Определение неоптерина в сыворотке крови диагностика туберкулеза и вирусных инфекций

Обновлено: 27.03.2024

В статье представлены результаты научных исследований, посвященных определению концентрации неоптерина с заболеваниями, сопровождающимися активацией опосредованного интерфероном-? иммунного ответа. Определение уровня неоптерина может быть полезным в качес

The article presents the results of research on determining the concentration of neopterin in conjunction with diseases involving activation of IFN-?-mediated immune response. Determination of neopterin levels may be useful as a potential marker of antiviral protection state in children.

Вопросы острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ), проблемы их профилактики и лечения являются одной из актуальных задач педиатрии. Это обусловлено высоким уровнем заболеваемости в детской популяции, значительной частотой развития тяжелых и осложненных вариантов течения болезней, особенно среди детей раннего возраста. Высокая заболеваемость детей респираторными вирусными инфекциями обусловлена разнообразием возбудителей и их серотипов, особенностями патогенеза болезни, а также незрелостью иммунной системы у детей раннего возраста, в том числе и в системе интерфероногенеза. При рождении детей их лимфоидная система остается функционально незрелой. Для полного развития функций системы Т-клеточного иммунитета и Т-В-кооперации должно пройти 3–9 месяцев после рождения. Дифференцировка лимфоцитов на Т-хелперы (Th) у здорового ребенка происходит постепенно на протяжении первых 3 лет жизни. Самая высокая продукция Т-лимфоцитов сохраняется до двух лет, а затем быстро падает. Именно в возрасте 1,5–3 лет происходит переориентация иммунного ответа на инфекционные агенты с имеющегося превалирования Th2-пути на Th1, типичный для инфекционного процесса у взрослого человека, т. е. происходит функциональное созревание противоинфекционного иммунитета ребенка [1].

Интерфероны (ИНФ) вырабатываются и содержатся во всех ядросодержащих клетках крови и эпителиальных клетках слизистых оболочек и отвечают за наведение и поддержание состояния невосприимчивости к вирусным инфекциям [5, 6]. ИНФ-α, как фактор врожденной резистентности организма, одним из первых цитокинов реагирует на внедрение вируса и играет контрольно-регуляторную роль в сохранении гомеостаза в организме человека. Противовирусный эффект ИНФ-α осуществляется опосредованно через синтезирование под его влиянием ферментов и ингибирующих пептидов, которые блокируют процессы транскрипции и трансляции вирусного генома и индуцируют каскад реакций, ведущий к элиминации вирусной ДНК/РНК [4]. При внедрении вируса ИНФ-α вместе с ИЛ-12 способствует дифференцировке активированных антигеном наивных T-хелперов в Тh1-типа, продуцирующих ИНФ-γ, что обусловливает наиболее эффективный клеточный иммунный ответ [7–9]. В свою очередь ИФН-γ активирует клетки моноцитарно-макрофагального звена, естественные киллеры (NK-клетки), Т- и В-лимфоциты, способствуя усилению их цитотоксичности, продукции молекул адгезии и других провоспалительных и противовоспалительных цитокинов [10]. Исследования энтеровирусной инфекции у детей выявили определенную зависимость динамики вирусного заболевания от типа интерферона. Было высказано мнение об их взаимовлиянии, и в доказательство этого у детей, больных серозным менингитом, при низком содержании в крови ИНФ-α с первых дней болезни применялся Виферон, содержащий рекомбинантный ИНФ-α-2b с антиоксидантами (аскорбиновая кислота и токоферол ацетат). Был получен отчетливый клинический эффект и статистически значимое увеличение содержаний ИНФ-γ в крови этих детей по сравнению с группой сравнения [11]. Доказано, что при респираторных вирусных инфекциях под воздействием патогена происходит нарушение интерфероногенеза [12–13]. В. В. Малиновской (2014) проанализирован интерфероновый статус у взрослых больных с респираторными вирусными инфекциями и выявлено, что использование в лечении рекомбинантного ИНФ-α-2b с антиоксидантами (витамины Е и С) позволяет нормализовать уровень продукции ИНФ-α как при изначально высоких, так и при низких значениях и усилить синтез ИНФ-γ [13]. Кроме того, установлено, что у детей в возрасте от одного месяца до 1 года способность к продукции интерферона снижена в 9 раз, у детей в возрасте от 1 года до 3 лет отмечено снижение способности к продукции в 6 раз по сравнению с взрослыми пациентами. В работе оценивался интерфероновый статус у детей с дисфункцией иммунной системы на фоне респираторной вирусной инфекции, где также было доказано положительное влияние на интерфероногенез генно-инженерного ИНФ-α-2b с антиоксидантами [12].

В других исследованиях было показано, что фактору некроза опухоли-α (ФНО-α) наряду с интерферонами (α, β, γ) принадлежит центральная роль в развитии и формировании противовирусного иммунитета. Установлено, что ФНО-α регулирует взаимодействие различных клеток организма человека между собой и тем самым поддерживает неизменным клеточный гомеостаз. Чрезмерная продукция ФНО-α в совокупности с другими провоспалительными цитокинами приводит к деструкции тканей и их некрозу [14].

В процессе взаимодействия клеток иммунной системы посредством цитокинов запускаются метаболические процессы, которые в той или иной степени могут косвенно отражать динамику и состояние иммунного ответа. Согласно обзору, проведенному Е. А. Свиридовым (2005), ИНФ-γ индуцирует активацию гуанозинтрифосфата, в результате чего синтезируются различные формы биоптерина. Этот метаболит служит коферментом в реакциях метаболизма фенилаланина, дофамина, серотонина, участвует в превращении аргинина в цитрулин и оксид азота, принимает участие в окислительном расщеплении эфиров липидов [15]. В настоящее время основной интерес исследователей представляет неоптерин (НП) [15–17], стабильный метаболит, образующийся в результате биосинтеза биоптерина.

В научной литературе обсуждается клиническая целесообразность определения концентрации неоптерина в биологических жидкостях. Как оказалось, НП участвует в патогенезе многих заболеваний, связанных с активацией клеточного звена иммунитета. Увеличение его концентрации коррелирует с изменениями ИНФ-γ и ФНО-α и связано с системным воспалительным ответом. Установлено, что гиперпродукция неоптерина напрямую сопряжена с активаторным влиянием концентрации данных цитокинов на метаболизм иммунных клеток [15, 18–22].

Основным источником НП являются моноциты, макрофаги, дендритные клетки и эндотелиальные клетки, активированные ИФН-γ. Количество синтезируемого неоптерина прямо пропорционально количеству ИНФ-γ, а также косвенно свидетельствует о повышении ИНФ-α. Увеличение уровня неоптерина в крови коррелирует с аутоиммунными, воспалительными, опухолевыми и инфекционными заболеваниями [23–24].

Немало исследований проведено по аутоиммунным заболеваниям в сопоставлении с уровнем концентрации неоптерина в крови [3, 19, 25–29]. Доказано, что его повышение связано с активной стадией процесса, обострением или прогрессированием течения аутоиммунных заболеваний. Согласно литературным данным, важной причиной гиперпродукции неоптерина при ревматоидном артрите, системной красной волчанке, псориазе, антифосфолипидном синдроме и других аутоиммунных заболеваниях являются такие провоспалительные цитокины, как ИЛ-6, ФНО-α, ИЛ-10, ИЛ-18, увеличение концентрации которых в плазме крови закономерно при указанных заболеваниях [19, 28, 29].

У детей с острыми лейкозами исследование концентрации неоптерина проводилось в рамках формирования сердечно-сосудистых осложнений от проводимой химиотерапии. Неоптерин был отнесен к факторам, способствующим развитию повреждения миокарда [22, 24].

Изменение концентрации НП у кардиологических больных, как принято считать, связано с патогенезом самого заболевания [20, 22]. Проведенные исследования доказали повышение уровня неоптерина у больных ишемической болезнью сердца, острым инфарктом миокарда, атеросклерозом аорты и периферических артерий. Доказано, что у больных с осложненным течением инфаркта миокарда (рецидивирующая стенокардия, левожелудочковая недостаточность, пароксизмальные нарушения сердечного ритма) определялись более высокие показатели неоптерина. Гиперпродукция неоптерина характерна для детей с недостаточностью кровообращения IIБ–III степени, что подтверждает патогенетическое значение активации клеточного иммунитета в развитии недостаточности крово­обращения. Предполагается, что явления гипоксии усиливают синтез провоспалительных цитокинов клетками иммунной системы [20, 22, 25].

Прогностически важным оказалось определение неоптерина у больных после трансплантации органов (сердца, почки, печени). Процессы тканевого (органного) отторжения и реакции сопутствующего воспаления сопровождаются мобилизацией неспецифических защитных систем организма, важным проявлением которой являются острофазный ответ и активация моноцитов/макрофагов. Острое клеточное отторжение пересаженного органа сопровождается значительным повышением уровня неоптерина [25, 26].

Проводились исследования у здоровых новорожденных и детей, рожденных с перинатальным поражением центральной нервной системы (ЦНС). Приведены данные, что у здоровых новорожденных ввиду наличия транзиторного иммунодефицита уровень неоптерина в крови повышен по сравнению с общепринятой нормой (менее 10 нмоль/л). Авторы полагают, что в период родов при участии неоптерина происходит активация макрофагов/моноцитов под влиянием родового стресса. Наиболее высокие показатели НП наблюдались у глубоко недоношенных детей с тяжелыми геморрагическими поражениями ЦНС (внутрижелудочковое кровотечение II–III степени) и сопутствующими инфекционно-воспалительными заболеваниями (пневмония, сепсис) [27, 30].

Достаточно много исследований посвящено определению концентрации неоптерина при различных вирусных инфекциях. Повышение зависимости концентрации НП от прогрессирования заболевания наблюдалось у пациентов с острыми гепатитами, краснухой, вирусом Денге, гриппом, цитомегаловирусом, вирусом Эпштейна–Барр, парвовирусом В-19, вирусными кишечными инфекциями [16, 17, 31–33].

В исследованиях по изучению впервые возникшей острой респираторно-синцитиальной вирусной инфекции у детей до 12 месяцев (первый эпизод обструктивного синдрома) концентрация неоптерина была значительно выше, чем в группе детей с рецидивирующими заболеваниями нижних дыхательных путей [18].

Среди всех вирусных инфекций повышение уровня неоптерина оказалось наиболее значимым при мониторинге ВИЧ-инфекции. Было показано, что уровень неоптерина повышается еще до появления первых клинических симптомов и обнаружения вируса в крови, до выявления специфических противовирусных антител. После сероконверсии концентрация неоптерина возвращается к норме в течение нескольких дней (между 2-й и 4-й неделями) после достижения его максимальных значений в крови больных [17, 34, 35].

В свете последних данных остается актуальным определение концентрации неоптерина в качестве мониторинга ИНФ-опосредованного иммунного ответа. Оценка активности неоптерина в крови детей может оказаться полезным тестом, отображающим динамику иммунных и метаболических процессов при различных инфекционных заболеваниях, и, возможно, позволит контролировать эффективность осуществляемой у детей противовирусной терапии.

Литература

  1. Хаитов Р. М., Пинегин Б. В., Ярилин А. А. Руководство по клинической иммунологии. Диагностика заболеваний иммунной системы. Рук-во для врачей. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. 345 c.
  2. Insug O., Ku G., Ertl H. C. A dendritic cell vaccine induces protective immunity to intracranial growth of glioma // Anticancer Res. 2002; 22: 613–621.
  3. Макаренкова В. П., Кост Н. В., Щурин М. Р. Система дендритных клеток: роль в индукции иммунитета, в патогенезе инфекционных, аутоиммунных и онкологических заболеваний // Иммунология. 2002. № 2. C. 68–76.
  4. Хмелевской В. И., Провоторов В. Я., Киселева В. В., Девянин О. А. Альфа-интерферон в клинической практике // Архив внутренней медицины. 2014. № 5 (19). С. 34–38.
  5. Коростелев А. А., Гайфулин Р. Ш. Интерфероновый статус при хронической рецидивирующей герпес-вирусной инфекции // Российский иммунологический журнал. 2013. Т. 7 (16). № 2–3. С. 138–150.
  6. Железникова Г. Ф., Иванова В. В. Иммунопатогенез осложненного, затяжного или хронического течения инфекций у детей и подходы к иммунокоррекции // Детские инфекции. 2003. № 3. С. 58–61.
  7. Van Reeth K. Cytokines in the pathogenesis of influenza // Veterinary Microbiology. 2000; 74: 109–116.
  8. Головачева Е. Г., Афанасьева О. И., Осидак Л. В., Образцова Е. В. и др. Влияние системы интерферона на направленность поляризации иммунного реагирования при гриппе у детей // Педиатр. 2014. Т. 5. № 3. С. 51–57.
  9. Lohoff M., Mak T. W. Roles of interferon-regulatory factors in T helper-cell differentiation // Nat. Rev. Immunol. 2005; 5 (2): 125–135.
  10. Wurster A. L., Tanaka Т., Grusby M. J. The biology of Stat 4 and Stat 6 // Oncogene. 2000; 19 (21): 2577–2584.
  11. Шипилов М. В., Иванов В. В. Интерферон-γ — основа противовирусной защиты при острых респираторных вирусных инфекциях // Педиатрия. 2011. № 7 (85). С. 72–75.
  12. Протасеня И. И., Молочный В. П., Обухова Г. Г. Цитокиновый статус цереброспинальной жидкости у детей, больных энтеровирусной инфекцией // Дальневосточный журнал инфекционной патологии. 2009. № 14. С. 19–23.
  13. Чеботарева Т. А., Выжлова Е. Н., Захарова И. Н., Заплатников А. Л. Терапия гриппа и острых респираторных инфекций у детей с измененным состоянием здоровья // Международный журнал педиатрии, акушерства и гинекологии. 2013. Т. 3. № 2. С. 44–48.
  14. Малиновская В. В., Чеботарева Т. А., Парфенов В. В. Клиническая эффективность применения препарата Виферон при лечении гриппа и ОРВИ у взрослых // Альманах клинической медицины. 2014. № 35. С. 109–115.
  15. Шипилов М. В. Исследование уровня фактора некроза опухоли-α при острых респираторных вирусных инфекциях // Медицина. Ученые записки. 2010. С. 291–295.
  16. Свиридов Е. А., Телегина Т. А. Неоптерин и его восстановленные формы: биологическая роль и участие в клеточном иммунитете // Успехи биологической химии. 2005. Т. 45. С. 355–390.
  17. Hayriye K. U., Pari S., Zafer H., Suat S. et al. Neopterin and Soluble CD14 Levels as Indicators of Immune Activation in Cases with Indeterminate Pattern and True Positive HIV-1 Infection // Plos One, DOI: 10.1371/journal.pone.0152258. 2016; March 31, с. 1–14.
  18. Murr С., Widner B., Wirleitner B., Fuchs D. Neopterin as a Marker for Immune System Activation // Current Drug Metabolism. 2002; 3: 175–187.
  19. Kandelaki E. T., Nemsadze K. P., Chkhaidze I. G., Kavlashvili N. I. et al. Neopterine and ige during respiratory-syncytial virus infection in infants // Georgian Med News. 2006, Jan; (130): 76–80.
  20. Александрова Е. Н., Новиков А. А., Решетняк Т. М., Попкова Т. В. и др. Цитокины и неоптерин при антифосфолипидном синдроме // Научно-практическая ревматология. 2009. № 2. С. 10–16.
  21. Бершова Т. В., Гасанов А. Г., Иванов А. П., Баканов М. И. и др. Метаболические и иммунные основы ремоделирования миокарда у детей с хронической сердечной недостаточностью // Вопросы диагностики в педиатрии. 2009. № 2. С. 35–39.
  22. Васильева Е. В., Лапин С. В., Блинова Т. В., Никитина И. Ю. и др. Сравнительная ценность квантиферонового теста, неоптерина и специфических противотуберкулезных антител для клинико-лабораторной диагностики туберкулеза легких // Клиническая лабораторная диагностика. 2013. № 5. С. 21–26.
  23. Кубенский Г. Е., Чернов С. А., Скворцов С. В., Шебанкова В. Н. Оценка изменений уровня цитокинов, сывороточного неоптерина и С-реактивного белка у больных инфарктом миокарда // Российский кардиологический журнал. 2005. № 5 (55). С. 12–15.
  24. Хышиктуев Б. С., Ринчинов З. Ц., Цыдендамбаев П. Б., Хлобыстин Р. Ю. Некоторые закономерности изменения уровня неоптерина у пациентов со злокачественными опухолями // Забайкальский медицинский вестник. 2008. № 2. С. 11–14.
  25. Теплякова Е. Д. Особенности формирования сердечно-сосудистых осложнений у детей с острыми лимфобластным лейкозом на фоне инфекционных заболеваний // Владикавказский медико-биологический вестник. 2011. Т. XIII. № 20–21. С. 169–175.
  26. Орлова О. В. Неоптерин у больных сердечной недостаточностью и реципиентов сердца // Вестник российского государственного медицинского университета. 2010. № 1. С. 48–53.
  27. Шевченко О. П., Олефиренко Г. А., Пищулина М. Э., Цирульникова И. Е. и др. Неоптерин при трансплантации печени детям с врожденными заболеваниями печени и желчевыводящих путей // Вестник транспланталогии и искусственных органов. 2011. Т. 13. № 2. С. 58–62.
  28. Муталов А. Г., Грешилов А. А., Амирова В. Р. Нейроиммунологические критерии диагностики и прогнозирования перинатальных поражений центральной нервной системы у новорожденных // Медицинский вестник Башкортостана. 2014. Т. 5. № 1. С. 34–39.
  29. Лысак Н. В., Бугрова О. В. Неоптерин у больных на ранней стадии ревматоидного артрита // Научно-практическая ревматология. 2008. № 1. С. 31–35.
  30. Shady M. M., Fathy H. A., Ali A., Youness E. R. et al. Association of neopterin as a marker of immune system activation and juvenile rheumatoid arthritis activity // J Pediatr (Rio J). 2015, July-August; 91 (4): 352–357.
  31. Федерякина О. Б., Виноградов А. Ф., Горшкова М. А., Шибаев А. Н. и др. Уровень неоптерина в сыворотке крови у доношенных новорожденных в процессе их адаптации к внеутробной жизни // Клиническая лабораторная диагностика. 2013. № 3. С. 13–15.
  32. Nublinq C. M., Chudy M., Volkers P., Lower J. Neopterin levels during the early phase of human immunodeficiency virus, hepatitis C virus, or hepatitis B virus infection // Transfusion, 2006, Nov; 46 (11): 1886–1891.
  33. Zaknun D., Weiss G., Glatzl J., Wachter H. et al. Neopterin levels during acute rubella in children // Clin Infect Dis. 1993; 17: 521–522.
  34. Chan C. P. Detection of serum neopterin for early assessment of dengue virus infection // J Infect. 2006; 53: 152–158.
  35. Kiepiela P., Smith A., Rosenberg E. Laboratory markers associated with progression of HIV infection // Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. 2005; 19: 243–254.
  36. Plata-Nazar K., Luczak G., Liberek A., Dudzinska-Gehrmann J. et al. Evaluation of clinical usefulness of serum neopterin determination in children with bacterial infections // Acta Biochim Pol. 2015; 62 (1): 133–137.

Р. А. Гладких* , 1
В. П. Молочный*, доктор медицинских наук, профессор
В. В. Малиновская**, доктор биологических наук, профессор
И. В. Полеско***, доктор медицинских наук, профессор

* ГБОУ ВПО ДГМУ МЗ РФ, Хабаровск
** ФГБУ ФНИЦЭМ им. Н. Ф. Гамалеи, Москва
*** ГБОУ ВО РНИМУ им. Н. И. Пирогова МЗ РФ, Москва

ГлавнаяHelixbook Определение неоптерина в сыворотке крови (диагностика туберкулеза и вирусных инфекций)

Неоптерин – пуриновый нуклеотид, синтезируемый макрофагами и моноцитами под действием гамма-интерферона. Он является пиразино-пиримидиновым компонентом, который продуцируется только живыми клетками. Повышенная концентрация неоптерина может служить маркером цитотоксического иммунного ответа.

Синонимы английские

Метод исследования

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Единицы измерения

Нмоль/л (наномоль на миллилитр).

Какой материал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Бактерия Mycobacterium tuberculosis является внутриклеточным патогеном, способным длительно жить внутри макрофагов. Эти бактерии, будучи поглощенными макрофагами, не могут быть уничтожены полиморфноядерными лейкоцитами. Неоптерин же высвобождается при наличии внутриклеточных инфекций, коей и является бактерия Mycobacterium tuberculosis.

Туберкулез является одной из ведущих инфекций с высокой заболеваемостью и смертностью по всему миру. Исследования показали, что уровень концентрации неоптерина в сыворотке крови достоверно выше у пациентов, зараженных Mycobacterium tuberculosis, по сравнению со здоровыми людьми. Кроме того, эта концентрация становится еще выше при присоединении других заболеваний, в частности пневмонии и рака легких. Также показана связь между уровнем концентрации неоптерина в различных биологических жидкостях и активностью туберкулеза, которая проявлялась в усилении кровохарканья, потере веса, изменениях рентгенологической картины легких и пр.

Когда назначается исследование?

Это исследование может проводиться при ряде заболеваний инфекционного генеза, а также при аутоиммунных и онкологических заболеваниях. Также данное исследование может использоваться для контроля за эффективностью проводимой терапии.

Для чего используется исследование?

Повышенная концентрация указанного метаболита может наблюдаться при следующих заболеваниях:

  • при вирусных инфекциях, в том числе при вирусе иммунодефицита человека, вирусах гепатита В и С;
  • при паразитозах;
  • при бактериальных инфекциях, запускаемых внутриклеточными бактериями, например Borrelia, Mycobacterium tuberculosis и Helicobacter pylori;
  • при ряде аутоиммунных заболеваний;
  • при злокачественных опухолевых заболеваниях;
  • при депрессиях;
  • при риске отторжения трансплантата.

Концентрация неоптерина обычно коррелирует с активностью заболевания. Поэтому целесообразен контроль данного показателя во время проведения терапии заболевания.

Что означают результаты?

Референсные значения: менее 10 нмоль/л.

Повышение концентрации неоптерина может наблюдаться:

  • при внутриклеточных бактериальных инфекциях;
  • при вирусных заболеваниях;
  • при паразитарных заболеваниях;
  • при онкологических заболеваниях;
  • при аутоиммунных заболеваниях;
  • при депрессии.

Нижней границы данного исследования нет.

Важные замечания

Концентрация неоптерина может повышаться при различных заболеваниях. Поэтому, чтобы верно интерпретировать повышение данного показателя, нужна комплексная оценка результатов остальных анализов, а также других медицинских данных.

Также рекомендуется (для верифицирования диагноза туберкулеза и других вирусных инфекций)

  • Общий анализ крови
  • С-реактивный белок
  • Исследование антител к вирусу иммунодефицита человека 1 и 2
  • HBsAg
  • Исследование антител к вирусу гепатита С
  • Определение антител к возбудителю малярии
  • Определение генетического материала малярийного плазмодия методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)
  • Borrelia burgdorferi, IgM, IgG
  • Borrelia burgdorferi s.l., ДНК (реал-тайм ПЦР)
  • Исследование мокроты на Mycobacterium tuberculosis
  • Рентгенография легких/флюорография
  • Проведение квантиферонового теста/диаскин-теста
  • Консультация фтизиатра

Кто назначает исследование?

Фтизиатр, инфекционист, пульмонолог, онколог, врач общей практики, терапевт, гематолог, хирург, ревматолог.

Тест для диагностики латентной туберкулезной инфекции и активного туберкулеза, основанный на измерении интерферона-гамма, вырабатываемого сенсибилизированными Т-лимфоцитами в ответ на специфические антигены M . tuberculosis .

Синонимы русские

Интерфероновый тест на туберкулез, ИФН-гамма тест на туберкулезную инфекцию.

Синонимы английские

QuantiFERON, Interferon-gamma assay, IGRA, T-cel lassay, Interferon-γ release essay, Cytokine detection assay.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Общая информация об исследовании

При наличии ЛТБИ или активного туберкулеза в крови присутствуют сенсибилизированные к этому микроорганизму Т-лимфоциты, способные при взаимодействии с антигенами M. tuberculosis вырабатывать интерферон-гамма. Квантифероновый тест основан на выявлении и количественном измерении вырабатываемого интерферона-гамма при добавлении венозной крови в пробирку, содержащую специфические антигены M. tuberculosis, в том числе ESAT-6 и CFP-10. Так как в исследовании используется смесь антигенов, специфических для туберкулезной палочки, квантифероновый тест более специфичен, чем проба Манту. Он не дает ложноположительных реакций при вакцинации БЦЖ в анамнезе или при наличии нетуберкулезной микобактериальной инфекции.

Благодаря высокой информативности и легкости выполнения, квантифероновый тест находит все более широкое применение в клинической практике. Он рекомендован для диагностики как ЛТБИ, так и активного туберкулеза. Чаще его используют вместо пробы Манту, однако в некоторых случаях оба теста используются одновременно.

Использование квантиферонового теста вместо пробы Манту

Квантифероновый тест может быть использован вместо пробы Манту во всех клинических ситуациях, когда показано проведение пробы Манту в качестве теста для диагностики инфекции M. tuberculosis.

1. Использование квантиферонового теста предпочтительнее (хотя проба Манту также может применяться) в следующих случаях:

  • в группах пациентов, которые по опыт, не всегда возвращаются к врачу на второй прием для оценки результата пробы Манту (например, лица с наркотической зависимостью);
  • у пациентов, получивших вакцину БЦЖ в прошлом (для вакцинации или лечения рака).

2. Использование пробы Манту предпочтительнее (хотя квантифероновый тест также может применяться):

3. Ситуации, в которых может быть использован или квантифероновый тест, или проба Манту, без предпочтения:

Использование квантиферонового теста совместно с пробой Манту

В целом совместное использование квантиферонового теста и пробы Манту не рекомендуется. Однако оно может потребоваться при получении отрицательного результата первоначального теста (квантиферонового или пробы Манту) в следующих ситуациях:

  • высокий риск инфицирования M. tuberculosis, развития активного туберкулеза и его осложнений (пациенты с ВИЧ, дети младше 5 лет);
  • присутствуют клинические симптомы, указывающие на активный туберкулез - в таком случае положительный результат повторного теста подтверждает инфекцию, а отрицательный результат первоначального теста следует считать ложноотрицательным; следует отметить, что даже многократные повторные отрицательные результаты квантиферонового теста или его комбинации с пробой Манту не позволяют полностью исключить инфекцию M. tuberculosis у таких пациентов.

Совместное использование квантиферонового теста и пробы Манту может потребоваться при получении положительного результата первоначального теста (квантиферонового или пробы Манту) в следующих ситуациях:

  • когда для подтверждения инфекции требуются дополнительные данные, например при положительном результате пробы Манту у вакцинированного БЦЖ пациента - в этом случае положительный результат подтверждающего (квантиферонового) теста позволяет не только выявить ЛТБИ, но и улучшить приверженность пациента проводимому лечению;
  • в группе здоровых пациентов, имеющих низкий риск инфицирования M. tuberculosis, - как и в случае с пробой Манту, квантифероновый тест не рекомендован в группах пациентов с низким риском инфицирования M. tuberculosis; в случае если распространенность туберкулеза менее 1 %, даже если специфичность теста приближается к 99 %, большинство положительных результатов будут ложноположительными; в таком случае отрицательный результат повторного теста исключает инфекцию, а положительный результат первоначального теста следует считать ложноположительным.

Совместное использование квантиферонового теста и пробы Манту может потребоваться, если результат первоначального теста неопределенный, пограничный или неинформативный.

При интерпретации результата квантиферонового теста следует учитывать следующее:

  • тест не позволяет различить ЛТБИ и активный туберкулез;
  • у пациентов с клиническими признаками активного туберкулеза положительный результат теста позволяет подтвердить инфекцию, отрицательный же результат теста у таких пациентов исключить туберкулез не позволяет;
  • у пациентов из группы низкого риска инфицирования M. tuberculosis однократный положительный результат квантиферонового теста не является доказательством инфекции; ввиду малой вероятности инфицирования в этой группе пациентов положительный результат, вероятнее всего, является ложноположительным, может быть рекомендовано повторное исследование;
  • квантифероновый тест – это непрямой метод диагностики, основанный на выявлении и измерении степени иммунного ответа пациента на M. tuberculosis; в отличие, например, от бактериологического метода (посева), квантифероновый тест не определяет сам микроорганизм, его результат в значительной степени зависит от состояния иммунной системы пациента;
  • квантифероновый тест не может быть использован в качестве основного метода диагностики ЛТБИ или активного туберкулеза. Это дополнительный тест, используемый в сочетании с анамнестическими, клиническими, другими лабораторными и инструментальными данными.

Важно отметить, что диагностическое значение квантиферонового теста до сих пор не было должным способом оценено у детей, ВИЧ-инфицированных пациентов, а также при наличии внелегочного туберкулеза. Четких рекомендаций по интерпретации результата квантиферонового теста у таких пациентов нет. Также не в полной мере исследованы феномен реверсии квантиферонового теста и его интерпретация.

Для чего используется исследование?

  • Диагностика латентной туберкулезной инфекции и активного туберкулеза.

Когда назначается исследование?

  • В качестве основного теста при профилактическом осмотре лиц, находящихся в группе риска инфицирования M. tuberculosis (медицинские работники, "контактные лица", пациенты с иммуносупрессиией – ВИЧ-инфекция, применение кортикостероидов, сахарный диабет, алкоголизм).
  • В качестве подтверждающего теста после проведения пробы Манту.
  • При наличии признаков активного туберкулеза: кашля, кровохарканья, потери веса, ночных профузных потов, стойкого субфебрилитета, рентгенологических признаков туберкулеза.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

  • латентная туберкулезная инфекция (ЛТБИ);
  • активный туберкулез.

Что может влиять на результат?

  • Время с момента заражения M. tuberculosis. Феномен сероконверсии/реверсии квантиферонового теста изучен недостаточно.
  • Состояние иммунной системы.

Важные замечания

  • Диагностическое значение квантиферонового теста до сих пор не было должным способом оценено у детей, ВИЧ-инфицированных пациентов, а также при наличии внелегочного туберкулеза.
  • Интерпретацию результата следует проводить с учетом анамнестических, клинических, других лабораторных и инструментальных данных.

Также рекомендуется

40 Определение неоптерина в сыворотке крови (диагностика туберкулеза и вирусных инфекций)

Универсальный альтернативный вариант иммунологического исследования in vitro диагностики туберкулезного процесса путем количественного определения мононуклеарных клеток периферической крови, продуцирующих ИФН-γ в ответ на присутствие белков CFP-10 и ESAT-6 M. tuberculosis.

Синонимы русские

Иммунологический тест на туберкулез

Синонимы английские

Testing for tuberculosis infection

Метод исследования

Прямая оценка функции T-клеток энзим-связывающий иммуноспотингом (ELISPOT).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.

Общая информация об исследовании

Возбудителем туберкулёза является микобактерия туберкулеза (МБТ, палочка Коха, Mycobacterium tuberculosis) – высокоустойчивый микроорганизм. В настоящее время описано около 150 видов микобактерий, но клинически значимыми признаны М. tuberculosis (более 90 % всех случаев туберкулезной инфекции), М. bovis (5 %) и М. africanum (около 3 % – главным образом среди населения стран тропической Африки).

Источником инфекции являются больные люди и животные. Наиболее распространен воздушно-капельный путь заражения, при котором возбудитель проникает в организм через верхние дыхательные пути, иногда через слизистые оболочки пищеварительного тракта или через поврежденную кожу.

Попадая в окружающую среду, возбудитель способен длительно сохраняться: в высохшей мокроте он выживают до 10 месяцев, на предметах, окружающих больного (белье, книги), – более 3 месяцев, в воде – более года, в почве – до 6 месяцев.

В настоящее время описаны следующие варианты развития ситуации после проникновения МБТ в организм человека: [1]

  • полная элиминация (удаление) возбудителя из организма;
  • развитие первичного туберкулеза (при быстром росте и размножении МБТ);
  • инфицирование, или "латентная туберкулезная инфекция" (ЛТИ), [2] – состояние стойкого иммунного ответа на антигены МБТ при отсутствии клинических проявлений активной формы туберкулеза.

Присутствующий в организме возбудитель способен не только длительно бессимптомно персистировать в организме, но при определенных обстоятельствах (интенсивное размножение МБТ на фоне малоэффективного иммунитета и т.д.) реактивироваться и вызвать развитие заболевания. В настоящее время установлено, что с момента инфицирования МБТ в течение первого года заболевание развивается у 5 % инфицированных людей, в течение всей оставшейся жизни туберкулез развивается еще у 5 %, то есть пожизненный риск заболевания туберкулезом среди инфицированных составляет 10 %.

Вместе с тем наличие различных факторов может способствовать повышению риска развития локального туберкулеза: так, при ВИЧ-инфицировании ежегодный риск заболевания туберкулезом на фоне ЛТИ составляет 10 %, а пожизненный риск – 50 %.

Диагностика туберкулеза является комплексной и включает, согласно регламентирующим документам, [3] аллергические внутрикожные пробы (реакция Манту и "Диаскинтест"), инструментальное обследование (ФЛГ, рентген) и лабораторные – направленные как на выявление и идентификацию возбудителя с определением спектра его чувствительности к препаратам этиотропной терапии, так и на изучение выраженности иммунологической реакции на патоген.

Одним из современных и высокоинформативных методов определения специфической иммунной реакции на МБТ, особенно при отсутствии или минимальных клинико-инструментальных признаках инфекции и сомнительных результатах общепринятых методов лабораторной диагностики туберкулеза, является тест T-SPOT.

Исследование иммунного Т-клеточно-опосредованного ответа: количественное определение в крови эффекторных Т-клеток (CD4 и CD8), вырабатывающих ИФН-ɣ (гамма-интерферон), который продуцируется в ответ на стимуляцию специально подобранными антигенами ESAT-6 и CFP10. Эти белки входят в состав клинически значимых МБТ (М. tuberculosis, М. bovis, М. africanum) и отсутствуют у бактерий, используемых при производстве вакцины БЦЖ и у непатогенных для человека микобактерий.

Изучена динамика содержания неоптерина в сыворотке крови и мочи у больных с острыми заболеваниями, поражающими респираторный тракт. Показана возможность использования уровня неоптерина в качестве диагностического маркера вирусной инфекции при дифференциал

The dynamics of neopterin content in the blood and urine serum in patients with acute diseases effecting respiratory tract, was studied. The possibility of using the level of neopterin as a diagnostic markers for viral infection in differential diagnosis.

Течение инфекционного процесса напрямую связано с иммунным ответом макроорганизма. С клинической точки зрения при острых вирусных инфекциях интерес представляет исследование диагностической роли биомаркера, отражающего активность клеточного звена иммунитета. Активацию иммунокомпетентных клеток в организме косвенно можно оценить с помощью регуляторных белков, которые являются продуктами деятельности данных клеток. В качестве такого маркера может рассматриваться стабильный метаболит — неоптерин, синтез которого инициируется под действием ИФН-γ, являющегося главным триггером иммунного ответа, направленного против внутриклеточных патогенов. Главными клетками — продуцентами неоптерина являются антигенпрезентирующие и дендритные клетки [1].

Клиническое значение концентрации неоптерина в биологических жидкостях организма изучается уже на протяжении многих десятилетий. Повышенные концентрации неоптерина регистрируются при различных заболеваниях, сопровождающихся активацией клеточного иммунитета, в связи с чем он является привлекательным маркером для диагностики вирусных инфекций. В научной литературе немного работ, посвященных оценке концентрации неоптерина в биологических жидкостях организма при острых вирусных инфекциях. В связи с этим целью нашего исследования явилось изучение динамики содержания неоптерина в сыворотке крови и мочи у больных острыми респираторными вирусными инфекциями (ОРВИ) различной этиологии.

Материалы и методы исследования

В исследование включено 60 пациентов с ОРВИ (средний возраст 29 ± 2 года (от 18 до 75 лет), мужчины/женщины = 47 (78%)/13 (22%)). Контрольную группу составили 10 здоровых лиц без хронической сопутствующей патологии (средний возраст 31 ± 10 лет (от 21 до 56 лет), мужчины/женщины = 6 (60%)/4 (40%)).

В исследование включены пациенты, поступавшие в ГБУЗ ИКБ № 1 ДЗМ в течение 2014–2015 гг. Критериями включения были: возраст пациентов от 18 лет и старше, давность заболевания не более 5 суток, повышение температуры тела ≥ 37,5 °C, наличие одного или нескольких симптомов катарального и интоксикационного синдромов, отсутствие приема антибактериальных препаратов на догоспитальном этапе по данным анамнеза.

Пациенты были разделены на две подгруппы: 1-я подгруппа больных гриппом, n = 24; 2-я подгруппа больных ОРВИ другой этиологии (аденовирусная инфекция, риновирусная инфекция, коронавирусная (NL63) инфекция, ОРВИ неуточненная), n = 36. В 35% (21/60) случаев этиологию установить не удалось. Кроме того, проводился анализ в подгруппах больных с неосложненным и осложненным течением (пневмония, синусит, лакунарная ангина) ОРВИ различной этиологии. Хроническая сопутствующая патология была выявлена только у 3% (2/60) больных (1 пациентка с осложненным течением ОРВИ — миома матки, 2 пациента с неосложненным течением ОРВИ — хронический бронхит, артериальная гипертензия).

  • в сыворотке крови в зависимости от возраста: 19–75 лет — < 8,7 нмоль/л; >75 лет — < 19,0 нмоль/л;
  • в моче в зависимости от возраста и пола: 18–25 лет (мужчины — 123–195 нмоль/л, женщины — 128–208 нмоль/л); 26–35 лет (мужчины — 101–182 нмоль/л, женщины — 124–209 нмоль/л); 36–45 лет (мужчины — 109–176, женщины — 140–239 нмоль/л); 46–55 лет (мужчины — 105–197 нмоль/л, женщины — 147–229 нмоль/л); 56–65 лет (мужчины — 119–218 нмоль/л, женщины — 156–249 нмоль/л); > 65 лет (мужчины — 133–229 нмоль/л, женщины — 151–251 нмоль/л).

Результаты исследования и обсуждение

Средняя концентрация неоптерина в сыворотке крови у лиц контрольной группы (3,9 ± 0,4 нмоль/л, от 1,5 до 5,6 нмоль/л) была статистически значимо ниже по сравнению с таковой у больных ОРВИ различной этиологии (p < 0,01).

При анализе уровней неоптерина в крови в зависимости от пола выявлено, что как у больных женского пола, так и у пациентов мужского пола в остром периоде средние концентрации неоптерина в крови достоверно выше по сравнению с периодом угасания клинических проявлений (t = 5,2, p < 0,01, t = 4,2, p < 0,01). Кроме того, средние концентрации неоптерина в крови в остром периоде статистически значимо выше были у женщин при сравнении с мужчинами (36,5 ± 7,3 и 20,9 ± 3,1 соответственно, t = 2,6, p < 0,05).

Уровни неоптерина в моче в группах больных ОРВИ в целом, неосложненным и осложненным течением ОРВИ, а также у больных женского и мужского пола колебались в пределах нормы и их средние значения статистически не различались как в остром периоде, так и при сравнении острого периода болезни с периодом угасания клинических проявлений. Обращает на себя внимание повышение в 20% (12/60) случаев концентрации неоптерина в моче при стихании клинических проявлений; у остальных пациентов — снижение его уровня в различных пропорциях.

Далее были проанализированы концентрации неоптерина в крови и моче в отдельных группах больных (ОРВИ в целом, грипп, ОРВИ другой этиологии) в зависимости от срока поступления от даты начала заболевания (табл. 2).

Средние уровни неоптерина в моче в исследуемых группах и на разных сроках болезни значимо не различались.

В группе больных гриппом (n = 24) при осложненном и неосложненном течении у большинства больных в первые дни болезни регистрируются повышенные уровни неоптерина в крови (87,5% (7/8) и 94% (15/16) соответственно). При динамическом обследовании регистрировалось снижение уровня неоптерина в крови. Однако только в 57% (4/7) при осложненном течении и в 60% (9/15) случаев при неосложненном течении гриппа регистрировались нормальные значения данного маркера. У остальных пациентов наблюдалось значимое снижение неоптерина в крови, однако не достигающее нормы.

Средние значения неоптерина в крови при неосложненном течении гриппа — 28,7 ± 5,1 нмоль/л (диапазон от 3,98 до 77,97 нмоль/л), в динамике — 9,1 ± 1,5 нмоль/л (диапазон от 2,76 до 25,36 нмоль/л), при осложненном течении — 33,5 ± 10,7 нмоль/л (диапазон от 4,87 до 95,12 нмоль/л), в динамике — 6,7 ± 1,1 нмоль/л (диапазон от 3,61 до 10,71 нмоль/л). Как при неосложненном, так и при осложненном течении гриппа средние значения неоптерина в крови в первые дни болезни были достоверно выше, чем в стадии стихания клинических проявлений (t = 3,8, р < 0,01, t = 2,5, p < 0,05 соответственно). Статистически достоверных различий средних концентраций неоптерина в крови у больных с неосложненным и осложненным течением гриппа в остром периоде не выявлено (p >0,05).

Средние значения неоптерина в моче при неосложненном течении гриппа 128,7 ± 8,7 нмоль/л (диапазон от 36,15 до 160,97 нмоль/л), в динамике 55,4 ± 15,2 нмоль/л (диапазон от 4,01 до 175,71 нмоль/л), при осложненном течении — 105,6 ± 22,4 нмоль/л (диапазон от 31,69 до 170,55 нмоль/л), в динамике 97,81 ± 24,2 нмоль/л (диапазон от 4,57 до 189,29 нмоль/л). У пациентов с неосложненным и осложненным течением гриппа регистрируются нормальные уровни неоптерина в моче как в остром периоде, так и при динамическом исследовании. В то же время при стихании клинических проявлений мы видим более низкие показатели уровня неоптерина в моче, а также у части пациентов его нарастание (18, 75% (3/16) и 50% (4/8) соответственно, р = 0,1123).

Не выявлено значимых изменений уровня неоптерина в крови и моче у больных ОРВИ различной этиологии в остром периоде заболевания и в зависимости от возраста.

Проведенный анализ показал, что содержание неоптерина в крови значительно возрастает в остром периоде ОРВИ, в том числе и в остром периоде гриппа, причем концентрация коррелирует с активностью заболевания: при стихании клинических проявлений концентрации неоптерина в крови значимо снижаются. Наши данные согласуются с результатами исследования 2014 г., посвященного изучению клинического значения неоптерина у больных гриппом в российской популяции [2]. Кроме того, в данной работе показано, что в группе больных гриппом, осложненным пневмонией с развитием острой дыхательной недостаточности, в период разгара болезни уровень неоптерина в крови был достоверно выше, чем в группе больных гриппом без симптомов дыхательной недостаточности. В нашей работе у пациентов с осложненным течением гриппа средние уровни неоптерина в крови также выше, чем у больных неосложненным течением гриппа, однако эти различия не достоверны. Таким образом, при осложненном и неосложненном течении гриппа изменения уровня неоптерина в сыворотке крови носят однонаправленный характер.

Выявленные высокие значения неоптерина в сыворотке крови у больных ОРВИ различной этиологии свидетельствуют о значительной активации макрофагально-моноцитарной системы, т. к. антигенпрезентирующие клетки являются основными продуцентами неоптерина. Обращает на себя внимание тот факт, что не у всех пациентов наблюдается повышение неоптерина в крови в остром периоде. Низкие значения уровня неоптерина в крови у небольшой части пациентов в остром периоде ОРВИ, очевидно, могут свидетельствовать о снижении иммунореактивности, в частности, об угнетении макрофагального звена иммунного ответа у данной категории больных.

Полученные результаты демонстрируют необходимость дальнейшего изучения диагностического и прогностического значения неоптерина в крови у больных ОРВИ, в том числе и гриппом. Так как в нашем исследовании в стадии стихания клинических проявлений мы видим падение концентрации неоптерина в крови практически до нормального уровня, а при длительно сохраняющейся симптоматике (≥ 5 дней) отсутствие его значимого снижения, определение сывороточного уровня неоптерина может использоваться в качестве прогностического маркера осложненного течения заболевания, а также — для оценки эффективности проводимой терапии. Очевидно, что определение сывороточного неоптерина особенно актуально у больных гриппом, поскольку именно при гриппозной инфекции наиболее часто развиваются тяжелые осложнения с вероятностью летального исхода, а в проведенном исследовании отмечены длительные сроки сохранения повышенного уровня неоптерина в крови.

Результаты нашего исследования позволили сделать заключение об отсутствии клинического значения определения неоптерина в моче при ОРВИ.

Заключение

Результаты нашего исследования показали, что у больных ОРВИ различной этиологии в остром периоде регистрируются высокие концентрации неоптерина в сыворотке крови, что позволяет рассматривать его в качестве диагностического маркера вирусной инфекции при дифференциальном диагнозе. Положительная динамика клинической симптоматики ОРВИ различной этиологии сопровождается снижением сывороточной концентрации неоптерина. Возможно, отсутствие значимого уменьшения концентрации неоптерина в крови у больных гриппом позволит рассматривать этот маркер в качестве прогностического при осложненном течении болезни в случае подтверждения данного факта в будущих исследованиях.

Работа выполнена в рамках гранта Президента РФ для государственной поддержки ведущих научных школ Российской Федерации (НШ-5855.2014.7).

Литература

М. М. Кутателадзе*
К. Р. Дудина* , 1 , доктор медицинских наук
О. О. Знойко*, доктор медицинских наук, профессор
С. А. Шутько*, кандидат медицинских наук
Л. Д. Филина*
Н. М. Кравченко**
Н. Д. Ющук*, доктор медицинских наук, профессор, академик РАН

* ГБОУ ВПО МГМСУ им. А. И. Евдокимова МЗ РФ, Москва
** ГБУЗ ИКБ № 1 ДЗМ, Москва

Читайте также: