Пцр системы для выявления вируса клещевого энцефалита

Обновлено: 23.04.2024

Этот анализ принимается по сокращённому графику. Это связано с тем, что биоматериал должен попасть в лабораторию в очень короткий срок. Проверьте расписание сокращённого графика приёма на странице вашего отделения. При сдаче вне графика срок выполнения исследования может быть увеличен на 1-3 дня.

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Вирус клещевого энцефалита, РНК (TBE Virus, ПЦР) плазма, кач.?

Выявление возбудителя при латентном и бессимптомном течении воспалительного процесса .
Является единственным подтверждающим тестом, так как другие методы лабораторной диагностики (микроскопия и бактериологический) обладают более низкой чувствительностью по сравнению с ПЦР .
Контроль эффективности проведенного лечения.

Подробное описание исследования

Клещевой энцефалит – менингоэнцефалит - вирусная инфекция нервной системы поражает не только человека, но и других млекопитающих. Вирус может инфицировать мозг, мозговые оболочки или то и другое вместе (менингоэнцефалит). Клещевой энцефалит - природноочаговое заболевание распространённое в России в основном в Сибири, Урале и на Дальном Востоке. В природе вирус имеет хозяина - клеща.

Этиология: возбудитель вирус клещевого энцефалита - член семейства флавивирусов (род flavivirius).

Выделяют 3 разновидности вируса:

Дальневосточный подвид
Центральноевропейский подвид
Возбудитель двухволнового менингоэнцефалита

Вирионы возбудителя клещевого энцефалита имеют сферическую форму с диаметром 40-50 нм. Внутренним компонентом является нуклеокапсид. Вирус длительное время сохраняется при низких температурах (оптимальный режим - 60 градусов и ниже). Быстро инактивируется при комнатной температуре.

Эпидемиология. Основными переносчикам вируса являются иксодовые клещи (Ixodes persulcatus, Ixodes nicinus). Во всех природных очагах вирус циркулирует между клещами и дикими животными (главным образом грызунами и птицами), которые являются дополнительным резервуаром. В антропурических очагах (местности сильно изменённые деятельностью человека) резервуаром могут служить домащние животные - козы и коровы. Вирус клещевого энцефалита может передоваться клещами трансовариально через яйцеклетки их потомству.

Пути передачи.

Трансмисивный путь - через укус клеща.
Алиментарный путь - при употреблении в пищу сырого молока и молочных продуктов инфецированных коз и коров.

Максимальный подъём заболеваемости в мае-июне. Второй менее выраженный подъём заболеваемости регистрируется в августе-сентябре, что сязанно с активностью и численностью клещей.

Комплексное исследование, направленное на диагностику инфицирования и оценку эффективности вакцинации против клещевого энцефалита, а также на диагностику системного клещевого боррелиоза.

Синонимы русские

Клещевой энцефалит; системный клещевой боррелиоз (болезнь Лайма); комплексная серологическая диагностика.

Синонимы английские

Тick-borne encephalitis; tick-borne borreliosis (Lyme borreliosis); comprehensive serological diagnostics.

Метод исследования

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Клещевой энцефалит – это вирусное природно-очаговое трансмиссивное заболевание, характеризующееся преимущественным поражением центральной нервной системы. Возбудителем является РНКсодержащий вирус, относящийся к роду Flavivirus семейства Togaviridae, группа Arboviruses. Инфекция носит сезонный (весенне-летний) характер и передается преимущественно с укусом клещей, также возможен алиментарный путь передачи через инфицированное сырое молоко коров и коз. Инкубационный период заболевания длится от 3 до 21 дней, в среднем 10-14 дней. Клинические проявления носят разнообразный характер. В зависимости от выраженности неврологических расстройств выделяют следующие формы заболевания: лихорадочную, менингеальную, менингоэнцефалитическую, менингоэнцефалополиомиелитическую и полирадикулоневритическую, двухволновый менингоэнцефалит. По степени тяжести инфекция может протекать в легкой, средней или тяжелой форме, что влияет на длительность заболевания, выраженности клинической симптоматики и варианты исхода болезни. Возможно длительное вирусоносительство в виде латентной, персистентной или хронической инфекции.

Диагностика клещевого энцефалита основана на комплексе эпидемиологических, клинических данных, результатах изменений в лабораторных параметрах. В клиническом анализе крови в острый период заболевания может отмечаться лейкоцитоз с абсолютным и относительным увеличением количества нейтрофилов. Также увеличивается скорость оседания эритроцитов, в анализе мочи может наблюдаться транзиторная протеинурия.

В серологической лабораторной диагностике данного заболевания, главным образом, применяется выявление специфических антител к вирусу клещевого энцефалита. В настоящее время для определения антител классов IgM и IgG используется метод твердофазного иммуноферментного анализа. Данные специфические иммуноглобулины вырабатываются иммунной системой в ответ на инфицирование вирусом клещевого энцефалита или на вакцинацию против данного возбудителя. Важным в серологической диагностике является определение нарастания титра специфических антител в парных сыворотках крови, взятых в первые дни болезни и через две-три недели от ее начала. Антитела класса IgM появляются одновременно с первыми симптомами заболевания, достигая максимального уровня через 3,5-4,5 недели с момента инфицирования, затем постепенно снижаясь в течение нескольких месяцев. Специфические антитела класса IgG возникают в крови спустя неделю после появления первых симптомов, достигают максимума через 1,5-2,5 месяца с момента инфицирования и сохраняются на протяжении всей жизни, обеспечивая стойкий иммунитет.

Системный клещевой боррелиоз, или болезнь Лайма, - природно-очаговое трансмиссивное заболевание, возбудителем которого является грамотрицательная подвижная бактерия Borrelia burgdorferi семейства Spirochaetaceae. Заражение человека может происходить после укусов иксодовых клещей, инокуляции боррелий со слюной клеща, возможна трансплацентарная передача возбудителя от матери к плоду. Чаще всего заражение происходит в весенне-летний период активности клещей. Инкубационный период заболевания может длиться от 3 до 32 дней, по данным некоторых авторов - до 60 дней. Клещевой боррелиоз имеет разнообразные клинические проявления: лихорадка, интоксикация, головные боли, распространенная "мигрирующая" эритема на месте контакта клеща с кожей больного, регионарный лимфаденит. При прогрессировании заболевания, его осложнении и несвоевременном применении лечения могут развиться нарушения в виде менингита, менингоэнцефалита, энцефалита и энцефаломиелита, поражение сердца, глаз, рецидивирующие и/или хронические артриты.

Диагностика заболевания основывается на данных эпидемиологического анамнеза, специфических клинических проявлениях и на оценке лабораторных данных. Особую роль играет специфическая лабораторная диагностика при нетипичной картине протекающей инфекции и безэритемных формах заболевания. В данном случае применяется метод полимеразной цепной реакции для выявления ДНК возбудителя Borrelia burgdorferi и серологическая диагностика.

Серологическая диагностика в настоящее время имеет широкое распространение и направлена на определение наличия и концентрации специфических антител классов IgM и IgG к возбудителю системного клещевого боррелиоза. При применении метода твердофазного иммуноферментного анализа диагностическое значение имеет нарастание титра специфических антител в парных сыворотках. Следует отметить, что антитела класса IgM появляются при первых симптомах заболевания, но их количество нарастает сравнительно медленно, достигая максимума через 2-3 недели, а далее снижаясь. Антитела класса IgG выявляются через несколько недель после инфицирования, максимального уровня достигают через 4-6 месяцев. Таким образом, антитела IgM указывают на недавнее заражение, а IgG подходят для более поздней диагностики. Также определение уровня IgG антител применяется при контроле эффективности проводимой терапии против клещевого боррелиоза.

Исследование направлено на выявление антигенов и генетического материала возбудителей клещевого энцефалита и системного клещевого боррелиоза (болезни Лайма) в исследуемых клещах. Применяется в целях своевременной диагностики заболеваний, экстренной специфической профилактики и проведения целенаправленного патогенетического лечения.

Какие тесты входят в данный комплекс:

Клещевой энцефалит (ВКЭ), антиген
Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ), определение РНК

Синонимы русские

Иксодовый клещ; клещевой энцефалит; вирус клещевого энцефалита; системный клещевой боррелиоз (болезнь Лайма), клещевой менингополиневрит, клещевой боррелиоз, иксодовый боррелиоз, хроническая мигрирующая эритема, эритемный спирохетоз, синдром Банноварта.

Синонимы английские

Ixodes tick; tick-borne encephalitis; tick-borne encephalitis virus; tick-borne borreliosis (Lyme borreliosis); Borrelia burgdorferi.

Метод исследования

Иммуноферментный анализ: Клещевой энцефалит (ВКЭ), антиген
Полимеразная цепная реакция (ПЦР): Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ), определение РНК

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Общая информация об исследовании:

Клещевой энцефалит – это вирусное природно-очаговое трансмиссивное заболевание, характеризующееся преимущественным поражением центральной нервной системы. Возбудителем заболевания является РНКсодержащий вирус, относящийся к роду Flavivirus семейства Togaviridae, группы Arboviruses. Инфекция носит сезонный (весенне-летний) характер и передается преимущественно с укусом клещей, при раздавливании внедрившегося насекомого, также возможен алиментарный путь передачи через инфицированное сырое молоко коров и коз. Основным резервуаром и переносчиком вируса являются клещи Ixodes persulcatus, Ixodes ricinus. Дополнительным резервуаром вируса являются грызуны, дикие животные и птицы. Заражение клеща происходит при укусе и кровососании инфицированных животных. При этом вирус проникает в органы и ткани клеща, преимущественно в слюнной аппарат, кишечник, половой аппарат, и сохраняется в течение всего периода жизни насекомых. Возбудитель клещевого энцефалита подразделяется на три подвида: дальневосточный, центрально-европейский и сибирский.

Инкубационный период заболевания длится от 3 до 21 дней, в среднем 10-14 дней. Клинические проявления носят разнообразный характер. Начальная фаза заболевания характеризуется лихорадкой, головной болью, миалгиями, возможно присоединение тошноты, рвоты, светобоязни. Далее развивается фаза неврологических расстройств, при которой происходит поражение центральной и периферической нервных систем. В зависимости от выраженности неврологических расстройств выделяют следующие формы заболевания: лихорадочную, менингеальную, менингоэнцефалитическую, менингоэнцефалополиомиелитическую и полирадикулоневритическую, двухволновый менингоэнцефалит. По степени тяжести инфекция может протекать в легкой, средней или тяжелой форме, что влияет на длительность заболевания, выраженность клинической симптоматики и варианты исхода болезни. В завершающую фазу заболевания может отмечаться выздоровление с угасанием неврологической симптоматики, хронизация патологического процесса или гибель больных. Возможно длительное латентное вирусоносительство, персистенция или хроническая форма инфекции.

Системный клещевой боррелиоз, или болезнь Лайма, – природно-очаговое трансмиссивное заболевание, возбудителем которого является грамотрицательная бактерия Borrelia burgdorferi семейства Spirochaetaceae. Заражение человека может происходить после укусов иксодовых клещей, инокуляции боррелий со слюной клеща, при раздавливании внедрившегося насекомого, также возможна трансплацентарная передача возбудителя от матери к плоду. Основным "резервуаром" и переносчиком вируса являются клещи Ixodes persulcatus, Ixodes ricinus, Ixodes scapularis. Чаще всего заражение происходит в весенне-летний период активности клещей.

Инкубационный период заболевания может длиться от 3 до 32 дней, по данным некоторых авторов до 60 дней. Клещевой боррелиоз имеет разнообразные клинические проявления. В первую фазу заболевания, фазу локальной инфекции, отмечаются лихорадка, интоксикация, головные боли, распространенная "мигрирующая" эритема на месте контакта клеща с кожей больного, регионарный лимфаденит. В фазу гематогенного и лимфогенного диссеминирования боррелий отмечается поражение органов и систем с развитием разнообразной клинической картины заболевания. Отмечается поражение опорно-двигательной, нервной, сердечно-сосудистой систем, глаз, печени, почек, кожи. При этом развивается клиническая картина невритов, радикулитов, энцефалитов, артритов, конъюнктивитов, миокардитов, появляется сыпь вне места укуса клеща. При прогрессировании заболевания, его осложнении и несвоевременном применении лечения могут развиться следующие процессы: неврологические нарушения в виде менингита, менингоэнцефалита, энцефалита и энцефаломиелита, тяжелые поражения сердца, рецидивирующие и/или хронические артриты. Возможно развитие непрерывного или рецидивирующего течения болезни, хронических форм поражения нервной системы.

В связи с тем что основным "резервуаром" и переносчиком клещевого энцефалита и системного клещевого боррелиоза являются иксодовые клещи, в лабораторной диагностике и выявлении возбудителей данных заболеваний используется непосредственное исследование клещей. Возможно обследование экземпляров клещей из природных очагов их распространения в целях выявления наличия возбудителей, определения процента инфицированных клещей на обследуемых территориях, количественного содержания вируса в случае клещевого энцефалита. Необходимым является исследование отдельных экземпляров клещей при их укусе человека, инокуляции вируса или боррелий со слюной клеща, при раздавливании внедрившегося насекомого. Это важно для определения возможного инфицирования клеща, своевременной диагностики заболеваний, экстренной специфической профилактике и проведении целенаправленного патогенетического лечения.

К современным методам диагностики возбудителей относятся методы твердофазного иммуноферментного анализа и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Они позволяют определить антиген возбудителя даже в минимальном объеме исследуемого биоматериала, характеризуются быстротой получения результата и обладают высокими показателями диагностической чувствительности и специфичности. Особенностью ПЦР-метода является возможность выявления генетического материала даже при малом его содержании в исследуемом биологическом материале. Данные методы позволяют в кратчайшие сроки определить наличие или отсутствие инфицированности клещей вирусом клещевого энцефалита и/или возбудителем клещевого боррелиоза. Но при отрицательных результатах исследований и сохранении подозрения на заболевания, а также при развитии клинической симптоматики рекомендуется исследование крови пациентов. При этом возможно определение антител классов IgM и/или IgG к антигенам возбудителей, а также выявление генетического материала возбудителей методом ПЦР.

Для чего используется исследование?

Для комплексной лабораторной диагностики клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза;
для определения инфицированности исследуемых клещей;
для определения содержания антигенов и генетического материала возбудителей клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза в исследуемых клещах;
для определения возможного инфицирования клеща в целях своевременной диагностики заболеваний, экстренной специфической профилактики и проведении целенаправленного патогенетического лечения;
для определения наличия и процента инфицированности клещей на исследуемой территории в природных очагах и в сезон распространения насекомых.

Когда назначается исследование?

При обследовании клеща после его укуса человека, раздавливания внедрившегося насекомого, извлечения клеща, в том числе в специализированном стационаре;
при обследовании клеща в целях диагностики антигенов и генетического материала возбудителей клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза;
при обследовании клещей в целях определения наличия и процента инфицированности клещей на исследуемой территории в природных очагах и в сезон распространения насекомых.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

инфицированность исследуемого клеща вирусом клещевого энцефалита;
инфицированность исследуемого клеща возбудителем системного клещевого боррелиоза;
инфицированность исследуемого клеща вирусом клещевого энцефалита и системного клещевого боррелиоза.

Причины отрицательного результата:

отсутствие инфицированности исследуемого клеща вирусом клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза;
содержание возбудителя в исследуемом материале ниже уровня детекции;
ложноотрицательные результаты.

Важные замечания

При подозрении на наличие клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза, но при отрицательных результатах исследования рекомендуется исследование крови пациентов. При этом возможно определение антител классов IgM и/или IgG к антигенам возбудителей, а также выявление генетического материала возбудителей методом ПЦР.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, вирусолог, паразитолог, эпидемиолог.

Также рекомендуется

18 Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

58 Вирус клещевого энцефалита, IgM

34 Вирус клещевого энцефалита, IgG

22 Вирус клещевого энцефалита, антиген (в ликворе)

15 Белок общий в ликворе

33 Глюкоза в ликворе

41 Borrelia burgdorferi, IgM, титр

9 Borrelia burgdorferi, IgG, титр

20 Borrelia burgdorferi s.l., ДНК [ ПЦР ]

48 Серологическая диагностика клещевого боррелиоза и энцефалита

Литература

1. Wang G, Liveris D, Brei B, Wu H, Falco RC, Fish D, Schwartz I. Real-time PCR for simultaneous detection and quantification of Borrelia burgdorferi in field-collected Ixodes scapularis ticks from the Northeastern United States / Appl Environ Microbiol. 2003 Aug;69(8):4561-5.

2. Pancewicz SA, Garlicki AM, Moniuszko-Malinowska A, Zajkowska J, Kondrusik M, Grygorczuk S, Czupryna P, Dunaj J Diagnosis and treatment of tick-borne diseases recommendations of the Polish Society of Epidemiology and Infectious Diseases. Polish Society of Epidemiology and Infectious Diseases / Przegl Epidemiol. // 2015;69(2):309-16, 421-8.

3. Вирусологическое исследование отдельных экземпляров иксодовых клещей с использованием методов микроанализа. Методические рекомендации.

4. Ткачев С. Е., Ливанова Н. Н., Ливанов С. Г.Исследование генетического разнообразия вируса клещевого энцефалита сибирского генетического типа, выявленного в клещах Ixodes persulcatus на Северном Урале в 2006 году / Сибирский научный медицинский журнал, № 4 (126) – 2007.

5. Покровский В.И., Творогова М.Г., Шипулин Г.А. Лабораторная диагностика инфекционных болезней. Справочник / М. : БИНОМ. – 2013.