Окраска вирусов по морозову
Обновлено: 25.04.2024
Диагностика и профилактика паротидной инфекции
Диагностика основана на типичных симптомах паротитной инфекции. Учитывая многообразие ее клинических, порой редких проявлений, для верификации диагноза используют серологические реакции: РСК, РТГА. Диагностический титр при однократном исследовании 1:80 (Н.И. Нисевич); исследуют парные сыворотки в динамике болезни. Возможна аллергодиагностика путем внутрикожного введения паротитного аллергена, с целью ретроспективного диагноза паротитной инфекции.
В периферической крови при неосложненных формах паротита - лейкопения с лимфоцитозом, РОЭ нормальная.
При неосложненном паротите проводят симптоматическое лечение, направленное на снижение интоксикации и воспаления слюнных желез. Назначают постельный режим, сухое тепло на область пораженной железы (соллюкс, УВЧ, согревающий компресс). При тяжелом течении назначают короткий курс Преднизолона. При орхите и эпидидимите рекомендуют холод на мошонку, ношение суспензория (до 2 недель). Назначают антигистаминные препараты, а также анальгин, амидопирин, аскорбиновую кислоту. Лечение серозного паротитного менингита проводят по общим принципам (дезинтоксикация и дегидратация); антибиотики не назначают. При паротитном панкреатите
- холод на живот, показаны ингибиторы трипсина - трасилол (контрикал), гордокс внутривенно по 50000 ЕД в 1 -й день, по 25000 ЕД во 2-й -4-й дни и по 15000 ЕД - в 5-й -10-й дни. В первые сутки - голод, затем осторожное расширение диеты.
Источником паротитной инфекции является больной человек, который представляет эпидемическую опасность для окружающих за 1-2 дня до появления клинических симптомов и наиболее заразен на 3-5-й день болезни. Путь передачи инфекции-воздушно-капельный. Восприимчивость к паротитной инфекции - всеобщая, особенно высокая у детей. Наибольшая заболеваемость, из-за скученности, приходится на холодное время года (декабрь
- март) и снижается к весне; летом возможны спорадические случаи. Вспышки инфекции носят локальный характер, ограничены пределами одного учреждения. Профилактика сводится к ранней изоляции больного в домашних условиях, а при тяжелом течении болезни - в стационаре. При точном установлении даты общения с больным детей не допускают в организованные коллективы с 11-го по 21-й день инкубационного периода в связи с возможным в этот период выделением вируса в окружающую среду. Объявляется карантин на 21 день. Проведение заключительной дезинфекции в эпидемическом очаге паротитной инфекции не требуется, в связи с небольшой устойчивостью вируса.
В настоящее время против паротитной инфекции получена живая вакцина, которая вводится в дозе 0,1 мл внутрикожно или 0,5 мл подкожно детям в возрасте 15-18 мес однократно. Вакцина обладает высокой иммунизирующей активностью и не дает серьезных осложнений.
Натуральная оспа
Variola major-лат, Smallpox-англ., Pocken, Blatern-нем., Variol-франц.
Натуральная оспа - острое вирусное высококонтагиозное заболевание, имеющее циклическое течение, характеризуется общей интоксикацией, высыпаниями на коже и слизистых оболочках, проходящих последовательные стадии пятна, везикулы, пустулы, корочки и рубца.
Поворотным моментом в борьбе с натуральной оспой, уносившей огромное количество человеческих жизней, явилось открытие в 1796 г. английским врачом Э. Дженнером метода оспопрививания. Проводимые до этого мероприятия не давали эффекта. В результате проведенной иммунизации населения всех континентов, осуществленной под эгидой ВОЗ в XX столетии натуральная оспа ликвидирована. В СССР она была ликвидирована благодаря тем же государственным мероприятиям в 1936 г. Завозной случай натуральной оспы из Индии в Москву с ее ограниченным распространением был в 1957 г. С тех пор случаев натуральной оспы в нашей стране не наблюдалось. Несмотря на ее ликвидацию на земном шаре, постоянное напоминание о ней во врачебной среде крайне необходимо.
В интересах стратегической безопасности во многих странах, в том числе и в России, сохранены противооспенные научно-исследовательские лаборатории, которые продолжают отслеживать ситуацию и имеют противооспенную вакцину в резерве.
Возбудитель - РНК-содержащий вирус относится к семейству Poxoviridae, имеет размеры 200-350 нм; размножается в цитоплазме эпителиальных клеток, образуя включения. При окраске методом серебрения по М. Морозову, вирус виден в обычный микроскоп. Антигены вируса имеют родство с эритроцитами группы А человека, что обуславливает слабый естественный иммунитет, высокую восприимчивость к оспе человека, тяжелое течение болезни и частые летальные исходы. Вирус устойчив во внешней среде; многие месяцы сохраняется в корочках и чешуйках, взятых с оспин; в замороженном состоянии жизнеспособен несколько лет, хорошо переносит высушивание.
Вирус от больного человека передается через воздух с капельками слизи, пылью и, реже, через загрязненную выделениями больного предметы (белье, одежду, игрушки). При вдыхании зараженного воздуха возбудитель попадает в дыхательные пути. Возможно заражение через кожу при вариоляции и трансплацентарно. Вирус достигает ближайших ЛУ, далее попадает в кровь, размножается в эпите-лиоцитах дыхательных путей и, циркулируя в крови, вызывает поражение кожи (экзантему) и слизистых оболочек (энантему). Присоединение вторичной микрофлоры трансформирует образовавшиеся везикулы в пустулы, обуславливая выраженную интоксикацию.
Как известно, вирусы не могут быть рассмотрены в световом микроскопе, поэтому в световом микроскопе изучают включения или ткани, пораженные вирусом. Изменения, происходящие в тканях, изучают с помощью методов и приемов гистологического исследования, которые рассматриваются в соответствующих руководствах.
Препараты для микроскопирования элементарных телец и включений готовят из мазков и отпечатков органов и тканей. Подготовленные мазки немедленно фиксируют. С этой целью применяют простые и сложные фиксаторы. Среди простых чаще других употребляют метиловый спирт, смесь Никифорова (спирта и эфира поровну), ацетон. Среди сложных фиксаторов нашли применение следующие: 1) смесь Дюбоска-Бразиля-Буэна: пикриновой кислоты 1 г, имеющегося в продаже (40%) формалина 60 мл, спирта (80%) 150 мл и ледяной уксусной кислоты 15 мл; 2) сулемовые смеси: а) Шаудина: насыщенного раствора сулемы 2 части и абсолютного спирта 1 часть; б) Ценкера: сулемы 5 г, бихромата калия 2,5 г, сульфата натрия 1 г, ледяной уксусной кислоты 5 мл, дистиллированной воды 100 мл. Уксусную кислоту добавляют в смесь перед употреблением; в) Хелли-Максимова: сулемы 5 г, бихромата калия 2,5 г, имеющегося в продаже неразведенного формалина 10 мл, 2% раствора осмиевой кислоты 10 мл, дистиллированной воды 100 мл. Формалин и осмиевую кислоту добавляют смесь перед употреблением.
Окраска препаратов Окраска по Романовскому
Техника. Высушенные на воздухе препараты без фиксации опускают на 1-2 мин в раствор неразведенного красителя Романовского. Затем их промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и микроскопируют с иммерсионной системой.
Микроскопическая картина. Элементарные тельца, окрашиваемые этим способом, имеют синий цвет на голубом фоне препарата.
Окраска по Муромцеву
Техника. Влажные мазки или отпечатки фиксируют 1-2 ч в этиловом или метиловом спирте комнатной температуры или 15-20 мин в спирте, подогретом до 50-70°С. После промывания дистиллированной водой красят 5-10 мин синим Менсона, разведенным в 40 раз.
Синий Менсона: в 10 мл кипящей воды растворяют 5-8 г химически чистой буры, добавляют 2 г метиленового синего. Окрашенный препарат, не промывая, дифференцируют 5-10 мин в водном растворе танина (5-10%). После приобретения препаратом голубоватого оттенка его промывают дистиллированной водой и подсушивают фильтровальной бумагой. Препарат проводят через абсолютный спирт или 50% смесь абсолютного спирта с ацетоном, после чего он готов для микроскопирования.
Микроскопическая картина. В окрашенном препарате фон и цитоплазма клеток бледно-голубые, тельца Бабеша-Негри резко очерчены, фиолетовые с розовым оттенком, ядра синие, ядрышки темно-синие, эритроциты оранжево-красные.
Окраска по Морозову
Техника. Приготовление реактивов и порядок окраски см. выше.
Микроскопическая картина. Элементарные тельца имеют вид темно-коричневых, почти черных зерен на светло-коричневом фоне.
Окраска по Селлеру
Техника. Влажный мазок или отпечаток без фиксации 10 секунд окрашивают смесью из насыщенных растворов в метиловом спирте основного фуксина (3-5 мл) и метиленового синего (15 мл), а также чистого метилового спирта (25 мл). Промывают проточной водой и сушат на воздухе; препарат готов для микроскопии.
Микроскопическая картина. Тельца Бабеша-Негри пурпурно-красные, цитоплазма, ядра и ядрышки синие, эритроциты кирпично-красные (рис.28).
Техника. За 1-2 суток до употребления готовят протраву, состоящую из 1 мл насыщенного спиртового раствора основного фуксина, 10 мл 20% водного раствора танина, 5,5 мл насыщенного на холоду водного раствора сульфата закисного аммиачного железа (соль Мора). Перед употреблением фильтруют. Препарат, приготовленный на покровном стекле, фиксируют и помещают на часовое стекло. Наливают протраву и 30-50 с подогревают до отхождения паров. Дав стеклу остыть, его промывают водой и, поместив на другое часовое стекло, красят фуксином Циля 2-3 мин при слабом подогревании. После тщательной промывки и высушивания препарат готов для микроскопирования.
Микроскопическая картина. Жгутики окрашиваются в розово-красный цвет (рис.18).
Серебрение по Морозову
Готовят 3 реактива: 1)1 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл имеющегося в продаже формалина, 100 мл дистиллированной воды; 2)5 г танина, 1 мл жидкой карболовой кислоты, 100 мл дистиллированной воды; 3)5 г кристаллического нитрата серебра растворяют в 100 мл дистиллированной воды, отливают 20 мл в другой сосуд, к оставшимся 80 мл раствора по каплям добавляют раствор аммиака, пока не растворится образующийся осадок и не останется легкая опалесценция; если аммиака будет добавлено слишком много, то из отлитых в другой сосуд 20 мл раствора серебра надо добавлять по каплям до получения нужной слабой опалесценции. Для окраски препарата раствор серебра разводят дистиллированной водой 1:10.
Техника. Наливают на 1 мин первый реактив, сливают, промывают препарат водой, наливают второй реактив, подогревают на легком пламени до отхождения паров (1 мин), тщательно промывают водой, 1-2 мин при подогревании обрабатывают препарат третьим реактивом до появления темно-коричневой окраски мазка, тщательно промывают водой, высушивают. Рассматривают с иммерсионной системой.
Микроскопическая картина. Жгутики окрашиваются в буро-черный цвет.
Метод Грея
Растворы, составляющие протраву, смешивают за сутки до употребления. Растворы состоят из: 1) насыщенного водного раствора калийных квасцов K2SO412Н2О – 5 мл, 20% водного раствора танина – 2 мл и насыщенного водного раствора двухлористой ртути – 2 мл; 2) насыщенного спиртового раствора основного фуксина – 0,4 мл.
Микроскопическая картина. Жгутики окрашиваются в красный цвет.
Окраска по Шенку
Протраву, состоящую из двух растворов, готовят за 7-10 дней до употребления. Первый раствор состоит из 30 мл насыщенного водного раствора танина и 10 мл 5% водного раствора полуторахлористого железа, второй – из 1 мл анилина и 4 мл 95% спирта.
Техника. На препарат наносят 8 капель первого и 1 каплю второго раствора. После того как избыток протравы сливают, на препарат наносят краску (без промывания). Красить можно 1% сафранином в 50% спирте или метиленовым синим Леффлера. Хорошие результаты можно получить, применив для окраски смесь 30 мл метиленового синего Леффлера и 8 мл второго раствора протравы.
Окраска по Граму. При окрашивании клеток генцианвиолетом (кристаллфиолетовым) и последующем докрашивании раствором люголя (J в KJ), в КС образуется комлпекс пептидогликан+йод+генцианвиолет, который затем обесцвечивают спиртом. У грам отрицательных мо, т.к. у них слой ПГ тонкий весь окрашенный комплекс вымывается из клеточной стенки и они становятся бесцветными. У грам положительных комплекс остается связанным в толстом слое пептидогликана. В итоге после первого окрашивания – грам+ – синие, грам – прозрачные. 2 этап окраски по Граму – этап докрашивания фуксином. После второго этапа грам+ остаются синими, а грам- становятся красными.
3.В брюшную полость экспериментального животного вводят микроорганизмы, исследуют в процессе фагоцитоза форму мембранной упаковки бактерий, выявляют внеклеточную одномембранную и внутриклеточные одно-, двух- и трехмембранные формы упаковки бактерий. Способ служит основой для разработки новых способов и методов лечебного воздействия на ряд хронических инфекционных заболеваний (туберкулез, лепра и т.д. ).
4. Сущность и техника окраски по Ожешко.
1. высушенный мазок наливают 0,5 % раствор хлористоводородной кислоты и подогревают 1-2 мин.
2.Препарат промывают водой и фиксируют над пламенем горелки.
3.Окрашивают по способу Циля-Нильсена.
Споры прочно удерживают карболовый фуксин и окрашиваются в красный цвет, цитоплазма бактерий обесцвечивается 5% серной кислотой и после докрашивания метиленовым синим приобретает синий цвет.
5. Сущность, техника обработки препаратов по Морозову.
Тонкий препарат, приготовленный из тканевой жидкости, подлежащей исследованию, высушивают в термостате при температуре 37 °С. На сухой препарат наливают 5—10 капель реактива I, через 1 мин реактив I сливают и препарат промывают дистиллированной водой. На препарат наслаивают реактив II и подогревают на пламени горелки до появления паров, затем тщательно промывают препарат водой и наносят реактив III так, чтобы он покрыл всю поверхность препарата. Предметное стекло вновь подогревают в течение 2— 3 мин до тех пор, пока окраска мазка не станет темнокоричневой. После тщательного промывания дистиллированной водой препарат высушивают и исследуют в микроскопе, пользуясь иммерсионной системой.
Данный метод окрашивания дает импрегнацию серебром бледных трепонем, которые становятся темнокоричневого или почти черного цвета.
Натуральная оспа (variola vera) — особо опасная вирусная инфекция, проявляющаяся интоксикацией, лихорадкой и пустулёзно-папулёзной сыпью.
Оспа одна из древнейших инфекционных болезней человека. Первые упоминания об натуральной оспе относятся к 3730-3710 гг. до н.э. (папирус Аменофиса I). В Европу возбудитель проник в VI веке, в Россию был занесён в XV-XVI веках, в Америку — в XVI веке.
До открытия Дженнером метода вакцинации европейские врачи были бессильны перед натуральной оспой. В отдельные годы смертность от оспы достигала 1,5 млн человек.
Возбудитель оспы — самый крупный вирус (220x300 нм), имеет кирпичеобразную форму с закруглёнными углами.
В состав вируса натуральной оспы входят 30 белков, более 10 из них — ферменты, катализирующие синтез нуклеиновых кислот. Вирус натуральной оспы проявляет гемагглютинирующие свойства; гемагглютинин состоит из трёх гликопротеинов.
Важнейшие Аг вируса оспы — нуклеопротеид NP (общий для всего семейства), термостабильный и термолабильный Аг, а также группа растворимых Аг. Размеры вирионов позволяют обнаружить их световой микроскопией в форме телец включений.
Внутриклеточные (точнее околоядерные) включения в клетках роговицы заражённого кролика впервые обнаружил итальянский патолог Д. Гварнери (1892). ЭТ возбудителя натуральной оспы в отделяемом везикул открыл немецкий бактериолог Э. Пашен (1906). Позднее было установлено наличие двух штаммов вируса натуральной оспы.
Первый вызывает классическую оспу (variola major) с летальностью, превышающей 50%, второй — алястрим (variola minor) с более лёгким течением и летальностью, не превышающей 1%. Возбудители идентичны по основным свойствам. Отличительные особенности — способность вируса алястрима размножаться в куриных эмбрионах при более низкой температуре (37,5 °С), образовывать бляшки и проявлять цитопатичес-кий эффект в культуре куриных фибробластов при температуре 37 °С.
К вирусу натуральной оспы чувствителен человек и приматы; экспериментальное внутримозговое заражение новорождённых мышат приводит к развитию генерализованной инфекции. Взрослые мыши нечувствительны к вирусу.
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.
Читайте также: