Напряженность иммунитета к гриппу птиц

Обновлено: 19.04.2024

Эффективность применения вакцины оценивают по трем показателям: уровню поствакционального иммунитета выраженного в протективных титрах антител, заболеваемости и смертности птиц при экспериментальном или полевом инфицировании. В качестве косвенного теста активной иммунной системы можно использовать количественные показатели иммунокомпетентных клеток.

Согласно инструкции по применению вакцины против гриппа птиц инактивированной эмульгированной, она должна вызывать не менее чем у 80% вакцинированных птиц накопление антител в крови к вирусу гриппа птиц в титре 1:16 со штаммом, имеющим иную антигенную форму. Иммунитет формируется в течение 28 дней после вакцинации. Однако существует мнение, если после иммунизации против вирусных болезней у 15% и более особей титры антител ниже, чем 1:64 в РТГА, то проведенные профилактические мероприятия можно считать не эффективными.(2)

Цель работы -определить эффективность вакцинопрофилактики птиц в Пышминском районе по результатам лабораторного мониторинга напряженности поствакцинального иммунитета.

Материалы и методы.

Реакция торможения гемагглютинации — (РТГА) метод идентификации вируса или выявления противовирусных антител в сыворотке крови больного, основанный на феномене отсутствия агглютинации эритроцитов препаратом, содержащим вирус, в присутствии иммунной к нему сыворотки крови.

Реакция торможения гемагглютинации проводится микрометодом в лунках 96-луночного круглодонного планшета для иммунологических исследований. Титр более 1:8 считается положительным.

Ее принцип состоит в том, что при контакте вируса с гомологичными антителами происходит связывание антител с гемагглютининами вируса, в результате чего вирус теряет свойство агглютинировать (склеивать) эритроциты. Для этого исследуемую сыворотку в разных разведениях смешивают с одинаковыми дозами известного вируса и после контакта ко всем смесям добавляют суспензию эритроцитов, которые служат индикатором вирусных гемагглютининов. При высшем разведении исследуемой сыворотки, когда еще подавляется гемагглютинация, и определится титр антител в этой сыворотке.

Результаты и обсуждение исследований

В Пышминском районе проводится уже 4 года подряд мониторинговая программа по гриппу птиц - исследуют сыворотку крови через месяц после ревакцинации кур и сыворотку диких птиц убитых во время сезона охоты. Сыворотки крови отправляют в Свердловскую областную лабораторию на исследование напряженности иммунитета.

При исследовании 15 проб полученных от дикой водоплавающей птицы, отстреленной в охотничьих угодьях Пышминского городского округа, методом РТГА, антител к вирусу гриппа птиц не обнаружили.

Проведя сравнительный анализ по полученным титрам антител, определяемых в реакции торможения гемагглютинации со штаммом вируса гриппа А подтипа Н5 исследовали в 2008 году 108 проб сыворотки крови кур. По результатам исследования сыворотки крови из 108 голов у 94 (87%) выявлен высокий уровень антител к гриппу и только у 14 (13%) антител не обнаружили. При этом 94 головы можно разделить на 3 группы: с высоким, и низким уровнем антителообразования. В процентном соотношении эти группы делятся так: с высоким уровнем 64,9%, с средним уровнем 33,0% с и низким 2,1%.

По результатам 2009 года из 80 голов у 73 (91,2%) выявлен высокий уровень антител к гриппу и только у 7 (8,8%) антител не обнаружили. При этом 73 головы так же можно разделить на три группы: с высоким, средним и низким уровнем антителообразования. В процентном соотношении эти группы делятся так: с высоким уровнем 19,2%, с средним уровнем 48,0% и низким 32,8%.

Список использованной литературы

Мезенцев С.В. Грипп птиц: эпизоотология и безопасность продукции // Ветеринарный консультант.№20. 2006

(с) 2009 ООО "Уралбиовет-Консалтинг"
620142 Екатеринбург, ул. Белинского, 112а. Тел./факс: (343) 214-76-30, 214-76-32
По всем вопросам звоните или пишите через форму обратной связи.

от 3 апреля 2006 года N 105

Об утверждении Ветеринарных правил лабораторной диагностики гриппа А птиц

В целях повышения эффективности борьбы с гриппом птиц и в соответствии с пунктом 5.2.11 Положения о Министерстве сельского хозяйства Российской Федерации, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 24 марта 2006 года N 164 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2006, N 14, ст.1543),

Утвердить Ветеринарные правила лабораторной диагностики гриппа А птиц согласно приложению.

в Министерстве юстиции

27 апреля 2006 года,

регистрационный N 7761

Приложение
к приказу Минсельхоза России
от 3 апреля 2006 года N 105

ВЕТЕРИНАРНЫЕ ПРАВИЛА
лабораторной диагностики гриппа А птиц

1. Область применения

1.1. Настоящие Правила устанавливают обязательные требования к организации лабораторной диагностики гриппа А птиц (далее - грипп птиц).

1.2. Положения настоящих правил обязательны для выполнения на территории Российской Федерации органами государственной власти, предприятиями или иными хозяйствующими субъектами, учреждениями, организациями, общественными объединениями, независимо от их подчинения и форм собственности, должностными лицами и гражданами.

2. Общие положения

2.1. Диагностические лабораторные исследования и серологические тесты по определению напряженности поствакцинального иммунитета (далее - лабораторные тесты) проводят в специализированных ветеринарных учреждениях.

2.2. Лабораторная диагностика гриппа птиц направлена на выявление в исследуемых объектах ветеринарного надзора:

вируса гриппа птиц;

РНК вируса гриппа птиц;

антигенов вируса гриппа птиц;

антител к вирусу гриппа птиц.

2.3. При проведении лабораторных тестов могут быть использованы методы лабораторных исследований, применяющие:

тесты, утвержденные в установленном порядке;

3. Обязательные требования по отбору проб для проведения диагностики гриппа птиц

3.1. Отбор проб крови и патологического материала проводит ветеринарный работник, имеющий специальную подготовку.

3.2. Пробы маркируются и опечатываются. К пробам прилагается сопроводительный документ, содержащий сведения о дате и месте отбора проб, юридическом или физическом лице - владельце птицы и месте его нахождения, виде, возрасте птицы и ее состоянии на момент отбора проб.

3.3. Для проведения исследований осуществляют отбор проб патологического материала (органы, ткани головного мозга, легких, трахеи, селезенки, участков кишечника, почек, сердца) от павшей или убитой с диагностической целью птицы.

3.4. От каждого стада птицы отбирают для исследований 5-10 трупов или патологический материал от 5-10 трупов, клоакальные и/или трахеальные смывы от 10-15 голов, 1-10 сборных проб помета от стада.

У мелких видов птиц для отбора проб используют свежий помет.

Пробу помета рекомендуется отбирать из расчета 1 грамм помета на 60 точек птичника (выгула или вольеры), выбранных по диагонали крест-накрест.

3.5. Пробы крови для определения антител к вирусу гриппа птиц рекомендуется отбирать у 25-30 птиц из стада (партии), из одного птичника (зала) или одного населенного пункта, местности (водоема).

Пробы крови отбирают из подкрыльцовой вены в пробирки, увлажненные физиологическим раствором. Кровь выдерживают до образования сгустка при комнатной температуре или в термостате при 37°С в течение 1-2 часов, затем обводят иглой или пастеровской пипеткой, отслаивая сгусток крови от стенок пробирки, и оставляют на 16-18 часов при температуре 2-4°С. Образовавшуюся прозрачную без признаков гемолиза сыворотку отбирают с помощью пипетки в отдельные чистые пробирки.

Отбор крови допускается проводить с помощью иглы и шприца (или вакуумной пробирки).

Рекомендуется проводить центрифугирование проб крови для получения сыворотки в течение 10-15 минут при 1000 об/мин для осаждения свободных эритроцитов.

Для серодиагностики используют парные пробы сывороток крови, полученные от больных или инфицированных птиц, в начале заболевания и через 4-10 дней.

3.6. Пробы транспортируются во влагонепроницаемой таре, в контейнере с хладоэлементами или в термосе со льдом. Допускается однократное замораживание сывороток.

При транспортировке проб соблюдают установленные ветеринарно-санитарные правила и меры безопасности, предъявляемые к транспортировке биологических материалов, содержащих инфекционные агенты 3-й группы патогенности.

3.7. Если немедленное исследование проб невозможно, допускается сохранять образцы на протяжении 4 дней при температуре 4°С.

При необходимости для увеличения срока хранения диагностические образцы и/или изолят помещают в морозильную камеру с температурой -80°С.

4. Методы и сроки проведения лабораторных исследований

4.1. Для установления диагноза на грипп птиц допускается применение следующих методов:

а) для выявления вируса гриппа птиц - биопроба на СПФ (свободных от патогенной микрофлоры) - цыплятах с обязательным последующим подтверждением специфичности биологической реакции;

б) для выделения вируса гриппа птиц - метод выделения вируса на СПФ - куриных эмбрионах или в культуре клеток;

в) для обнаружения антигенов вируса гриппа птиц:

иммуноферментный анализ (ИФА) для обнаружения одного или нескольких белков вируса;

иммунопреципитация (двойная иммунодиффузия по Оухтерлони (далее - РДП) или иммуноэлектроосмофорез (далее - ИЭОФ);

иммунохроматографические методы (далее - ИХА);

радиоиммунный анализ (далее - РИА);

непрямая гем- и латексагглютинация;

реакция связывания комплемента (далее - РСК);

г) для обнаружения гемагглютинина (гемагтлютинирующей активности) вируса гриппа птиц:

реакция гемагтлютинации (далее - РГА) с подтверждением специфичности в реакции торможения гемагглютинации (РТГА);

ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину;

Организация мониторинга заносов и распространения гриппа птиц в природных условиях на территории Российской Федерации

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г.Г.Онищенко, Е.Б.Ежлова, Г.Ф.Лазикова); ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора (И.Г.Дроздов, А.Н.Сергеев, А.П.Агафонов, А.М.Шестопалов, Е.А.Ставский, А.Ю.Алексеев, О.К.Демина, Е.Б.Шеметова, А.А.Сергеев, Ю.В.Туманов, В.А.Терновой); ФГУЗ ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора (Г.А.Шипулин, А.Т.Подколзин, С.Б.Яцышина); ФГУЗ РосНИПЧИ "Микроб" Роспотребнадзора (А.В.Топорков, С.А.Щербакова, Н.В.Попов, В.П.Топорков, А.А.Слудский, И.Н.Шарова, М.Н.Ляпин, А.Н.Матросов, В.Н.Чекашов, Т.Ю.Красовская); ГУ НИИ гриппа РАМН (О.И.Киселев, Л.М.Цыбалова, Т.Г.Лобова).

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ К УТВЕРЖДЕНИЮ Комиссией по государственному санитарно-гигиеническому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

4. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН методических рекомендаций "Организация мониторинга заносов и распространения гриппа птиц в природных условиях на территории Российской Федерации" от 17.11.06 N 0100/12294-06-34.

Список сокращений

ВГПА - вирус гриппа птиц типа А

Биобезопасность - биологическая безопасность

ИФА - иммуноферментный анализ

МФА - метод иммунофлуоресцирующих антител

ОТ-ПЦР - метод обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции

РТГА - реакция торможения гемагглютинации

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

1. Область применения

1.2. Настоящие методические рекомендации предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека и других организаций независимо от организационно-правовой формы собственности.

2. Общие положения

2.1. Целью введения настоящих методических рекомендаций является регламентация мероприятий по эпизоотологическому мониторингу за гриппом птиц в природных условиях. Комплекс мероприятий по мониторингу включает в себя организацию сбора, хранения и транспортирования материала, проведение лабораторных исследований, а также обеспечение биологической безопасности проводимых работ. Основной задачей мероприятий по мониторингу за гриппом птиц является выявление заносов возбудителя и распространения этой инфекции в популяциях диких животных околоводного комплекса с целью проведения адекватных противоэпидемических и профилактических мероприятий среди людей.

2.2. Организация и проведение мероприятий по эпизоотологическому мониторингу гриппа птиц в природных условиях на территории Российской Федерации осуществляется органами и учреждениями Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека во взаимодействии с органами и учреждениями Минсельхоза и Россельхознадзора.

2.3. Объем, характер и направленность проведения профилактических мероприятий среди людей определяются результатами эпизоотологического обследования и прогнозом эпизоотической и эпидемической ситуации по гриппу птиц в конкретных субъектах Российской Федерации.

2.4. Управления Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации, на территории которых обнаружены эпизоотии гриппа птиц, совместно с органами исполнительной власти субъектов, органами Россельхознадзора, МЧС и другими заинтересованными службами и ведомствами планируют проведение мероприятий, направленных на предупреждение распространения вируса среди домашней птицы, на птицефабриках и среди людей, а также направленных на минимизацию последствий от возможных вспышек, если они уже возникли, и их подавление. Комплексный план профилактических мероприятий по гриппу птиц составляют управления Роспотребнадзора совместно с органами управления здравоохранением субъектов Российской Федерации, Россельхознадзором и другими заинтересованными службами и ведомствами сроком не менее чем на 2 года с ежегодным корректированием.

2.5. Прогноз эпидемиологической и эпизоотологической ситуации по гриппу птиц на территории Российской Федерации составляется научно-методическим центром по референс-диагностике и изучению высокопатогенных штаммов вируса гриппа - НМЦГ (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора). Прогноз составляется на основе предоставляемых в НМЦГ заключений об эпидемиологической и эпизоотологической обстановке по гриппу птиц в России (1-2 раза в год), подготовленных Центром экологии и эпидемиологии гриппа - ЦЭЭГ (ГУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН) и Федеральным Центром по гриппу - ФЦГ (ГУ НИИ гриппа РАМН). Эти заключения формируются на основе представляемой в адрес ЦЭЭГ и ФЦГ информации от курируемых ими соответствующих учреждений (противочумные станции и опорные базы, определенные Приказом Роспотребнадзора от 31.03.05 N 373). Сформулированный обобщенный прогноз и заключения об эпидемиологической и эпизоотологической обстановке в России направляются в Федеральную службу по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Данные прогноза эпидемиологической и эпизоотологической ситуации по гриппу птиц на территории Российской Федерации передаются в ВОЗ, на информационный сайт НМЦГ, в Национальные центры по гриппу стран СНГ и учреждения-разработчики (ЦЭЭГ и ФЦГ) после согласования с Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2.6. Консультативно-методическая и практическая помощь управлениям Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации по вопросам профилактики и проведения противоэпидемических мероприятий среди людей на территориях, пораженных эпизоотией гриппа птиц, осуществляется НМЦГ, ЦЭЭГ и ФЦГ, Противочумным центром, региональными центрами по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней, созданных на базе противочумных учреждений.

3. Обоснование необходимости осуществления мониторинга за гриппом птиц

Необходимость проведения мониторинга за гриппом птиц определяется реальной опасностью заносов возбудителя этого заболевания перелетными птицами и формирования очагов инфекции во многих регионах Российской Федерации, а также возникновения эпизоотий среди домашних птиц и потенциальная способность вируса гриппа птиц вызывать заражение человека.

С 1997 г. отмечаются эпизоотии среди диких и домашних птиц, вызванных высокопатогенными вирусами гриппа А субтипа H5N1, способными вызывать также тяжелые заболевания среди людей с высокой летальностью. В последние годы происходит расширение ареала вируса гриппа птиц, увеличение видового спектра носителей, повышение вирулентности циркулирующих штаммов. Способность выживать в окружающей среде в течение длительного времени, особенно при низких температурах, обусловливает расширение ареала распространения вируса и необходимость проведения мероприятий по мониторингу на обширных территориях Российской Федерации.

Федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору (Россельхознадзор) контролирует обстановку по птичьему гриппу, решая в первую очередь проблемы профилактики эпизоотических вспышек среди домашних животных. Вместе с тем эпизоотологический мониторинг гриппа птиц в природных биотопах в настоящее время проводится в недостаточном объеме.

4. Организация эпизоотологического мониторинга за гриппом птиц в природных условиях

4.1. Эпизоотологические и эпидемиологические особенности гриппа птиц

Вирусы гриппа, которые принадлежат к семейству Orthomyxoviridae, классифицируются как А, В и С на основании антигенных различий в их нуклеопротеиновом (NP) и матричном (M1) белках. Из трех известных типов вирус гриппа А является наиболее патогенным и инфицирует разнообразные виды животных, включая свиней, лошадей, морских млекопитающих и птиц, периодически вызывая пандемии в человеческой популяции. Дальнейшее разделение вируса гриппа А на субтипы основано на антигенных свойствах двух поверхностных гликопротеинов: гемагглютинина (Н) и нейраминидазы (N). В настоящее время известны 16 вариантов гемагглютининов (H1-Н16) и 9 вариантов нейраминидаз (N1-N9). Только вирусы гриппа А вызывают инфекции птиц. Все известные на сегодняшний день комбинации из гемагглютининов (H1-Н16) и нейраминидаз (N1-N9) гриппа были изолированы от птиц. Вирусы гриппа А, инфицирующие домашнюю птицу, могут быть разделены на две группы на основе их патогенности. Высоковирулентные вирусы вызывают "птичью чуму" - высокопатогенный грипп птицы (highly pathogenic avian influenza - HPAI), при которой смертность достигает 100%. Эти вирусы ограничены Н5, Н7 и Н9 субтипами, хотя не все штаммы этих субтипов вызывают HPAI. Все другие субтипы вируса, вызывающие более слабую форму респираторного заболевания, обозначаются как низкопатогенный грипп птицы (LPAI). Впервые вирус высокопатогенного гриппа птиц субтипа H5N1 был выделен от цыпленка в 1959 г. в Шотландии.

Вирусы гриппа птиц обладают высокой изменчивостью и способностью к мутациям, что приводит к постоянному возникновению новых штаммов вируса, в том числе обладающих повышенной вирулентностью. Важной особенностью вируса гриппа птиц субтипа H5N1 является способность выживать в окружающей среде в течение длительных периодов времени, особенно при низких температурах (например, в загрязненной пометом воде). В воде вирус может выживать до 4 дней при 22 °С и более 30 дней при температурах 4-6 °С, в фекалиях - в течение 35 дней при температуре 0 °С. Длительная сохранность вируса в объектах внешней среды обусловливает расширение ареала распространения вируса и необходимость проведения мероприятий по мониторингу на большем количестве территорий Российской Федерации.

Из домашних птиц основная роль в качестве носителей вируса H5N1 принадлежит уткам и гусям, которые зачастую сами не болеют или переносят инфекцию в легкой форме, но выделяют вирус в окружающую среду в большом количестве. Куры, особенно их молодняк и несушки, очень чувствительны к гриппу птиц. Именно в их популяциях возникают массовые эпизоотии, приводящие к 100% гибели поголовья. Болеют также индюки, перепелки, куропатки, бойцовские петухи, павлины, цесарки, страусы и попугаи.

Инкубационный период болезни у птиц длится 1-7 дней. Клиническими признаками болезни являются вялость, снижение яйценоскости, отказ от пищи, взъерошенность перьев, истечения из носовой и ротовой полостей, понос, синюшность гребня и сережек, раздутие и подкожное кровоизлияния шпор, судороги и паралич. Смерть наступает очень быстро, зачастую в течение первых суток после инфицирования. Чаще всего заболевают птицы на личных подворьях и фермах с открытым выпасом птицы. Крупные животноводческие хозяйства, где соблюдается режим закрытого содержания, поражаются гораздо реже.

Устойчивые природные очаги гриппа птиц находятся в странах Юго-Восточной Азии, где вирус инфекции способен циркулировать круглогодично в популяциях местных и зимующих перелетных птиц, скапливающихся на водоемах. Мигрирующие с юга на север дикие птицы, совершающие дальние перемещения на места постоянных гнездовий (чайки, кулики, аистообразные и воробьиные), заносят вирус на водоемы, где происходит заражение оседлых видов.

В настоящее время на территории России, Китая, Монголии, Казахстана, Азербайджана, Украины, Турции, Египта, Ирака, Румынии и других стран Евразии вдоль пролетных трасс мигрирующих птиц сформировались и функционируют заносные природные очаги, откуда возможна дальнейшая экспансия гриппа птиц субтипа H5N1 на территорию России и сопредельных государств.

Основной путь заражения людей вирусом гриппа птиц - при контактах с зараженной птицей, при разделке тушек больной птицы.

Длительность инкубационного периода при гриппе A (H5N1) составляет обычно 2-3 дня с колебаниями от 1 до 7 дней. Заболевание начинается остро - с озноба, миалгии, возможны боли в горле, ринорея. В странах Юго-Восточной Азии более чем у половины больных отмечалась водянистая диарея при отсутствии слизи и крови в фекалиях, в четверти случаев повторная рвота. Повышение температуры тела является одним из ранних и постоянных симптомов. Уже в первые часы болезни температура превышает 38 °С и часто достигает высоких и гиперпиретических значений. В разгар заболевания (на 2-3-й день болезни) характерно поражение нижнего отдела дыхательных путей (нижний респираторный синдром) с возможным развитием первичной вирусной пневмонии: кашель, одышка и дисфония. Кашель обычно влажный, в мокроте нередко отмечается примесь крови. Аускультативно-жесткое дыхание, хрипы. На рентгенограмме грудной клетки в ранние сроки находят неспецифические изменения в легких - диффузные, мультифокальные или отдельные инфильтраты, которые способны к быстрому распространению и слиянию. В некоторых случаях могут быть обнаружены сегментарные или долевые уплотнения. Прогрессирование заболевания сопровождается развитием дыхательной недостаточности и острого респираторного дистресс-синдрома.

В периферической крови больных определяется:

лимфопения; средний уровень 0,7х10/л (от 0,25 до 1,1х10/л при нижней границе нормы 1,2х10/л);

тромбоцитопения; средний уровень 75,5х10/л (от 45,0 до 174,0х10/л при нижней границе нормы 180,0х10/л).

Проявлениями пантропизма вируса, развивающегося в процессе интоксикации, может быть поражение печени и почек, более чем у 30% больных развивается острая почечная недостаточность. При биохимическом исследовании крови, как правило, выявляется повышение активности трансаминаз, нередко наблюдается креатининемия.

Дети младшего возраста переносят заболевание в тяжелой форме. К основным синдромам у них возможно присоединение симптомов энцефалита. В этом случае симптоматика дополняется сильной головной болью, рвотой, нарушением сознания и тошнотой.

4.2. Цель и задачи эпизоотологического мониторинга за гриппом птиц в природных условиях

Основной целью эпизоотологического мониторинга за гриппом птиц является своевременное выявление случаев заноса вируса гриппа птиц в природные биотопы и отслеживание особенностей распространения этой инфекции среди диких животных околоводного комплекса.

Для обеспечения цели необходимо решить следующие задачи:

выбрать географические точки для мониторинга с составлением кадастра водоемов, где скапливается большое количество птиц лимнофильного комплекса для отдыха, гнездования и кормежки;

организовать выездные мобильные бригады для сбора проб материала на исследование;

установить видовой состав, численность, особенности размещения потенциальных носителей ВГП в биотопах околоводного комплекса;

осуществлять сбор проб полевого материала для лабораторного исследования на наличие вируса гриппа птиц, обработку и оперативный анализ полученных результатов;

изучить эпизоотологический статус отдельных видов и групп птиц и других животных околоводных биоценозов;

изучить параметры эпизоотического процесса в очагах гриппа птиц (сезонные особенности, площади эпизоотии, видовой спектр зараженных животных и др.);

оценить степень опасности инфицирования различных типов водоемов, располагающихся в непосредственной близости от сельских населенных пунктов и крупных птицеводческих хозяйств;

составить список населенных пунктов, где возможно заражение домашних животных гриппом птиц от диких околоводных птиц;

разработать мероприятия по предупреждению эпизоотических вспышек и заболеваний людей;

проводить санитарно-просветительную и разъяснительную работу среди местного населения;


Основным критерием оценки эффективности применения средств специфической профилактики инфекционных болезней (вакцин), является напряженность иммунитета. Высокие показатели напряженности иммунитета по стаду гарантируют отсутствие заболеваемости и падежа. Довольно часто возникают ситуации, при которых приходится вводить дополнительные вакцинации в связи с низкими титрами антител или их отсутствием, из-за сбоя в работе иммунной системы.

Важным условием профилактических и оздоровительных мероприятий, остается исследование напряженности иммунитетавсех инфекционных заболеваний, которые прививаются в конкретном птицехозяйстве, а такжепри переходе на другую вакцину или на другую схему вакцинации.

Пробы крови получают методом случайной выборки. Не следует делать разницы между больной и здоровой птицей, маленькой, большой и т.д. Важно также брать птиц из разных мест птичника, тогда результаты исследований будут объективными.

При клеточном содержании птицы образцы крови следует брать по всему птичнику: от одной птицы из каждой выбранной клетки. Пробы крови отбирают индивидуально:

от цыплят в возрасте менее 10 дней:

— путем декапитации (этот метод прост и позволяет получить достаточное количество крови);

от более старшей птицы и взрослого поголовья:

— инъекционной иглой из подкрыльцевой вены.

Для проверки напряженности иммунитета и получения наиболее достоверных титров кровь берут не ранее, чем через 2- 3 недели после последней вакцинации (зависит от сроков формирования иммунитета против конкретнойвакцины- эти данные есть в инструкции по применению). Но наиболее оптимальным сроком взятия крови у птицы считают 2-3 месяца после последней вакцинации против инфекционных заболеваний.

Перечень заболеваний, на которые проверяют напряженность иммунитета, зависит от состава вакцины.

Контроль напряженности иммунитета в стаде дает возможность оценивать эффективность проводимой вакцинации и своевременной корректировки мер, направленных на оздоровление хозяйств от инфекционных заболеваний. Также необходимым условием эффективности профилактических мероприятий является соблюдение ветеринарно-санитарных мероприятий.

Просим обратить внимание, что при покупке птицы у частных лиц необходимо потребовать документ, чтобы убедиться в благополучии района по инфекционным заболеваниям, откуда привезли на продажу птицу. Обязательно должна быть отметка о вакцинации приобретаемой вами птицы. На документе должна быть голограммаветеринарного подразделения, кто его выдает.

В целях повышения эффективности борьбы с гриппом птиц и в соответствии с пунктом 5.2.11 Положения о Министерстве сельского хозяйства Российской Федерации, утвержденного Постановлением Правительства Российской Федерации от 24 марта 2006 г. N 164 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2006, N 14, ст. 1543), приказываю:

утвердить Ветеринарные правила лабораторной диагностики гриппа A птиц согласно приложению.

Приложение

от 3 апреля 2006 г. N 105

Ветеринарные правила лабороторной диагностики гриппа А птиц

Статья 1

Область применения

1.1. Настоящие Правила устанавливают обязательные требования к организации лабораторной диагностики гриппа A птиц (далее - грипп птиц).

1.2. Положения настоящих правил обязательны для выполнения на территории Российской Федерации органами государственной власти, предприятиями или иными хозяйствующими субъектами, учреждениями, организациями, общественными объединениями, независимо от их подчинения и форм собственности, должностными лицами и гражданами.

Статья 2

Общие положения

2.1. Диагностические лабораторные исследования и серологические тесты по определению напряженности поствакцинального иммунитета (далее - лабораторные тесты) проводят в специализированных ветеринарных учреждениях.

2.2. Лабораторная диагностика гриппа птиц направлена на выявление в исследуемых объектах ветеринарного надзора:

вируса гриппа птиц;

РНК вируса гриппа птиц;

антигенов вируса гриппа птиц;

антител к вирусу гриппа птиц.

2.3. При проведении лабораторных тестов могут быть использованы методы лабораторных исследований, применяющие:

тесты, утвержденные в установленном порядке;

Статья 3

Обязательные требования по отбору проб для проведения диагностики гриппа птиц

3.1. Отбор проб крови и патологического материала проводит ветеринарный работник, имеющий специальную подготовку.

3.2. Пробы маркируются и опечатываются. К пробам прилагается сопроводительный документ, содержащий сведения о дате и месте отбора проб, юридическом или физическом лице - владельце птицы и месте его нахождения, виде, возрасте птицы и ее состоянии на момент отбора проб.

3.3. Для проведения исследований осуществляют отбор проб патологического материала (органы, ткани головного мозга, легких, трахеи, селезенки, участков кишечника, почек, сердца) от павшей или убитой с диагностической целью птицы.

3.4. От каждого стада птицы отбирают для исследований 5 - 10 трупов или патологический материал от 5 - 10 трупов, клоакальные и/или трахеальные смывы от 10 - 15 голов, 1 - 10 сборных проб помета от стада.

У мелких видов птиц для отбора проб используют свежий помет.

Пробу помета рекомендуется отбирать из расчета 1 грамм помета на 60 точек птичника (выгула или вольеры), выбранных по диагонали крест-накрест.

3.5. Пробы крови для определения антител к вирусу гриппа птиц рекомендуется отбирать у 25 - 30 птиц из стада (партии), из одного птичника (зала) или одного населенного пункта, местности (водоема).

Пробы крови отбирают из подкрыльцовой вены в пробирки, увлажненные физиологическим раствором. Кровь выдерживают до образования сгустка при комнатной температуре или в термостате при 37 град. C в течение 1 - 2 часов, затем обводят иглой или пастеровской пипеткой, отслаивая сгусток крови от стенок пробирки, и оставляют на 16 - 18 часов при температуре 2 - 4 град. C. Образовавшуюся прозрачную без признаков гемолиза сыворотку отбирают с помощью пипетки в отдельные, чистые пробирки.

Отбор крови допускается проводить с помощью иглы и шприца (или вакуумной пробирки).

Рекомендуется проводить центрифугирование проб крови для получения сыворотки в течение 10 - 15 минут при 1000 об./мин. для осаждения свободных эритроцитов.

Для серодиагностики используют парные пробы сывороток крови, полученные от больных или инфицированных птиц, в начале заболевания и через 4 - 10 дней.

3.6. Пробы транспортируются во влагонепроницаемой таре, в контейнере с хладоэлементами или в термосе со льдом. Допускается однократное замораживание сывороток.

При транспортировке проб соблюдают установленные ветеринарно-санитарные правила и меры безопасности, предъявляемые к транспортировке биологических материалов, содержащих инфекционные агенты 3-й группы патогенности.

3.7. Если немедленное исследование проб невозможно, допускается сохранять образцы на протяжении 4 дней при температуре 4 град. C.

При необходимости для увеличения срока хранения диагностические образцы и/или изолят помещают в морозильную камеру с температурой -80 град. C.

Статья 4

Методы и сроки проведения лабораторных исследований

4.1. Для установления диагноза на грипп птиц допускается применение следующих методов:

    а) для выявления вируса гриппа птиц - биопроба на СПФ (свободных от патогенной микрофлоры) - цыплятах с обязательным последующим подтверждением специфичности биологической реакции; б) для выделения вируса гриппа птиц - метод выделения вируса на СПФ - куриных эмбрионах или в культуре клеток; в) для обнаружения антигенов вируса гриппа птиц:
    1. иммуноферментный анализ (ИФА) для обнаружения одного или нескольких белков вируса;
    2. иммунопреципитация (двойная иммунодиффузия по Оухтерлони (далее - РДП) или иммуноэлектроосмофорез (далее - ИЭОФ);
    3. иммунохроматографические методы (далее - ИХА);
    4. радиоиммунный анализ (далее - РИА);
    5. непрямая гем- и латексагглютинация;
    6. реакция связывания комплемента (далее - РСК);
    1. реакция гемагглютинации (далее - РГА) с подтверждением специфичности в реакции торможения гемагглютинации (РТГА);
    2. ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину;
    1. полимеразная цепная реакция (далее - ПЦР);
    2. ПЦР с последующим секвенированием ее продуктов;
    3. Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот;
    1. ИФА;
    2. РДП и ИЭОФ;
    3. ИХА;
    4. РИА;
    5. РТГА;
    6. РСК;
    1. РТГА;
    2. сиквенс к ДНК или ПЦР-продукта;
    3. ПЦР;
    4. Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот;
    5. ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных
      антител к вирусному гемагглютинину; з) для субтипирования противовирусных антител по гемагглютинину:
      1. РТГА;
      2. ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину.

      4.2. Применение иных тестов допускается для получения предварительных результатов.

      4.3. Методы проведения лабораторных исследований реализуются на основе утверждаемых в установленном порядке методик проведения обязательных диагностических исследований.

      4.4. Сроки проведения лабораторных исследований устанавливаются в зависимости от метода исследования и не могут превышать 1 месяца.

      Читайте также: