Лиофилизированное состояние вируса что это
Обновлено: 24.04.2024
О.Р. ШАНГИНА, Л.А. БУЛГАКОВА
Всероссийский центр глазной и пластической хирургии МЗ РФ, г. Уфа
Контактная информация:
Шангина Ольга Ратмировна – заместитель генерального директора, заведующая лабораторией консервации тканей, доктор биологических наук, профессор
В статье представлен обзор данных литературы об истории развития метода лиофилизации аллогенных трансплантатов, применении лиофилизированных аллотрансплантатов в различных сферах клинической практики. Дана оценка гистологических, морфофункциональных, клинических особенностей данного вида пластического материала. Показано, что данный вид пластического материала заслуженно занимает одно из ведущих мест в области реконструктивной медицины.
Ключевые слова: аллотрансплантаты, лиофилизация, биомеханические свойства, структура аллотрансплантатов.
O.R. SHANGINA, L.A. BULGAKOVA
Russian Eye and Plastic Surgery Center, Ufa, the Republic of Bashkortostan, Russian Federation
STRUCTURAL PECULIARITIES OF LYOPHILIZED TISSUES AND POSSIBILITIES OF THEIR CLINICAL APPLICATION
Contact details:
Shangina O.R. – Deputy General Director, Head of Tissue Conservation Laboratory, Doctor of Biological Sciences, Professor
The article presents a review of literature data on developmental history of the method of lyophilization of allogeneic grafts, the use of lyophilized allografts in various fields of clinical practice. An assessment of histological, morphofunctional, clinical features of this type of plastic material is given. It is shown that this type of plastic material deservedly occupies one of the leading places in the field of reconstructive medicine.
Key words: allografts, lyophilization, biomechanical properties, structure of allografts.
Одной из наиболее перспективных разновидностей биологического материала для применения в реконструктивной хирургии являются трансплантаты аллогенного происхождения (твердая оболочка головного мозга, широкая фасция бедра, пяточное сухожилие, хрящи, перикард, амниотическая оболочка и др.). В настоящее время при проведении восстановительных операций ведущие клиники используют многочисленные варианты данного пластического материала [1]. Оптимальные результаты операций с применением аллогенных трансплантатов достигаются вследствие того, что они вызывают наименьшую иммунную реакцию, апирогенны, стимулируют процессы репаративной регенерации, замещаясь вновь образованной тканью [2]. Все известные в настоящее время трансплантаты получают в результате обработки донорских тканей физическими или химическими методами. Широкая вариативность аллогенных трансплантатов основана на различных методах консервации и стерилизации [3].
Одним из широко применяемых методов консервации донорских тканей является лиофилизация. Лиофилизация – метод высушивания предварительно замороженной ткани, предназначенной для длительного хранения и последующего ее использования (после регидратации) в клинической практике. Отличительная особенность данного метода состоит в том, что высушивание происходит при переходе воды из твердого состояния в пар, минуя жидкую фазу [4]. Началом системного изучения свойств и качества лиофилизированных трансплантатов пришлось на 50-е гг. прошлого столетия. Одни из первых работ, посвященные лиофилизации тканей, принадлежат Flosdorf E.W. [5]. В нашей стране успешное применение лиофилизации в биологической промышленности и медицине стало возможным благодаря теоретическим и практическим разработкам М.И. Пановой [6], Г.С. Юмашева [7] и др. Высушивание тканей в процессе лиофилизации приводит к дегидратации аморфного матрикса, окружающего коллагеновые волокна. В результате этого, в зависимости от степени начальной гидратированности аморфного матрикса, происходят те или иные структурные преобразования [8]. Всестороннему изучению особенностей фиброархитектоники лиофилизированных трансплантатов и их биомеханических свойств посвящено достаточно большое количество работ. По мнению В.И. Савельева с соавторами [9], в процессе лиофилизации ткани приобретают устойчивость к факторам внешней среды и способность сохранять комплекс структурных и биохимических качеств, важных с трансплантационной точки зрения. Кроме того, по мнению этих же авторов, лиофилизация аллотканей важна перед стерилизацией гамма-лучами, поскольку без дегидратации в тканях возникают значительные изменения, препятствующие их клиническому использованию. Процесс лиофилизации, по утверждению П.П. Коваленко [10], не оказывает существенного влияния на структуру таких тканей, как кость, хрящ и перикард. Изучив структуру лиофилизированного хряща, было установлено, что после 2–8 ч пребывания в физиологическом растворе его эластичность и консистенция не отличались от нативного хряща. По мнению данного автора, лиофилизация является наиболее эффективным методом консервирования сухожилий [11], которые широко используются для пластики поврежденных сухожилий и связок, как у взрослых, так и у детей. Лиофилизированные трансплантаты обладают достаточной прочностью и эластичностью, создают необходимое натяжение концов поврежденного сухожилия, что способствует более полноценной регенерации. В качестве пластического материала В.Б. Третьяков и Л.И. Малюченко [12] использовали аллогенный лиофилизированный трансплантат связки надколенника. Результаты гистологических и биомеханических исследований данного трансплантата свидетельствовали о сохранении гистологической структуры и прочностных характеристик сухожильной ткани после лиофилизации и радиационной стерилизации. Полученные данные позволили сделать вывод о том, что артроскопическая реконструкция передней крестообразной связки с использованием аллогенных лиофилизированных блочных трансплантатов связки надколенника является эффективным и безопасным методом лечения, позволяющим добиваться хороших клинических результатов по стабилизации сустава.
Комплексные исследования лиофилизированных аллотканей на протяжении ряда лет проводились в Ростовском медицинском институте, при этом мнения ведущих специалистов по данному вопросу носят противоречивый характер. Так, исследования Р.О. Кристостурян с соавторами [13] показали, что кость, хрящ, фасция, сухожилия, кожа, артериальные сосуды, перикард, консервированные лиофилизацией, сохраняют свои структурные и пластические свойства. В то же время Н.П. Демичев [14] считает, что процесс лиофилизации приводит к нарушению структуры и пластических свойств сухожилий. По мнению указанного автора, коллагеновые волокна сухожилий либо расщепляются на отдельные фибриллы, либо набухают, образуя гомогенный бесструктурный массив, обнаруживается много трещин и пустот.
О том, что лиофилизация изменяет структурные и пластические свойства биологических тканей, таких как роговица, склера, твердая оболочка головного мозга, аорта, отмечает в своих работах Р.Н. Подопригора [15].
А.С. Имамалиевым [16] было установлено, что лиофилизированная кость отличается от нативной по прочности и характеру деформации. При испытании на изгиб прочность лиофилизированной кости оказалась меньше, чем у нативной. Однако регидратация лиофилизированной кости практически восстанавливает упругость, утраченную в результате лиофилизации. Анализ прочностных свойств дермальных лиофилизированных трансплантатов на растяжение показал, что их показатели сопоставимы с показателями аналогичных характеристик нативных образцов [17].
Снижение прочностных свойств является существенным ограничением использования лиофилизированных трансплантатов при укрепляющих операциях, где главную роль играют их прочностные характеристики [19]. Изменения в структуре лиофилизированных трансплантатов можно рассматривать как деструкцию волокнистого остова, но можно взглянуть на данные структурные изменения с другой стороны. Модифицированная структура лиофилизированных соединительнотканных трансплантатов может использоваться для восстановления тканей с дренажной функцией, при заполнении дефектов тканей [20]. Так, дренирующие свойства модифицированных лиофилизированных губчатых аллотрансплантатов используют для операций спонч-дренирования при различных формах глаукомы, а также при невритах зрительного нерва, когда необходимо усиление кровообращения в заднем отрезке глазного яблока [21]. Лиофилизированные губчатые аллотрансплантаты, помещенные в супрахориоидальное пространство глаза, длительно (в течение 5 лет) не рассасываются, не рубцуются, сохраняют в тканях реципиента свою первоначальную структуру, выполняя дренажную функцию, прорастают кровеносными сосудами, создавая дополнительное питание оболочкам глаза [22]. Лиофилизированные губчатые аллотрансплантаты применяются в урологической практике для закрытия раневых дефектов почек. Эффект проводимых операций основывается на моделирующей роли трансплантатов в репаративной регенерации структурных элементов нефрона [23].
Таким образом, обзор литературных данных, посвященных лиофилизированным аллотрансплантатам и их применению в клинической практике показал, что данный вид пластического материала заслуженно занимает одно из ведущих мест в области реконструктивной медицины. Однако преобразование структуры и снижение прочностных характеристик некоторых лиофилизированных аллотрансплантатов являются ограничением их использования в проведении укрепляющих операций, при которых решающую роль играют биомеханические свойства тканей. Такие аллотрансплантаты могут применяться при заполнении объемных дефектов тканей, в качестве укрывных мембран, бионосителей для лекарственных веществ и культур клеток.
Лиофилизация (сублимация) широко применяется в ветеринарной, медицинской, биологической практике и пищевой промышленности для длительного сохранения бактерий, вирусов, грибов, диагностических и лечебных биопрепаратов, животных и растительных тканей, продуктов. При лиофилизации вода из объектов удаляется без нарушения нативной структуры белков; в препаратах резко замедляются или прекращаются биохимические реакции, в результате чего они становятся более устойчивыми к факторам внешнего воздействия и сохраняют первоначальные свойства в течение длительного периода хранения.
Препараты, высушенные методом лиофильной сушки, обладают хорошей растворимостью и при добавлении к ним воды или физиологического раствора легко переводятся в исходное нативное состояние.
Процесс лиофилизации состоит из предварительного замораживания препарата, первичного высушивания, досушивания, укупорки ампул (флаконов) с высушенным препаратом. Для сохранения исходных свойств препаратов или высокой жизнеспособности микроорганизмов в процессе лиофильной сушки и последующем хранении используют различные защитные среды (стабилизаторы): сыворотку крови животных, альбумин, обезжиренное молоко, желатин, желатозу, пептон, сахарозу, сорбит, поливинилпирролидон, глутамат натрия и их комбинации. Предварительное замораживание материала проводят в морозильных камерах при t от -40 до -60°C или при помещении материала в смесь спирта с сухой углекислотой (t -78°C), чем избегают вспенивания препарата в процессе лиофильной сушки. Замороженный материал в ампулах или флаконах быстро переносят в сушильную камеру (сублиматор), в которой создаётся глубокий вакуум и поддерживается пониженная температура (до -40°С). На биофабриках, биокомбинатах и в институтах применяют камерные вакуумные аппараты различных марок. Существуют аппараты, в которых предварительное замораживание препаратов осуществляется непосредственно в сублимационной камере. В результате сублимации свободная вода удаляется с поверхности замороженного материала, препарат переходит из твёрдого (замороженного) состояния в сухое (пористая масса, почти не изменённая в объёме). Досушивание объекта проводят в этой же камере при t до 20°C и выше. При этом из препарата удаляется связанная вода. После окончания лиофильной сушки вакуумный насос выключают, и в камеру через фильтр подают стерильный сухой воздух или азот.
Ампулы или флаконы быстро укупоривают, чтобы избежать увлажнения препарата при хранении. Ампулы запаивают, предварительно создавая в них вакуум или заполняя их инертным газом. Флаконы заполняют газом или сухим воздухом, закрывают резиновыми пробками с алюминиевыми колпачками. Время лиофилизации на биологических предприятиях регулируют и регистрируют с помощью автоматических приборов. Качество лиофильной сушки оценивается по следующим основным показателям:
- быстрая растворимость препарата (1-2 мин),
- остаточная влажность, не превышающая 1-3%,
- исходная вязкость препарата после растворения,
- характерная структура высушенного материала,
- рН среды,
- сохранение активности, специфичности и других свойств объекта.
В процессе лиофилизации вирулентных штаммов микроорганизмов, живых вакцин и диагностикумов возможна контаминация сушильных аппаратов, поэтому их необходимо периодически дезинфицировать парами формальдегида, спиртом и другими средствами.
1 ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский университет)
В настоящее время согласно рекомендациям отечественных и зарубежных руководств при оказании помощи при кровотечениях и всевозможных тяжелых коагулопатиях пациенты нуждаются в трансфузиологических пособиях. Основная роль отводится свежезамороженной плазме, однако ее применение сопряжено с риском передачи трансмиссивных инфекций. Эту проблему в наше время минимизируют посредством вирусинактивации свежезамороженной плазмы. Лиофилизация свежезамороженной плазмы действительно снимет проблемы, сопряженные с хранением, транспортировкой и подготовкой данного препарата крови к использованию при оказании помощи пациентам. В статье приведены материалы исследования по изучению сохранения коагуляционного потенциала в лиофилизированной плазме, инактивированной двумя различными технологиями, преимущественно применяемыми в настоящее время в современной трансфузиологии: амотосален + облучение ультрафиолетом спектра А; метиленовый синий + видимый свет. В исследовании использовался метод анализа концентрации факторов свертывания крови и других показателей, которые оказывают влияние на все пути свертывания (внешний, внутренний и общий), путем сопоставления образцов вирусинактивированной лиофилизированной плазмы, инактивированной различными технологиями инактивации, как между собой, так и с контрольной группой при использовании размороженной свежезамороженной плазмы. В конечном итоге исследования в показателях между образцами плазмы, инактивированной разнообразными способами, значительных отклонений не обнаружено. По результатам анализа можно сделать вывод, что вирусинактивированная лиофилизированная плазма выступает альтернативой свежезамороженной плазме в полной мере.
1. American Association of Blood Banks, American Red Cross, America’s Blood Centers, and Armed Services Blood Program. Circular of information for the use of human blood and blood components. Bethesda (MD): American Association of Blood Banks. Transfusion. 2009. Vol. 48. P. 1711–1714.
2. Чечеткин А.В., Алексеева Н.Н., Тхоржевская З.С. Новое о клиническом применении плазмы (информация о симпозиуме по плазме, предназначенной для непосредственного клинического применения) // Трансфузиология. 2015. Т.16. № 4. С. 53-61.
4. Devine D., Sher G. An introduction to new and renewed products for transfusion. Vox Sang. 2018. Vol. 113 (1). Р. 6.
5. De Biasi A.R., Stansbury L.G., Dutton R.P., Stein D.M., Scalea T.M., Hess J.R.. Blood product use in trauma resuscitation: plasma deficit versus plasma ratio as predictors of mortality in trauma (CME). Transfusion. 2011. Vol. 51. P. 1925–32.
6. Iapichino G.E., Ponschab M., Cadamuro J., Süssner S., Gabriel C., Dieplinger B., Egger M., Schlimp C.J., Bahrami S., Schöchl H. Concentrated lyophilized plasma used for reconstitution of whole blood leads to higher coagulation factor activity but unchanged thrombin potential compared with fresh-frozen plasma. Transfusion. 2017. Vol. 57 (7). P. 1763-1771. DOI: 10.1111/trf.14123.
8. Shuja F., Finkelstein R.A., Fukudome E. Development and testing of low-volume hyperoncotic, hyperosmotic spray-dried plasma for the treatment of trauma-associated coagulopathy. J. Trauma. 2011. No 70. P. 664-671.
9. Sailliol A., Plang S., Martinaud C., Hemovigilance et securite transfusionnelle en operation exterieure. Transfus Clin Biol. 2014. No 21. 229–233.
10. Shlaifer A., Siman-Tov M., Radomislensky I., Prehospital administration of freeze-dried plasma, is it the solution for trauma casualties? J. Trauma Acute Care Surg. 2017. No 83. 675–682.
12. Rock G. A comparison of methods of pathogen inactivation of FFP. Vox Sang. 2011. Vol. 100. P. 169 –178.
13. Постановление Правительства РФ от 22.06.2019 N 797 "Об утверждении Правил заготовки, хранения, транспортировки и клинического использования донорской крови и ее компонентов и о признании утратившими силу некоторых актов Правительства Российской Федерации" // Российская газета. 23 июня 2019 г.
14. Schoenfeld H., Pruss A., Keller M., Lyophilised plasma: Evaluation of clotting factor activity over 6 days after reconstitution for transfusion. J. Clin Pathol. 2010. Vol. 63. P. 726–730.
15. Midwinter M., Crombie N. A multicentre randomised controlled trial of pre-hospital blood product administration versus standard care for traumatic haemorrhage PROTOCOL. Wiley Online Libr . 2017. Vol. 28. P. 346–356.
Свежезамороженная плазма является одним из наиболее распространенных компонентов крови, используемых сегодня в медицинских учреждениях для таких случаев, как кровотечения и тяжелые коагулопатии, а также в качестве источника прокоагулянтов, физиологических антикоагулянтов, активаторов и ингибиторов фибринолиза. Отличительное свойство данного материала – стремление к сохранению в оптимальном соотношении всех составляющих компонентов и регуляторов системы гемостаза плазмы крови, за исключением влияния тромбоцитов. У пациентов с заболеваниями печени при наличии нарушений синтеза прокоагулянтов и ингибиторов свертывающей системы крови применение свежезамороженной плазмы крови предпочтение отдается рекомбинантным концентратам факторов свертывания крови [1].
Вирусинактивированная плазма на данный момент часто используется в практике оказания медицинской помощи. Несмотря на молекулярные и серологические методы скрининга и должный отбор доноров крови, до сих пор существует определенный риск заражения трансмиссивными инфекциями и переливания инфицированных компонентов крови. Это противоречит одному из ключевых принципов сегодняшней трансфузионной терапии, заключающемуся в использовании гемокомпонентов, обеспечивающих как лучший терапевтический эффект, так и безопасность в отношении гемотрансмиссивных инфекций, профилактику иммунологических реакций и осложнений [2].
Для увеличения инфекционной безопасности трансфузии плазмы на протяжении уже многих лет применяются технологии инактивации (редукции) возбудителей. Для инактивации патогенов в плазме крови человека используются два способа по следующим технологиям:
1) с амотосаленом (Интерсепт, Церус);
2) с метиленовым синим (Терафлекс, Макофарма).
Обе эти технологии относятся к фотодинамическим методам.
Фотодинамические агенты действительно не вызывают реактивности нуклеиновых кислот и действуют, выделяя активные формы кислорода для лизиса вирусных оболочек. Ультрафиолетовый В-свет (УФВ) без добавления фотосенсибилизаторов редуцирует безоболочечные поливирусы в плазме крови. Поэтому данные методы являются перспективными при производстве препаратов плазмы и крови.
Перед переливанием вирусинактивированную плазму нужно разморозить и довести до нужной температуры. Для этого необходимо наличие специализированного оборудования, требуются определенные затраты времени. В полевых условиях использовать свежезамороженную плазму попросту неудобно, учитывая незаменимость оборудования. Также невозможно использовать необходимые материалы и при оказании первой помощи при чрезвычайных обстоятельствах.
Температура хранения лиофилизированной (сублимированной) плазмы находится в пределах 20–26ºС. Процесс переливания лиофилизированной плазмы крови не требует наличия специализированного оборудования для разморозки. Следовательно, в значительной мере сокращается период времени на восстановление, так как нет необходимости размораживать материал, как при применении свежезамороженной плазмы. Проблема применения в условиях медицинской практики в России лиофилизированной (сублимированной) плазмы заключается в отсутствии производства данного вида продукции.
Таким образом, сочетание инактивации (редукции) вируса и лиофилизации – возможное решение двух важнейших вопросов: полная безопасность и хранение материала при комнатной температуре. Подобное решение вопроса снижает стоимость издержек, связанных с хранением и транспортировкой. Также лиофилизированная плазма имеет перспективы эффективного исследования в условиях оказания медицинской помощи первой необходимости.
Цель работы: изучить воздействие процесса лиофилизации на уровень содержания факторов свертывания и показателей свертываемости в вирусинактивированной лиофилизированной плазме.
Материалы и методы исследования
Образцы для исследования лиофилизированной плазмы были сделаны из свежезамороженной. Последняя характеризовалась биологической (гемостатической) полнотой. Все этапы приготовления образцов для экспериментов соответствуют современным стандартам. Всего было создано 100 образцов (n=100) [3–4].
Исследуемые образцы инактивировались по двум методикам:
1) редукция с использованием амотосалена и ультрафиолета спектра А;
2) вирусинактивация с использованием рибофлавина и УФ-облучения средств спектра B.
На каждое тестирование по каждой методике было взято по 50 образцов.
Ход лиофилизации был следующим: вирусинактивированная плазма помещалась в простерилизованные флаконы (10 мл), далее материал подвергался замораживанию (–30°С). Последующий этап – сублимационная сушка. Она проводилась в немецкой сублимационной установке типа ТГ-50. На установке устанавливались физические параметры эксперимента (давление и температура), велся постоянный контроль за их стабильностью. Полученный лиофилизат содержал остаточной влаги менее 1%.
Флаконы хранились под вакуумом в темном шкафу при комнатной температуре (22–27°С), относительная влажность составляла от 55% до 65%.
Восстановление лиофилизатов проходило методом солюбилизации образцов. Для этого добавляли воду для инъекций в количественном соотношении 1:1 комнатной температуры.
Восстановленные лиофилизаты испытывались тремя следующим методами:
Для контрольной группы были взяты 100 образцов.
Все результаты исследования были представлены в средних величинах со стандартными отклонениями. Статистическую оценку результатов исследования мы проводили с применением дескриптивных статистик при уровне значимости p
Результаты исследования и их обсуждение
В итоге проведенного исследования мы отмечали снижение количества вещества фактора VIII в исследуемых образцах (как в контрольной группе, так и в вирусинактивированной плазме, подвергшейся процессу лиофилизации, инактивированной двумя применяемыми методами). Подобный результат выявлен и у второго термолабильного фактора V, как в лиофилизированной свежезамороженной плазме, так и в лиофилизированной вирусинактивированной плазме при применении исследуемых технологий вирусинактивации. Остальные факторы свертывания менялись не столь существенно.
В вирусинактивированной плазме после лиофилизации при использовании двух методов инактивации показатели были следующими: фактор II – от 82% до 84%, фактор V – 68% в обеих исследуемых группах, фактор VII – от 92% до 94%, фактор VIII – от 60% до 63%, фактор IX – 72% в обеих исследуемых группах, фактор X – 90% в обеих исследуемых группах (табл. 1).
Показатели гемостаза плазмы
Лиофилизированная плазма, инактивированная амотосаленом
Лиофилизированная плазма, инактивированная метиленовым синим
Примечание: СЗП – свежезамороженная плазма.
В исследуемых образцах после лиофилизации при использовании обоих методов инактивации показатели физиологических антикоагулянтов были следующими: антитромбин III – от 88% до 90%, α 2 антиплазмин – от 87% до 89%, протеин C – от 95% до 96% (табл. 2).
Показатели физиологических антикоагулянтов плазмы
Лиофилизированная плазма инактивированная амотосаленом
Лиофилизированная плазма инактивированная метиленовым синим
α 2 антиплазмин
Примечание: СЗП – свежезамороженная плазма.
В образцах после лиофилизации показатели свертывающей системы были следующими: протромбиновое время (ПВ) находилось в пределах от 19 до 20 сек, активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) – от 38 до 39 сек (табл. 3).
Показатели свертывающей системы плазмы
Лиофилизированная плазма инактивированная амотосаленом
Лиофилизированная плазма инактивированная метиленовым синим
Примечание: СЗП – свежезамороженная плазма, ПВ – протромбиновое время, АЧТВ – активированное частичное тромбопластиновое время.
Лиофилизация вирусинактивированной плазмы крови различными методами приводила к некоторому улучшению показателей свертывания крови, в частности ПВ и АЧТВ, после сублимации вирусинактивированной плазмы, а также к понижению концентрации факторов V и VIII ниже физиологической нормы. Остальные факторы свертывания оставались в физиологических нормальных пределах. Достоверной разницы в показателях между испытуемыми образцами плазмы, инактивированной двумя указанными методами, не выявлено.
Проведенное исследование очевидно показало, что после вирусинактивации и процесса лиофилизации плазмы крови в ней наблюдается удлинение протромбинового времени (ПВ) и активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ). Также происходит понижение количество вещества фактора V и фактора VIII по сравнению с контрольной группой лиофилизированной свежезамороженной плазмой. Все остальные факторы свертывания крови и показатели не выходят за пределы физиологических нормальных значений. Зависимость была замечена при всех указанных методах испытаний. В результатах не выявлено существенных отклонений независимо от используемого способа вирусинактивации.
Также доказано, что протромбиновое время удлиняется до 70% при множественных травмах с сопутствующим геморрагическим шоком. Применение любого из двух видов плазмы (лиофилизированной или свежезамороженной) – эффективный метод контроля коагулопатии у подобных пациентов [4].
Примечательно, что большая часть исследований, освещающих эффекты лиофилизированной плазмы, была проведена в военных условиях [9–10]. Использование результатов военных исследований для обобщения выводов о клинических эффектах сомнительно, поскольку, в отличие от гражданских условий, в военных условиях объектами изучения являются преимущественно взрослые мужчины молодого возраста. Также существенно отличается друг от друга тип травм. Принадлежность к одному полу и малая разница в возрасте затрудняют сравнение, поэтому необходимо проведение дополнительных исследований, которые покажут эффект от применения лиофилизированной плазмы крови за пределами боевого поля.
Высокие риски инфицирования реципиентов гемотрансмиссивными инфекциями привели к тому, что использование лиофилизированной плазмы резко сократилось в течение 1960-х и 1970-х гг. В настоящее время благодаря различным методам вирусной инактивации компонентов крови использование лиофилизированной плазмы стало более безопасным, что значительно расширяет возможности ее более широкого применения.
В источниках детально описывается, как сохраняются коагуляционные белки в плазме крови в условиях сублимационной сушки [12]. В испытаниях проводился анализ количества вещества факторов свертывания крови, которые способны в значительной мере повлиять на пути свертывания. В результате выявлено понижение этих факторов в испытуемых образцах вирусинактивированной лиофилизированной плазмы независимо от пути инактивации. Такой итог совпадает с исследованиями, которые проводили ранее в данной тематике [5–7].
Дополнительно наблюдалось удлинение протромбированного времени и активированного частичного тромбопластинового времени. Предполагается, что причиной служит уменьшение активности действия факторов VIII и V. Важно сказать, что фактор VIII – это тот показатель, по которому проводят контроль качества плазмы крови как в России, так и в Европе, так как он выступает сильно изменяющимся фактором свертываемости [13].
В результате проведенной работы выявлено, что нет существенной разницы в показателях плазменного гемостаза лиофилизированной плазмы, которая была инактивирована любым из методов. Такие показатели делают возможным вывод, что для лиофилизации можно использовать плазму крови человека, инактивированную любым из исследуемых методов инактивации.
Следует отметить, что лиофилизированная плазма также имеет недостатки. Экономически она дороже, чем свежезамороженная плазма, на единицу, и ее внедрение в догоспитальное или больничное использование может увеличить расходы. Более того, материально-технические преимущества применения лиофилизированной плазмы могут быть незначительными в городских районах при коротком времени транспортировки. Доказательства того, целесообразно ли использовать короткое время транспортировки для восстановления лиофилизированной плазмы или ускоренной транспортировки, когда в отделении неотложной помощи имеются продукты крови, еще предстоит установить. В настоящее время три научных исследования по оценке применения лиофилизированной плазмы для гражданского использования продолжаются в Норвегии, Франции и Великобритании [15]. Это огромный шаг к расширению знаний о клинических эффектах лиофилизированной плазмы.
Заключение
В результате выполненное исследование подтверждает факт, что лиофилизация вирусинактивированной плазмы независимо от метода вирусинактивации не оказывает существенного влияния на уровень содержания факторов свертывания, показатели свертываемости и содержание физиологических антикоагулянтов в плазме. Поэтому по клиническим свойствам вирусинактивированная лиофилизированная плазма может выступать альтернативным вариантом свежезамороженной плазмы, но для выявления всех гипотетически свойств и возможных реакций организма нужно проводить ряд дополнительных исследований.
"Ничего делать не могла"
Плюс появились проблемы с сосудами на ногах и в глазах. Я даже думала, что у меня разрыв сетчатки на фоне кислородного голодания и повреждения сосудов. Но офтальмолог ничего не нашел, слава богу. Назначил капли, не помогли — глазные яблоки будто болели изнутри. Я консультировалась с разными врачами, никто ничего не мог толком сказать. Прописывали лекарства. От одних становилось только хуже, другие совсем не действовали.
Так как я индивидуальный предприниматель, смогла себе организовать очень лайтовый режим труда. Первые три месяца, до января, не работала вообще. Бизнес просто встал. Никаких доходов — проедала подушку безопасности.
"Пришлось уволиться с работы"
Александр Корчевный, 39 лет, Экибастуз, Казахстан. Сейчас лечится в Новосибирском центре профилактики тромбозов
Я заболел в начале июня 2020 года, заразился, предположительно, на работе. Сдал ПЦР-тест — положительный. Меня отправили на добровольную изоляцию в инфекционную больницу на 18 дней. Как оказалось, зря: родные один за другим заболели ковидом.
В стационаре особо ничем не лечили, только наблюдали, поскольку болезнь протекала не тяжело. Было легкое недомогание около трех дней, потом два дня плохо сбиваемая температура до 38. Пропали запахи, снизился аппетит, появились проблемы со сном. Первый "звонок" был дней через десять после постановки диагноза. Началась неожиданная тахикардия, паническая атака и подскочило давление. Сделали укол эуфиллина. Вроде немного полегчало.
Из больницы выписался не больной и не здоровый. Очень хотелось домой после изоляции. Но дальше было только хуже. Постепенно добавлялись новые симптомы, связанные с нервами и сосудами. Начались бесконечные походы по врачам. Никто из них до конца не понимал, в чем дело и как меня лечить. Все анализы более-менее спокойные. В течение года проходил курсы у пяти невропатологов в разных городах. Все ставили два диагноза: вегето-сосудистая дистония и синдром хронической усталости. Все намекали на психолога. У него я тоже побывал, он нарушений не выявил.
"Волосы лезли клочьями"
Наиля Вагизова, 38 лет, Казань
Когда я выписывалась из больницы, меня никто не предупреждал, что это может затянуться так надолго и восстановление будет столь тяжелым. От государственной медицины сейчас никакой помощи. Врачи в поликлинике ничего не говорят. Я сама сдаю все анализы платно, пью витамины, собираю информацию в интернете, от людей, которые тоже переболели. Я по профессии врач-лаборант, поэтому начала самостоятельно в теме разбираться и контролировать свое состояние.
"Мне легче думать, что это не ковид"
Заболела коронавирусом я в конце прошлой осени, но в декабре был уже хороший анализ. Про постковид меня врач сразу предупредила. Она сама перенесла COVID-19 и знает, что это такое. Сейчас время от времени у меня проявляются какие-то типичные симптомы, но я осознанно списываю их на основное заболевание. Мне так легче.
Я постоянно под медицинским наблюдением. Меня регулярно навещает врач. Мне бесплатно выдают антиагреганты, получаю в аптеке довольно дорогой антикоагулянт. На дом приезжают осматривать узкие специалисты и берут анализы. Но я редко беспокою поликлинику просьбами. Научилась с приступами справляться сама. В целом просто надеюсь, что рано или поздно тело приспособится к чужому вирусу. Если до сих пор выжила с таким списком болезней и даже перенесла ковид, значит, надо благодарить гены и ангела-хранителя.
"Главное — довериться врачам"
Валентина Нелюбова, 59 лет, Москва
"Это уже самостоятельное заболевание"
По данным исследователей Сеченовского университета, в России от постковидного синдрома страдают больше 20 процентов пациентов, перенесших коронавирусную инфекцию. Среди самых частых жалоб — слабость (точнее, быстрая утомляемость), одышка, тревога, депрессия, проблемы со сном и выпадение волос.
По его словам, симптомы ПКС, их выраженность и продолжительность часто зависят от тяжести течения COVID-19, но не всегда. Так, среди пациентов немало людей, которые относительно легко перенесли сам ковид, а от его осложнений мучаются уже более года.
"Основа реабилитационных программ при постковидном синдроме — дыхательная гимнастика, циклические физические упражнения, кардиопротекция. Мы стремимся защитить сердечную мышцу как медикаментозно, так и различными физиотерапевтическими вариантами. Используем массажи, барокамеры. Достаточно широкий спектр. Но надо понимать, что зачастую дома реабилитировать таких пациентов очень сложно. Лучше госпитализировать. Постковидный синдром — это уже самостоятельное заболевание, и к нему надо относиться очень серьезно", — подчеркнул профессор.
Однако если симптомы ПКС ярко выражены, а возможности обратиться к врачу нет, то специалисты советуют заниматься скандинавской ходьбой. Этот вид физической активности хорошо влияет на сердечно-сосудистую и дыхательные системы. А вот надувать шарики для восстановления объема легких ни в коем случае нельзя, чтобы не получить дополнительную легочную травму.
ЛИОФИЛИЗАЦИЯ (греч. lyo растворять + philia склонность; син.: сублимационная сушка, замораживание — высушивание) — процесс получения обезвоженного материала (препарата, ткани и т. п.), способного легко растворяться в воде; в отличие от высушивания (см.), лиофилизации предусматривает предварительное замораживание материала и последующую сушку из замороженного состояния в вакууме. Процесс высушивания имеет две фазы — сублимацию льда при температурах ниже 0° и десорбцию — удаление части свободной и связанной влаги при температурах выше 0°. Л. широко используется для получения сухих мед. препаратов и биол, материалов благодаря минимальным физ.-хим. и биол, превращениям в получаемом материале, отсутствию вспенивания, способствующего денатурации белков, малой изменяемости формы и структуры материала и возможности его длительного хранения при комнатной температуре, а при соответствующей упаковке — и в тропических условиях.
Применительно к мед. препаратам Л. впервые была осуществлена в 1909 г. Шаккеллом (L. F. Shackell), который высушил вирус бешенства, а также ряд антисывороток. Лиофилизированные антисыворотки, в отличие от антисывороток, высушенных тепловым способом, легко растворялись, и их р-ры были прозрачными. Однако широкое развитие Л. получила в 30-х гг. 20 в. после того, как Флосдорф (E. W. Flosdorf) приготовил этим методом сухую плазму крови, а Л. Г. Богомолова, H. Н. Титов и М. А. Калашников спроектировали один из первых в мире сублимационных аппаратов камерного типа. В последующие годы началось бурное развитие Л. Этим методом готовят различные сухие мед. препараты: плазму крови, фибриноген, криопреципитат, тромбин, фибринолизин, вакцины, сухую бактериальную массу (колибактерин и др.), антибиотики, гормональные и ферментные препараты, коллагенные губки, различные экстракты, гистол, препараты для гистохимических и электронно-микроскопических исследований и т. д. Высушивание из замороженного состояния в вакууме распространено в пищевой, микробиологической, химической и других отраслях промышленности.
Л. мед. и биол, препаратов проводится в стеклянных флаконах, ампулах и противнях. Для обеспечения оптимальных условий замораживания и последующего высушивания температура замораживания должна соответствовать эвтектической температуре р-ра, при к-рой р-р полностью замерзает и отношение поверхности к объему замороженного препарата будет максимальным, что обеспечит наибольшую поверхность сублимации при минимальной толщине слоя.
При получении препаратов сухой плазмы крови — фибриногена, криопреципитата, альбумина, гамма-глобулина и др.— предварительное замораживание проводят во флаконах, помещенных в спиртовую ванну (—40—45°) и вращающихся вокруг горизонтальной оси. В зависимости от количества замораживаемого препарата продолжительность процесса составляет 30—40 мин. Микроскопические исследования сухой плазмы крови, замороженной этим методом, показали, что сухой материал состоит из нескольких слоев, на границах которых обнаруживаются изменения белковой структуры, т. к. продолжительность замораживания относительно велика. Для сокращения периода замораживания и образования мелкокристаллической структуры льда выступающую из ванны поверхность флакона поливают охлажденным спиртом. Используется также метод центробежного замораживания, при к-ром флаконы с помощью специальных устройств (моторы, турбинки) вращаются в вертикальном положении со скоростью 800—1500 об/мин. Охлаждение производится путем разбрызгивания охлажденного до —45" спирта на стенки флаконов.
Предварительное замораживание препаратов в пенициллиновых флаконах и ампулах осуществляется в холодильных камерах с температурой внутри бункера —40—50°. В лаб. практике для замораживания может использоваться твердая углекислота (— 78°), охлаждающая смесь изо льда (2 части) и поваренной соли (1 часть). Такая смесь позволяет получить температуру до —21,3°. При статическом замораживании ампулы могут быть помещены в холодильный шкаф в вертикальном либо наклонном положении. При самозамораживании препаратов используется охлаждающий эффект, возникающий при испарении воды в вакууме.
Библиография: Бланков Б. И. и Клебанов Д. Л. Применение лиофилизации в микробиологии, М., 1961, библиогр.; Д о-л и н о в К. Е. Основы технологии сухих биопрепаратов, М., 1969, библиогр.; H и-к и т и н E. Е. и 3 в я г и н И. В. Замораживание и высушивание биологических препаратов, М., 1971, библиогр.; Подольский М. В. Высушивание препаратов крови и кровезаменителей, М., 1973, библиогр.; Применение замораживания — высушивания в биологии, под ред. Р. Харриса, пер. с англ.. М., 1956; F I о s d о r f E. W. Freeze-Drying-, X. Y., 1949.
Читайте также: