Обработка гарантирующая инактивацию вируса ящура

Обновлено: 24.04.2024

Ящур является опасным вирусным инфекционным заболеванием животных и людей, при котором поражаются слизистые покровы кожи. Болезнь передается человеку от больных животных. Заражение человека может произойти, главным образом, при употреблении сырого молока, молочных продуктов, мяса, реже - при непосредственном контакте с больными животными и при контакте с инфицированными предметами (подстилка, кормушка). Возможны случаи воздушно-капельного заражения.

Передачи инфекции от человека к человеку не происходит. Но наиболее восприимчивы к ящуру дети, взрослые заболевают редко.

Возбудителем ящура является РНК-содержащий вирус из семейства пикорнавирусов, характеризуется высокой степенью контагиозности (болезнетворности) и дерматотропностью (сродством по отношению к коже). По антигенной структуре подразделяется на 7 серотипов, в каждом из которых различают несколько антигенных вариантов. На территории СНГ обычно встречаются вирусы типов О и А.

В сырье и продуктах, полученных от больных животных, вирус остается жизнеспособным от нескольких суток до месяца и более. В условиях холода вирус сохраняется в сливках - до 4 дней, молоке - до 12 дней, масле - до 45 дней, субпродуктах - до 3 месяцев. Вирус ящура устойчив во внешней среде: на шерсти животных он сохраняется до четырех недель, на одежде - до 3,5 недели. Обратите внимание: низкие температуры и высушивание не уничтожают вирус.

Источник возбудителя ящура - больные животные, в том числе находящиеся в инкубационном периоде заболевания, а также вирусоносители (более 400 дней). Такие животные выделяют вирус во внешнюю среду с молоком, слюной, мочой и калом. В результате этого происходит инфицирование помещений, выгульных дворов, различных предметов и инвентаря, пастбищ, водоисточников, кормов, транспортных средств, предприятий по заготовке и переработке животноводческой продукции и других объектов. Заражение животных происходит преимущественно через слизистые оболочки ротовой полости при поедании кормов и питья, облизывании различных инфицированных предметов. Большое значение в распространении вируса ящура имеет человек, так как он чаще всего соприкасается с животными и может перемещаться на большие расстояния. Механически переносится вирус ящура с транспортом, птицей и другими видами невосприимчивых животных (в том числе и дикими), а также насекомыми и клещами.

Симптомы болезни у человека - инкубационный период заболевания - в среднем 3-4 дня, хотя он может укорачиваться до двух дней или удлиняться до 10-14 дней, очень редко протекает 21 день.

Дети жалуются на затруднение при глотании, на боли при жевании, разговоре; становятся раздражительными, полностью отказываются от еды. Нередко выделение слюны столь обильно, что она вытекает струей. Высыпания имеются на слизистой оболочке носа, желудка, конъюнктиве, а также на коже лица, предплечий, кистей, голеней и стоп (особенно между пальцами рук и ног).

Меры профилактики - профилактика ящура состоит из комплекса санитарно-ветеринарных мероприятий и мер личной гигиены:

В местах, где появляется ящур, строго запрещается пить сырое молоко и есть молочные продукты, приготовленные из него.
Не допускаются к уходу за больными животными беременные женщины, дети и подростки.
При обнаружении ящура на неблагополучные хозяйства или населенный пункт накладывают карантин, определяют угрожаемую по ящуру зону, вводят ограничения в хозяйственной деятельности на территории района, области, края, республики.
Эти ограничения могут предусматривать запрещение вывоза животных и сельскохозяйственной продукции, введение особого порядка ее заготовки и использования, временного запрета движения личного и общественного транспорта и т. д.
При появлении первых случаев заболевания животных ящуром в ранее благополучном регионе (местности) с целью недопущения дальнейшего распространения болезни рекомендуется немедленно убить всю неблагополучную группу животных на месте их нахождения с соблюдением ветеринарно-санитарных правил. Вывоз такого мяса и других продуктов убоя в сыром виде за пределы хозяйства запрещают. Одновременно с убоем животных в хозяйстве проводят и другие мероприятия, предусмотренные инструкцией, включая дератизационные мероприятия. Трупы животных, павших в очаге ящура, уничтожают, молоко и навоз обеззараживают.
Карантин по ящуру снимают с неблагополучного пункта через 21 день после последнего случая выздоровления животных или их убоя, с обязательным проведением заключительной очистки и дезинфекции инфицированных животноводческих помещений, выгульных дворов, инвентаря, транспортных средств, оборудования и механизмов.
В угрожаемых по ящуру территориях проводят вакцинацию животных. Вакцины против ящура для людей нет.

Эпизоотическая ситуация по ящуру на территории Камчатского края благополучная, но из-за обнаружения очагов в некоторых субъектах ДФО, в крае усиливаются профилактические мероприятия в целях недопущения завоза инфекции.

Следует помнить, что во избежание инфекционных и паразитарных болезней, общих для человека и животных, нельзя приобретать мясо, молоко и другую продукцию животного происхождения в местах несанкционированной торговли без ветеринарной справки на продукцию.

Управление Роспотребнадзора по ЕАО в связи со сложившейся неблагополучной ситуацией по заболеванию ящуром типа О среди животных в 5 населенных пунктах Борзинского района Забайкальского края, в целях предупреждения заболеваемости среди людей напоминает:

Ящур является опасным вирусным инфекционным заболеванием, при котором поражаются слизистые покровы кожи. Болезнь передается человеку от больных животных. Заражение человека может произойти, главным образом, при употреблении сырого молока, молочных продуктов, мяса, реже - при непосредственном контакте с больными животными и при контакте с инфицированными предметами (подстилка, кормушка). Возможны случаи воздушно-капельного заражения. Передачи инфекции от человека к человеку не происходит. Но наиболее восприимчивы к ящуру дети, взрослые заболевают редко.

Ученые установили, что данное заболевание имеет широкое распространение, обладает высокой устойчивостью во внешней среде и долгое время сохраняет активность в условиях холода и высушенном состоянии.

Симптомы болезни

Инкубационный период заболевания - в среднем 3-4 дня, хотя он может укорачиваться до двух дней или удлиняться до 10-14 дней, очень редко протекает 21 день.

У людей болезнь начинается с сильного озноба, подъема температуры до 39-40°, головной боли, потери аппетита, мышечных болей, особенно в области поясницы. Уже в первые сутки больной ощущает сухость и жжение во рту, сильное слюнотечение. Затем появляются пузырьковые высыпания от 1 до 3 мм диаметром. Особенно их много на кончике и по краям языка, а также на слизистой оболочке щек, на деснах и губах. Содержимое пузырьков прозрачно, желтоватого цвета, затем мутнеет, пузырьки увеличиваются, образуя эрозии. Дети жалуются на затруднение при глотании, на боли при жевании, разговоре; становятся раздражительными, полностью отказываются от еды. Нередко выделение слюны столь обильно, что она вытекает струей. Высыпания имеются на слизистой оболочке носа, желудка, конъюнктиве, а также на коже лица, предплечий, кистей, голеней и стоп (особенно между пальцами рук и ног).

Лечение: Ни в коем случае не нужно заниматься самолечением!

Животных:

В случае обнаружения указанных признаков для постановки диагноза и оказания своевременной квалифицированной помощи необходимо срочно обращаться к ветеринарным специалистам.

Людей:

В случае обнаружения указанных признаков для постановки диагноза и оказания своевременной квалифицированной помощи необходимо срочно обращаться в медицинские учреждения.

1. Больных ящуром госпитализируют.

2. Специальных средств лечения этой болезни нет.

Меры профилактики

Профилактика ящура состоит из комплекса санитарно-ветеринарных мероприятий и мер личной гигиены:

В местах, где появляется ящур, строго запрещается пить сырое молоко и есть молочные продукты, приготовленные из него.
Не допускаются к уходу за больными животными беременные женщины, дети и подростки.
При обнаружении ящура на неблагополучные хозяйства или населенный пункт накладывают карантин, определяют угрожаемую по ящуру зону, вводят ограничения в хозяйственной деятельности на территории района, области, края, республики.
Эти ограничения могут предусматривать запрещение вывоза животных и сельскохозяйственной продукции, введение особого порядка ее заготовки и использования, временного запрета движения личного и общественного транспорта и т. д.
При появлении первых случаев заболевания животных ящуром в ранее благополучном регионе (местности) с целью недопущения дальнейшего распространения болезни рекомендуется немедленно убить всю неблагополучную группу животных на месте их нахождения с соблюдением ветеринарно-санитарных правил. Вывоз такого мяса и других продуктов убоя в сыром виде за пределы хозяйства запрещают. Одновременно с убоем животных в хозяйстве проводят и другие мероприятия, предусмотренные инструкцией, включая дератизационные мероприятия. Трупы животных, павших в очаге ящура, уничтожают, молоко и навоз обеззараживают.
Карантин по ящуру снимают с неблагополучного пункта через 21 день после последнего случая выздоровления животных или их убоя, с обязательным проведением заключительной очистки и дезинфекции инфицированных животноводческих помещений, выгульных дворов, инвентаря, транспортных средств, оборудования и механизмов.
В угрожаемых по ящуру территориях проводят вакцинацию животных. Вакцины против ящура для людей нет.

1. БОЛЕЗНИ, ОБЩИЕ ДЛЯ ВСЕХ ИЛИ НЕСКОЛЬКИХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ

1.2. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ВЫДЕЛЕНИЮ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ШТАММОВ ВИРУСА ЯЩУРА

ОДОБРЕНЫ И РЕКОМЕНДОВАНЫ 15 октября 1973 г., б/н

I. ВЫДЕЛЕНИЕ ВИРУСА ЯЩУРА

Для выделения вируса из патологического материала необходимо располагать достаточным количеством такого материала, иметь восприимчивых к вирусу ящура сельскохозяйственных или лабораторных животных, а также чувствительные к вирусу культуры клеток; располагать условиями, исключающими возможность выноса вируса за пределы диагностической лаборатории.

1. Правила отбора патологического материала

Для исследования отбирают патологический материал в виде стенок афт от 2. 3 больных животных в количестве не менее 5 г. У крупного рогатого скота берут стенки созревших непрорвавшихся афт с языка, у свиней - с "пятачка" или вымени, у мелкого рогатого скота - с беззубого края верхней челюсти, с кожи межкопытной щели или венчика. Афты должны быть свежими, плотной консистенции, не издавать гнилостного запаха.

Материалом для исследования могут служить и лимфатические узлы или костный мозг, реже другие паренхиматозные органы. Для прижизненного обнаружения вируса ящура можно использовать слюну и кровь больных животных. Для исследования на вирусоносительство у животных специальным зондом берут соскоб слизистой оболочки глотки и пищевода.

При отборе патологического материала пользуются стерильным инструментом или посудой. Патологический материал помещают в стерильные флаконы или банки с навинчивающимися колпачками с плотной резиновой прокладкой, в которые до 1/3 объема наливают консервирующую жидкость, состоящую из смеси равных частей химически чистого глицерина и фосфатно-буферного раствора рН 7,4. 7,6. На флаконы наклеивают этикетку с наименованием вида патологического материала, даты отбора и адреса хозяйства.

Флаконы или банки с отобранным материалом ставят в металлический непроницаемый контейнер, опечатывают и помещают в термос со льдом. К материалу прилагают сопроводительную записку, в которой указывают дату взятия материала, от какого вида животных и какой материал взят, сообщают подробную эпизоотическую обстановку по ящуру в хозяйстве.

2. Подготовка материала к исследованию

При доставке в лабораторию стенок афт от больных животных для определения типа и варианта вируса ящура необходимо в максимально короткий срок провести исследование в РСК. С этой целью из афтозного материала готовят антиген по следующей методике. Стенки афт отмывают физиологическим раствором рН 7,4. 7,6, высушивают фильтровальной бумагой, взвешивают, измельчают и растирают в фарфоровой ступке с битым нейтральным стеклом до получения однородной массы.

Антигены для РСК готовят в виде 33%-ной суспензии (1:3) путем добавления к полученному весу афтозного материала двойного количества физиологического раствора. Полученную взвесь экстрагируют при комнатной температуре в течение 2 ч и промораживают при температуре -6. -20°С в течение 5…18 ч.

После размораживания антиген центрифугируют 10. 15 мин при 6000 об/мин. Затем надосадочную жидкость сливают и инактивируют при 58°С в течение 40 мин. После инактивации надосадочную жидкость повторно центрифугируют и используют в РСК.

Эффективность выделения вируса из патологического материала повышается при очистке и концентрировании вируссодержащих суспензий. Для этой цели в суспензию используемого материала добавляют фреон-113 в равном количестве к ее объему или хлороформ (10% к объему суспензии). После гомогенизации в течение 15. 20 мин и центрифугирования в течение 20 мин проводят концентрирование надосадочной жидкости полиэтиленгликолем с молекулярным весом 6000. К надосадочной жидкости добавляют 7,5% полиэтиленгликоля, встряхивают до растворения и оставляют в холодильнике при температуре 4°С на 2 ч. Затем центрифугируют при 4000. 6000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость удаляют, а образовавшийся осадок разбавляют фосфатным буфером или физиологическим раствором в объеме, в 10. 20 раз меньшем, чем исходное количество взятой суспензии. Подготовленный материал используют для испытания на наличие вируса.

3. Выделение вируса

На основании опыта отечественных и зарубежных исследователей для выделения вируса ящура может быть предложена следующая схема (рис.1).

Лучшим, хотя и дорогостоящим, методом обнаружения вируса ящура в патологическом материале является биопроба на крупном рогатом скоте. 10%-ную суспензию полученного материала вводят телятам в возрасте 3 мес. и старше, по 0,1 мл в слизистую оболочку языка в нескольких точках. Появление афт на месте введения материала с последующим подтверждением специфичности материала в РСК свидетельствует о наличии вируса ящура. Этот метод применяется в диагностической практике очень редко. Чаще всего для постановки биопроб используют мышат-сосунов 4. 6-дневного возраста и морских свинок весом не менее 500 г. Мышатам-сосунам 10%-ную суспензию испытуемого материала вводят под кожу в дозе 0,2 мл или внутрибрюшинно в дозе 0,1 мл. Появление парезов и параличей конечностей, а затем гибель мышат с подтверждением специфичности в РСК свидетельствует о наличии вируса ящура в испытуемом материале. Морским свинкам 10%-ную суспензию испытуемого материала вводят методом туннелирования внутрикожно в плантарную поверхность лапок. Появление афт на месте введения материала с последующим подтверждением их специфичности в РСК свидетельствует о наличии вируса ящура.

Схема выделения вируса

Высокочувствительным методом выделения вируса является инокуляция культур клеток. В этих целях чаще всего используют однослойную культуру первично-трипсинизированных клеток почек свиней (СП). 10%-ную суспензию испытуемого материала вносят в 4. 6 пробирок с культурой клеток. Для этого удаляют питательную среду и добавляют 0,1. 0,2 мл испытуемого материала. Лучше испытуемый материал инокулировать в увеличенных дозах (20 мл) в большие сосуды типа матрасов Повитской емкостью до 5 л. Пробирки или матрасы оставляют в горизонтальном положении около часа для контакта клеток с испытуемым материалом. После этого добавляют питательную среду. Наблюдение за инфицированными культурами клеток ведут в течение трех дней. При появлении выраженного цитопатического действия (++++) культуральную жидкость собирают и сохраняют в замороженном состоянии. Специфическая дегенерация клеток при подтверждении ее специфичности в РСК свидетельствует о наличии вируса ящура в испытуемом материале.

II. МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИРУСА

1. Серологические методы

А. Реакция связывания комплемента по 100%-му гемолизу

Наставление по определению типов и подтипов (вариантов) вируса ящура утверждено Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 27 августа 1968 г.

Реакция связывания комплемента применяется для определения типов и подтипов (вариантов) вируса ящура, вызвавших заболевание животных, а также для проверки производственных штаммов вируса ящура при изготовлении вакцин и лабораторных штаммов в научно-исследовательской работе.

Компоненты реакции:

а) гемолизин - сыворотка кроликов, гипериммунизированных эритроцитами барана;

б) эритроциты барана - в виде 2%-ной взвеси (из осадка отмытых эритроцитов) на физиологическом растворе;

в) комплемент - свежая или сухая нормальная сыворотка морских свинок;

г) сыворотки морских свинок, гипериммунизированных стандартными типовыми производственными или эпизоотическими штаммами вируса ящура;

д) антигены контрольные - из эталонов типовых и производственных штаммов вируса ящура, испытуемые - из эпизоотических, производственных или лабораторных штаммов вируса от крупного рогатого скота, овец, свиней, крольчат и животных других видов;

е) физиологический раствор - 0,85%-ный раствор химически чистой поваренной соли на дистиллированной воде.

а) Гемолизин

Для определения титра гемолизина из него готовят серию разведений на физиологическом растворе и затем испытывают его активность в этих разведениях.

Выпускаемый биофабрикой гемолизин консервирован глицерином (1:1), поэтому для приготовления первого разведения 1:100 берут 0,2 мл гемолизина и 9,8 мл физиологического раствора. Затем в отдельной пробирке готовят следующее разведение - 1:1000, для чего к 1 мл гемолизина в разведении 1:100 добавляют 9 мл физиологического раствора. Разведение 1:1000 является основным, из которого готовят все последующие: 1:1500, 1:2000, 1:3000, 1:4000 и т.д.

Приготовление разведений гемолизина

Водяная баня 10 мин при температуре 37. 38°С, после чего проводят учет реакции.

Титром гемолизина считается наивысшее разведение, дающее полный гемолиз эритроцитов.

Рабочим разведением гемолизина считается четырехкратная концентрация от его предельного титра.

Титрование гемолизина

В дальнейшем перед постановкой реакции гемолизин обычно не титруют, а рабочее разведение готовят, исходя из предельного титра, установленного при его выпуске биофабрикой и указанного на этикетке. Например, если предельный титр гемолизина 1:3000, рабочее разведение будет 1:750. Поскольку гемолизин, выпускаемый биофабрикой, консервирован глицерином (1 часть глицерина на 1 часть гемолизина), для приготовления рабочего разведения гемолизина берут вдвое больше, т.е. 2:750, или 0,2 мл гемолизина и 74,8 мл физиологического раствора.

Для дальнейшей работы гемолизин в рабочем разведении смешивают с равным количеством 2%-ной взвеси эритроцитов. Полученная смесь называется гемолитической системой (гемсистемой).

б) Эритроциты

Полученную кровь барана дефибринируют, фильтруют через марлю в центрифужные пробирки, затем центрифугируют 10 мин при 2000. 3000 об/мин. Сыворотку отсасывают, а к осадку эритроцитов добавляют примерно 8. 10-кратное количество физиологического раствора, все тщательно перемешивают и снова центрифугируют, как указано выше. Затем жидкость над осадком удаляют, а к осадку добавляют свежую порцию физиологического раствора, смешивают и центрифугируют. Эту операцию отмывания эритроцитов от сыворотки повторяют до тех пор, пока жидкость над осадком не станет бесцветной (обычно для этого требуется отмывать 3. 5 раз). По окончании отмывания жидкость над осадком тщательно отсасывают пипеткой, а из осадка эритроцитов готовят 2%-ную взвесь. Для этого берут 2 мл отмытых эритроцитов и 98 мл физиологического раствора. Для удобства дальнейшей работы готовят гемсистему, которую в процессе употребления часто взбалтывают, так как эритроциты быстро оседают на дно сосуда.

в) Комплемент

Комплемент выпускается биофабриками в сухом виде. Его можно получить и самим, приготовив свежую неинактивированную сыворотку крови от здоровых морских свинок. Титруют комплемент в гемолитической системе и обязательно в день постановки реакции.

Титрование комплемента

Комплемент исследуют в разведении 1:20 в следующих дозах: 0,05; 0,10; 0,15 и т.д. с интервалами 0,05 до 0,40 мл. В каждую пробирку недостающее количество до объема 0,5 мл доливают физиологическим раствором (в первую пробирку 0,45 мл физиологического раствора, во вторую - 0,40, в третью - 0,35 и т.д.). Это будет соответствовать 0,5; 1,0; 1,5; 2; 2,5; 3; 3,5 и 4% цельного комплемента, содержащегося в дозе 0,5 мл разведения с физиологическим раствором.

Водяная баня 15 мин при температуре 37. 38°С, после чего проводят учет реакции.

Титром комплемента считается наименьшее его количество, дающее полный гемолиз эритроцитов. Для работы по определению типов вируса ящура пригоден комплемент, дающий при этих условиях титр не ниже 2,5%.

В дальнейшем для постановки главного опыта комплемент берут с постоянным излишком в 2 условные единицы от титра в его гемолитической системе. Например, если титр комплемента в гемолитической системе 1,5% (см. схему титрования комплемента), для получения рабочего разведения комплемента следует взять 2,5%, что составляет 2 единицы. Разведение комплемента делают из нативного цельного комплемента.

г) Сыворотки

Типоспецифические и вариантные гипериммунные ящурные сыворотки готовят на биофабриках (в институтах) и используют для определения типов и подтипов (вариантов) вируса ящура.

Типоспецифические и вариантные ящурные антигены готовят из тканей больных ящуром крольчат на биофабриках и в институтах.

Испытуемый антиген (стенки афт с языка крупного рогатого скота, с "пятачка" или вымени свиней, с венчика, межкопытной щели или беззубого края верхней челюсти мелкого рогатого скота и т.д.) готовят по методике, описанной выше (см. п.2). Присланный на исследование патологический материал в виде стенок афт или других тканей берут в количестве, необходимом для постановки РСК. Остаток патологического материала хранят в холодильнике при температуре -6. -20°С в консерванте и используют для дальнейшего изучения. В случае отрицательных результатов РСК допускается расплодка испытуемого материала на 4. 6-дневных мышатах, морских свинках или культуре ткани.

Определение типов вируса ящура

При определении типов вируса ящура перед проведением главного опыта позитивные ящурные сыворотки и антигены не титруют, а используют их в удвоенных титрах. Например, если предельный титр сыворотки, указанный на этикетке, 1:40, то ее удвоенным титром будет разведение 1:20. Если предельный титр антигена, указанный на этикетке, 1:6, то его удвоенным титром будет разведение 1:3.

Испытуемый антиген в реакции исследуют цельным (33%-ная взвесь) и в разведениях 1:2; 1:4, 1:8.