Метод пцр гепатит в инвитро

Обновлено: 24.04.2024

Метод ПЦР — позволяет идентифицировать в биологическом материале искомый участок генетического материала и обнаружить единичные молекулы ДНК вируса, не выявляемые другими методами. Принцип метода основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК.

С помощью ПЦР-анализа можно диагностировать инфекцию в остром периоде и выявлять случаи носительства.

Аналитическая чувствительность: РНК вируса гепатита С — 15 МЕ/мл или 38 копий/мл.

Ультрачувствительные тесты — это тесты с высокой аналитической чувствительностью. Тест позволяет проводить диагностику вируса гепатита С на ранних сроках, с момента инфицирования. Исследование помогает выявить инфекцию, даже в тех случаях, когда стандартные методы ПЦР-диагностики бессильны. Исследование оптимально для тестирования донорской крови.

Исследование вируса гепатита С ультрачувствительным методом, особенно актуально для пациентов, имеющих субклиническую форму гепатита, а также является достоверным способом оценки эффективности проводимой противовирусной терапии в процессе лечения.

Вирус гепатита С
Вирус гепатита С (ВГС, HCV) поражает клетки печени, а также некоторые клетки крови (нейтрофилы, моноциты, В-лимфоциты).

Основной путь передачи вируса гепатита С — кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты), реже — заражение половым путём. Одним из основных факторов риска инфицирования является употребление инъекционных наркотиков.

слабость;
утомляемость;
тошнота;
отсутствие аппетита;
потеря веса;
при циррозе печени может появиться желтуха.

Попадая в организм, вируса гепатита С (HCV) проникает в макрофаги крови и гепатоциты печени, где происходит его возобновление. Печень повреждается главным образом за счет иммунного лизиса, также вирус оказывает прямое цитопатическое действие.

Длительность инкубационного периода от 6 до 8 недель. В конце инкубационного периода повышаются уровни печеночных трансаминаз, возможно увеличение печени и селезёнки. Острый период протекает со слабостью, снижением аппетита. В 30% случаев возникает лихорадка, артралгия, полиморфная сыпь. Возможны диспептические явления и полинейропатии. Очень редко возникает холестаз. Лабораторные показатели отражают цитолиз. При высоком уровне трансаминаз (более 5 норм) и признаках печеночно-клеточной недостаточности следует заподозрить микст-инфекцию: HCV+HBV.

Острый вирусный гепатит
Острый вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно и в большинстве случаев остаётся невыявленным. Наиболее тяжёлые исходы хронического гепатита С — цирроз печени и гепатоцеллюлярная карцинома.

для выявления скрытых (латентных) форм вируса гепатита С;
при наличии в крови антител к вирусам гепатита С, но неподтверждённом стандартными видами ПЦР-диагностики;
для оценки эффективности проводимой противовирусной терапии в процессе лечения и через 24 недели после окончания лечения;
для раннего выявления острого вируса гепатита С у лиц, контактировавших с заражённым человеком.

Интерпретация результатов
Ответ выдается в количественном формате.

Референсные значения: не обнаружено.

Аналитическая чувствительность: РНК вируса гепатита С —15 МЕ/мл или 38 копий/мл.

Синонимы: Вирус гепатита С (ВГС), количественное определение РНК. Hepatitis C Virus RNA, Quantitative, Real-Time PCR; Blood, HCV Viral Load; Hepatitis C Virus RNA Quant.

Гепатит С вызывается РНК-содержащим вирусом семейства Flaviviridae – вирусом гепатита С (ВГС, HCV). Вирус передается парентерально (использование загрязненных игл, шприцев и других медицинских инструментов), реже половым путем, а также (4-6%) от инфицированной матери ребенку (вертикальный путь). Клиническое течение острого гепатита С обычно бывает легким.

Вирус гепатита С проявляет большую вариабельность генома, у инфицированных лиц происходит быстрая мутация вируса, с чем, возможно, связано ускользание его от механизмов иммунной защиты и большая частота хронизации этой инфекции. Хроническая инфекция вирусом гепатита С характеризуется, с одной стороны, постоянной репликацией вируса, а с другой – активным, но недостаточным иммунным ответом организма. В отличие от гепатита В, антигены вируса гепатита С в крови не улавливаются в достаточных количествах (их обнаруживают в биоптатах печени). Это ограничивает возможности лабораторной оценки течения и активности инфекционного процесса. Диагноз гепатита С в настоящее время основывается на прямом обнаружении вирусной РНК методами ПЦР и обнаружении anti-HCV антител.

Количественная характеристика содержания РНК вируса гепатита С в клинических образцах важна для оценки эффективности противовирусной терапии и имеет прогностическое значение для определения хронизации данного гепатита.

В данном исследовании определение РНК вируса гепатита С в сыворотке крови проводится методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени.

определяемый фрагмент – специфический участок РНК вируса гепатита С;
специфичность определения – 100%;
чувствительность определения – 60 МЕ/мл;
линейный диапазон: 102 - 1х108 МЕ/мл.

Выявление РНК гепатита С в сыворотке крови используется при ведении пациентов с хронической ВГС-инфекцией для оценки вирусологического ответа на ранних этапах курса антивирусной терапии.

Специальной подготовки к исследованию не требуется.С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться здесь >>

Положительный качественный тест на наличие РНК вируса гепатита С в сыворотке крови.
Определение вирусной нагрузки.
Определение тактики лечения пациентов.
Точная оценка эффективности лечения.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения: количество РНК вируса гепатита C, выраженное в МЕ/мл. Для пересчета в копии/мл следует применять соотношение 1 МЕ=2,5 копии РНК вируса гепатита С.

Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Напоминаем вам, что самостоятельная интерпретация результатов недопустима, приведенная ниже информация носит исключительно справочный характер.

Антитела к вирусу гепатита C класса IgM и IgG (anti-HCV total): показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.
Гепатит С – вирусное заболевание, которое может протекать в бессимптомной и легкой форме в течение нескольких недель, но иногда может перейти в хроническую форму.

По статистике ВОЗ, самой частой причиной развития рака печени является предшествующее поражение органа вирусом гепатита С. У некоторых пациентов после контакта с вирусом развивается острая форма гепатита, а у ряда зараженных происходит спонтанная элиминация вируса (самостоятельное излечение) без проведения специфического лечения в течение нескольких лет после инфицирования.

Заражение вирусом гепатита С происходит при контакте с кровью, вагинальным секретом или спермой больного, при использовании загрязненных медицинских инструментов, в том числе в маникюрных и тату-салонах, при стоматологических и эстетических процедурах (инъекции ботокса, перманентный макияж), при введении наркотических веществ общими иглами и шприцами, при незащищенном половом контакте. Возможна передача вируса гепатита С от зараженной матери ребенку в процессе родов. Однако в настоящее время при выявлении этого заболевания у женщины практикуют отказ от естественных родов для снижения риска инфицирования ребенка. С учетом того, что вирус гепатита С не передается с грудным молоком, слюной, пищевыми продуктами, при поцелуях и объятьях, риск заражения бытовым путем минимален.

Диагностика гепатита С определяется особенностями строения вируса.

Вирус состоит из нуклеокапсида, содержащего РНК и окруженного липидной (жировой) мембраной, на поверхности которой расположены гликопротеины Е1 и Е2.

Показания для определения антител к вирусному гепатиту С классов IgM и IgG (anti-HCV total):

Предоперационная подготовка.
Беременность.
Обследование доноров крови.
Подготовка к вакцинации.
Желтухи различного генеза.
Повышение маркеров повреждения клеток печени (АЛТ, АСТ, билирубин и др.) неясного генеза.
Установление исходной причины поражения печени (например, при циррозе печени неясного генеза).
Наличие клинической картины вирусного гепатита (как острого, так и хронического).
Скрининговая диагностика после незащищенного полового контакта, при контакте с кровью больного, инфицированного вирусом гепатита С.

С учетом особенностей течения данного заболевания выявление в крови циркулирующих антител возможно только по прошествии инкубационного периода – в среднем через 4-6 недель после инфицирования.
Взятие крови проводят натощак (8 часов голода), можно пить обычную воду.
За 30 минут до взятия крови рекомендовано исключить физическую нагрузку.
Накануне сдачи любых анализов, отражающих функцию печени, в том числе и для выявления антител к вирусу гепатита С, категорически запрещено употребление алкоголя и наркотических веществ, необходимо соблюдать диету, исключив из рациона жирные, копченые продукты и специи.

Интерпретацию результатов анализа крови на суммарные антитела к вирусу гепатита С проводит специалист! В норме результат должен быть отрицательным.

Причины, по которым антитела не выявлены:

Отсутствие инфицирования и заболевания.
Слишком раннее проведение анализа (до шести недель после инфицирования).

Беременность.
Патологические состояния, при которых уровень всех иммуноглобулинов повышен (тяжелые системные инфекции).
Перенесенный в легкой (или бессимптомной) форме гепатит С, когда в крови присутствуют антитела.

ВИЧ-инфекция.
СПИД.
Нарушение иммунитета – иммунодефицитные состояния (врожденные или приобретенные вследствие приема различных лекарственных препаратов, в процессе прохождения химио- или лучевой терапии).
Аутоиммунные состояния.

IgM + IgG – инфицирование вирусом гепатита С; перенесенная бессимптомная инфекция; вследствие проведенной противовирусной терапии; ложноположительный результат.
IgM – острая инфекция.
IgG – хроническая инфекция; после проведенного лечения гепатита С; инфицирование ребенка от матери (вертикальная передача); спонтанное выздоровление от гепатита С без проведения специфического лечения.

Биохимический анализ крови для оценки степени тяжести поражения печени ( общий белок , белковые фракции , С-реактивный белок , АЛТ , АСТ , ЛДГ , ГГТ , билирубин общий , прямой , холестерин , креатинин , глюкоза , электролиты: калий, натрий, хлор , кальций )

Анализ свертывающей системы крови (коагулограмма) . При поражении печени нарушается ее функция, которая заключается в синтезе белков – факторов свертывания. В связи с этим отмечается повышенная кровоточивость, легче образуются синяки, требуется больше времени для остановки кровотечений, чем в норме.

УЗИ органов брюшной полости.

Неинвазивные диагностические исследования, представляющие собой комплекс расчетных тестов, которые дают возможность судить об активности процесса без биопсии печени, например, ФиброТест (FibroTest) , ФиброМакс (FibroMax) , СтеатоСкрин (SteatoScreen) .

Пункционная биопсия печени.
Альфа-фетопротеин – белок, используемый для ранней диагностики рака печени.

ВАЖНО!

Этот анализ принимается по сокращённому графику. Это связано с тем, что биоматериал должен попасть в лабораторию в очень короткий срок. Проверьте расписание сокращённого графика приёма на странице вашего отделения. При сдаче вне графика срок выполнения исследования может быть увеличен на 1-3 дня.

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Вирус гепатита B, ДНК (HBV, ПЦР) плазма, кач.?

Диагностика гепатита В.
Выявление носителей вируса гепатита В.
Контроль эффективности лечения гепатита В.
Подготовка к госпитализации.

Подробное описание исследования

Исследование проводится методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени и позволяет обнаружить ДНК вируса гепатита В. Используется для диагностики гепатита В и контроля эффективности лечения.

Гепатит В (ВГВ) – инфекционное заболевание, преимущественно поражающее печень. Возбудитель — ДНК-содержащий вирус гепатита В (ВГВ, HBV) из семейства Hepadnaviridae. Источник инфекции — больной человек или бессимптомный носитель. Вирус гепатита В стойкий во внешней среде и длительно сохраняется на поверхностях. При комнатной температуре он способен сохранять активность до 3 месяцев, а при отрицательной температуре до 20 лет. Он также не чувствителен к ультрафиолету, формалину, высушиванию и хлорсодержащим дезинфицирующим средствам с низкой концентрацией активного вещества. Зато нагревание до 60С убивает вирус за 4 часа.

половой – заражение связано с микроповреждениями кожи и слизистых оболочек;
гемоконтактный – заражение биологическими жидкостями инфицированного ВГВ человека при совместном использовании предметов личной гигиены;
перинатальный – передача вируса от матери ребенку при родах, реже – через гемато-плацентарный барьер;
медицинский парентеральный – при медицинских манипуляциях инструментами, не прошедшими достаточную обработку (стоматологическими, эндоскопическими и т. п.), переливании крови и ее компонентов;
немедицинский парентеральный – при нанесении татуировок и выполнении других процедур (бритье, маникюр, проколы мочки уха и т. п.) инструментами, не прошедшими достаточную обработку.

В результате заражения вирусом развивается острый или хронический вирусный гепатит. Инкубационный период инфекции — до 12 месяцев. Заболевание протекает циклично.

Преджелтушный период длится 1-16 дней. Симптомы преджелтушного периода:

субфебрильная лихорадка;
слабость;
тошнота;
повышенная утомляемость;
снижение аппетита;
сыпь на коже;
снижение работоспособности;
боли в животе (редко).

В желтушный период отмечается изменение цвета склер и слизистых оболочек. Он сопровождается кожным зудом, потемнением мочи, обесцвечиванием кала. При этом печень увеличивается в размерах, изменяются биохимические показатели крови (возрастает концентрация ферментов печени и общего билирубина).

Гепатит считается хроническим, если заболевание продолжается более 6 месяцев. При этом в печени возникают некротические и фиброзные изменения, в результате которых часть клеток погибает, а другая часть замещается соединительной тканью. При этом орган не может полноценно функционировать.

Читайте также: