Методы обеззараживания инфицированного материала

Обновлено: 24.04.2024

Дезинфекция представляет собой комплекс различных мер, которые направлены на то, чтобы уничтожить возбудителей, провоцирующих инфекционные заболевания, а также для того, чтобы разрушить токсины. Процесс дезинфекции относится к одним из видов обеззараживающих процедур.

Для проведения дезинфицирующих мероприятий применяют специальные химические препараты, а также растворы органических веществ, которые владеют дезинфицирующими свойствами.

Благодаря проведению дезинфекции можно минимизировать концентрацию микроорганизмов до требуемого уровня или полностью их уничтожить.

Этапы дезинфекции

Современные методы дезинфекции включают в себя этапы, которые можно разделить на три категории:

• профилактическая;
• текущая;
• заключительная

Профилактика

Мероприятия по профилактической дезинфекции реализуются постоянно не зависимо от того, какая эпидемическая обстановка на том или ином объекте. Эти мероприятия выполняются с целью того, чтобы исключить вероятность распространения инфекционных болезней на различных объектах, которые отличаются постоянным скоплением большого числа людей.

К основным мероприятиям профилактики относятся мытье рук и очистка окружающих предметов с использованием чистящих и моющих средств, которые содержат в своем составе специальные бактерицидные добавки.

К основным объектам, на которых проводят профилактическую дезинфекцию, относят:

• медицинские объекты;
• учебные и дошкольные заведения;
• места общего использования;
• публичные места скобления большого числа людей;
• объекты пищевой промышленности;
• предприятия водоснабжения.

Профилактическая дезинфекция, в зависимости от сложности и объемов работ, проводится либо сотрудниками соответствующих объектов, либо специальными организациями, которые специализируются на предоставлении профессиональных услуг по дезинфекции разного рода объектов.

Текущая

Эта дезинфекция проводится в том случае, когда выявлен очаг инфекции и требуется выполнение мероприятий по его локализации и нейтрализации.

Этот этап дезинфекции предназначен для выполнения возле мест больных в лечебных заведениях, медицинских изоляторах, а также в домашних условиях. Выполнение этих процедур позволит уничтожить возбудителей инфекции и предотвратить ее распространение на большую площадь.

К основным показаниям для выполнения мероприятий текущей дезинфекции относятся:

1. пребывание пациента в очаге инфекции до того, как он был госпитализирован в медицинское учреждение;
2. проведение лечебных процедур на дому у инфекционно больного до его полнейшего выздоравливания;
3. присутствие в очаге инфекции бактерионосителя, пока он не будет полностью уничтожен.

Организацией и проведением мероприятий по текущей дезинфекции должны заниматься специалисты санитарно-эпидемиологических служб. Кроме этого, к таким мероприятиям залучаются и медицинские работники, которые должны объяснить и обучить пациентов основным нюансам проведения дезинфекции.

На дому процесс текущей дезинфекции организуется и контролируется медработником, который выявил инфекционное заболевание у пациента.

В процессе проведения текущей дезинфекции реализуются три группы мероприятий:

• санитарно-гигиенические;
• обеззараживание внешней среды и предметов;
• обеззараживание и уничтожение выделений больного.

Заключительная

Заключительный этап дезинфекции предназначен для реализации после госпитализации, изоляции, смертельного исхода или выздоровления больного. Этот тип дезинфекции выполняется после того, как был удален источник инфекции. Целью этого этапа дезинфекции является очистка объекта от возбудителей, которые там могли остаться после больного человека.

Мероприятия заключительной дезинфекции проводятся центрами дезинфекции и стерилизации или специалистами дезинфекционных отделов территориальных центров гигиены и эпидемиологии.

Кроме этого, работы по заключительной дезинфекции могут осуществляться под присмотром центра дезинфекции и стерилизации с привлечением к этим работам:

• медперсонала лечебно-профилактических клиник;
• медперсоналом детских и подростковых учреждений;
• населением в собственных квартирах и домах.

Методы дезинфекции

К методам дезинфекции относят следующие воздействия на очаг заражения:

1. механические;
2. физические;
3. химические;
4. биологические;
5. комбинированные.

Ниже будут представлены основные нюансы каждого из них.

Механический метод

Механическая дезинфекция предусматривает обязательное выполнение следующих процедур:

• проведение систематической влажной уборки;
• выбивание постельного белья и встряхивание предметов одежды на свежем воздухе;
• периодическая уборка помещений с использованием пылесоса (при возможности использовать моющий);
• своевременная побелка и покраска помещений;
• обязательное мытье рук перед приемом пищи и контакте с больным;
• удаление зараженного слоя грунта или иного рода настилов.

Физический метод

Физические методы проведения дезинфекции предусматривают обработку очагов заражения с помощь коротковолнового излучения (это может быть УФ или гамма излучение) или высокотемпературной обработки.

УФ-излучение

Обработка помещений с помощью УФ-излучения позволяет обеззаразить воздух в лечебных помещениях и клиниках. Может эффективно использоваться и в других учреждениях, включая и квартиры или частные дома. Генерирование высокочастотного излучения осуществляется с помощью специальных ламп, например: БУВ-15, БУВ-30.

Длина волны используемого излучения составляет порядка 253,7 нм, что соответствует пику бактерицидной эффективности – именно при этой длине волны ДНК молекулы наиболее эффективно поглощают высокочастотное излучение. Вследствие этого затормаживается процесс развития вредных микроорганизмов и бактерий, а также приводит к их неминуемой гибели.

Гамма излучение

Этот вид высокочастотного излучения применяется для высокоэффективной стерилизации различного медицинского оборудования и сопутствующих материалов.

На практике используют технологию радиационной гамма стерилизации, когда нужно провести дезинфекцию:

• медизделия однократного применения, которые имеют непосредственный контакт с кровью пациента и лимфой (шприцы, иглы, катетеры и пр.);
• изделия, которые на протяжении длительного периода времени пребывают в контакте с внутренней средой пациента (имплантируемые катетеры, различные датчики, контрацептивные средства и пр.);
• изделия и материалы, которые непосредственно контактируют с раной больного (перевязки, бинты, дренажные принадлежности, хирургический материал и пр.);
• медицинские инструменты и изделия, которые пребывают в длительном контакте с кожей и слизистыми оболочками пациента (инструменты урологического, гинекологического, стоматологического предназначения);
• медицинская спецодежда, белье, средства индивидуальной защиты однократного применения.

Температурное воздействие

Этот способ предусматривает использование кипячения, которое позволяет дезинфицировать белье, хирургический инструментарий, резиновые изделия, стеклянная посуда.

Солнечное излучение предусматривает возможность дезинфекции воды, которая находится в пластиковой бутылке. При воздействии лучей солнца на жидкость, находящуюся в замкнутом пространстве, гибнет большая часть микроорганизмов, которая находится в питьевой воде.

Обжигание загрязненных объектов в тигельных или муфельных печах является одним из наиболее эффективных механических методов дезинфекции. При температурах 500…800ºС гибнут все микроорганизмы и бактерии. Этот метод подходит для стерилизации металлических, кроме стальных, или фарфоровых предметов.

Проглаживание может также использоваться как один из методов термического обеззараживания. Может применяться в домашних условиях для дезинфекции нижнего белья и одежды.

Сжигание медицинских отходов и мусора. Для этой цели предусмотрены специальные установки инсинераторы, которые позволяют избавиться от мусора и исключить попадание в окружающую среду предметов, которые были в контакте с очагами заражения.

Химический

Химическая дезинфекция – это основной вид обеззараживания медицинских инструментов, помещений и материалов от болезнетворных микроорганизмов. Этот метод заключается в применении различных средств, которые включают в свой состав химически активные вещества, разрушающие токсины и убивающие различные микроорганизмы.

Дезинфекция этим способом сводится к использованию различных химических реагентов, которые представляют собой водные растворы, газы или сыпучие и твердые вещества.

В качестве основных средств, которые используются для химической дезинфекции, используют препараты следующих групп:

• хлорсодержащие;
• на основе кислорода;
• на спиртовой основе;
• альдегидные;
• катионные поверхностно-активные вещества;
• на основе производных гуанидина.

Средства, которые имеют в своем составе хлор, отличаются широким спектром антимикробного воздействия, имеют небольшое время экспозиции и могут использоваться для дезинфекции различных инструментов и материалов.

Кислородосодержащие средства отличаются высокой активностью и могут использоваться не только для дезинфекции, а и для стерилизации.

Спиртсодержащие средства имеют в своем составе этанол, пропанол или изопропанол. Такие препараты в основном используются в качестве антисептиков для обработки участков кожи. Также их активно используют для обработки металлических поверхностей различных медицинских инструментов и принадлежностей.

Альдегидные препараты отличаются существенными преимуществами перед другими веществами. Они могут воздействовать на все типы микроорганизмов, включая и споры. Обработка изделий такими средствами не приводит к их повреждению.

Гуаинидные средства относятся к одним из наиболее перспективных дезинфицирующих средств, которые отличаются невысокой токсичностью, стабильностью, высокими биоцидными свойствами, продолжительным биоцидным эффектом. Эти препараты можно сочетать с другими средствами для дезинфекции.

Средства, которые за основу используют третичные амины, отличаются отличными моющими средствами, они малотоксичные, имеют высокую антимикробную активность. Их широко используют для дезинфекции различных инструментом и медицинских принадлежностей, а также для проведения очистки медицинских помещений.

Биологический

Биологическая дезинфекция основана на использовании антагонистического воздействия между разными микроорганизмами, а также средств, которые имеют биологическую природу. Такого типа дезинфекция практикуется на станциях, специализирующихся по очистке сточных вод.

Комбинированный

Методы и режимы дезинфекции комбинированным способом предусматривают параллельное использование нескольких из перечисленных способов дезинфекции.

Например, влажная уборка, которая завершается УФ-облучением. Комплексное воздействие на микроорганизмы позволит эффективнее воздействовать на очаги инфекции и быстро их локализовать.

Заключение

Благодаря наличию разных способов проведения мероприятий по дезинфекции можно быстро и эффективно локализировать, и устранять очаги инфекции. Это будет способствовать тому, что болезнь можно будет вылечить быстрее или предупредить ее появление и распространение на большую территорию. Если в комплексе применять несколько способов дезинфекции, то можно получить максимальный по эффективности результат.

Видео: Виды дезинфекции

Глава 4 ДЕЗИНФЕКЦИЯ И СТЕРИЛИЗАЦИЯ 4.1. Дезинфекция

Комплекс мероприятий, направленных на уничтожение па­тогенных, условно-патогенных микроорганизмов, грибов и ви­русов в объектах внешней среды, объединяются в понятие дезинфекции.

Основной задачей дезинфекции в сочетании с противоэпи­демическими мероприятиями, регламентированными приказами и положениями Министерства здравоохранения и Государственным санитарным эпидемиологическим надзором Россий­ской Федерации, является прерывание механизма передачи Возбудителя на его пути от источника или резервуара инфекции к здоровому организму.

В клинико-микробиологических лабораториях, в которых врачам и микробиологам приходится постоянно контактиро­вать с инфицированным и потенциально инфицированным патологическим материалом, выделять из него чистые культу­ры возбудителей различных инфекционных болезней и выполнять ряд микробиологических и серологических диагностичес­ких исследований для определения видовой принадлежности выделенного микроорганизма, дезинфекция приобретает осо­бенно большое значение с точки зрения профилактики зара­жения, возникновения случаев внутрибольничных инфекций и выноса возбудителя за пределы лабораторий.

Методы дезинфекции подразделяют на физические (терми­ческие, действие УФ-лучей) и химические. Выбор того или иного способа дезинфекции определяется конкретными условиями выполняемой работы, биологическими свойствами микроба-возбудителя, конструктивными особенностями обеззаражи­ваемого изделия и физико-химической спецификой материала, на поверхности или внутри которого содержится возбудитель.

В медицинских микробиологических лабораториях наиболее широкое применение в целях дезинфекции находят термичес­кие и химические методы обеззараживания.

Химические средства действуют на обеззараживаемые объ­екты более поверхностно, чем высокая температура, тем не менее на практике они значительно удобнее и доступнее, чем применение высокой температуры.

Кроме того, многие изделия, портящиеся под воздействием кипячения или сухого жара, переносят без ущерба действие химических дезинфектантов.

В качестве средств дезинфекции и предстерилизационной очистки используют только разрешенные в установленном по­рядке в Российской Федерации химические средства.

За последние 1,5–2 десятилетия арсенал химических средств дезинфекции увеличился в несколько десятков раз. Если ранее в распоряжении микробиологов в основном была хлорная из­весть и ее производные: осветленные растворы хлорной извес­ти, хлорамин, лизол и раствор фенола (карболовая кислота), то в настоящее время имеется несколько химических групп соединений, каждая из которых включает по нескольку дезин­фицирующих средств, обладающих различными свойствами.

Однако каждый из применяемых дезинфицирующих пре­паратов должен иметь разрешение к применению, зарегистри­рованное в установленном порядке Министерством здравоохранения Российской Федерации и Департаментом Госсанэпид­надзора Российской Федерации.

Наибольшее применение в микробиологической практике получили дезинфектанты отечественного и зарубежного про­изводства, относящиеся к следующим группам химических соединений.

• Дезинфицирующие средства на основе четвертичных аммо­ниевых соединений. По своему физико-химическому соста­ву и строению препараты этой группы очень удачно соче­тают в себе дезинфицирующие и моющие свойства. Они не имеют резкого запаха, не обладают аллергенным действием, не вызывают раздражения глаз и слизистых оболочек верх­них дыхательных путей. Основным действующим веществом этих средств является дидецилдиметиламмоний бромид (ДДАБ), который не содержит в своем составе фенольной группы, что резко снижает его токсичность. Четвертично-аммониевые соединения используются одновременно как мою­щие, дезодорирующие препараты, а также как средства пред­стерилизационной очистки медицинского инструментария.
• Альдегидсодержащая группа препаратов, действующим началом которой служат глутаровый или янтарный альдегид, с дополнением или без дополнения активно действующих веществ, таких как четвертично-аммонийные соли или по­верхностно-активные вещества (ПАВ), обладающие способ­ностью моющего, дезодорирующего и частично растворяю­щего действия. Дезинфектанты этой группы обладают ши­роким спектром активности: бактерицидным, туберкулоцидным, вирулоцидным (ВИЧ, гепатит) и фунгицидным. Препараты этой группы используются, как правило, для дезинфекции, совмещенной с предстерилизационной очист­кой. Однако их недостатком является то, что они фиксиру­ют на обрабатываемых объектах органические загрязнения и обладают сенсибилизирующим эффектом.
• Дезинфицирующие средства на базе полигуанидина, слож­ного органического вещества, большей частью в комплексе с другими дезинфицирующими средствами, обладают про­лонгированным действием, невысокой токсичностью и не вызывают коррозии металлов. Препараты этой группы обладают широким диапазоном бактерицидного действия, од­нако для его проявления в отношении ряда бактерий, в частности микобактерий туберкулеза и вирусов, эти средства должны использоваться в высоких концентрациях (1–2 %) действующего вещества; на спороносную микрофлору даже в высоких концентрациях препараты полигуанидина влия­ния не оказывают.
• Кислородсодержащие вещества с пергидролем (Н₂О₂) ис­пользуют большей частью с добавлением 0,5 % раствора моющего средства типа "Прогресс", "Астра" в целях дезин­фекции и предстерилизационной очистки инструментов. Для снижения коррозийного действия к смеси растворов перекиси водорода и моющего средства добавляют 1,4 % ингибитора коррозии олеата натрия (малотоксичное соеди­нение, относящееся к мылам). Рабочие растворы пергидро­ля используются иногда для влажной уборки помещения лаборатории.
• Группа спиртов – этанола, пропанола, изопропанола – на­ходит применение в дезинфекции в виде отдельных пре­паратов или в сочетании с другими дезинфицирующими средствами. Этиловый ректификованный спирт рекоменду­ется только для дезинфекции изделий из металла. Для из­делий из прочих материалов разрешены к применению дез­инфектанты на основе других спиртов с добавлением по­верхностно-активных веществ, обладающих детергентным свойством. Дезинфицирующие средства, содержащие спир­ты, фиксируют на обрабатываемых поверхностях загрязне­ния органического происхождения, которые приходится от­мывать проточной водой с применением ершей, щеток, марлевых или бязевых салфеток.
• До настоящего времени широкое применение находят хлорсодержащие препараты, в частности хлорамин Б, хлоргексидин, биглюконат, хлорина, хлорэффект, хлоросепт Б.

Несмотря на стойкий и резкий запах хлорсодержащих пре­паратов, раздражающее действие на слизистые оболочки верх­них дыхательных путей, они находят широкое применение в клинико-микробиологических лабораториях благодаря высо­кой бактерицидной активности для предварительной дезин­фекции патологического материала и использованных в работе культур микробов.

▲ Фенолсодержащие вещества в настоящее время в бакте­риологической практике применяются очень ограниченно. Фенол как дезинфектант запрещен для применения в лабо­ратории из-за высокой токсичности и сильного стойкого запаха.

В табл. 4.1 приведены в качестве примера несколько наи­более простых и распространенных дезинфектантов для предстерилизационной очистки изделий медицинского назначения: ножниц, скальпелей, изделий из стекла, резины и пластмасс.

Таблица 4.1. Средства предстерилизационной очистки

Средство

Концентрация ра­бочего раствора, %

Способ очистки

Вид изделий

Велтолен "Велт" (Россия)

Изделия из стекла, резин, пластмасс, металлов

Септабик ("Абик", Израиль)

Септодор ("Дорвет ЛТД", Израиль)

Септодор-форте ("Дорвет ЛТД", Израиль)

Раствор, содержа­щий перекись во­дорода и моющее средство ("Лотос-автомат", "Астра", "Прогресс")

Механизирован­ный струйный метод, ершевание и ручной

Изделия из стекла, резин, пластмасс, коррозиестойких металлов

"Астра", "Прог­ресс" (Россия)

Ручной с при­менением ки­пячения

Изделия из стекла, резин, пластмасс, металлов

С начала до конца рабочего дня в бактериологической ла­боратории врачи и лаборанты одновременно с повседневной работой: приемом клинического материала, первичным посевом, выделением чистых культур микроба – возбудителя и его идентификацией – ведут непрерывную, плановую работу по текущей дезинфекции, предусматривающую обеззараживание отработанного патологического материала, посуды, в которой он находился, исследованных культур микробов, пипеток, ин­струментов и пр.

При выборе дезинфектанта руководствуются Санитарными Правилами 1.2.731–99, составленными на основе биологичес­ких свойств предположительно находящегося в материале воз­будителя, возможной степени микробного обсеменения, кон­систенции и свойств среды, в которой потенциально находится Возбудитель (табл. 4.2).

Таблица 4.2. Обеззараживание поступивших на бактериологичес­кое исследование выделений больных

Объект, подлежа­щий обезза­раживанию

Способ обеззара­живания

Обеззараживающее средство

Время обеззара­живания

(мин)

Норма расхода дезинфек­танта

I. Бактерии, не образующие спор (кроме микобактерий)

Мокрота, оформлен­ные фека­лии, сме­шанные с мочой или водой при­мерно 1:5, рвотные массы

Засыпать и разме­шать

1. Сухая хлорная известь

2. Белильная термостойкая известь

2 % раствор хлорной извести или белильной термостойкой жидкости

2 % раствор хлорамина Б или ХБ

1 % раствор ДТС ГК или НГК

II. Микобактерии

2 % раствор пищевой соды

Залива­ние и пе­ремеши­вание

2,5 % раствор хлора­мина Б или ХБ

Засыпа­ние и перемешивание

Хлорная известь или – термостойкая белиль­ная известь

Хлорамин Б или ХБ с активатором (1:1)

Оформлен­ные фека­лии, сме­шанные с мочой или водой, примерно 1:5, жид­кие фека­лии, рвот­ные массы

Дезинфицирующие средства и режимы обеззараживания такие же, как и мокроты (кроме кипячения)

III. Бактерии, образующие споры

Засыпать и разме­шать

Сухая хлорная известь Белильная термостой­кая известь

ДТС ГК, ДСГК или НГК (сухие)

Засыпать и разме­шать

Сухая хлорная известь Белильная термостой­кая известь

ДТС ГК, ДСГК или НГК (сухие)

IV. Вирусы и хламидии

Мокрота, фекалии, рвотные массы

Засыпать и разме­шать

Хлорная известь Белильная термостой­кая известь

ДТС ГК, ГКТ, НГК, ДСГК

V. Риккетсии

Засыпать и разме­шать

Сухая хлорная известь Белильная термостой­кая известь

ДТС ГК, НГК, ГКТ (в сухом виде)

Моча, жидкость после опо­ласкива­ния зева

Засыпать и разме­шать

Сухая хлорная известь, белильная термостой­кая известь

ДТС ГК, НГК или ГКТ

Для обеззараживания крови и ее сгустков используют 5 % раствор хлорамина Б или ХБ аналиты, получаемые электрохи­мическим методом на установках, разрешенных к производст­венному применению в установленном порядке. Дезинфици­рующие средства используют в соответствии с режимами, ука­занными в Методических указаниях, утвержденных Госсан­эпиднадзором России (1.01.97 г.) и Министерством здравоох­ранения Российской Федерации (1.01.97 г.). Вместо указанных дезинфектантов можно использовать 3 % осветленный раствор хлорной извести; 0,6 % осветленный раствор нейтрального гипохлорита кальция; 0,5 % раствор ДП-2.

При использовании дезинфицирующих и стерилизующих средств необходим систематический контроль стабильности концентраций их рабочих растворов.

В последние годы НПФ "ВИНАР" (Россия) разработаны новые виды изделий – индикаторные одноразовые полоски экспресс-контроля концентрации рабочих растворов дезинфи­цирующих и стерилизующих средств "Дезиконт", предназна­ченные для экспресс-контроля соблюдения концентраций ра­бочих растворов хлорамина, хлорной извести, гипохлорита на­трия, нейтрального анолита, перекиси водорода в лечебно-про­филактических учреждениях и дезстанциях.

Однако нельзя исключить возможности того, что среди ос­татков использованного материала находится кровь или ее сгустки, содержащие вирус иммунодефицита человека или ге­патита В и С.

В связи с этим наиболее целесообразно оставшуюся от первичных посевов кровь собрать в специальный бак, плотно закрыть его крышкой, запломбировать и сдать в стерилизацию.

Обеззараживание производят в паровом стерилизаторе (ав­токлаве) при температуре 132 °С, давлении 2 кгс/см2 в течение 60 мин[1].

Из числа разрешенных к применению дезинфектантов в контейнерах могут быть использованы 3 % раствор хлорамина Б или хлорамина ХБ, 0,25 % по активному хлору раствор гипохлорита натрия; аналит, 2 % раствор дексона-1 или дексона-4, 3 % раствор ПФК/1, 3 % раствор перекиси водорода с 0,5 % моющего средства, 3 % раствор пероксимеда, 10 % раствор Демоса. Использованные в работе предметные и покровные стекла подлежат обязательной дезинфекции, так как неодно­кратно отмечались случаи сохранения жизнеспособных микро­организмов в фиксированных и окрашенных мазках. В целях предстерилизационной обработки для стекол может быть ис­пользован тот же дезинфицирующий раствор, который приме­няется для дезинфекции остальных предметов. Однако приори­тетное значение имеет 96 % этиловый спирт с 3 % перекисью водорода.

Через 1–2 дня после накопления достаточного количества стекол в банке их с целью обезжиривания обрабатывают хро­мовой смесью; последняя, являясь сильным окислителем, раз­рушает органические вещества с образованием растворимых газообразных продуктов. Перед употреблением хромовую смесь подогревают до 45–50°С и заливают ею грязные стекла.

Приготовление хромовой смеси

Пропись первая. В колбу емкостью 200 мл наливают 150 мл концентрированной серной кислоты, туда же всыпают 25 г измельченного бихромата калия. Полученную смесь взбал­тывают и оставляют стоять до растворения. Через сутки раствор темно-оранжевого цвета может быть применен для мытья посуды. Перед употреблением смесь следует подо­греть до температуры 45–50 °С. Изменение темно-оранже­вого цвета хромовой смеси на темно-зеленый свидетельст­вует об ее непригодности.

Пропись вторая. В 500 мл дистиллированной воды раство­ряют 5 г неочищенного измельченного бихромата калия и затем, перемешивая жидкость, тонкой струей вливают ее в 500 мл концентрированной серной кислоты.

При приготовлении хромовой смеси и мытье ею посуды нужно надевать резиновые перчатки, так как попадание на кожу хромовой смеси вызывает болезненные ожоги; нельзя насасывать хромовую смесь в пипетки ртом; в хромовую смесь, содержащую кислоту, нельзя вливать воду.

Пробирки, чашки Петри с отработанным материалом сдают в стерилизационную для обеззараживания насыщенным паром при 126 °С под давлением 1,5 кгс/см2 в течение 60 мин для неспорообразующих форм микроорганизмов и при 132 °С, дав­лении 2 кгс/см2 в течение 90 мин для уничтожения споровых культур (СП 1.2.731-99).

Для предупреждения инфицирования окружающей среды перенос инфицированного материала (посуды и культур) для обеззараживания осуществляется в закрывающихся емкостях.

Все перечисленные мероприятия, не относящиеся непо­средственно к основным микробиологическим операциям, но постоянно сопутствующие им и определяющие чистоту мик­робиологического исследования, а, следовательно, и его досто­верность, составляют комплекс мероприятий текущей дезин­фекции, необходимый для микробиологических лабораторий.

Все работы с экспериментальными животными ведутся в боксах, оснащенных бактерицидными лампами, с участием двух сотрудников.

Перед входом в боксированное помещение сотрудники пе­реодеваются: надевают шапочку или косынку, заменяют меди­цинский халат на хирургический, доходящий до нижней трети голени, надевают резиновые перчатки, тапочки, а при необхо­димости – маски или респираторы. Инструментарий, приме­ненный в работе с лабораторными животными (шприцы многоразового пользования после вакцинации или заражения животных, взятия крови, инструменты для вскрытия), сдают в стерилизационную для обработки (кипячения, автоклавирования) или обрабатывают в боксе дезинфицирующими средства­ми. Режим дезинфекции определяется биологией возбудителя, который использовался в работе с экспериментальными жи­вотными (табл. 4.3).

Таблица 4.3. Обеззараживание инфицированных инструментов, использованных в работе с экспериментальными животными

УТВЕРЖДАЮ
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации -
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
23 мая 2001 г.

Дата введения: 1 октября 2001 г.

3.5.5. ДЕЗИНФЕКЦИОННЫЕ СРЕДСТВА И ТЕХНОЛОГИИ

ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА,
ИНФИЦИРОВАННОГО БАКТЕРИЯМИ I-IV ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ,
ПРИ РАБОТЕ МЕТОДОМ ПЦР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУ 3.5.5.1034-01

1. Разработаны Российским научно-исследовательским противочумным институтом "Микроб" (Куличенко А.Н., Касьян И.А., Гаранина С.Б., Майоров Н.В., Тучков И.В., Еремин С.А., Дроздов И.Г., Кутырев В.В.).

2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 23.05.01.

3. Введены впервые.

1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

В настоящих указаниях предложены способы обеззараживания материала, зараженного или подозрительного на зараженность бактериями I-IV групп патогенности, при проведении генодиагностических исследований методом ПЦР.

Указания предназначены для специалистов санитарно-гигиенических, лечебно-профилактических учреждений, генодиагностических центров и лабораторий, применяющих метод ПЦР для обнаружения ДНК возбудителей инфекционных заболеваний.

Внедрение в практику лабораторной диагностики инфекционных болезней полимеразной цепной реакции (ПЦР) должно быть обеспечено соответствующими методами подготовки проб, предусматривающими обеззараживание исследуемого материала.

Используемые обычно в практике табельные средства стерилизации (растворы формалина, хлорамина, перекиси водорода и др.) не могут быть применены при ПЦР-анализе вследствие повреждающего действия на ДНК или ингибирования реакции.

В существующих СП 1.2.011-94 "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности" не предусмотрено выполнение современных генетических методов, в т.ч. полимеразной цепной реакции, которая в настоящее время широко используется для обнаружения различных микроорганизмов, включая и возбудителей опасных инфекций.

В настоящих методических указаниях для работы с не образующими споры бактериями I-II групп патогенности предлагается обработка объектов мертиолятом натрия и затем лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом. При работе с возбудителем холеры может быть использован метод прогревания при 100 град. С в течение 30 мин.

Для инактивации не образующих споры микроорганизмов III-IV групп патогенности может быть использован метод термической обработки при 100 град. С в течение 30 мин. или лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом.

Для обеззараживания материала, содержащего спорообразующие микроорганизмы, в т.ч. Bacillus anthracis применяют методический подход, заключающийся в герминации спор с последующей обработкой пенициллином, прогреванием при 100 град. С и обработкой лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом.

Разработанные способы инактивации приводят к полному обеззараживанию материала, не повреждают ДНК и не ингибируют ПЦР.

3. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

СП 1.2.011-94 "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности" (М., 1994).

СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами" (М., 1999).

Инструкция по контролю специфической стерильности экспериментальных препаратов, приготовленных из культур чумного или холерного микробов (Саратов, 1982).

Временная фармакопейная статья (ВФС) 42-62-ВС-86 для диагностикума бруцеллезного жидкого для реакции агглютинации.

Методические указания "Современные методы микробиологической диагностики туберкулеза" (М., 1975).

Руководство по профилактике чумы (Саратов, 1992),

4. ОПИСАНИЕ МЕТОДА

Формула метода

Рекомендуемые средства стерилизации материала при ПЦР-анализе имеют следующие механизмы антимикробного действия. Мертиолят натрия необратимо связывается с SH-, NH2- и COOH-группами белковых молекул с дальнейшим ингибированием дыхательной цепи микроорганизма.

Инактивирующий эффект лизирующего буфера обусловлен действием хаотропного агента - гуанидинтиоцианата, обеспечивающего разрушение клеточных мембран и лизис клеток с последующим выходом ДНК.

Метод обеззараживания содержащих споры микроорганизмов основан на прорастании споры в вегетативные клетки при культивировании в благоприятных для герминации условиях. Далее под воздействием температуры (для сибиреязвенного микроба еще и пенициллина) происходит разрушение клеточной мембраны и выход ДНК.

Материально-техническое обеспечение

Средства измерения

Указанные средства измерения и оборудование могут быть заменены на аналогичные по характеристикам производства других фирм.

- Весы PG 203 - прецизионные одночашечковые электронные цифровые с функцией обнуления тары и другими вспомогательными функциями, стандартного уровня, максимальная загрузка - 210 г, погрешность при измерении - 0,001 г, (Mettler, Швейцария);

- иономер рН-150 (рН-метр-милливольтметр); используется для определения рН буферных растворов, диапазон рН от 1 до 14, точность 0,01 рН, температура анализируемой среды от 10 до 100 град. С (Белоруссия).

Указанные средства измерения и оборудование могут быть заменены на аналогичные по характеристикам производства других фирм.

- Дистиллятор А1013 - производительность 7,6 л/ч. (Barustead, США);

- термостат ЕВ - объем от 18 до 1000 л с регулируемым диапазоном температур от 5 до 80 град. С (Jouan, Франция);

- встряхиватель V-4 типа вортекс-регулируемый (Elmi, Латвия);

- микроцентрифуга для пробирок типа "Eppendorf" - СМ-50 -12x1,5 (0,5) мл, до 12000 об./мин., ротор - угловой (Elmi, Латвия);

- баня водяная J-12 (18,30) с корпусом из нержавеющей стали с термометром, на 12, 18, 30 л, вместимостью соответственно 72,108 и 192, пробирки диаметром 16 мм; максимальная температура 100 град. С (Jouan, Франция).

Вспомогательные изделия и материалы

5. СПОСОБЫ ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ МАТЕРИАЛА,
ИССЛЕДУЕМОГО МЕТОДОМ ПЦР

Вся работа с исследуемым материалом, подозрительным на зараженность микроорганизмами I-II групп патогенности, проводится в соответствии с СП 1.2.011-94 "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности".

Отобранные для исследования пробы могут быть инактивированы следующими способами.

5.1. Материал (кровь, другие биологические жидкости,
экстракты органов, смывы с поверхностей, фильтраты почвы),
подозрительный на зараженность не содержащими споры
бактериями I-II групп патогенности

Обработка мертиолятом натрия с прогреванием при температуре 56 град. С: к исследуемым образцам добавляют мертиолят натрия, проверенный на бактерицидное действие, до концентрации 1:10000 (0,01%) с последующим прогреванием их при 56 град. С в течение 30 мин.

Обработка лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом и прогреванием при температуре 65 град. С: к 100 мкл обработанных мертиолятом натрия образцов (п. 1.1.), разлитым в микроцентрифужные пробирки типа "Eppendorf", добавляют 300 мкл лизирующего буфера и инкубируют 15 мин. при температуре 65 град. С. После выполнения данного этапа материал считается обеззараженным. Далее для выделения ДНК используют метод нуклеосорбции на силикагеле или другом нуклеосорбенте, начиная с этапа добавления сорбента.

ПЦР выполняют по общепринятой методике в соответствии с указаниями к ПЦР-наборам изготовителя.

Приготовление лизирующего буфера
с гуанидинтиоцианатом

Гуанидинтиоцианат (конечная концентрация 6М) - 18 г, дитиотрейтол (0,2М) - 95 мг и ЭДТА (0,5М) 1 мг растворяют в 30 мл дистиллированной воды. Готовый раствор, проверенный на бактерицидное действие, хранится в темной посуде в холодильнике до 6 месяцев.

5.2. Материал, подозрительный на зараженность
не содержащими споры бактериями III-IV групп
патогенности

Прогревание при 100 град. С в течение 30 мин. (кроме ПЦР-анализа крови).

Обработка лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом и прогреванием при 65 град. С в течение 15 мин., как описано в п. 1.2.: исследуемые образцы в количестве 100 мкл помещают в микроцентрифужные пробирки типа "Eppendorf", смешивают с 300 мкл лизирующего буфера с гуанидинтиоцианатом и прогревают при 65 град. С в течение 15 мин.

После лизиса гуанидинтиоцианатом для выделения ДНК используют метод нуклеосорбции на силикагеле, начиная с этапа добавления сорбента.

ПЦР выполняют по общепринятой методике в соответствии с указаниями к ПЦР-наборам изготовителя.

5.3. Материал, подозрительный на зараженность
содержащими споры бактериями II-IV групп
патогенности

Герминация спор с обработкой пенициллином и прогреванием при 100 град. С в течение 10 мин.: исследуемый материал в количестве 0,1 мл засевают в пробирки с 0,9 мл бульона Хоттингера рН 7,6 и инкубируют с аэрацией при температуре 37 град. С в течение 2,5 ч. Добавляют пенициллин (1000 ед./мл) и инкубируют при 37 град. С 15 мин. Затем прогревают на водяной бане при температуре 100 град. С в течение 10 мин.

Обработка лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом и прогреванием при температуре 65 град. С: к 100 мкл обработанных, как описано в п. 3.1., образцов, разлитых в микроцентрифужные пробирки типа "Eppendorf", добавляют 300 мкл лизирующего буфера и инкубируют 15 мин. при температуре 65 град. С. После выполнения данного этапа материал считается обеззараженным. Далее для выделения ДНК используют метод нуклеосорбции, начиная с этапа добавления сорбента.

ПЦР выполняют в соответствии с указаниями к ПЦР-наборам изготовителя.

После инактивации проб любым из вышеописанных способов дальнейшие исследования проводятся, как с обеззараженным материалом.

Везде, где происходит жизнедеятельность человека, обитает множество микроорганизмов. Среди них есть возбудители опасных заболеваний. Для защиты людей от инфекций на государственном уровне разработана система мероприятий, направленных на уничтожение возбудителей болезней на различных объектах, получивших название дезинфекция. В быту, на производстве, в медицинских учреждениях разработаны методы, позволяющие производить дезинфекции согласно формату, специфике объектов, в соответствии с санитарными нормами. Мероприятия позволяют снизить эпидемиологическую опасность, не допускать распространения инфекций, защитить здоровье людей.

Классификация дезинфекций по видам и месту проведения работ

Если на объекте нет источника инфекции, но требуется предотвратить возникновение заболеваний в местах массовых скоплений людей, проводится профилактическая дезинфекция. Она бывает трех типов:

• плановая, по утвержденному графику. В процессе проведения обеззараживаются медицинский инвентарь, питьевая вода, проводится борьба с грызунами, вредными насекомыми на объекте;
• по эпидемиологическим показателям – проводится на территориях, соседствующих с локациями, где выявлен очаг эпидемии;
• по санитарно-гигиеническим показателям.

Объектами проведения профилактических мероприятий по уничтожению вредоносной флоры являются предприятия общественного питания, сферы услуг, образовательные учреждения, бани, сауны, бассейны, промышленные предприятия по производству пищевых продуктов. Полный перечень объектов приведен в санитарно-гигиенических нормах.

По установлению факта наличия инфекционного заболевания проводится очаговая дезинфекция, которая предусматривает текущие антисептические мероприятия и заключительные. Разница между ними состоит в том, что заключительная санация проводится однократно, после выздоровления или смерти больного, текущая – многократно, в течение всего периода сохранения эпидемиологической опасности.

Методы проведения дезинфекции

1. Механическая дезинфекция
Механический метод основан на снижении концентрации возбудителей инфекционных заболеваний. Уменьшение количества микробов достигается удалением грязи, пыли, жира, органических частиц с поверхностей механическим способом. Мероприятия реализуются путем проветривания, мытья полов, влажного протирания поверхностей, фильтрацию воды, уборку помещений пылесосом, стирку постельного белья и проч. Ассортимент приспособлений определяет качество обеззараживания. Гидропульты, кондиционеры, моющие пылесосы, вентиляторы повышают эффективности механического метода.

2. Физическое обеззараживание
Физические методы основаны на термическом воздействии на вредные микроорганизмы или обеззараживание посредством ионизирующего излучения. Применяются такие процедуры:

• пастеризация;
• кипячение, рекомендуется для обработки посуды. Температура и длительность нагревания, необходимые для достижения стерильности, могут изменяться в зависимости от вида микрофлоры и других условий;
• обработка паром под давлением;
• обжиг сухим горячим воздухом;
• обработка воздуха в помещениях УФО (ультрафиолетовым облучением);
• сжигание, используется для уничтожения отходов в медицине.

Физический метод обеззараживания ультрафиолетовым облучением основанный на фотохимических реакциях, которые приводят к необратимым повреждениям молекулярной структуры вредоносных микроорганизмов. В результате микробы теряют способность к размножению.

Технология УФ-обеззараживания может применяться как в системах водоподготовки и водоотведения, так и при обеззараживании воздуха и поверхностей.

При выборе УФ-оборудования очень важно обеспечить дозу УФ-излучения, достаточную для обеспечения требуемых концентраций микроорганизмов после обеззараживания.

Физические способы обеззараживания экологически безвредны. Они применяются для обработки белья, посуды при многих инфекционных заболеваниях.

3. Химическая дезинфекция
Химические методы обеззараживания относятся к наиболее эффективным и доступным. В работе применяются сыпучие препараты, растворы. Среди проводимых процедур – орошение, погружение, замачивание предметов, засыпание сухими препаратами. Среди используемых препаратов – средства, утвержденные и разрешенные к применению в установленном порядке в Российской Федерации.

Вступая в химические реакции, средства удаляют возможные источники заражения.

При использовании химических методик важно:

• готовить растворы в хорошо проветриваемых помещениях, специально для этого предназначенных;
• белье и рабочую одежду дезинфицировать в отдельных помещениях;
• применять средства в соответствии с инструкцией;
• хранить приготовленные дезинфектанты в герметично закрытых емкостях, соблюдая сроки хранения;
• емкости с дезинфицирующими средствами и готовые растворы должны иметь соответствующую содержимому маркировку с указанием называние препарата, концентрации раствора, времени и цели приготовления, граничного срока использования.

Контакт с активными химическими веществами опасен для здоровья, поэтому дезинфекция проводится персоналом в защитных костюмах, в масках для защиты органов дыхания, в очках – для защиты глаз.

Особенности химических дезинфицирующих средств

Выбор антисептических препаратов огромен. Характеристики, на основе которых их выбирают, уровень антимикробной активности, короткое время экспозиции, безопасность использования для людей и окружающей среды. Основные группы химических дезинфектантов:

• альдегиды;
• щелочи;
• препараты, содержащие кислород;
• хлорактивные соединения;
• спирты;
• препараты, содержащие фенол;
• поверхностно-активные вещества.

В медицинских учреждениях, на предприятиях общественного питания распространено обеззараживание хлорированием. Разные соединения хлора обладают различной степенью окисления клеточных соединений. Хлор и его соединения эффективны в отношении энтеральных бактерий, в частности, к группе кишечной палочки. Недостаток хлорного обеззараживания – токсичность соединений.

Ни одно средство не является идеальным. При выборе важно узнать характеристики, убедиться, что препарат одобрен для использования в медицинских учреждениях, салонах красоты, бассейнах, на предприятиях общественного питания, в квартирах и домах.

Химические средства применяются в быту, на предприятиях общественного питания, пищевых производствах, транспорте, на сельскохозяйственных объектах.

4. Биологический метод
Биологическое обеззараживание основано на особенностях воздействий вредоносных бактерий при взаимодействии с другими микроорганизмами. Использование микробов-антагонистов – трудоемкий метод, он применяется редко, в основном – для очистки сточных вод и мероприятий фильтрации.

Естественное биологическое обеззараживание сточных вод происходит без применения бактерий-антогонистов под влиянием ряда факторов: мутности, объему взвешенных частиц, температуры. Если влияния природных факторов не достаточно, перед сливом проводится очистка с помощью микроорганизмов. Такой вид воздействия намного безопасней для здоровья людей, природы, чем традиционное использование для этих целей хлорсодержащих химических соединений.

5. Метод комбинированного обеззараживания
Комбинированный метод основан на сочетании нескольких методик обеззараживания. Это, например, влажная уборка с последующим УФО, кондиционирование, обработка поверхностей химическими средствами и кварцевание и проч.

Факторы, определяющие качество санитарной обработки

На итоговый результат обеззараживания влияют несколько факторов: качество предварительной очистки поверхностей, резистентность возбудителей к определенным средствам, состав, степень загрязнения, конфигурация объектов дезинфекции.

Пищевые загрязнения, оставшиеся на плохо очищенной поверхности, являются источниками питания и очагами роста микроорганизмов. Хорошее санитарно-гигиеническое состояние достигается комбинированной программой тщательной очистки всех поверхностей и оборудования. Также имеет значение, сколько времени воздействовал препарат, какой был выбран метод дезинфекционной обработки.

Режимы дезинфекции

Существует три режима или уровня дезинфекции:

• высокий, направленный на уничтожение всех видов вредоносных бактерий группы кишечной палочки, возбудителей респираторных заболеваний, кроме споровых форм;
• средний, при котором уничтожаются споры, вирусы, вегетативные грибы;
• низкий. Метод позволяет избавиться от большинства бактерий, отдельных видов вирусов и грибов, возбудителей ВИЧ-инфекций, гепатита.

В каждом режиме применяются уникальные методики с использованием разных средств дезинфекции. Для каждого уровня разрабатывается индивидуальная схема дезинфекционных мероприятий.

К отдельным режимам относят обработку рук, которую необходимо проводить перед инъекциями, хирургическими вмешательствами, контактами с открытыми ранами.

Требования к дезинфекционным мероприятиям на различных объектах

В РФ действуют санитарные правила, согласно которым работы по обеззараживанию и уничтожению патогенной микрофлоры проводятся в лечебно-профилактических комплексах, в школах, детских садах, в общежитиях отелях, хостелах, в торговых учреждениях.

Для каждой группы предприятий процесс имеет свои особенности:

• в медицинских учреждениях применяются исключительно химические препараты 3 и 4 класса опасности. Для проведения обеззараживающих процедур в штате предусматривается специально обученный специалист;
• регламент проведения дезинфекционных работ в образовательных учреждениях определяется нормативными актами. Сотрудник, выполняющий их, может состоять в штате или быть сотрудником специализированной компании. Допускается применение средств только 4 класса опасности. Работы производятся при отсутствии в школах, детских садах сотрудников и детей. Перед возобновлением учебного процесса необходимо провести влажную уборку помещений;
• в отелях, хостелах, общежитиях дезинфекционные процедуры выполняют в очаговой или профилактической форме, в зависимости от данных по уровню заражения. Работы включают обработку санузлов, ванн, душевых, мусоропроводов, лифтов, номеров.

На всех типах объектов уничтожение вредоносной флоры проводится на оборудовании, которое контактировало с инфекционным очагом, предметах мебели, медицинских инструментах, поверхностях в помещении, кухонных принадлежностях, предметах обуви и одежды. Уборочный инвентарь должен быть промаркирован надписями с указанием помещения, для которого он предназначен и видом работ. После уборки инвентарь обрабатывают дезраствором, высушивают и хранят в емкости с соответствующей маркировкой.

Дезинфекция квартир и домов

Проведение обеззараживающих мероприятий актуально не только для медицинских учреждений, бассейнов, салонов красоты и других коммерческих предприятий. В осенне-зимний период, когда повышается пик вирусно-респираторной заболеваемости, важно обезопасить свой жилище от болезнетворных вирусов и бактерий. Изоляции больного члена семьи не достаточно. Выберите один из методов очистки жилища от вредоносной флоры:

Перечисленные методы доступны, но, если они вызывают сложности, можно вызвать на дом городские дезинфекционные службы. Специалисты приедут к вам домой в оговоренный срок, определят, какой метод дезинфекции подходит, подберут дезинфектанты. На нашем сайте составлен рейтинг таких организаций , который можно изучить и выбрать исполнителя работ. После выбора назовите адрес, причину вызова и получите ответ менеджера.

Проводить обеззараживающие мероприятия рекомендуется не только в периоды роста заболеваемости гриппом и другими инфекциями. Ежеквартальная мера позволяет очистить свой дом от болезнетворных бактерий, вирусов и грибов и уменьшить вероятность заболеть в самый неподходящий момент.

Читайте также:

  
• Что такое травматический гепатит
  
• Эрозия шейки и лечение гепатита с
  
• Долой китайский коронавирус
  
• Что означает положительный результат на антитела к вирусу гепатита с
  
• Порез пальца глубокий инфицирован опухло сильно