу молоко. То же самое относится к мясу после забоя скотины.
Нельзя перевозить КРС в другую местность и перемещать даже в пределах данного населенного пункта. Для этого придется получить разрешение у ветеринарной службы.

Оздоровление поголовья может проводиться разными методами. Это зависит от степени инфицирования стада. Все способы направлены на исследование всего поголовья, убой зараженных особей и частичную замену животных. Фермеры должны строго соблюдать требования по профилактике и борьбе с данным заболеванием, придерживаться ветеринарных и санитарных правил во время проведения зоотехнических и ветеринарных мероприятий.

Первоначально необходимо осуществить забор крови у каждого животного. Если лейкоз подтверждается, зараженный скот немедленно перемещают в другое место, после чего отправляют на забой. Остальных коров подвергают постоянному исследованию. Если на протяжении полугода заболевание не выявится, ферма приобретает статус благополучной по лейкозу.

Так как фермер после выбраковки больных животных лишается большинства коров, ему необходимо пополнять стадо. Для этого проводятся закупки из других фермерских хозяйств. При этом важно соблюдать карантинный режим.

Меры профилактики

Профилактические мероприятия входят в список обязательных действий по содержанию крупного рогатого скота. Это позволяет предупредить инфицирование и дальнейшее распространение лейкоза:

Приобретать скот нужно только в тех хозяйствах, где отсутствует в родословной заболеваемость лейкозом. Быки и коровы должны быть полностью здоровы.
Обязательно соблюдать карантин. Для этого новый завоз поголовья размещают в отдельном помещении на 2 месяца. В этот период коровы осматриваются ветеринаром, проводится их обследование, причем минимум 2 раза. Если результат отрицательный, скот вводят в общее стадо. Если положительный, направляют на откорм.
РИД-позитивные особи содержатся в отдельном помещении, они предназначены для откорма.
Если теленок родился от больной коровы, его несколько раз проверяют на лейкоз, так как не всегда молодняк заражается от матери.
Коров с ослабленным иммунитетом желательно содержать тоже отдельно, так как существует риск инфицирования. Фермер должен их подкармливать специальными добавками для укрепления иммунной системы.
Доение аппаратами, ветеринарную обработку и прочие манипуляции всегда начинают с полностью здоровых коров.
Телят нумеруют при помощи жидкого азота, обеззараживают инструменты термическим и химическим способом.
У быков-осеменителей нужно собирать кровь четырежды в год.
Стельные коровы обследуются за 30-60 суток до предполагаемого отела.
Санитарные условия содержания стада должны отвечать стандартным требованиям. Все инструменты, аппараты и инвентарь нужно качественно дезинфицировать.
Исключается свободное спаривание быков и коров.
Если в хозяйстве отсутствует осеменитель, закупается сперма, которая перед осеменением направляется на лабораторное исследование.

Лейкоз у коров является опасным заболеванием, которое быстро передается от больного животного к здоровому. Поэтому важнейшей частью содержания фермы считается профилактика. Лейкоз может поражать не только коров, но и коз, овец и прочих домашних животных. Заботьтесь о здоровье КРС с самого их рождения.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ДИАГНОСТИКЕ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Руководитель Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации М.В.Кравчук 23 августа 2000 г. N 13-7-2/2130

1. Общие положения

1.1. Лейкоз крупного рогатого скота - хроническая инфекционная болезнь, вызываемая вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС). Лейкозом болеет крупный рогатый скот всех возрастов. Клинически болезнь проявляется чаще у животных в возрасте старше 4 лет.

Болезнь протекает вначале бессимптомно, затем проявляется персистентным лимфоцитозом и (или) образованием опухолевидных разрастаний в кроветворных и других органах и тканях.

После установления опухолевой природы лейкоза болезнь как у животных, так и у человека получила название гемобластозы, то есть опухолевые заболевания крови. По характеру и месту локализации опухолевых разрастаний, а также по морфологии и принадлежности пролиферирующих клеток к определенным росткам гемопоэза гемобластозы разделены на две группы:

лейкозы - системные поражения органов кроветворения, включающие лимфоидную, миелоидную, моноцитарную и недифференцированную формы;

гематосаркомы - сопровождающиеся опухолевым ростом. К ним относятся лимфосаркома, ретикулосаркома, лимфогрануломатоз и миеломная болезнь.

Возбудителем лейкоза крупного рогатого скота является опухолеродный РНК-содержащий вирус из семейства Retroviridae.

Источник возбудителя инфекции - животное, зараженное ВЛКРС.

Факторами передачи являются кровь, молоко и другие секреты и экскреты, содержащие лимфоидные клетки, инфицированные ВЛКРС.

Заражение может происходить при совместном содержании здоровых и инфицированных ВЛКРС животных.

1.2. Диагностические исследования на лейкоз проводят серологическими, молекулярно-биологическим, гематологическим, клиническим, патоморфологическим методами, методом биопробы.

1.3. Основу диагностики лейкоза крупного рогатого скота составляет серологический метод исследования - реакция диффузионной преципитации (РДП), иначе называемая реакцией иммунодиффузии в геле агара (РИД).

Из числа положительно реагирующих в РИД животных (инфицированных ВЛКРС) с помощью гематологического метода выявляют больных лейкозом.

2. Серологические методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота

2.1. Реакция иммунодиффузии (РИД).

2.1.1. Сущность метода.

Метод основан на обнаружении в сыворотке крови животных специфических преципитирующих антител к антигенам вируса лейкоза крупного рогатого скота. Специфические антитела появляются в крови через 2-8 недель после заражения животного ВЛКРС и сохраняются в организме пожизненно.

2.1.2. Серологическому исследованию на лейкоз подвергают животных в возрасте 6 месяцев и старше. Пробы крови для исследований берут не ранее чем через 30 суток после введения животным вакцин и аллергенов, у стельных животных - за 30 суток до отела или через 30 суток после него.

2.1.3. Получение сыворотки. Сыворотки для исследования получают из крови испытуемого животного в количестве 2-3 мл и направляют в лабораторию с сопроводительным документом, в котором указывают название хозяйства, номер (кличку), возраст, пол, породу животного.

Кровь (для получения сыворотки) берут в бактериологические пробирки, выдерживают 1-2 ч в теплом месте (не выше 40°С). Для лучшего отделения сыворотки образовавшийся сгусток обводят в пробирке профломбированной после каждой пробы стальной спицей (проволокой). После этого пробирки выдерживают в течение 20-24 ч при 4-10°С. Полученные пробы сыворотки сливают в пробирки Флоринского (достаточно 2-3 мл) и маркируют.

При невозможности быстрого исследования подготовленные сыворотки хранят в замороженном состоянии.

2.1.4. Для постановки РИД используют набор для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота (ТУ 10-19-442-87), в состав которого входят: сухой специфический антиген вируса лейкоза крупного рогатого скота, состоящий из гликопротеидного gр-51 и полипептидного р-24 антигенов, разбавитель антигена, специфическая преципитирующая сыворотка (СПС) к вирусу лейкоза, солевая смесь агара (ССА) и разбавитель ССА, контрольные сыворотки: отрицательная, положительная, слабоположительная и положительная с антителами к р-24 антигену ВЛКРС.

Оборудование и реактивы:

- чашки Петри диаметром 100 мм;

- стандартный штамп-пробойник для просечения лунок в агаре;

- пипетки пастеровские или автоматические со сменными наконечниками;

- хлорид натрия (х.ч.);

2.1.5. Постановка РИД.

Подготовку компонентов реакции к работе осуществляют в соответствии с "Наставлением по применению набора для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота". Антиген растворяют в 5 см разбавителя. Растворенный антиген хранят при температуре 4°С не более двух недель.

Разбавитель ССА и солевую смесь агара переносят в колбу и приливают дистиллированную воду до объема 200 см, затем колбу помещают в водяную баню и выдерживают до полного расплавления гранул агара. Расплавленный агаровый гель, имеющий температуру 50-70°С, разливают слоем 2-3 мм (12-15 мл) в обезжиренные чашки Петри и оставляют их приоткрытыми при комнатной температуре в течение 1 ч. После застывания агара специальным штампом-пробойником делают лунки в геле, не допуская образования трещин между ними и отслоения агара от дна чашки. В каждой чашке делают по четыре фигуры, каждая из которых состоит из семи лунок: одна в центре, остальные по периферии. Диаметр каждой лунки составляет 7 мм, расстояние между центральной и периферическими лунками - 3 мм. Образовавшиеся диски геля удаляют из лунок канюлей, соединенных с вакуумным насосом.

Антиген, контрольные и испытуемые сыворотки вносят в лунки каждой фигуры пастеровскими или автоматическими пипетками со сменными наконечниками.

Антиген (А) вносят в центральную лунку, две диаметрально противоположные лунки заполняют контрольной сывороткой (КС). Оставшиеся в фигуре 4 периферические лунки (1, 2, 3, 4) заполняют испытуемыми сыворотками. Лунки заполняют доверху, не допуская переливания жидкости через край. После заполнения всех лунок чашки Петри закрывают крышками и инкубируют во влажной камере при температуре 22-27°С.

2.1.6. Учет и оценка результатов реакции.

2.1.6.1. Реакцию учитывают не ранее чем через 48 ч и не позднее чем через 96 ч. Чашки просматривают на темном фоне, направляя сфокусированный луч осветителя на дно чашки под углом 30-45°. Специфичность реакции оценивают по контрольной линии преципитата. Если она отсутствует или слабо выражена, то реакцию следует повторить.

Специфическая линия преципитации, формируемая преципитирующей контрольной сывороткой и антигеном, должна быть четкой, иметь форму прямой, располагаться на одинаковом расстоянии от лунок с антигеном и контрольной сывороткой.

Неспецифической считают линию преципитации, которая образуется между лунками с испытуемой сывороткой и антигеном, но не сливается с контрольной линией преципитации, а пересекает ее или упирается в нее, образуя угол.

2.1.6.2. Оценка результатов.

В зависимости от наличия специфических антител против антигенов ВЛКРС в испытуемой сыворотке реакцию оценивают как положительную или отрицательную.

Положительной считают реакцию, если между лунками с антигеном и испытуемой сывороткой образуется полоса преципитации, которая соединяется с полосой преципитации контрольной сыворотки, образуя непрерывную линию, то есть идентична ей (рис.1 - не приводится, поз.1):

- если линия преципитации между лунками с испытуемой сывороткой и антигеном отсутствует, но контрольная линия преципитирующей сыворотки образует вблизи лунки с испытуемой линией изгиб, направленный в сторону лунки с антигеном (рис.1, поз.2), - слабоположительная сыворотка;

- если контрольная линия значительно укорочена со стороны лунки с испытуемой сывороткой и имеет размытый изгиб к лунке с антигеном или образует линию преципитации, расположенную очень близко от лунки с антигеном (рис.1, поз.2), - резко положительная сыворотка.

Положительно реагирующая сыворотка может образовывать вторую линию преципитации, которая располагается ближе к лунке с испытуемой сывороткой. Эта линия указывает на наличие в сыворотке преципитирующих антител против второго антигена (р-24) ВЛКРС (рис.1, поз.3).

При образовании толстой, короткой, без загибов контрольной линии преципитации, не доходящей до лунки с испытуемой сывороткой, необходимо провести раститровку этой испытуемой сыворотки физраствором до получения результата, который можно будет оценить как отрицательный, положительный или неспецифический. Для этого необходимо физиологический раствор в объеме 100-500 мкл разлить в пробирки или в лунки стандартных пластиковых плат для постановки серологических реакций (количество пробирок или лунок соответствует числу необходимых разведений). В первую пробирку или лунку с физраствором внести такой же объем сыворотки, тщательно перемешать и перенести той же пипеткой в том же объеме в следующую пробирку или лунку, затем после перемешивания - в следующую и т.д. В результате в первой пробирке или лунке испытуемая сыворотка разведена в 2 раза, во второй - в 4 раза, в третьей - в 8 раз и т.д.

Реакцию считают отрицательной, если контрольная линия продолжается до лунки с испытуемой сывороткой без загиба (рис.1, поз.4).

В случаях, когда линия преципитации плохо просматривается или имеется зона опалесценции вокруг лунок, реакцию следует переставить.

Сдвиг контрольной линии преципитации в сторону лунки с антигеном или с контрольной сывороткой указывает на нарушение соотношения антигена и антител в тест-системе. В этом случае необходимо использовать другую серию диагностического набора.

2.1.7. Животных, сыворотки крови которых дали положительный результат в РИД, признают зараженными вирусом лейкоза, и их необходимо исследовать гематологическим методом.

2.2. Метод иммуноферментного анализа (ИФА).

2.2.1. Сущность метода. Иммуноферментный анализ основан на иммунохимической реакции взаимодействия антиген-антитело и использовании в качестве индикатора этой реакции маркированных ферментами антител или антигенов.

Существует две модификации иммуноферментного анализа: непрямой и конкурентный.

Метод непрямого иммуноферментного анализа основан на связывании специфических к вирусу лейкоза антител с антигеном ВЛКРС, адсорбированным на стенках лунок планшета для микротитрования. Связавшиеся антитела выявляют с помощью видоспецифических антител, меченых ферментом (пероксидазой), с последующим ферментативным превращением бесцветного субстрата пероксидазой в окрашенный продукт. Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию антител к ВЛКРС в сыворотке крови.

В основе конкурентного иммуноферментного анализа лежит способность антител к ВЛКРС, содержащихся в испытуемой сыворотке, блокировать связывание антигена ВЛКРС с антителами к ВЛКРС, иммобилизованными (адсорбированными) на стенках лунок планшетов для микротитрования (МТП). Антиген ВЛКРС, связавшийся с иммобилизованными антителами, выявляют с помощью антител к ВЛКРС, меченных пероксидазой (конъюгатом антител с пероксидазой) и последующего ферментативного превращения бесцветного субстрата пероксидазы в окрашенный продукт. В том случае, если испытуемый материал не содержал антител к ВЛКРС, интенсивность окрашивания максимальна. Антитела к ВЛКРС в испытуемом материале снижают интенсивность окрашивания прямо пропорционально их содержанию.

2.2.2. Материалы и оборудование.

2.2.2.1. Материалом для исследования методом иммуноферментного анализа может служить сыворотка крови, секрет вымени сухостойных коров, молозиво и молоко.

При исследовании сывороток крови их получают, как изложено в п.2.1.3. Сыворотки пригодны для использования в течение 10 дней при температуре хранения +4°С. Срок годности сыворотки, хранящейся при температуре -20°С и ниже, не ограничен.

Бактериально загрязненные, разложившиеся или сильно гемолизированные сыворотки непригодны для исследования.

2.2.2.2. При постановке реакции используют стандартные коммерческие диагностические наборы согласно прилагаемому к ним наставлению по применению.

Для проведения исследования применяют:

- микропипетки одноканальные автоматические;

- фотометр одно- или многоканальный с автоматической регистрацией результатов. Рекомендуется использовать анализатор иммуноферментный фотоэлектрический АИФ-Ц-01С;

- микротитровальные пластмассовые (полистироловые) планшеты с 96 лунками;

- автоматическое или полуавтоматическое оборудование для промывания пластин;

- термостат, обеспечивающий температуру 37+/-0,5°С;

- пипетки градуированные вместимостью 1 и 10 см.

2.2.3. Непрямой иммуноферментный анализ для выявления антител к вирусу лейкоза.

2.2.3.1. В состав диагностического набора входят:

- антиген вируса лейкоза лиофилизированный и разбавитель антигена;

- конъюгат антител против иммуноглобулинов крупного рогатого скота с пероксидазой или другим ферментом, жидкий или лиофилизированный, и разбавитель конъюгата;

- сыворотки контрольные - отрицательная и положительная (слабоположительная), лиофилизированные или жидкие;

- разбавитель для сывороток и промывающий раствор, содержащий детергент и инертный белок;

3. БОЛЕЗНИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

3.1. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ДИАГНОСТИКЕ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

УТВЕРЖДЕНЫ 23 июля 2000 г., N 13-7-2/2130

1. Общие положения

После установления опухолевой природы лейкоза болезнь как у животных, так и у человека получила название гемобластозы (опухолевые заболевания крови). По характеру и месту локализации опухолевых разрастаний, а также по морфологии и принадлежности пролиферирующих клеток к определенным росткам гемопоэза гемобластозы разделены на две группы:

- лейкозы - системные поражения органов кроветворения, включающие лимфоидную, миелоидную, моноцитарную и недифференцированную формы;

- гематосаркомы - сопровождающиеся опухолевым ростом. К ним относятся лимфосаркома, ретикулосаркома, лимфогранулематоз и миеломная болезнь.

Возбудителем лейкоза крупного рогатого скота является опухолеродный РНК-содержащий вирус из семейства Retroviridae.

Источник возбудителя инфекции - животное, зараженное ВЛКРС.

Заражение может происходить при совместном содержании здоровых и инфицированных ВЛКРС животных.

1.2. Диагностические исследования на лейкоз проводят серологическим, молекулярно-биологическим, гематологическим, клиническим, патоморфологическим методами, методом биопробы.

2. Серологические методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота

2.1. Реакция иммунодиффузии (РИД)

2.1.1. Сущность метода

Метод основан на обнаружении в сыворотке крови животных специфических преципитирующих антител к антигенам вируса лейкоза крупного рогатого скота. Специфические антитела появляются в крови через 2. 8 недель после заражения животного ВЛКРС и сохраняются в организме пожизненно.

2.1.2. Серологическому исследованию на лейкоз подвергают животных в возрасте 6 мес. и старше. Пробы крови для исследований берут не ранее чем через 30 сут после введения животным вакцин и аллергенов, у стельных животных - за 30 сут до отела или через 30 сут после него.

2.1.3. Получение сыворотки. Сыворотки для исследования получают из крови испытуемого животного в количестве 2. 3 мл и направляют в лабораторию с сопроводительным документом, в котором указывают название хозяйства, номер (кличку), возраст, пол, породу животного.

Кровь (для получения сыворотки) берут в бактериологические пробирки, выдерживают 1. 2 ч в теплом месте (не выше 40°С). Для лучшего отделения сыворотки образовавшийся сгусток обводят в пробирке профломбированной после каждой пробы стальной спицей (проволокой). После этого пробирки выдерживают в течение 20. 24 ч при 4. 10°С. Полученные пробы сыворотки сливают в пробирки Флоринского (достаточно 2. 3 мл) и маркируют.

При невозможности быстрого исследования подготовленные сыворотки хранят в замороженном состоянии.

2.1.4. Для постановки РИД используют набор для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота (ТУ 10-19-442-87*), в состав которого входят сухой специфический антиген вируса лейкоза крупного рогатого скота, состоящий из гликопротеидного gp-51 и полипептидного р-24 антигенов, разбавитель антигена, специфическая преципитирующая сыворотка (СПС) к вирусу лейкоза, солевая смесь агара (ССА) и разбавитель ССА, контрольные сыворотки: отрицательная, положительная, слабоположительная и положительная с антителами к р-24 антигену ВЛКРС.

* ТУ не приводятся. За информацией о документе Вы можете обратиться в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Оборудование и реактивы:

- чашки Петри диаметром 100 мм;

- стандартный штамп-пробойник для высечения лунок в агаре;

- пипетки пастеровские или автоматические со сменными наконечниками;

- хлорид натрия (х.ч.);

2.1.5. Постановка РИД

Разбавитель ССА и солевую смесь агара переносят в колбу и приливают дистиллированную воду до объема 200 см, затем колбу помещают на водяную баню и выдерживают до полного расплавления гранул агара. Расплавленный агаровый гель, имеющий температуру 50. 70°С, разливают слоем 2. 3 мм (12. 15 мл) в обезжиренные чашки Петри и оставляют их приоткрытыми при комнатной температуре в течение 1 ч. После застывания агара специальным штампом-пробойником делают лунки в геле, не допуская образования трещин между ними и отслоения агара от дна чашки. В каждой чашке делают по 4 фигуры, каждая из которых состоит из 7 лунок: одна в центре, остальные по периферии. Диаметр каждой лунки составляет 7 мм, расстояние между центральной и периферическими лунками - 3 мм. Образовавшиеся диски геля удаляют из лунок канюлей, соединенной с вакуумным насосом.

2.1.6. Учет и оценка результатов реакции

2.1.6.1. Реакцию учитывают не ранее чем через 48 ч и не позднее чем через 96 ч. Чашки просматривают на темном фоне, направляя сфокусированный луч осветителя на дно чашки под углом 30. 45°. Специфичность реакции оценивают по контрольной линии преципитата. Если она отсутствует или слабо выражена, то реакцию следует повторить.

2.1.6.2. Оценка результатов

Положительной считают реакцию, если между лунками с антигеном и испытуемой сывороткой образуется полоса преципитации, которая соединяется с полосой преципитации контрольной сыворотки, образуя непрерывную линию, т.е. идентична ей (рис.16*, поз.1):

* Нумерация рисунков сквозная по всему тексту Сборника. - Примечание изготовителя базы данных.

- если линия преципитации между лунками с испытуемой сывороткой и антигеном отсутствует, но контрольная линия преципитирующей сыворотки образует вблизи лунки с испытуемой линией изгиб, направленный в сторону лунки с антигеном (рис.16, поз.2) - слабоположительная сыворотка;

- если контрольная линия значительно укорочена со стороны лунки с испытуемой сывороткой и имеет размытый изгиб к лунке с антигеном или образует линию преципитации, расположенную очень близко от лунки с антигеном (рис.16, поз.2), - резко положительная сыворотка.

Читайте также:

Лейкоз крупного рогатого скота вирус лейкоза крупного рогатого скота

УТВЕРЖДЕНЫПриказомМинсельхозпрода Россииот 11 мая 1999 года N 359

1. Общие сведения о лейкозе

2. Требования по профилактике лейкоза крупного рогатого скота

3. Эпизоотологический контроль и постановка диагноза на лейкоз

4. Ограничительные мероприятия в пунктах,неблагополучных по лейкозу

5. Оздоровительные мероприятия в неблагополучныхпо лейкозу животноводческих хозяйствах

6. Оздоровительные мероприятия в племенных хозяйствах

Причины возникновения и как передается вирус?

Стадии болезни

Симптомы

Возможные осложнения и последствия для животного

Существует ли опасность для человека?

Диагностика

Лечение лейкоза

Меры профилактики

1. Общие положения

2. Серологические методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота

1. Общие положения

2. Серологические методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота

УТВЕРЖДЕНЫ
Приказом
Минсельхозпрода России
от 11 мая 1999 года N 359

4. Ограничительные мероприятия в пунктах,
неблагополучных по лейкозу

5. Оздоровительные мероприятия в неблагополучных
по лейкозу животноводческих хозяйствах