Набор для выявления антител к вирусу инфекционного бронхита кур методом ифа

Обновлено: 26.04.2024

Название (рус.) НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ (ИББ) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ ПРИ ТЕСТИРОВАНИИ СЫВОРОТОК В ОДНОМ РАЗВЕДЕНИИ Состав и форма выпуска В состав набора входят следующие компоненты - иммуноспецифические: очищенный антиген вируса ИББ, адсорбированный в лунках планшета для ИФА 2 планшета; гипериммунная сыворотка крови кур к вирусу ИББ (положительный контроль), цельная лиофилизированная - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или нативная - прозрачная жидкость желтого или красноватого цвета, 0,2 мл - 1 флакон; нормальная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу ИББ, цельная лиофилизированная - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или нативная - прозрачная жидкость желтого или красноватого цвета, 0,2 мл - 1 флакон; антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против lgG кур, лиофилизированный, сухая пористая масса белого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или концентрат раствора, прозрачная бесцветная жидкость, 3,0 мл - 1 флакон, рабочее разведение 1 : (указывается для каждой серии). Неспецифические компоненты: концентрат буферного раствора для разведения испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата, бесцветная прозрачная жидкость, 32,5 мл - 1 флакон; концентрат раствора для межэтапной промывки, бесцветная прозрачная жидкость, 130 мл - 1 флакон; раствор субстрата АБТС (2,2'-азино-ди[3-этил]бензтиазолинсульфоновая кислота) с перекисью водорода - зеленоватая прозрачная жидкость, 25 мл - 1 флакон; концентрированный 5-кратный - 5 % раствор додецилсульфата натрия, бесцветная прозрачная жидкость, 5 мл - 1 флакон. Допускается образование осадка белого цвета при хранении в холодильнике. Набор рассчитан на анализ 92 проб сывороток крови кур на каждом планшете. Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения исследований по мере поступления биологического материала. Фармакологические свойства Сущность метода заключается в выявлении комплекса антиген-антитело, образовавшегося на поверхности лунок полистиролового планшета. Специфический комплекс взаимодействует с антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом против lgG кур и вызывает разложение субстрата, окрашивая содержимое лунок планшета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации антител в исследуемом материале. Показания Для определения специфических гуморальных антител против вируса инфекционной бурсальной болезни (ИББ) в сыворотках крови кур иммуноферментным методом (ИФА) при исследовании в одном разведении. Дозы и способ применения Для постановки реакции используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки переменного объема до 0,02 мл, до 0,2 мл и до 1,0 мл со сменными наконечниками, мерную лабораторную посуду, пробирки для разведения проб, дистиллированную или деионизированную воду, термостат с температурой нагрева (37 + 0,5 °С), бытовой холодильник, спектрофотометр (ридер) любой модели с фильтром на 405 - 410 нм для учетов результатов ИФА. Приготовление рабочих растворов. Перед началом работы набор с компонентами выдерживают 30 минут при температуре 18 - 22 °С. Буфер для разведения проб, контрольных сывороток, антикуриного конъюгата. Содержимое флакона с концентратом буфера для разведения доводят дистиллированной водой до 250 мл. Рабочий раствор конъюгата. Содержимое флакона с лиофилизированным конъюгатом растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Для приготовления рабочего разведения конъюгата __ мл концентрата конъюгата доводят буфером для разведения до 10 мл (в расчете на 1 планшет). Содержимое флакона с лиофилизированной положительной контрольной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Готовят перед использованием. Сыворотки в нативном виде готовы к использованию. Содержимое флакона с лиофилизированной отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Готовят перед использованием. Сыворотки в нативном виде готовы к использованию. Промывочный буфер. Содержимое флакона с концентратом буфера для отмывки доводят дистиллированной или деионизированной водой до 1000 мл и тщательно перемешивают. . Концентрированный разводят в 5 раз дистиллированной или деионизированной водой и тщательно перемешивают (например для получения 12,5 мл к 2,5 мл концентрата добавляют 10 мл воды). Расход на 1 планшету - 12,5 мл. Внимание! Если при хранении 5 кратного раствора образовался осадок, его необходимо прогреть при комнатной температуре или при температуре 37 °С до полного растворения осадка. Разведение испытуемых и контрольных сывороток. Все испытуемые и контрольные пробы сывороток разводят 1 : 400 буфером для разведения, используя для каждой пробы новый наконечник. С этой целью к 0,0025 мл сыворотки крови кур добавляют 1 мл буфера для разведения и трижды пипетируют. Постановка реакции - Из комплекта набора берут планшет, сенсибилизированный антигеном вируса ИББ. В лунки А1 - А2 вносят по 100 мкл подготовленного отрицательного контроля. В лунки АЗ - А4 вносят по 100 мкл подготовленного положительного контроля. В остальные лунки планшета вносят по 100 мкл испытуемых проб сыворотки крови. Планшет накрывают крышкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С, после чего лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды промывают промывочным буфером (по 300 мкл на лунку). Затем жидкость окончательно удаляют и планшет подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора конъюгата, накрывают крышкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С. Трижды повторяют процедуру промывания. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл раствора субстрата, накрывают крышкой и выдерживают 10 минут при температуре 22 - 28 °С. Реакцию останавливают добавлением в каждую используемую лунку по 100 мкл подготовленного . Учет результатов анализа проводят инструментальным способом сразу же после остановки реакции, используя спектрофотометр (ридер) с вертикальным лучом света при длине волны 405 - 410 нм. Реакцию оценивают по отношению значений оптической плотности (ОП) испытуемой пробы (S) к значению оптической плотности положительного контроля (P), что отражает относительное количество антител в исследуемых образцах. Среднее значение ОП отрицательных контролей должно быть не выше 0,150. Разница показателей между средним значением ОП положительного контроля и средним значением отрицательного контроля допустима в диапазоне 0,400 - 0,900. Если полученные значения выходят за пределы этих значений, результаты считаются недостоверными и реакцию повторяют. Расчет S/Р-отношения:
S/P = (Значение ОП испыт. сыв-ки - ср. значение ОП отрицательного контроля)/(Ср. значение полож. контроля - ср. значение отрицательного контроля)
Полученные значения S/Р позволяют дифференцировать испытуемые сыворотки на положительные, отрицательные и сомнительные. Пробы сывороток со значениями S/Р ниже или равными 0,172 считаются отрицательными. Расчет титра антител. Титр антител в исследуемых пробах сыворотки крови, разведенных 1:400, вычисляют по следующей формуле: Титр = аntilg (1,714 (lg S/Р) + 3,855). Интерпретация результатов - по результатам ИФА определяют напряженность иммунитета в партии привитых цыплят путем деления количества положительных проб к общему количеству исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают иммунной к ИББ при напряженности иммунитета 80 и более процентов (т. е., если в 80 и более процентах исследованных проб сывороток крови получены положительные результаты). Птицу вакцинируют (ревакцинируют) при напряженности иммунитета менее 80 %. Обнаружение антител у невакцинированной птицы свидетельствует о возможной циркуляции в стаде полевого вируса ИББ. В таких случаях через 21 - 30 дней проводят повторное исследование проб сывороток крови, полученных от этих же птиц. Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при наличии клинических и патологоанатомических признаков ИББ является основанием для объявления в хозяйстве неблагополучия по данному заболевани
ю. Особые указания Работу с химическими компонентами набора следует проводить очень осторожно. При попадании их на кожу или слизистые оболочки рекомендуется промывать пораженное место большим количеством водопроводной воды под краном. Использованные планшеты обеззараживают 3 % раствором хлорной извести или другими сильными окислителями. Запрещается прием пищи и воды, курение в помещении, где проводятся работы с компонентами набора. Флаконы и планшеты без этикеток, с нарушением целостности, изменением консистенции или цвета, наличием посторонних примесей подлежат выбраковке и утилизации. Условия хранения В сухом защищенном от света месте и температуре от 2° до 8 °С. Не допускается замораживание компонентов. Срок годности набора - 12 месяцев. Производитель Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ (ВНИИЗЖ ФГУ), Россия

Название (рус.) НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР (ИБК) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ Состав и форма выпуска В состав набора входят 9 компонентов (К1 - К9). Иммуноспецифические компоненты: К1 - положительная к вирусу ИБК сыворотка крови кур (положительный контроль) цельная лиофилизированная, 1 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула (флакон); К2 - отрицательная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу ИБК, цельная, лиофилизированная, 1,0 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула (флакон); К3 - очищенный антиген вируса ИБК, адсорбированный в лунках планшета для ИФА - 2 планшета; К4 - антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против lgG кур, сухой в объеме 0,5 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула, рабочее разведение 1: (указывается для каждой серии). Неспецифические компоненты: К5 - набор солей для приготовления буферного раствора для испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки: трис (оксиметил) аминометан - 0,97 г (К5.1), трис (оксиметил) аминометан гидрохлорид - 6,61 г (К5.2), натрий хлористый' - 11,7 г (К5.3); К6 - набор солей для приготовлений субстратного буфера: натрий фосфорнокислый двузамещенный - 5,37 г - 1 флакон (К6.1), лимонная кислота - 1,57 г - 1 флакон (К6.2); К7 - детергент твин 20, жидкий - 1 мл - 1 флакон; К8 - субстрат - ортофенилендиамин, 1 таблетка во флаконе; К9 - перекись водорода, гидроперит, таблетка 1 г - 1 шт. в упаковке. Фармакологические свойства Сущность метода заключается в выявлении образовавшегося на поверхности лунок полистиролового планшета комплекса антиген-антитело. Специфический комплекс взаимодействует с антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом против lgG кур и вызывает разложение субстрата, окрашивая содержимое лунок планшета. Набор рассчитан на проведение 176 анализов сывороток крови кур при исследовании в одном разведении 1 : 400, при раститровке сывороток от 1 : 100 до 1 : 12800 - на 20 анализов. Показания Для определения специфических антител против вируса инфекционного бронхита кур (ИБК) в сыворотках крови кур иммуноферментным методом (ИФМ). Дозы и способ применения Для исследования в лабораторию доставляют из птицехозяйств сыворотки крови кур от 25 голов (по 0,2 - 0,3 мл). Пробы сывороток хранят в морозильной камере бытового холодильника. Для постановки метода ИФА используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки постоянного и переменного объема до 0,02 мл и до 0,2 мл со сменными наконечниками, термостат с температурой нагрева (37 + 0,5 °С), бытовой холодильник, рН метр, ридер любой модели для учетов результатов ИФА. Перед приготовлением рабочих растворов набор с компонентами выдерживают 30 минут, при комнатной температуре (20 - 22 °С). Раствор № 1. Содержимое флаконов К5.1, К5.2 и К5.3 растворяют в 1000 мл дистиллированной воды и измеряют показание рН, которое должно быть в пределах 7,4 - 7,6. Затем в этот раствор вносят содержимое флакона К7, получая конечную концентрацию детергента 0,01 %. Данный раствор используют для разведения контрольных сывороток, испытуемых проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки. Раствор № 2. Фосфатно-цитратный буфер рН 4,9 - 5,0. Для приготовления буфера содержимое флакона К6.1 растворяют в 50 мл дистиллированной воды, содержимое флакона К6.2 также в 50 мл дистиллированной воды. Затем смешивают 24,3 мл раствора К6.1 с 25,7 мл раствора К6.2, добавляют 50 мл дистиллированной воды. Полученный раствор должен иметь рН 4,9 - 5,0 при необходимости добавляют кислый (К6.2) или щелочной (К6.1) компоненты. Раствор № 3. Содержимое флакона К1 растворяют в 1,0 мл раствора № 1. Готовят перед использованием. Сыворотка К1 в нативном виде готова для использования по вышеописанному способу. Раствор № 4. Содержимое флакона К2 с отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 1 мл раствора № 1. Раствор № 4 готовят перед использованием. Сыворотка К2 в нативном виде готова для использования по вышеописанному методу. Раствор № 5. Содержимое флакона К4 с антивидовым конъюгатом растворяют в 0,5 мл раствора № 1. Для получения рабочего разведения 1: из этого флакона или из нативного препарата конъюгата отбирают мл на 10 мл раствора №1 (на 1 планшет), готовят перед использованием. Раствор № 6. 1 таблетку гидроперита растворяют в 20 мл дистиллированной воды. Раствор № 7. Субстратно-индикаторная смесь. Содержимое флакона К8 (таблетку) растворяют в 20 мл раствора № 2, встряхивают до полного растворения и добавляют на каждые 10 мл этого раствора по 0,4 мл раствора № 6. Готовят раствор № 7 непосредственно перед использованием. В связи с высокой токсичностью ОФД приготовление субстратно-индикаторной смеси проводить в резиновых перчатках, избегая попадания на кожу и слизистые оболочки. Постановка реакции - из комплекта набора берут планшет (К3), в лунках которого адсорбирован очищенный антиген вируса ИБК, и используют для постановки иммуноферментного метода. Разведение сывороток - образцы исследуемых проб сывороток крови разводят 1 : 100 раствором № 1. С этой целью к 0,01 мл сыворотки крови кур добавляют 1 мл раствора № 1 и перемешивают. В лунки рядов планшета В1 - 12. Н1 - 12 вносят по 0,1 мл раствора № 1, а в лунки А2 - 11 вносят по 0,2 мл исследуемых проб сывороток крови, и проводят раститровку по вертикальным рядам, начиная с 1 : 100 до 1 : 12800. В лунки А1 и А12 вносят разведения 1 : 100 контрольных (отрицательной и положительной) сывороток и также проводят раститровку по вертикальным рядам. Из последних лунок Н1 - Н12 удаляют по 0,1 мл. При обнаружении высоких титров антител в испытуемых пробах проводят раститровку по горизонтальным рядам планшета. Планшет осторожно встряхивают, закрывают крышкой и переносят в термостат на 37 °С на 2 часа. Затем лунки планшета освобождают от содержимого путем вытряхивания и трехкратно промывают раствором № 1. Готовят раствор № 5 по вышеописанному способу и вносят во все лунки планшета по 0,1 мл, затем опять помещают в термостат на 1 час и промывают. Готовят раствор № 7 и вносят во все лунки по 0,1 мл. Оставляют при комнатной температуре в темном месте 5 - 10 минут. Останавливают реакцию добавлением в каждую лунку 0,05 мл серной кислоты, приготовленной путем растворения 2 мл концентрированной серной кислоты в 10 мл дистиллированной воды (в наборе отсутствует). Учет результатов анализа проводят после остановки реакции одним из способов: визуально - по интенсивности окрашивания содержимого лунок планшета или инструментально - с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом при длине волны 492 нм. При визуальном способе учета первоначально проводят оценку результатов по контрольным лункам планшета: положительный контроль при раститровке окрашивается в желтый цвет различной интенсивности. В лунках с отрицательным контролем раствор остается неокрашенным или незначительно желтеет. При визуальном учете сравнивают окраску содержимого лунок планшета испытуемых проб с окраской лунок контрольных образцов. За титр испытуемой сыворотки принимают последнее разведение ее, при котором наблюдают видимое глазом цветовое окрашивание, более интенсивное по сравнению с отрицательным контролем. Инструментальный фотометрический учет результатов анализа позволяет количественно оценить титры специфических антител в исследуемых пробах путем измерения значений оптической плотности (ОП 492 нм). Конечным разведением испытуемой сыворотки считается последнее ее разведение, в котором оптическая плотность превышает таковую отрицательного контроля в 2 - 2,1 раза. Расчет титра сывороток при постановке реакции в одном разведении 1 : 400. Выявление специфических антител в сыворотках крови можно проводить и без раститровки испытуемых сывороток. В этом случае во все лунки планшета А2 - 12 . Н2 - 12 вносят по 0,1 мл исследуемых проб сывороток в разведении 1:400 в одной или двух повторностях, используя по 1(2) лунки на каждую пробу. В две лунки В1, С1 вносят положительные, а в две последующие Д1, Е1 - отрицательные контрольные сыворотки в разведении 1 : 400. Лунки F1, G1, H1 служат контролем конъюгата и заполняются по 0,1 мл раствором № 1. Учет результатов реакции проводится спектрофотометрически при длине волны 492 нм. Для предполагаемого варианта учета различия между средними значениями положительной
и отрицательной контрольных сывороток (PC_x - NC_x) должно быть более 0,5. Значения оптической плотности для отрицательного контроля должны быть менее или равны 0,150. Наличие или отсутствие антител к вирусу ИБК определяют путем вычисления отношения средней оптической плотности испытуемой сыворотки при длине волны 492 нм к среднему значению оптической плотности (ОП) положительного контроля (S/Р). Положительная контрольная сыворотка стандартизована и имеет определенный титр антител к вирусу ИБК. Если S/Р отношение меньше или равно 0,15, сыворотка будет считаться отрицательной. Если S/Р отношение больше чем 0,15, сыворотка содержит антитела к вирусу ИБК. Конечное значение титра может быть подсчитано по S/Р-отношению при разведении 1 : 400. Расчет титра.
Расчет среднего значения ОП отрицательного контроля (NC_x):
(Значение В1 ОП(492) + Значение С1 ОП(492))/2 = NC_x
Пример: (0,100 + 0,120)/2 = 0,110 (NC_x = 0,110).

Расчет среднего значения ОП положительного контроля (PC_x):
(Значение D1 ОП(492) + Значение E1 ОП(492))/2 = PC_x

Пример: (0,720 + 0,690)/2 = 0,755 (PC_x = 0,755).

Расчет S/Р отношения:
(ОП(492) испытуемой сыворотки - NC_x)/(PC_x - NC_x) = S/P
Пример: Значение образца = 0,480
(0,480 - 0,110)/(0,755 - 0,110) = 0,370/0,645 = 0,574 (Значение S/Р=0,574).

В состав набора входят иммуноспецифические компоненты:

— полистироловые 96-луночные микропанели инактивированным антигеном: по

— буфер для разведения испытуемых проб;

— (сыворотка крови кур содержанием специфических антител ИБК);

— положительный контроль (сыворотка крови кур, содержащая специфические антитела ИБК);

— отрицательный контроль (сыворотка крови кур, специфических антител ИБК);

— антивидовой конъюгат (антитела кур, меченые щелочной фосфатазой);

Набор рассчитан проб микропанели. Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения нескольких исследований по мере поступления биологического материала.

Для исследования используют индивидуальные сыворотки крови птиц без признаков гемолиза контаминации объемом см 3 .

Следует помнить, что ИФА является высокочувствительным методом, поэтому ошибки, связанные образцов, проведением инкубационного, температурного режимов могут быть причиной получения недостоверных результатов.

Перед началом работы микропанели компоненты набора выдерживают при температуре использованные реагенты убирают 8°С) после проведения исследования.

Принцип метода

Вирусный антиген, адсорбированный полистироловой микропанели, связывается антителами, присутствующими крови, чего формируется комплекс Полученный иммунный комплекс выявляется после взаимодействия конъюгатом (антитела меченые щелочной фосфатазой), фермент которого, после добавления субстрата, вызывает разложение субстрат- индикаторного раствора растворимого окрашенного продукта. интенсивность окраски раствора микропанели пропорциональна содержанию антител материале.

Порядок применения

Приготовление рабочих растворов

Буфер для разведения проб. Концентрированный раствор буфера разводят в дистиллированной или

Промывочный буфер. Концентрированный раствор буфера разводят в дистиллированной или

Коньюгат, субстратный раствор — готовы

Подготовка испытуемых сывороток проб

Все испытуемые сыворотки, стандарт, положительный контроли разводят 1:400 буфером для разведения проб, используя для каждого образца новый наконечник.

В лунки микропанели повторах вносят по приготовленных контрольных проб: буфер для разведения проб, отрицательный контроль, положительный контроль, стандарт.

В остальные лунки микропанели вносят по приготовленных 1:400 испытуемых проб сыворотки крови при температуре 20-30°С.

После инкубации лунки освобождают резким встряхиванием промывают промывочным буфером (по лунку), каждый раз выдерживая лунки оставлять лунки сухими между промывками. Затем жидкость окончательно удаляют, микропанель подсушивают постукиванием по сложенной слоев фильтровальной бумаге.

Затем микропанели вносят по конъюгата при температуре 20-30°С.

После инкубации проводят процедуру

Далее лунки микропанели вносят по субстрата при температуре 20-30°С.

После чего реакцию останавливают, добавляя используемую лунку по

после остановки реакции проводят измерение оптической плотности (О.П.) раствора лунке (ридер) лучом света при длине волны оценку реакции компьютерной программы

Условия хранения

Срок годности компонентов изготовления при хранении их месте при температуре от 8°С.

Федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору (Россельхознадзор)

Диагностикумы заболеваний птиц

Набор для определения антител к аденовирусу птиц 4 серотипа группы 1 (синдром гидроперикардита) иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении

подробнее Купить

Набор для определения антител к вирусу инфекционного ларинготрахеита птиц иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении

подробнее Купить

Набор для выявления антител к Mycoplasma synoviae иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении

подробнее Купить

Набор для определения антител к вирусу инфекционного энцефаломиелита птиц иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении

подробнее Купить

Набор для выявления антител к возбудителю реовирусной инфекции птиц иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении

подробнее Купить

Набор для определения антител к пневмовирусу птиц иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении

подробнее Купить

Набор для определения антител к Mycoplasma gallisepticum иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении

подробнее Купить

Набор для определения антител к вирусу инфекционного бронхита кур иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении

подробнее Купить

Набор для определения антител к вирусу инфекционной бурсальной болезни иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении

подробнее Купить

Набор для определения антител к вирусу синдрома снижения яйценоскости-76 иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении

подробнее Купить

Набор для определения антител к вирусу ньюкаслской болезни иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении

подробнее Купить

Набор для выявления антител к вирусу синдрома снижения яйценоскости-76 в реакции торможения гемагглютинации

подробнее Купить

Набор для выявления антител к вирусу гриппа птиц иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении

подробнее Купить

Читайте также: