Пцр мочи на вирусы

Обновлено: 24.04.2024

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).

В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).

Исследование урогенитального тракта методом ПЦР на ИППП ;

тест методом ПЦР на коронавирус Covid-19, мазок из носа и зева на определение РНК вируса SARS-CoV-2;

Для проведения исследования в медицинских офисах необходимо предъявить СНИЛС и документ удостоверяющий личность. Запись на исследование В случае получения положительного или сомнительного результата на COVID-19 и при необходимости проведения подтверждающего тестирования обра.

Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.

Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике - для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ - вирусов папилломы человека; в пульмонологии - для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии - для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний - в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии - для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.

Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами - короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 - 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

Проведение ПЦР

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
термостабильная ДНК-полимераза;
дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.

Ход реакции

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 - 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 - 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 - 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 - 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.

Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 - 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 - 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 - 15 мин.

Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию

Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой - позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота - биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.

РНК– рибонуклеиновая кислота - биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев - нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.

Нуклеоти́ды - основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию - адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) - гуанин, цитозиновый (C) - цитозин, тиминовый (Т) - тимин, урациловый (U) - урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов - A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа - A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК - рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.

Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

Этот анализ принимается по сокращённому графику. Это связано с тем, что биоматериал должен попасть в лабораторию в очень короткий срок. Проверьте расписание сокращённого графика приёма на странице вашего отделения. При сдаче вне графика срок выполнения исследования может быть увеличен на 1-3 дня.

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Вирус Эпштейна-Барр, ДНК (EBV, ПЦР) моча, кач.?

Для диагностики инфекционного мононуклеоза.
Для дифференциальной диагностики герпетических инфекций.
Для дифференциальной диагностики при ангинах и тонзиллитах.
Для выявления реактивации вируса Эпштейна – Барр при трансплантации органов и тканей.

Подробное описание исследования

Вирус Эпштейна-Барра вызывает инфекционный мононуклеоз. Инфекционный мононуклеоз (железистая лихорадка Филатова-Пфейффера, моноцитарная ангина, доброкачественный острый лимфобластоз) – острое вирусное заболевание, вызываемое 4 типом вируса простого герпеса вирусом Эпштейна-Барра. Заболевание характеризуется интоксикацией, поражением небных и глоточных миндалин, увеличением лимфатических узлов, печени и селезенки, а также изменениями в крови (наличием атипичных мононуклеаров). Источник инфекции – больной и вирусоносители. Пути передачи: контактный (через посуду, предметы личной гигиены) и воздушно-капельный. Инкубационный период составляет от нескольких дней до 2 месяцев, первые симптомы – умеренные признаки интоксикации и лихорадка.

Вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) - представитель ДНК-содержащих вирусов из семейства Herpesviridae, являющийся вирусом герпеса человека 4-го типа. В настоящее время доказано, что ВЭБ вызывает инфекционный мононуклеоз, а также способствует развитию опухолей, таких как назофарингеальная карцинома, лимфома Беркитта, Т-клеточная лимфома, болезнь Ходжкина. Около 90% людей старше 40 лет инфицированы ВЭБ. Учитывая неспецифичность признаков инфекционного заболевания нужно проводить дифференциальную диагностику с такими заболеваниями, как лакунарная ангина, аденовирусная инфекция, дифтерия. Вирус выделяется со слюной в остром периоде заболевания и в течение 6-ти месяцев после выздоровления.

Инфекционный мононуклеоз - это острая вирусная патология, которая характеризуется лихорадкой, поражением ротоглотки, увеличением лимфатических узлов, печени и селезенки. У 10-18% больных появляется пятнисто-папулёзная сыпь, возникновению которой предшествует приём препаратов ампициллина или амоксициллина. Инкубационный период - от 4-х до 7-ми недель. Острые симптомы могут сохраняться в течение 3-4-х недель. Реже возможно развитие затяжного (3-6 месяцев) или хронического (более 6-ти месяцев) инфекционного процесса.
Вирус определяется с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), которая позволяет увеличить число копий ДНК бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК. Синтезированное количество ДНК идентифицируют методами иммуноферментного анализа или электрофореза. ПЦР-диагностика позволяет обнаружить возбудителя на самых ранних этапах инфекционного процесса, в любой биологической среде организма, с возможностью количественного определения вирусов или бактерий.

Данный комплекс лабораторных исследований позволяет выявить основных возбудителей инфекционных заболеваний, передающихся половым путем. Результаты анализа могут быть полезны при планировании беременности, а также для определения причин развития воспалительных заболеваний мочеполовой системы и нарушения репродуктивной функции мужчин и женщин.

Что входит в комплекс

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ ПЦР-4 ИППП патогены (анализ мочи, спермы) качественный?

Характерные клинические симптомы ИППП;
Планирование беременности;
Обследование половых партнеров с подозрением на ИППП;
Дифференциальная диагностика ИППП;
Контроль после проведенного лечения.

Подробное описание исследования

ИППП (инфекции, передаваемые половым путем) — группа заболеваний, которые могут быть переданы от человека к человеку при половом контакте.

Согласно данным Всемирной организации здравоохранения, в группу распространенных ИППП включены: хламидиоз, трихомониаз, кандидозные вульвовагиниты и баланопоститы, микоплазмоз, генитальный герпес, бактериальный вагиноз.

Часто характерные клинические проявления данных инфекционных заболеваний схожи и включают:

Появление патологических выделений из половых путей;
Боль во время полового акта;
Затрудненное мочеиспускание;
Зуд в области половых органов.

Микоплазма Mycoplasma genitalium;
Хламидия Chlamydia trachomatis;
Трихомонада Trichomonas vaginalis;
Гонорея Neisseria gonorrhoeae.

Перечисленные микроорганизмы — абсолютные патогены, то есть в норме они не присутствуют в организме человека, а попадая в мочеполовую систему мужчин и женщин вызывают воспаление.

Основной путь инфицирования данными патогенами — половой, кроме этого возможна передача инфекции от матери к ребенку при родах.

Без адекватного лечения данные инфекционные заболевания могут стать причиной бесплодия мужчин и женщин, а также провоцировать акушерские осложнения: замершую беременность, угрозу прерывания беременности, внутриутробное инфицирование плода.

Точный диагноз может поставить только врач после проведения осмотра пациента, а также по результатам лабораторных исследований.

Выделяют следующие методы лабораторной диагностики ИППП:

Микроскопические;
Иммунологические;
Молекулярно-биологические;
Микробиологические (вирусо-, бактерио-, мико-, паразитологические); биологические.

Клиническим материалом для лабораторных исследований являются, как правило:

У женщин: отделяемое (соскоб) уретры, цервикального канала, влагалища, моча;
У мужчин: отделяемое (соскоб) уретры, моча, эякулят; при наличии показаний — секрет предстательной железы, отделяемое нижнего отдела прямой кишки, ротоглотки, слизистой оболочки конъюнктивы глаз.

Один из методов, используемых в диагностике ИППП, — ПЦР-исследование.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) удобна тем, что в одной пробе в течение нескольких часов можно определить состав микробиоты урогенитального тракта. Метод ПЦР позволяет определить ДНК микроорганизмов даже в небольшом количестве исследуемого материала и получить точный результат.

Анализ может быть использован как при наличии характерной клинической симптоматики у обследуемого, так и в рамках профессиональных осмотров, или у партнеров с диагнозом ИППП, чтобы предотвратить дальнейшее распространение инфекции.

ПЦР имеет высокую чувствительность и специфичность, поэтому также полезна и удобна для проведения скрининговых исследований.

Подробное описание исследований, референсные значения представлены на страницах с описаниями отдельных исследований.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) – это метод исследования, направленный на выявление возбудителя инфекционного заболевания.

С его помощью возможно определение различных видов бактерий, вирусов или грибов путем идентификации их ДНК.

Материалы для анализа можно использовать разные, это может быть мазок или уретры или влагалища, кровь, секрет простаты, моча.

Методом ПЦР наличие в организме микроорганизма можно установить даже на доклинической стадии заболевания, когда никаких симптомов еще нет.

Часто врачами используется в качестве биологического материала для ПЦР моча .

Инфекция мочеполовой системы, в том числе передающиеся половым путем болезни, успешно диагностируются таким способом.

ПЦР применяется для выявления в моче инфекций:

трихомонады; ;
кандиды;
герпеса;
папилломавируса;
ВИЧ.

Мочу для ПЦР сдают в основном мужчины , так как у женщин этот материал менее предпочтителен по сравнению с мазком из уретры или влагалища.

Преимущества и недостатки ПЦР для определения инфекций в моче.

ПЦР имеет всего один недостаток – данный метод исследования позволяет установить лишь сам факт наличия возбудителя, но не пригоден для определения количественных показателей.

В случае возникновения такой необходимости, применяются другие диагностические мероприятия.

Заболевания, которыми заражаются преимущественно через половой контакт, сегодня являются настоящим бичом сексуально активной части населения России.

О том как сдаются анализы мочи
методом ПЦР рассказывает
подполковник медицинской службы,
врач Ленкин Сергей Геннадьевич

Содержание данной статьи проверено и подтверждено на соответствие медицинским
стандартам врачем дерматовенерологом, урологом, к.м.н.

Ленкиным Сергеем Геннадьевичем

Наименование	Срок	Цена
ДНК Chlamydia trachomatis	1 д.	300.00 руб.
ДНК Neisseria gonorrhoeae	1 д.	300.00 руб.
ДНК Trichomonas vaginalis	1 д.	300.00 руб.

В то же время ПЦР мочи имеет множество преимуществ:

высокая чувствительность (низкая вероятность пропустить инфекцию, если возбудитель присутствует в биологическом материале)
низкая частота ложных положительных результатов;
возможность выявления инфекционного агента, даже если в материале его ДНК присутствует в минимальных количествах;

возможность определения инфекции, даже если иммунологические, бактериологические и микроскопические методы не дали результатов;
высокая скорость диагностики, в отличие от бактериального посева, при котором результата нужно ждать несколько дней.

ПЦР дает возможность выявления болезни на ранних стадиях развития, что значительно повышает эффективность лечения, снижает длительность терапевтического курса, уменьшает финансовые затраты пациента на медицинское обслуживание и препараты.

Как сдать мочу на ПЦР?

Чтобы сдать анализ мочи методом ПЦР , вам потребуется специальный вакуумный набор.

Вы не можете сдать биологический материал обычным способом, потому что так он будет контактировать с внешней средой.

Это значит, что в мочу могут попасть бактерии, вирусы и грибы, которые в дальнейшем будут определены посредством ПЦР.

Подавляющее большинство ложноположительных результатов– это следствие нарушения техники сдачи мочи.

Вакуумный набор, который вам предстоит использовать для сдачи анализа, состоит из банки с крышкой и пробирки с трубкой.

Утром вы должны помочиться в баночку.

Далее нужно накрыть ее крышкой и вставить туда трубку.

Пробирка наполнится мочой сама, за счет отрицательного давления. Как только это произойдет, трубку и баночку вы можете выбросить, а пробирку нужно доставить в лабораторию, чтобы провести анализ мочи на ПЦР .

Результаты ПЦР анализа мочи на инфекции в нашем платном КВД, вы получите на следующий день.

Несколько правил, без которых невозможна правильная диагностика ПЦР мочи:

сдавать мочу нужно только утром, следуя всем описанным правилам;
нельзя мыть половые органы перед сбором биологического материала;
сдавайте мочу сразу после пробуждения;

за 1-2 суток до сдачи анализа не вступайте в половые связи.

Вы можете обратиться в наш платный КВД для проведения ПЦР .

Анализ мочи на инфекции – это эффективный и быстрый метод диагностики заболеваний, передающихся половым путем.

Обращайтесь к автору этой статьи – венерологу, урологу в Москве с 15 летним опытом работы.

Читайте также: