Набор для экспресс-диагностики вирусного гепатита в
Обновлено: 28.03.2024
Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.
Напоминаем вам, что самостоятельная интерпретация результатов недопустима, приведенная ниже информация носит исключительно справочный характер
Антитела к вирусу гепатита В: показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.
Показания к назначению исследования
Основным показанием к назначению исследования служит гепатит В – инфекционное заболевание, вызываемое ДНК-содержащим вирусом, относящимся к семейству Hepadnaviridae. Вирус гепатита В высококонтагиозен и устойчив к действию факторов окружающей среды.
Источником инфекции являются больные любой формой острого или хронического гепатита, а также вирусоносители. Инкубационный период составляет от 60 до 120 дней.
Непосредственно сам вирус не повреждает клетки печени (гепатоциты). Поражение клеток печени происходит в результате иммунного ответа организма через повреждающее действие Т-лимфоцитов, в меньшей степени за счет образования антител.
Болезнь начинается постепенно и характеризуется наличием у пациента слабости, повышенной утомляемости, редкой головной болью, нарушением сна, снижением аппетита, тошнотой, иногда рвотой, горечью во рту, тяжестью и тупыми болями в правом подреберье. Примерно у 20-30% больных отмечаются боли в крупных суставах, сыпь, реже кожный зуд.
Затем увеличивается печень, появляются темная моча и недостаточно окрашенный кал, желтушность кожных покровов (хотя безжелтушный вариант течения вирусного гепатита В встречается в 20-40 раз чаще желтушного). Период выздоровления может продолжаться до 6 месяцев.
Гепатит В у беременных нередко протекает тяжелее, особенно во второй половине беременности, осложняясь острой печеночной недостаточностью, отслойкой плаценты, гибелью плода и др.
У новорожденных и детей вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно, без классической желтухи, но в 70-90% случаев переходит в хроническую форму.
Гепатит В у пожилых людей часто имеет тяжелое течение, значительную продолжительность болезни и признаки холестаза (нарушение выработки желчи или ее оттока в двенадцатиперстную кишку с повышением в крови экскретируемых с желчью веществ, появлением кожного зуда, тяжести в правом подреберье, желтушности кожных покровов, потемнение мочи и обесцвечивание кала).
Выделяют острый и хронический гепатит В. Хроническая форма гепатита В диагностируется при обнаружении HBsAg (поверхностного антигена вируса гепатита В) в сыворотке крови в течение 6 и более месяцев.
В структуре вируса выделяют следующие антигенные структуры:
- поверхностный антиген (HBsAg), входит в состав оболочки вируса, его обнаружение в крови пациента указывает на наличие инфекции;
- ядерный антиген (HBсAg) – белок внутренней оболочки вируса гепатита В, синтезируется в зараженной клетке, не проникает через клеточную мембрану и поэтому не обнаруживается в сыворотке крови больного человека;
- HBеAg – входит в состав ядра вируса гепатита В, наличие его в крови указывает на активное размножение вируса;
- HBхAg –расположен около оболочки вируса, его роль изучается.
- антитела к HBsAg - анти-HBsAg;
- антитела к HBсAg обнаруживаются двух видов: анти-HBсAg IgМ и анти-HBсAg IgG;
- антитела к HBеAg - анти-HBеAg.
- диагностика вирусного гепатита В (в процессе первичного клинико-лабораторного обследования; перед плановыми хирургическими операциями; беременные женщины в I и III триместрах беременности; реципиенты и доноры крови и ее компонентов, органов и тканей; персонал медицинских организаций; пациенты перед проведением химиотерапии; больные с хроническими заболеваниями, пациенты наркологических и кожно-венерологических диспансеров; персонал учреждений с круглосуточным пребыванием; контактные лица в очагах острого и хронического гепатита В; дети в возрасте до 12 месяцев, рожденные от инфицированных ВГВ матерей; больные с онкологическими заболеваниями, пациенты на гемодиализе, пациенты на лечении иммунодепрессантами и др.);
- подготовка к вакцинации и оценка иммунитета после вакцинации.
Подготовка к процедуре
- Рекомендуется сдавать кровь утром с 8 до 11 часов, натощак (не менее 8 часов голода, пить воду можно в обычном режиме).
- Предварительно проконсультируйтесь с врачом по поводу целесообразности проведения исследования на фоне принимаемых лекарств или возможности отмены приема препарата перед исследованием.
- Исключить прием алкоголя накануне исследования, не курить в течение 1 часа до исследования.
- Исключить физические и эмоциональные перегрузки накануне исследования.
- После прихода в лабораторию отдохнуть 10-20 минут перед взятием крови.
- Нежелательно сдавать кровь для лабораторного исследования вскоре после физиотерапевтических процедур, инструментального обследования и других медицинских вмешательств.
- При контроле лабораторных показателей в динамике рекомендуется проводить повторные исследования в одинаковых условиях: в одной лаборатории (тем же методом), сдавать кровь примерно в одинаковое время суток и т. п.
Сроки исполнения
1 рабочий день, исключая день взятия крови.
Что может повлиять на результат
Кроме того, ложноположительный результат может быть у пациентов после переливания крови или компонентов плазмы.
Кровь на анализ берется из вены.
Метод определения: иммуноферментный анализ (ИФА).
Исследуемый материал: сыворотка крови.
Единицы измерения в лаборатории ИНВИТРО: мМЕ/мл.
Анализ крови на антитела к вирусу гепатита В может включать определение следующих показателей:
-
Anti-HBs (антитела к HBs-антигену вируса гепатита B);
Серологический маркёр острого процесса. Определяет присутствие антител класса M к HBcoreAg Антитела к HBсore антигену класса М начинают вырабатываться в период первого появления клинических симптомов гепатита В и сохраняются до периода выздоровления. Особенности инфекции. Гепатит B.
Свидетельство перенесённого острого гепатита В, показатель ремиссии. Определяет присутствие антител к HBеAg. Синтез антител к HBeAg в организме начинается после элиминации антигена инфекционности, они свидетельствуют о прекращении репликации (размножения) вируса в организме. К концу 9-й недели .
Определяет присутствие антител к HB-core Ag, независимо от класса M или G. Функции. Антитела к HB-core антигену появляются при остром гепатите В в крови вскоре после появления HBsAg, персистируют после исчезновения HBs-антигена перед появлением анти-HBs-антител и сохраняются длительное время после.
Интерпретация результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т. д.
Нормальные показатели
Для контроля эффективности иммунитета при вакцинации против гепатита В используют количественное определение анти-HBs Ag.
Расшифровка показателей
Антитела к поверхностному антигену вируса гепатита В (Anti-HBs Ag) можно обнаружить в конце острого периода, чаще через 3 месяца от начала инфекции, но иногда и позже (до года). Антитела к поверхностному антигену нейтрализуют вирус, их наличие рассматривают как признак иммунитета.
Anti-HBs Ag выявляются длительное время, могут сохраняться пожизненно и свидетельствуют о наличии инфекции (текущей или перенесенной ранее) или поствакцинальном иммунитете.
При количественном определении анти-HBs Ag:
- Anti-HBs ниже 10 мМЕ/л - показана вакцинация против гепатита В;
- Anti-HBs 10-100 мМЕ/л - вакцинацию следует отложить на 1 год;
- Anti-HBs более 100 мМЕ/л - вакцинация не показана, рекомендовано повторное обследование через 5 лет.
Выявление анти-HBс IgМ свидетельствует об активном размножении вируса, о наличии острой инфекции, особенно при отрицательном результате на HBsAg, в некоторых случаях - о хроническом гепатите В.
Антитела к HBсAg класса IgG появляются в острый период практически одновременно с анти-HBс IgМ, достигают максимальных значений через 5-6 месяцев от момента обнаружения HBsAg и сохраняются на протяжении всей жизни. Анти-HBс IgG - маркер хронической или перенесенной инфекции, вызванной вирусом гепатита В.
Анти-HBе появляются в острый период, сохраняются до 5 лет после перенесенной инфекции и указывают на активное выведение вируса гепатита В из организма и незначительное инфицирование. Их появление считается признаком благоприятного течения болезни, свидетельствуя о снижении скорости размножения вируса.
Отрицательный результат на анти-HBе не исключает наличия острого или хронического гепатита.
Расшифровку результатов лабораторных исследований на антитела к вирусу гепатита В проводят только с учетом выявления других маркеров гепатита. В таблице представлены некоторые критерии лабораторной диагностики нескольких вариантов течения инфекции, вызванной вирусом гепатита В.
Маркер | Острый гепатит В | Хронический гепатит В | Перенесенный гепатит В | Носительство гепатита В | Иммунитет после вакцинации |
HBsAg | + | + | - | + | - |
Anti-HBs Ag | - | - | + | - | + |
анти-HBс Ag IgG | + | + | + | + | - |
анти-HBс Ag IgМ | + | - | - | - | - |
HBеAg | +/- | +/- | - | - | - |
анти-HBеAg | -/+ | -/+ | + | - | - |
ДНК вируса гепатита В | + | + | - | +/- | - |
Активность АЛТ (аланинамино- трансфераза) | ↑ | норма | норма | норма | норма |
Дополнительное обследование
При наличии антител к вирусу гепатита В в крови для уточнения диагноза и определения дальнейшей тактики лечения может быть назначено дополнительное обследование:
HBsантиген вируса гепатита В – основной маркер вируса гепатита В. Синонимы: Анализ крови на австралийский антиген гепатита В; Поверхностный антиген гепатита В. Australia antigen (Au(1)); Australian antigen; Australia-Antigen. Краткое описание исследования HBs¬-антиге.
Экспресс тест для выявления гепатита В. Простая и быстрая процедура тестирования на наличие антигена вируса гепатита В (HBsAg) в цельной крови.
Полоска ИммуноХром-HBsAg-Экспресс предназначена для одноэтапного быстрого качественного in vitro определения наличия поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) в сыворотке, плазме и крови человека методом иммунохроматографического анализа.
ТОЛЬКО ДЛЯ IN VITRO ДИАГНОСТИКИ.
НЕОБХОДИМА КОНСУЛЬТАЦИЯ СПЕЦИАЛИСТА.
Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Испытуемый образец всасывается впитывающим участком полоски иммунохроматографической; при наличии в образце поверхностного антигена вируса гепатита В последний вступает в реакцию со специфическими поликлональными антителами к HBsAg, связанными с частицами коллоидного золота, образуя окрашенный комплекс антиген-антитело. Этот комплекс движется по мембране полоски с фронтом жидкости и связывается с моноклональными антителами к HBsAg, иммобилизованными в виде линии на мембране в тестовой зоне полоски. В случае присутствия HBsAg в анализируемом образце в тестовой зоне выявляются две линии розово-фиолетового цвета, а в случае отсутствия - только одна линия (контроль).
АКЦИЯ! вместо 1000 руб > 800 руб!
Экономьте при покупке любых 4-х тестов на инфекции (ВИЧ, гепатит С, гепатит В, сифилис) в любой комбинации.
Например: 3 теста на ВИЧ и 1 тест на Гепатит В; или 4 теста на Сифилис.
Обратите внимание: акция действует только в случае, если в корзине ровно 4 теста!
Рекомендуем вместе с данным тестом приобрести антисептический гель для того, чтобы протереть руки до и после процедуры.
Тест-кассета для одноэтапного определения поверхностного антигена вируса гепатита В HBsAg (цельная кровь/сыворотка/плазма) - это быстрый иммунохроматографический метод для качественного выявления поверхностного антигена вируса гепатита В в цельной крови, сыворотке или плазме.
РЕЗЮМЕ
Вирусный гепатит является системным заболеванием, поражающим в первую очередь печень. Причиной большинства случаев острых вирусных гепатитов является вирус гепатита А, вирус гепатита В (HBV) или вирус гепатита С. Комплексный антиген, обнаруживаемый на поверхности HBV. называется HBsAg Прежние названия его - австралийский, или Аи-антиген 1. Наличие HBsAg в цельной крови, сыворотке или плазме является показателем HBV - инфекции - острой или хронической. При типичной инфекции гепатита В HBsAg будет выявляться за 2-4 недели до изменения уровня ALT, и за 3-5 недель перед проявлением симптомов заболевания или развитием желтухи. HBsAg имеет четыре основных подтипа: adw. ayw, adr и аут. Вследствие антигенной гетерогенности детерминант выделяют 10 главных серотипов вируса гепатита В.
Тест-кассета для одноэтапного определения поверхностного антигена вируса гепатита В HBsAg (цельная кровь/сыворотка/плазма) - это быстрый тест для качественного определения HBsAg в цельной крови, сыворотке или плазме. В тесте используется сочетание моноклональных и поликлональных антител для селективного выявления повы- шенных уровней HBsAg в цельной крови, сыворотке или плазме.
ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Тест-кассета для одноэтапного определения поверхностного антигена вируса гепатита В HBsAg (цельная кровь/ сыворотка/ плазма) - это качественный твердофазный многослойный иммунотест для выявления HBsAg в цельной крови, сыворотке или плазме. На мембране в тест-кассете на участке тестовой линии сорбированы антителами к HBsAg. Во время тестирования образец цельной крови, сыворотки или плазмы взаимодействует с сорбированными анти-НВзАд-анти- телами. Смесь хроматографически мигрирует вверх по мембране под действием капиллярных сил, чтобы прореагировать с анти-HBsAg-антителами на мембране и сформировать окрашенную линию. Появление такой окрашенной линии указывает на положительный результат, тогда как ее отсутствие указывает на отрицательный результат. В качестве контроля метода в области контрольной линии всегда будет появляться окрашенная линия, указывая на то, что был внесен достаточный объем пробы и что произошло капиллярное увлажнение мембраны, т.е.что процедура анализа проведена правильно.
РЕАГЕНТЫ
Тест-кассеты содержат частицы анти-HBsAg, нанесенные на мембрану
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
- Применять только для профессиональной диагностики in vitro. Не используйте после указанной даты.
- Не ешьте, не пейте и не курите в зоне, где содержатся пробы и наборы для анализа.
- Обращайтесь со всеми пробами так. как будто они содержат инфекционный материал. Во время проведения анализа соблюдайте установленные меры предосторожности против микробиологических рисков и следуйте стандартным процедурам надлежащей утилизации проб.
- При проведении тестирования образцов надевайте защитную одежду, такую как лабораторный халат, одноразовые перчатки и защиту для глаз.
- Влажность и температура могут неблагоприятно влиять на результаты анализа.
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ
Храните тест-наборы при комнатной температуре или в холодильнике (при температуре от +2 до +30'С). Тест-кассета стабильна до даты, указанной на герметичной упаковке. Тест-кассета должна оставаться в герметичной упаковке до применения НЕ ЗАМОРАЖИВАТЬ. Не использовать после указанной даты.
Сбор образцов и подготовка к анализу:
- Тест-кассету для одноэтапного определения поверхностного антигена вируса гепатита В (цельная кровь/сыворотка/плазма) можно использовать для анализа цельной крови (из вены или из пальца), сыворотки или плазмы.
- Для отбора проб цельной крови из пальца:
- Отделите сыворотку или плазму от остальной крови как можно быстрее, чтобы избежать гемолиза. Используйте только прозрачные, не гемолизированные пробы.
- Тестирование надо проводить немедленно после отбора проб. Не оставляйте пробы на долгое время при комнатной температуре. Пробы можно хранить при температуре от+2 до +8' С в течение 3 дней. При необходимости длительного хранения пробы следует держать при температуре ниже -20* С. Цельная кровь, полученная из вены, может сохраняться при температуре от + 2 до +8° С. если тест нужно провести в течение 2 дней после отбора проб. Не замораживайте пробы цельной крови. Цельную кровь, взятую из пальца, необходимо тестировать немедленно.
- Перед проведением анализа прогрейте пробы при комнатной температуре. Замороженные пробы перед проведением анализа должны полностью оттаять, и их необходимо хорошо перемешать. Пробы нельзя повторно замораживать и прогревать.
- Если пробы необходимо транспортировать, то они должны быть упакованы в соответствии с федеральными правилами, регламентирующими транспортировку инфекционных материалов.
МАТЕРИАЛЫ
Поставляемые материалы
- Тест-кассеты.
- Одноразовые пипетки для образцов.
- Буфер.
- Инструкция по применению
Необходимые, но не поставляемые материалы
- Контейнер для забора проб.
- Скарификаторы (только для цельной крови из пальца).
- Одноразовые капиллярные трубки с гепарином и груша (только для цельной крови из пальца).
- Центрифуга (только для сыворотки/плазмы).
- Таймер.
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
Перед тестированием тест-кассеты, пробы, буфер и/или контрольные образцы прогреть до комнатной температуры (от+15 до +30‘ С).
1. Извлеките тест-кассету из герметичной упаковки и используйте ее как можно быстрее. Наилучшие результаты будут получены, если анализ будет проведен немедленно после вскрытия упаковки из фольги
2. Для образцов сыворотки или плазмы:
Держа пипетку вертикально, нанесите 3 капли сыворотки или плазмы (примерно 75 мкл) в окошечко для образца (S) тест-кассеты и включите таймер. См. иллюстрацию ниже Для образцов цельной крови из вены:
Держа пипетку вертикально, нанесите 2 капли цельной крови из вены (примерно 50 мкл) в окошечко для образца (S) тест-кассеты, затем добавьте 1 каплю буфера (примерно 40 мкл) и включите таймер. См. иллюстрацию ниже
При использовании капиллярной трубки:
Заполните капиллярную трубку и перенесите примерно 50 мкл пробы цельной крови из пальца в окошечко для образца (S) тест-кассеты, затем добавьте 1 каплю буфера (примерно 40 мкл) и включите таймер. См иллюстрацию ниже
При использовании метода 'висячей капли':
Позвольте 2-м висячим каплям пробы цельной крови из пальца (примерно 50 мкл) попасть в окошечко для проб (S) тест-кассеты, затем добавьте 1 каплю буфера (примерно 40 мкл) и включите таймер. См. иллюстрацию ниже.
Дождитесь появления красной линии(й). Посмотрите результаты через 15 минут. Не интерпретируйте результаты через 20 минут.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ: красные линии. Одна линия должна быть в контрольной области (С), а другая линия должна быть в тестовой области (Т).
ПРИМЕЧАНИЕ: интенсивность красного цвета в области тестовой линии (Т) будет варьировать в зависимости от концентрации HBsAg в пробе. Поэтому любая интенсивность красного окрашивания в тестовой области (Т) считается положительным результатом.
ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ: одна красная линия появилась в контрольной области (С). В тестовой области (Т) не появилось ни красной, ни розовой линии.
НЕДОСТОВЕРНЫЙ: контрольная линия не появилась. Чаще всего неудача с контрольной линией происходит из-за недостаточного объема пробы или неправильной методики проведения анализа. Проверьте ход выполнения процедуры и повторите анализ с помощью новой тест-кассеты. Если проблема остается, немедленно прекратите использовать данную серию тестов и свяжитесь с местным представителем фирмы.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Внутренние контроли метода включены в тест. Красная линия, появляющаяся в контрольной области (С), является внутренним контролем хода определения. Ее наличие подтверждает внесение достаточного объема пробы и правильность методики выполнения анализа. Контрольные стандарты не прилагаются к этому набору: однако для корректной лабораторной практики рекомендуется тестировать положительный контроль (содержащий 10 нг/мл HBsAg) и отрицательный контроль (содержащий 0 нг/мл HBsAg), чтобы подтвердить методику определения и проверить правильность постановки теста.
ОГРАНИЧЕНИЯ
1. Тест-набор для одноэтапного определения поверхностного антигена вируса HBsAg гепатита В (цельная кровь/сыворотка/плазма) применяется только для диагностики in vitro. Этот тест должен быть использован для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В в пробах цельной крови, сыворотки и плазмы. Ни количественные значения, ни уровень концентрации HBsAg нельзя определить с помощью данного качественного теста.
2. Тест-набор для одноэтапного определения поверхностного антигена вируса гепатита В HBsAg (цельная кровь/сыворотка/плазма) только укажет на наличие поверхностного антигена вируса гепатита В в образце, и не может служить единственным критерием для диагностики HBV- инфекции.
3. Как и в случае любых других диагностических тестов, все результаты необходимо рассматривать совместно с остальной клинической информацией, доступной врачу
4. Тест-кассета для одноэтапного определения поверхностного антигена вируса гепатита В HBsAg (цельная кровь/сыворотка/плазма) не может выявить концентрации HBsAg в образцах ниже 1 нг/мл. Если результат теста отрицательный, но сохраняются клинические симптомы. предполагается провести дополнительное тестирование с помощью других клинических методов В любом случае отрица- тельный результат не исключает возможности инфекции гепатита В
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Тест-набор для одноэтапного определения поверхностного антигена вируса гепатита В HBsAg (цельная кровь/сыворотка/плазма) сравнили с ведущим коммерческим тестом на HBsAg - EIA. Корреляция между этими двумя тест-системами составила свыше 99%.
ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Чувствительность
Тест-набор для одноэтапного определения поверхностного антигена вируса гепатита В HBsAg (цельная кровь/сыворотка/плазма) был протестирован с помощью набора для проверки на чувствительность, включая как подтип ad. так и ay в диапазоне концентраций от 0 до 300 нг/мл. Все 10 подвидов HBsAg давали положительные результаты с помощью тест-набора для одноэтапного определения поверхностного антигена вируса гепатита В (цельная кровь/сыворотка/плазма). Тест может выявлять 1 нг/мл HBsAg в цельной крови, сыворотке или плазме за 15 минут.
Специфичность
Антитела, используемые для тест-набора для одноэтапного определения поверхностного антигена вируса гепатита В HBsAg (цельная кровь/сыворотка/плазма) были получены против целого антигена, выделенного из вируса гепатита В. Специфичность тест-набора для одноэтапного определения поверхностного антигена вируса гепатита В HBsAg (цельная кровь/сыворотка/плазма) также была протестирована с помощью лабораторных штаммов вирусов гепатита А и гепатита С. Все тесты с этими штаммами дали отрицательные результаты.
Относительная чувствительность: > 99.0%
Относительная специфичность: 99,7%
Точность: 99,8%
Точность
В одном определении
Сходимость результатов была определена путем использования 15 повторов трех образцов, содержащих 0 нг/мл, 1 нг/мл и 5 нг/мл HBsAg. Отрицательные и положительные значения правильно определялись в 99% случаев.
Между разными постановками
Сходимость результатов между разными постановками теста определялась с использованием тех же трех образцов - 0 нг/мл, 1 нг/мл и 5 нг/мл HBsAg в 15 независимых определениях. Три разных серии тест- наборов для одноэтапного определения поверхностного антигена вируса гепатита В HBsAg (цельная кровь/сыворотка/плазма) были протестированы в течение 3 месяцев с использованием отрицательных, слегка положительных и высокоположительных образцов. Образцы правильно идентифицированы в 99% случаев.
КРАТКАЯ ИНФОРМАЦИЯ
Вирус гепатита А вызывает острое инфекционное заболевание печени, называемое гепатитом А. Вирус передается фекально-оральным путем через продукты питания и воду, как правило, при недостаточном уровне санитарных условий и перенаселенности.
Основные симптомы заболевания – высокая температура, общее недомогание, потеря аппетита, диарея, тошнота, боли в животе, темная моча, желтуха (окрашивание склер и кожи в желтый цвет). Тяжесть заболевания и смертность увеличиваются с возрастом. У заболевших детей младше 6 лет обычно не проявляются тяжелые симптомы и только у 10% наблюдается желтуха. У большинства подростков и у взрослых болезнь, как правило, протекает в более тяжелой форме и желтуха отмечается в 70% случаев.
Инкубационный период составляет от 2 до 6 недель, в среднем – 28 дней.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Анализируемый образец жидкого биологического материала абсорбируется поглощающим участком тест-полоски. При наличии в образце вируса гепатита А он вступает в реакцию с нанесенными на стартовую зону специфическими моноклональными антителами против вируса гепатита А, меченными окрашенными частицами, и продолжает движение с током жидкости. В аналитической зоне тест-полоски происходит взаимодействие со специфическими моноклональными антителами, иммобилизованными на поверхности мембраны, с образованием окрашенного иммунного комплекса.
В контрольной зоне тест-полоски специфический окрашенный иммунный комплекс образуется независимо от наличия в тестируемом биологическом материале вируса гепатита А.
В том случае, если в анализируемом образце присутствует вирус гепатита А, на тест-полоске образуются две параллельные окрашенные линии (красная аналитическая, обозначенная буквой Т, и зеленая контрольная, обозначенная буквой С), что указывает на положительный результат анализа. В случае отсутствия в анализируемом образце вируса гепатита А на тест-полоске образуется одна зеленая контрольная линия (С), что указывает на отрицательный результат анализа.
СОСТАВ
НЕОБХОДИМЫЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА
- контейнеры для сбора образцов кала;
- одноразовые резиновые или пластиковые перчатки;
- часы или таймер.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Свежесобранный биологический материал (кал), не содержащий консерванты.
Образцы кала должны быть собраны в чистый контейнер. Следует отбирать образцы кала для анализа в первые 1-2 недели после появления симптомов заболевания, т.к. спустя месяц после инфицирования количество вируса гепатита А значительно уменьшается.
Образцы кала до определения можно хранить при температуре 2–4°С не более 2 сут., при необходимости более длительного (до 1 года) хранения – при температуре –20°С
и ниже.
Перед анализом образцы кала должны быть полностью разморожены и доведены до комнатной температуры.
Повторное замораживание и оттаивание образцов недопустимо.
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ
1. Пробирка для растворения образца / Твёрдый образец (кал) | 2. Жидкий образец |
1. Снять крышку-капельницу с пробирки и с помощью стержня на крышке взять небольшое количество анализируемого образца. Для этого ввести стержень в 3 разные зоны образца, собрав примерно 150 мг кала (рис. 1-1). Если образец жидкий, отобрать 150 мкл с помощью пипетки. Ввести стержень с образцом в пробирку с буфером для растворения образца и плотно завинтить крышку-капельницу (рис. 1-2).
2. Несколько раз встряхнуть пробирку, чтобы облегчить растворение образца (рис. 2-1).
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Выявление в тестовом окошке кассеты одной зеленой контрольной линии (С) свиде-
тельствует об отрицательном результате анализа, т.е. указывает на отсутствие в анализи-
руемом образце кала вируса гепатита А (рис. 3-1).
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
One step HВsAg тест – это быстрый, иммунохроматографический тест для качественного определения поверхностных антигенов гепатита В (HвsAg) в цельной крови, сыворотке и плазме человека. Присутствие HвsAg в концентрации 5нг/мл и выше может быть обнаружено в течение 10 минут, а в концентрации 1 нг/мл – в течение 15 минут. Тест предназначен для использования профессиональными работниками здравоохранения.
Описание и принцип действия
One step HВsAg тест – это иммунотест, содержащий коллоидное золото, для определения поверхностных антигенов вируса гепатита В в цельной крови, сыворотке и плазме человека. В тестовой зоне на нитроцеллюлозной мембране иммобилизованы анти-HВsAg антитела козы. Во время проведения тестирования образец реагирует с окрашенным коньюгатом (коньюгат антител с коллоидным золотом); затем капиллярным путем смесь хроматографически продвигается по мембране. HвsAg положительные образцы дают четко окрашенную полосу в тестовой зоне, окрашивание формируется за счет специфического окрашенного комплекса коньюгата с комплексом антитело - HвsAg. Отсутствие окрашенной полосы в тестовой зоне говорит об отрицательном результате тестирования. Вне зависимости от результата тестирования в контрольной зоне всегда появляется окрашенная полоса как контроль правильности проведения тестирования.
Предоставленные материалы:
- Тест-кассеты / тест-полоски, индивидуально упакованные в пакетики из фольги, снабженные осушителем;
- Инструкция;
- Пластиковая пипетка для забора образца (только для тест-кассет).
Необходимые, но не предоставленные материалы:
- Ланцет;
- Пипетка;
- Гепаринизированные капиллярные тюбики и резиновая груша;
- Положительный и отрицательный контроли (оптимально).
Условия хранения
Тест-наборы должны храниться в сухом месте при температуре от 2 до 30 ºС в запечатанном виде.
Меры предосторожности:
Рекомендовано хранить все образцы, взятые для анализа, в соответствии со 2-м уровнем биологической безопасности, практикуемым и описанным в публикациях CDC NIH, а также биологической безопасности в микробиологических и биомедицинских лабораториях и других подобных рекомендациях.
- Только для in vitro диагностики.
- Для проведения тестирования надевайте перчатки и обращайтесь со всеми образцами и используемыми материалами, как с потенциально инфицированными.
- Удаляйте и дезинфицируйте все разлитые образцы и реагенты с помощью подходящего дезинфектанта, такого как 1% натрия гипохлорид.
- Стерилизуйте все предметы, использовавшиеся при проведении тестирования.
- Не используйте тест-набор по истечении срока годности.
- Все положительные результаты тестирования должны быть подтверждены альтернативными методами.
- Не меняйте реагенты из тест-наборов одной серии и тест-наборов другой серии.
Сбор образцов
Цельная кровь:
- Следуя обычной лабораторной процедуре, соберите образец цельной крови.
- Для сбора образцов цельной крови должны использоваться капиллярные тюбики, содержащие гепарин. Не используйте гемолизированные образцы крови.
- Образцы цельной крови должны быть проанализированы сразу после сбора.
Сыворотка и плазма:
- Следуя обычной лабораторной процедуре, соберите образцы сыворотки и плазмы.
- Для исследования подходят только чистые, прозрачные, хорошо растворимые образцы
- Образцы, имеющие очевидные признаки гемолиза, чрезмерно утолщенные или с высоким жировым показателем не подходят для тестирования.
- Хранение: Образцы, не использованные в день сбора проб, должны храниться в холодильнике. Если образцы не были протестированы в течение 3-х дней, их следует заморозить. Избегайте процедур заморозки - разморозки образцов, повторяющихся более 2-3х раз. В качестве консерванта, не влияющего на результат исследования, к образцам может быть добавлен 0.1% натрия азид.
Процедура тестирования:
Для тест-кассет:
- Доведите температуру всех образцов и реагентов до комнатной.
- Достаньте тест-кассету из упаковки и положите на чистую сухую поверхность.
- Сделайте пометки на тест-кассетах для каждого образца или контроля.
- Добавьте 100 μl (3 капли) образца или контроля в лунку для образца (S) на тест-кассете.
- Интепретируйте результат через 15 минут.
Для тест-полосок:
Внимание: для каждого образца используйте чистую капиллярную трубку, во избежание перекрестной контаминации.
При большой концентрации антигенов в образце положительный результат может развиться практически сразу после нанесения образца. Однако, чем ниже концентрация антигенов в образце, тем больше времени необходимо для того, чтобы появилась тестовая полоса; таким образом, отрицательный результат может быть оценен по истечении 15 минут с начала тестирования для того, чтобы подтвердить отрицательный результат, а не слабый положительный.
Уровень HвsAg | Время прочтения результата |
≥5 нг/мл | 5-10 мин. |
1 нг/мл | 15 мин. |
Отрицательный | 15 мин. |
Прочтение результатов тестирования:
Не интерпретируйте результат тестирования через 20 минут с начала тестирования.
- Положительный: Пурпурно-красная полоса, появившаяся в тестовой зоне говорит о положительном результате тестирования. Чем ниже концентрация антигенов в образце, тем слабее может быть окраска полосы.
- Отрицательный: Отсутствие пурпурно-красной полосы в тестовой зоне говорит об отрицательном результате тестирования.
- Недействительный: В контрольной зоне всегда должна появляться пурпурно-красная полоса, вне зависимости от результата тестирования. Если в контрольной зоне нет пурпурно-красной полосы, тестирование считается недействительным и должно быть повторено с использованием новой тест-полоски.
Тактико-технические данные:
One step HВsAg тест может определить HвsAg в концентрации больше или равной 1 нг/мл (включая оба субтипа ad и as). Для определения корреляции между One step HВsAg тестом и EIA и RIA тестами, были проведены клинические испытания.
Читайте также: