Метод парных сывороток при гриппе

Обновлено: 27.03.2024

Известно более 200 разновидностей вирусов, избирательно поражающих респираторный тракт человека (возбудителей ОРВИ).

У большинства возбудителей ОРВИ первичное размножение вирусов происходит в слизистой оболочке дыхательной системы, поэтому клиническая картина сходная, заболевание протекает в виде ринита, ринофарингита, как правило, в легкой форме. У детей раннего возраста вирусы могут поражать нижние отделы респираторного тракта, и болезнь протекает в более тяжелой форме в виде бронхитов, бронхиолитов, пневмоний. Наиболее тяжело протекающей острой вирусной респираторной инфекцией является грипп, который часто принимает эпидемическое распространение, характеризуется явлениями общей интоксикации, лихорадкой, поражением дыхательного тракта, нервной и сердечно-сосудистой систем. Максимальное число тяжелых форм течения инфекции наблюдается в период пандемий, обусловленных новым вариантом вируса гриппа.

Лаборатория оуществляет диагностику с помощью экспресс-методов, вирусологических и серологических методов исследования. Быстрая (экспресс) диагностика гриппа и ОРВИ:

1)метод флюоресцирующих антител (МФА) - основан на выявлении вирусных антигенов в клетках эпителия носовых ходов, конъюнктивы (при явлениях конъюнктивита). Исследуемый материал: мазки из носа, конъюнктивы, взятые в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни. Определяемые возбудители: - вирусы сезонного гриппа типа А (H1N1) - вирусы сезонного гриппа типа А (H3N2) - вирусы гриппа типа В - вирусы парагриппа 1, 2, 3 типов - аденовирусы - респираторно-синцитиальный вирус;

2) метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)- основан на обнаружении в клинических пробах генетического материала вирусов (РНК или ДНК)- является наиболее современным, высокочувствительным методом.

Исследуемый материал: мазки из носа и зева, взятые в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни, секционный материал. Определяемые возбудители:

- вирусы пандемического высокопатогенного гриппа типа А (H1N1)

- вирусы гриппа типа А

- вирусы гриппа типа В - вирусы парагриппа 1, 2, 3,4 типов

- аденовирусы - респираторно-синцитиальный вирус;

Вирусологическая диагностика - выделение вируса на чувствительной клеточной культуре с последующей идентификацией в реакции нейтрализации или ПЦР.

Этот метод отличается трудоемкостью и длительностью и используется, главным образом, для эпидемиологических и научных целей (изучается изменчивость вирусов, что помогает прогнозировать эпидемические подъемы гриппа, отбираются актуальные штаммы, пригодные для изготовления вакцин) Исследуемый материал: мазки из носа и зева (в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни).

- вирусы гриппа типа А (разные серотипы)

- вирусы гриппа типа В Серологическая диагностика является ретроспективной. Она выявляет прирост титров антител к возбудителям заболевания в парных сыворотках крови, что позволяет установить точную этиологию даже при отрицательных результатах других методов лабораторной диагностики, а также при бессимптомном или атипичном течении гриппа, широко применяется и для эпидемиологических целей. Исследуемый материал: сыворотки крови, взятые в начале заболевания и через 10- 14 дней.

Возбудители к которым определяется прирост титров антител:

- вирусы сезонного гриппа типа А (H1N1)

- вирусы сезонного гриппа типа А (H3N2) - вирусы гриппа типа В

- вирусы парагриппа 1, 2, 3 типов

В период подьема заболевамости гриппом и ОРВИ (в октябре- декабре 2009г.) вирусологической лабораторией обследовано методом флюоресцирующих антител (МФА) 432 человека. У 27% заболевших был выявлен аденовирус, у 8,3% - вирус парагриппа 3 типа, у 8% - респираторно-синцитиальный вирус, у 2% - вирусы парагриппа 1, 2 типов, у 0,2% - вирус сезонного гриппа типа А (H1N1).

При обследовании методом ПЦР 565 больных с подозрением на высокопатогенный грипп типа А (H1N1) РНК вируса обнаружена у 213 человек (в 38% проб). По даннным серологического обследования 67 больных ( в октябре и ноябре) заболевания гриппозной этиологии составили 4,3 % (грипп А(H1N1) сезонный - 2 человека), парагрипп 3 типа — 4,5% ( 3 человека), парагрипп 2 типа — 1,5% ( 1человек).

Выявление противовирусных антител ( AT ) в сыворотке крови. РТГА. РСК. РИФ. Иммуносорбционные методы выявления противовирусных антител.

Более простой и доступный подход — выявление противовирусных антител ( AT ) в сыворотке. Образцы крови необходимо отбирать дважды: немедленно после появления клинических признаков и через 2~3 нед. Чрезвычайно важно исследовать именно два образца сыворотки. Результаты однократного исследования нельзя считать окончательными из-за невозможности связать появление AT с настоящим случаем. Вполне возможно, что эти AT циркулируют после предшествующей инфекции. В подобной ситуации роль исследования сыворотки, полученной в период рекон-валесценции, трудно переоценить. На наличие заболевания в период отбора первой пробы указывает не менее чем четырёхкратное увеличение титра AT, выявленное при исследовании второй пробы.

Перечисленные ниже методы не позволяют дифференцировать антитела ( AT ), образующиеся во время болезни и циркулирующие после выздоровления (продолжительность этого периода вариабельна для различных инфекций). Поскольку для адекватной диагностики необходимо подтвердить достоверное увеличение титров AT в двух пробах, то первую пробу исследуют в острой фазе, а вторую — в период выздоровления (через 2-3 нед). Полученные результаты носят ретроспективный характер и более пригодны для проведения эпидемиологических обследований.

РТГА выявляет AT, синтезируемые против гемагглютининов вирусов (например, вируса гриппа). Метод позволяет легко выявлять подобные антитела ( AT ) в сыворотке больного.

Выявление противовирусных антител ( AT ) в сыворотке крови. РТГА. РСК. РИФ

РСК — основной метод серодиагностики вирусных инфекций (среди доступных). Реакция выявляет комплементсвязывающие IgM и IgG, но не дифференцирует их; для оптимизации получаемых результатов постановка реакции требует определённых навыков персонала.

РИФ. При возможности получить биоптат инфицированной ткани и доступности коммерческих наборов AT, меченных флюоресцеином, диагноз может подтвердить реакция прямой иммунофлюоресценции. Постановка реакции включает инкубацию исследуемой ткани с AT, их последующее удаление и люминесцентную микроскопию образца.

Иммуносорбционные методы выявления противовирусных антител

Иммуносорбционные методы (например, ИФА и РИА) более информативны, поскольку выявляют IgM и IgG по отдельности, что позволяет делать определённые выводы о динамике инфекционного процесса или состоянии реконвалесценции. Для выявления AT известный Аг сорбируют на твёрдом субстрате (например, на стенках пробирок, пластиковых микропланшетах, чашках Петри) и вносят различные разведения сыворотки пациента. После соответствующей инкубации несвязавшиеся AT удаляют, вносят антисыворотку к Ig человека, меченную ферментом, повторяют процедуру инкубирования и отмывания несвязанных AT и вносят какой-либо хромогенный субстрат (чувствительный к действию фермента). Поскольку изменение окраски пропорционально содержанию специфических AT, то вполне возможно определение их титра спектрофотометрическим способом. В диагностике ВИЧ-инфекции наи- большее распространение нашёл метод иммуноблотннга.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

ОРВИ часто вызывают представители 3-х семейств РНК-содержащих вирусов – парамиксовирусы (респираторно-синцитиальный вирус, метапневмовирус человека, вирусы парагриппа 1–4), коронавирусы (229E, OC43, NL63, HKUI) и пикорнавирусы (риновирусы) и 2-х семейств ДНК-содержащих вирусов – аденовирусы (виды B, C, E), парвовирусы (бокавирус человека). Все вышеперечисленные вирусы, за исключением бокавируса человека, вызывают заболевания верхних и нижних дыхательных путей у всех возрастных групп, но наиболее тяжело протекают ОРВИ, вызванные респираторно-синцитиальным вирусом, метапневмовирусом, вирусами парагриппа и коронавирусами, у детей в возрасте до 5 лет, пожилых и у лиц с иммунодефицитом. Респираторно-синцитиальный вирус (РС-вирус) в отдельные годы вызывает до 40% всех ОРВИ. С РС-вирусом связывают формирование хронических бронхитов и бронхиальной астмы у 30% детей, перенесших бронхиолит в течение первых 6-ти месяцев жизни. Метапневмовирусная инфекция сходна по клинической картине с РС-вирусной инфекцией. Доля вирусов парагриппа в этиологической структуре ОРВИ составляет от 9 до 30%. Среди детей с заболеваниями нижних дыхательных путей, госпитализированных в стационары, инфицированные вирусами парагриппа в среднем составляют около 12%, что ставит вирусы парагриппа на второе место после РС-вируса по частоте госпитализации и тяжести заболевания. Аденовирусы часто вызывают вспышки в детских дошкольных учреждения, домах ребенка, домах престарелых, воинских частях. Инфекция, вызванная коронавирусами, тяжелее протекает у детей первого года жизни преимущественно в форме крупа. Самым распространенным возбудителем ОРВИ среди взрослого населения и детей всех возрастных групп является риновирусы, вызывающие воспаление слизистой верхних дыхательных путей с ринореей и кашлем; в качестве осложнения нередко развивается трахеит. В 2005 г. был описан бокавирус человека, который обнаруживается в назофарингеальных мазках и мокроте у детей, страдающих ОРЗ верхних или нижних дыхательных путей со среднегодовой частотой 1,5–19,0%, а также в фекалиях детей с гастроэнтеритами с частотой 1–2%. Помимо этого, бокавирусы часто обнаруживаются в составе сочетанной инфекции с другими вобудителями ОРЗ. Основной восприимчивой группой являются дети до 3 лет. У взрослых отмечают случаи заболевания бокавирусной инфекцией, ассоциированные, как правило, с пневмонией на фоне иммунодефицита. У лиц со сниженной активностью иммунной системы, ОРЗ могут вызывать также энтеровирусы, вирусы герпеса, цитомегаловирус.

Показания к обследованию. Наличие у пациента остро возникшего заболевания с локальными симптомами поражения верхних или нижних дыхательных путей при наличии обще-интоксикационного синдрома.

Материал для исследований

  • Мазки из носоглотки – культуральное исследование, обнаружение АГ;
  • мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки – выявление РНК/ДНК вирусов (поражение верхних дыхательных путей);
  • мокрота, плевральная жидкость, аспираты из зева, БАЛ – выявление РНК/ДНК вирусов (поражение нижних дыхательных путей);
  • сыворотка крови – обнаружение АТ.

Этиологическая лабораторная диагностика ОРВИ включает выделение вируса в культуре клеток, выявление РНК/ДНК возбудителей и их АГ, обнаружение специфических АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Выделение в культуре клеток возможно для респираторно-синцитиального вируса, вирусов парагриппа 1–3 типов, метапневмовируса человека и аденовирусов. Для рутинной диагностики метод не используется.

Для обнаружения АГ респираторно-синцитиального вируса, вирусов парагриппа 1–3 и аденовирусов используют ИХА и РИФ (МФА), последний отличается субъективностью при интерпретации результатов анализа. Аналитические характеристики наборов для РИФ и ИХА широко варьируют: при их использовании в период эпидемий могут быть выявлены не все случаи инфицирования (недостаточная диагностическая чувствительность по сравнению с культуральными методами и ПЦР), в межэпидемический период могут быть получены ложноположительные результаты (низкая специфичность).

При выявлении специфических АТ оценивают нарастание их титра в динамике в пробах крови, полученных с интервалом в 2 недели (парные сыворотки). Для обнаружения АТ к вирусам используют различные методы: к респираторно-синцитиальному вирусу – РН, РСК, РНГА, ИФА; вирусам парагриппа 1–4 – РТГА, РСК, ИФА; аденовирусам – ИФА; риновирусам – РСК; исследования носят ретроспективный характер. По сравнению с РСК метод ИФА отличается большей чувствительностью.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Для быстрой этиологической диагностики ОРВИ используется выявление НК вирусов методом ПЦР. Выявление АТ применяют для определения уровня коллективного гуморального иммунитета, ретроспективной диагностики и ретроспективного анализа природы эпидемических вспышек ОРВИ. Обнаружение АГ целесообразно использовать только для массового скрининга в эпидемиологических целях.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Возможность сочетанного инфицирования несколькими возбудителями ОРЗ может осложнять течение болезни, поэтому необходимо проведение исследований полного спектра возбудителей. Несоблюдение техники получения клинического материала для исследования может снизить информативность исследования вплоть до получения отрицательного результата. При выявлении АТ пробы крови для исследования берут в начале заболевания и повторно через 10–14 дней, диагностическим считается нарастание титра АТ не менее чем в 4 раза в повторно взятой пробе. В связи с недостаточной чувствительностью тестов для выявления АГ методами РИФ и ИХА получение отрицательных результатов при их использовании не исключает возможного инфицирования.

Клиника и диагностика гриппа. Современное лечение гриппа

Болезнь чаще всего начинается внезапно, ознобом и быстрым повышением температуры до высоких цифр, головной болью с локализацией в области лба и глазниц, мышечной болью, резкой слабостью. Ведущим синдромом является общая интоксикация, катаральные явления со стороны верхних дыхательных путей менее выражены. Интоксикация достигает апогея в первые-вторые сутки. В тяжелых случаях появляются головокружение, тошнота, возможны рвота, носовые кровотечения, нарушения сна, сознания, судороги.

Объективные данные обычно скудные: легкая одутловатость и гиперемия лица, глаза блестящие, кожа горячая и влажная. В первый день-тахикардия, а затем брадикардия; тоны сердца приглушены, АД вначале повышено, а позднее понижено. Несколько позднее присоединяются катаральные воспаления слизистых оболочек верхних дыхательных путей: насморк со скудным отделяемым, заложенность носа, першение в горле, болезненность за грудиной (трахеит), сухой болезненный кашель, охриплость, чувство стеснения в груди, одышка. Слизистые оболочки носа, глотки, гортани, особенно трахеи отечны и гиперемированы, иногда с кровоизлияниями.

В неосложненных случаях температура постоянного или ремитирующего характера длится 3-4 дня, реже 6-7 дней и снижается литически. Иногда температурная кривая имеет двугорбый характер.

Клинические проявления могут варьировать, что наиболее полно отражено в классификации, предложенной Ф.Г. Эпштейном. В зависимости от типа вируса, возраста больных и иммунитета формы гриппа могут быть бессимптомными (афебрильная форма гриппа), без выраженных катаральных явлений (акатаральная форма), тяжелые гиперпиретические с быстрым летальным исходом.

Наиболее частыми осложнениями гриппа являются бактериальные суперинфекции (пневмонии, другие очаговые инфекции).
В практике используют чаще всего серодиагностику, применяя метод исследования парных сывороток (кровь у больного берется в первые дни и спустя 5-7 дней); осуществляют постановку РТГА, РСК и др. Возможна экспресс-диагностика: берут мазки-отпечатки со слизистой носа и проводят иммунолюминес-центное исследование - свечение вируса гриппа наблюдается в цитоплазме, тогда как при аденовирусных инфекциях- в ядре. Для определения циркулирующего штамма вируса в данном эпидемическом сезоне проводят вирусологические исследования смывов из ротоглотки и материала, полученного тампоном из носа. Проводят заражение куриных эмбрионов и культур тканей.

диагностика гриппа

Современное лечение гриппа

Во время лихорадки и спустя 2 дня больной гриппом должен соблюдать постельный режим. При гриппе, независимо от тяжести течения, работающим выдают лист нетрудоспособности на 5 дней, при необходимости его продлевают. Лечение основной массы больных проводится на дому. Показанием для госпитализации является тяжелое течение гриппа, наличие сопутствующих заболеваний легких, сердечнососудистой системы и др., при которых высока степень их обострений.

Рекомендуется молочно-растительная витаминизированная (особенно витамином С) диета, обильное питье теплой подкисленной жидкости (чай с лимоном, клюквенный морс, фруктовые соки без консервантов). Показано горячее питье из плодов малины, калины, эвкалипта, цветов ромашки и др., а также горячее молоко с медом.

Назначение противовирусных препаратов показано при тяжелом течении гриппа и больным гриппом с сопутствующими заболеваниями, обострение которых может представлять угрозу для жизни больного. При гриппе А хорошо зарекомендовали препараты этиотропного действия: ремантадин внутрь по схеме. В самом начале болезни показано применение человеческого лейкоцитарного или рекомбинантного интерферона по 3-5 капель в каждый носовой ход через 1-2 ч в течение 2-3 дней. Для лечения ринита используют оксалиновую мазь. При затрудненном носовом дыхании галазолин, нафтизин, эфедрин в виде капель в носовые ходы. Жаропонижающие препараты назначают только при гиперпирексии (аскофен, аспирин, парацетамол и др.); при температуре до 38,5°С назначение их нецелесообразно, так как лихорадочная реакция носит защитно-приспособительный характер (усиливается, в частности, выработка эндогенного интерферона).

Всем больным гриппом показано назначение поливитаминов, особенно аскорбиновой кислоты до 1,0 г в сутки. При мучительном кашле - кодтерпин, коделак, либексин и др. При нарушении сна - микстуру Бехтерева, валокордин.

Проводят дезинтоксикационную терапию: полиглюкин, реополиглюкин, 5% раствор глюкозы, гемодез, плазму в объеме парентерально вводимой жидкости не более 500-800 мл в сутки. Назначают сердечно-сосудистые препараты (коргликон, кордиамин, солюкамфокаин и др.); оксигенотерапию, при геморрагических проявлениях - аскорутин.

Антибактериальные средства назначают только при осложненных формах гриппа; назначение антибиотиков с целью профилактики осложнений недопустимо, так как они профилактическим действием не обладают.

Читайте также: