Пцр диагностика вирусных заболеваний у животных

Обновлено: 18.04.2024

ДНК содержащий вирус иммунодефицита кошек (Feline immunodeficiency virus, FIV) один из представителей семейства Retroviridae имеет высокую степень генетического родства с вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) и поражает миллионы домашних и диких кошек во всем мире.

Передача вируса осуществляется парентерально через слюну или кровь больного животного, что обуславливает более широкую распространенность инфекции среди самцов. Экспериментально вирус передается при внутривенных, подкожных, внутримышечных, внутрибрюшинных инъекциях. Трансплацентарное заражение котят естественным путем - крайне редкое явление.

Патогенез инфекции FIV зависит от множества факторов, основными из которых являются возраст животного, инфекционные свойства вируса, количество патогена и путь заражения.

В момент заражения FIV происходит интеграция ДНК-копии вируса РНК (называемая провирусом) в геном кошки, что приводит к пожизненному инфицированию. В период первичной инфекции, который может длиться от 7 до тридцати дней) у зараженной кошки отмечают вялость и периферическую лимфоаденопатию. Бессимптомная инфекция, в период которой репликации вируса, практически, не происходит, протекает без клинических проявлений и может длиться на протяжении ряда лет. Фаза вторичной инфекции, вызванная репликацией вируса, протекает с клинической картиной, преимущественно, как результат лимфоцитопении.

Зараженные животные высоко восприимчивы к другим вирусным, бактериальным, грибковым и другим паразитарным инфекциям. FIV провоцирует развитие лимфосарком, лейкемий, фибросарком и пр.

Вирус FIV детектируется с использованием полимеразной цепной реакции в плазме или лимфоцитах периферической крови спустя две недели или ранее после заражения в пик виремии. В этот период поражаются одноядерные клетки красного костного мозга, мозга, легких, почек и желудочно-кишечного тракта. Продуцирование антител против вируса зависит от концентрации вируса в организме кошки, чем выше концентрация, тем эффективнее начинается выработка более чем 70 видов антител. У экспериментально зараженных животных это состояние отмечали спустя четыре недели с момента заражения. Латентный период инфекции характеризуется продолжением репликации вируса в тканях, с возможностью восстановления из сыворотки и плазмы крови, клеток лимфоидной ткани, спинномозговой жидкости. Вирусная нагрузка на организм кошки может варьировать в процессе жизни. По мнению клиницистов, проявления заболевания многообразны, а симптомы не патогномоничны.

Тестирование кошек на FIV рекомендуется в следующих случаях:

  • все больные кошки, даже если результаты предыдущих анализов были отрицательны;
  • все вновь приобретаемые кошки с неизвестным статусом FIV;
  • все кошки, которые имели контакты с зараженными животными или подозреваются в заражении вирусом. Таким животным требуется контрольное обследование спустя 2-3 месяца для выявления сероконверсии;
  • кошки с неконтролируемым образом жизни вне помещения;
  • кошки, проживающие с зараженными животными;
  • кошки перед вакцинацией;
  • животные доноры и принимающие участие в вязках.

Подтверждение диагноза возможно при обнаружении специфических антител против FIV с использованием ELISA. Вестерн-блоттинг и непрямой иммунофлуоресцентный метод имеют в случае с FIV низкую специфичность, особенно у вакцинированных кошек. В целом, в случае выявления антител важно учитывать тот факт, что у котят до шестимесячного возраста в крови могут присутствовать антитела, полученные от инфицированных или вакцинированных матерей. Также важно, что, в среднем, выработка антител у зараженных животных начинается спустя минимум 60 дней после контакта с вирусом, выработка антител может не происходить при интенсивном прогрессировании заболевания. Ложноотрицательные результаты можно получить у зараженных животных с ослабленным иммунитетом.

В настоящее время ПЦР один из наиболее чувствительных и применяемых методов диагностики вируса. К отрицательным характеристикам этого метода следует отнести его зависимость от высокой вариабельности вирусного генома, тогда как разработанные диагностические наборы сконструированы на основе генетических последовательностей хорошо изученных и широко распространённых генетических типов вируса. Это, в свою очередь, может привести к ложноотрицательным результатам в диагностике.

Сроки исполнения: 2 дня (плюс 1-2 дня для регионов).

Исследуемый аналит: цельная венозная кровь.

Метод исследования: ПЦР- Real time.

Подготовка пациента: не требуется.

  • стоматит и/или хронические или рецидивирующие инфекции кожи, мочевого пузыря и верхних отделов дыхательных путей;
  • наличие у кошки медленнной, но пргрессирующей потери веса или выраженного истощения;
  • перед возвращением кошки домой из питомника;
  • перед помещением кошки в питомник, где содержится много животных этого вида;
  • после возможного инфицирования кошки (тест проводится через более 2 месяца после возможного инфицирования);
  • если кошка содержится с ВИК-инфицированными кошками;
  • наличие факторов высокого риска (например, некастрированный кот после драки с сородичами);
  • как один из тестов, проводимых для проверки состояния здоровья.

Противопоказания: не известны.

Метод отбора биоматериала: венепункция периферической вены.

Преаналитика:

  1. Провести процедуру взятия крови.
  2. После внесения биоматериала в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА) осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом.
  3. Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.
  4. Контейнер маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного.
  5. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.
  6. Температурный режим транспортировки в лабораторию -17℃…-23℃ (красный пакет)

Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Формат выдачи результата: качественный метод. Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе провирусной ДНК Feline immunodeficiency virus, FIV.

В этой статье будут разобраны наиболее распространенные поражения ротовой полости, являющиеся симптомами конкретных системных заболеваний.

Инфекционные

Большинство воспалительных поражений во рту у кошек ассоциированы с вирусными инфекциями, такими как вирус иммунодефицита кошек (ВИК), вирус лейкоза кошек (ВЛК), вирус герпеса кошек и калицивироз.
Клинические проявления в ротовой полости могут быть весьма разнообразными.

Вирусный иммунодефицит кошек (ВИК или FIV) – одна из распространенных хронических вирусных инфекций (ХВИ) кошек, представитель семейства ретровирусов (Retroviridae). Заболевание часто протекает бессимптомно, а животные-носители вируса могут передавать ВИК другим кошкам. Передача чаще всего происходит со слюной или кровью при кусаных ранах, при взаимном вылизывании, а также от матери к котятам с молоком или во время родов.

Заболевания ротовой полости являются одним из наиболее частых проявлений ВИК. Ведущая роль принадлежит хроническому гингивостоматиту, механизм развития которого не совсем ясен. Также можно наблюдать пролиферацию десен, изъязвления слизистых оболочек, периодонтит.
Для диагностики используют определение антител к ВИК методом ИФА в крови.

Вирусный лейкоз кошек (ВЛК или FeLV). Вирус лейкоза или лейкемии также относится к семейству ретровирусов и вслед за ВИК является ярким представителем ХВИ, вызывающих различные поражения в ротовой полости. Инфекция также часто протекает бессимптомно, может приводить к иммуносупрессии, анемии, лейкопении, лимфоме.
Диагностика основана на исследовании крови методом ПЦР для определения провирусной ДНК у бессимптомных кошек и вирусной РНК у кошек с симптомами активной формы заболевания.

Герпесвирусная инфекция (FHV-1) чрезвычайно распространена среди кошек повсеместно. Вирус поражает клетки эпителия конъюнктивы и верхних дыхательных путей, вызывает некроз клеток и воспаление слизистых оболочек, сопровождающееся выделениями из глаз, носа, блефароспазмом, чиханьем, кашлем.
В ротовой полости клинические проявления могут быть в виде гингивита различной степени тяжести или изъязвления слизистых оболочек и ростральной части языка.

Калицивироз. Калицивирусная инфекция – одна из главных причин возникновения комплекса острых респираторных инфекций у кошек. Частыми проявлениями инфекции во рту являются гингивит, язвы, глоссит. Поражения очень схожи с герпесвирусной инфекцией (фото 15).

Чума собак (чума плотоядных) – высококонтагиозная, повсеместно распространенная инфекционная болезнь собак, которая вызывается вирусом чумы собак и часто заканчивается смертельным исходом. Инфекция затрагивает многие системы органов и может проявляться поражением респираторного тракта, желудочно-кишечного тракта, нервной системы, пневмонией.
В ротовой полости при этом наблюдаются различные аномалии развития зубов, такие как непрорезывание или частичное прорезывание зубов, олигодонтия, гипоплазия эмали и корня (фото 16).
Чума собак является болезнью, предотвращаемой посредством вакцинации.

Иммуноопосредованные заболевания

Причины таких заболеваний, при которых иммунная система атакует собственные клетки, ткани или даже целые органы, могут быть весьма разнообразными. Некоторые патологии считаются идиопатическими (то есть не имеющими известных причин). К известным причинам можно отнести инфекционные заболевания (например, некоторые кровепаразитарные инфекции), опухоли, лекарственные препараты, вакцины, воспалительные процессы.

Системная красная волчанка (СКВ) – хроническое мультисистемное аутоиммунное заболевание, характеризующееся выработкой аутоантител, которые формируют циркулирующие иммунные комплексы, оседающие в различных органах и тканях. Симптомами заболевания могут быть перемежающаяся лихорадка, полиартрит, полимиозит, анемия, кожные поражения в виде эрозий, язв, эритемы, алопеции (фото 17).
На слизистых, в частности в ротовой полости, часто можно наблюдать эрозии.

Пемфигус, или пузырчатка, – группа аутоиммунных заболеваний кожи с образованием интраэпидермальных пузырей в результате нарушения межклеточных взаимосвязей. Самой распространенной формой данной болезни является листовидная пузырчатка.
Заболевание нередко поражает ротовую полость, на слизистой оболочке которой появляются волдыри, эрозии и язвы (фото 18).

Лекарственные реакции

Многие лекарственные препараты способны вызывать различные реакции со стороны слизистой оболочки ротовой полости.

Эрозии, язвы, некроз могут возникать в результате применения антибиотика доксициклина и других тетрациклинов, а также сульфаниламидов, барбитуратов, бета-блокаторов, аспирина, перекиси водорода, препаратов калия (фото 19).
Сухость во рту. Причинами сухости слизистой оболочки ротовой полости могут быть трициклические антидепрессанты, бензодиазепины, атропин, Н2-блокаторы (ранитидин, фамотидин).
Гиперплазия десен – хронический побочный эффект, развивающийся в течение 2–6 месяцев на фоне приема таких лекарственных препаратов, как блокаторы кальциевых каналов (амлодипин), иммуносупрессивные препараты (циклоспорин) (фото 20).

Другие патологии

Комплекс эозинофильной гранулемы – заболевание у кошек, проявляющееся в трех основных формах: эозинофильная (или коллагенолитическая) гранулема, эозинофильная (или вялая) язва и эозинофильная бляшка. Поражения могут возникать на теле, конечностях, а также во рту и на губах.

Комплекс эозинофильной гранулемы не является специфическим диагнозом, данные поражения могут представлять собой различные проявления реакций на одни и те же вызывающие их причины.

Многие случаи остаются идиопатическими, то есть без установленной причины.
В ротовой полости поражения выглядят как язвы на губах или слизистой оболочке, или как гранулема, которая может находиться в любой области ротовой полости (фото 21).


Уремический стоматит (фото 22).
Почечная недостаточность – распространенное явление в ветеринарной практике. В результате хронических и (реже) острых болезней почек уровни продуктов распада белка (креатинина и мочевины) повышаются, мочевина проникает в слюну, где под действием бактерий последняя превращается в аммиак, раздражающий слизистые оболочки и вызывающий их воспаление.
Во рту поражения могут выглядеть как гингивит, некроз, ксеростомия, часто присутствует специфический запах аммиака.


Токсичные растения. Многие комнатные растения (в перечень наиболее опасных входят диффенбахия, дьявольский плющ, гортензия, филодендрон, каладиум) являются токсичными для кошек и вызывают различные патологические процессы, начиная с раздражения слизистой оболочки ротовой полости (язвы, гингивит) и заканчивая нарушением работы внутренних органов – острым повреждением почек (фото 23).

Внимательный осмотр ротовой полости, несомненно, является одним из важных компонентов физикального обследования пациентов в ветеринарной практике и позволяет заподозрить ряд патологий различных систем органов.
Ветеринарные врачи вне зависимости от их специализации не должны пренебрегать таким важным инструментом диагностики заболеваний.

Автор выражает благодарность за предоставленные фото своим коллегам: Кадыровой Татьяне, Бушминой Александре, Ореховой Кристине, Варфоломеевой Наталье.

Инфекционная патология в ветеринарии охватывает широкий круг болезней, различных как по характеру течения (острые, хронические, латентные), степени распространения (от спорадических случаев до эпизоотии), так и по сложности их диагностики. Важное, а при некоторых болезнях решающее значение имеют серологические исследования, направленные на выявление антител, вырабатываемых организмом животного в ответ на внедрение инфекционного агента или вакцины. Несмотря на ряд достоинств, методы, основанные на этом принципе, обладают недостаточной чувствительностью и специфичностью. Существенный прорыв был сделан в последние годы, когда для диагностических целей привлекли методы генной инженерии и биотехнологии. Одним из наиболее применяемых способов для диагностики инфекционных заболеваний стала полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Метод прямой и позволяет достичь предельно возможной чувствительности: от одного до нескольких возбудителей в пробе. Количество исследуемого материала, как правило, составляет несколько десятков микролитов. Высокая чувствительность метода позволяет контролировать эффективность проводимого лечения. ПЦР успешно используется при диагностике труднокультивируемых и некультивируемых возбудителей, а также хронических, латентных и персистентных форм инфекции. Длительность анализа не превышает 5-6 часов.

Анализ методом ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач.

Но наряду с достоинствами имеется определённый недостаток, который можно охарактеризовать как технологический. Подразумеваются повышенные требования к оснащению лаборатории, качеству тест-наборов и строжайшее соблюдение регламента исследования во избежание получения ложных результатов. Решение проблемы качества анализов возможно при соответствующей квалификации персонала и обязательной сертификации лаборатории.

Метод ПЦР был разработан сравнительно недавно, но к настоящему времени успел занять передовые позиции как в медицинской, так и в ветеринарной лабораторной диагностике инфекционных и инвазионных заболеваний. Основные принципы ПЦР открыл в 1983 году американский химик Кэри Б. Мюллис, за что и был удостоен Нобелевской премии.

Ветеринарными специалистами уже разработаны тест-системы для диагностики методом ПЦР таких заболеваний, как туберкулёз, сибирская язва, лейкоз, чума крупного рогатого скота, ящур, бруцеллез, кампилобактериоз, листериоз, хламидиоз животных, классическая чума свиней, респираторно-репродуктивный синдром свиней, парвовирусная инфекция свиней, энцефаломиокардит свиней, сальмонеллёз, стафилококкоз, микоплазмоз, болезнь Марека, реовирусная инфекция, болезнь Гамборо, инфекционный бронхит птиц, ньюкаслская болезнь; чума плотоядных, вирусный энтерит норок, вирусный гепатит утят и др.

Бактериальные и вирусные заболевания — одни из наиболее часто встречающихся заболеваний домашних животных. Это, например, пироплазмоз, лептоспироз, гепатит, чумка, герпесвирус, калицивироз, хламидиоз и др.

До настоящего времени диагностика таких заболеваний вызывала затруднения, поскольку существующие виды анализов из-за их малой доступности не нашли широкого применения в ветеринарии. Зачастую работа по диагностике и лечению вирусных и бактериальных инфекций строится на основании одних лишь симптомов заболевания и личного опыта врача. При этом нужно учитывать, что часто различные вирусы и бактерии могу вызывать одинаковые симптомы заболевания. Разумеется, рассчитывать на высокую эффективность лечения при таких условиях невозможно. Но с появлением нового диагностического инструмента — анализа ПЦР — ситуация существенно изменилась! Теперь на основании данного анализа ветврач может точно определить заболевание и назначить эффективное лечение или скорректировать уже проводимое.

С октября 2016 г. ПЦР-диагностика вирусных и бактериальных заболеваний доступна в клиниках “Доктор Вет”!

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — высокоточный метод диагностики многих инфекций, который основывается на исследовании генетического материала животных (ДНК и РНК). Это один из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.

ДОСТОИНСТВА МЕТОДА

Универсальность. ПЦР позволяет обнаруживать любые ДНК и РНК, даже когда бессильны другие методы.

Специфичность. При поиске определяется вид конкретного возбудителя. Кроме того в одном биологическом материале, возможен поиск нескольких возбудителей без ущерба для качества полученных данных.

Чувствительность. Результат будет получен даже при минимальном содержании возбудителя в материале, например, на начальной стадии заболевания или если заболевание не вылечено окончательно. А лечение болезни на раннем этапе значительно повышает эффективность и скорость выздоровления пациента, предотвращает риски осложнений.

Оперативность. Результат анализа готов уже через сутки.

Так как все инфекции собак и кошек можно разделить на несколько групп: системные, кровопаразитарные, офтальмологические, респираторные, дерматофитозные, половые, желудочно-кишечные, то и забор материала должен проводиться с соответствующих мест. Материалом для исследования может служить: кровь, слюна, мокрота, фекалии, соскобы и суспензии клещей.

Несмотря на вышеуказанные трудности ПЦР остается наиболее доступным и совершенным на сегодняшний день приемом диагностики.

КАКИЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ОПРЕДЕЛЯЮТСЯ МЕТОДОМ ПЦР?

  1. Герпесвирусная инфекция — приводит к абортам, высокой смертности новорожденных (инфицирование почти в 60% случаев).
  2. Калицивирус — тяжело протекает у котят, в то же время 25-80% переболевших взрослых животных становятся носителями и являются источником заражения, передавая вирус через слюну.
  3. Панлейкопения — вирусное заболевание кошек, характеризующееся резким падением уровня лейкоцитов, гастроэнтеритом, ринитами с конъюнктивитами, высокой смертностью (30-90 %) заболевших котят.
  4. 4. Короновирусная инфекция — тяжелое заболевание, возбудителем которого является РНК-содержащий высокопатогенный вирус.
  5. Иммунодефицит кошек и лейкемия кошек — вирус поражает иммунную и нервную системы.
  6. Аденовирус и чума плотоядных у собак проявляется комплексом симптомов: лихорадка, конъюнктивиты и ринотрахеиты, расстройство желудочно-кишечного тракта, поражение нервной системы.
  7. Токсоплазмоз — промежуточными хозяевами могут быть кошка, собака, человек. Клинические симптомы зависят от пораженных органов: могут наблюдаться неврологические нарушения (тремор, паралич) или нарушения походки, атрофия мышц, а также миокардит и гепатит.
  8. Хламидиоз — у кошек заболевание проявляется в основном в форме гнойных и негнойных конъюнктивитов и кератитов, также могут наблюдаться ринит, пневмония, вагинит, аборты и бесплодие. У котят встречается конъюнктивит. У собак симптомы разнообразны и проявляются воспалительными заболеваниями конъюнктивы, половых органов, гастритами, артритами, абортами и бесплодием. Есть данные о роли хламидий в развитии атеросклероза у собак.
  9. Микоплазмоз — протекает с признаками бронхопневмонии, кератоконъюктевитов и кератитов.
  10. Пироплазмоз, анаплазмоз, боррелиоз — заболевания, переносимые клещами.

Все перечисленные заболевания очень коварны, так как легко и быстро передаются от больных животных здоровым (а также людям) и имеют высокий показатель смертности при отсутствии должного лечения.

ПЦР-метод позволяет гарантированно обнаруживать даже единичных возбудителей в биологическом материале за короткий промежуток времени, благодаря чему врач может поставить точный диагноз, назначить адекватное лечение и разработать профилактические мероприятия.

Читайте также: