Работа с вирусами требования
Обновлено: 18.04.2024
137. Биологическую опасность деятельности с использованием ПБА определяют в зависимости от вида осуществляемых работ и потенциальных рисков, обусловленных патогенными (опасными) свойствами ПБА, с которыми проводят работу (приложение 1 к Санитарным правилам).
138. Работа с рекомбинантными молекулами ДНК микроорганизмов должны осуществляться в соответствии с требованиями главы IV Санитарных правил.
139. При производстве иммунобиологических лекарственных препаратов (ИЛП) и медицинских изделий (МИ) с использованием ПБА, продуктов на основе микроорганизмов и организации производственного контроля в отношении указанных объектов должны соблюдаться требования Санитарных правил.
140. Исследования по детекции нуклеиновых кислот ПБА проводят в соответствии с требованиями по организации работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности.
141. Не допускается передача ПБА: в организации, не имеющие лицензии на деятельность, связанную с использованием возбудителей инфекционных заболеваний человека и животных соответствующих групп патогенности (за исключением случая, если указанная деятельность осуществляется в медицинских целях); в организации, не имеющие лицензии на осуществление медицинской деятельности на соответствующие работы (услуги), связанные с использованием ПБА; и в подразделения, не имеющие санитарно-эпидемиологического заключения о соответствии условий выполнения работ с ПБА санитарно-эпидемиологическим правилам.
142. Хранение ПБА I-IV групп осуществляют в специально определенном помещении "заразной" зоны.
143. Особенности деятельности с использованием ПБА в лабораториях (подразделениях) предусматривают их классификацию по уровню биобезопасности: базовые - уровень биобезопасности (УББ) 1 (осуществление всех видов работ с ПБА IV группы); уровень биобезопасности (УББ) 2 (осуществление всех видов работ с ПБА III-IV группы, а также проведение работ с ПБА II группы, не сопровождающихся накоплением (культивированием или концентрированием) жизнеспособного патогена; изолированные - УББ 3 (осуществление всех видов работ с ПБАI (возбудитель чумы) - II группы, а также проведение работ с вирусами I группы, не сопровождающихся накоплением (культивированием или концентрированием) жизнеспособного патогена); максимально изолированные - УББ 4 (все виды работ с вирусами I группы патогенности, микроорганизмами, ассоциированные с клиническими проявлениями характерными для ПБА I-II групп, таксономическое положение которых не определено, а степень опасности не изучена, экспериментальные исследования штаммов со множественной устойчивостью к антибиотикам и химиопрепаратам; аэробиологические исследования с ПБА I-II групп).
144. В организациях, осуществляющих работы с использованием ПБА, должны обеспечиваться:
контроль обеспечения биологической безопасности в организации;
контроль за проведением комплекса мероприятий, направленных на предупреждение аварийных ситуаций и ликвидацию их последствий;
контроль подготовленности персонала к работе с ПБА и организация наблюдения за состоянием здоровья, включая контроль прохождения диспансеризации и иммунопрофилактики работников, учет работников с повышенной чувствительностью к антибиотикам и имеющих противопоказания к вакцинации;
контроль выполнения санитарно-эпидемиологических требований;
контроль порядка выезда сотрудников, выдача обсервационных удостоверений (при отсутствии врача изолятора);
проведение анализа состояния биологической безопасности и разработка комплекса мер по ее совершенствованию.
145. Организацию и выполнение комплекса мероприятий по биологической безопасности в организации в целом обеспечивает ее руководитель, в подразделениях - руководители подразделений. По решению руководителя организации в этих целях создается комиссию по контролю соблюдения требований биологической безопасности (КББ).
146. Для подразделения должен быть разработан документ, определяющий режим безопасной работы в конкретных условиях, с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизма и продуктов его жизнедеятельности.
147. Во всех подразделениях разрабатывают план ликвидации аварий при работе с ПБА. Не реже одного раза в год проводят плановые тренировочные занятия по ликвидации аварий при работе с ПБА, информацию о которых заносят в журнал регистрации проведения тренировочных занятий.
148. В организации разрабатывают инструкции и планы мероприятий по действиям в чрезвычайных ситуациях природного и техногенного характера, утверждаемые руководителем организации.
149. Работу с ПБА выполняют специалисты не моложе 18 лет, не имеющие медицинских противопоказаний к работе с опасным и вредными производственными факторами. На работы, связанные с патогенными микроорганизмами, принимаются лица, имеющие высшее или среднее медицинское, или биологическое, или ветеринарное, или микробиологическое, или биотехнологическое или пищевое профессиональное образование и дополнительную подготовку по специальностям, отвечающим требованиям и характеру заявленных работ. Вновь принятые работники, не имеющие дополнительной подготовки, должны быть направлены на ее прохождение в возможно более короткие сроки с момента трудоустройства.
150. Инженерно-техническое сопровождение работ с ПБА выполняют специалисты с высшим или средним специальным инженерно-техническим образованием, не имеющие медицинских противопоказаний к работе с опасным и вредными производственными факторами.
151. Допуск персонала, работающего в организации, к работе с ПБА, а также обслуживающего оборудования, используемого при работе с ПБА и (или) имеющих доступ на территорию, где используется ПБА, осуществляется на основании приказа руководителя организации, издаваемого один раз в два года
152. Допуск инженерно-технического персонала, не работающего в организации, в помещения, где проводится работа с ПБА, осуществляют по письменному разрешению руководителя организации, в сопровождении сотрудника организации, после прекращения работы в подразделении и проведения текущей дезинфекции. Цель посещения и время регистрируют в журнале.
153. Прикомандированных в организацию лиц допускают к работе с ПБА на общих основаниях в соответствии с требованиями настоящих санитарных правил, по письменному разрешению руководителя данной организации, с предъявлением копии приказа о допуске к работе с ПБА по основному месту работы.
154. В период обучения слушателей курсов профессиональной переподготовки допускают к работе с ПБА отдельным приказом по организации.
155. При приеме на работу персонал проходит вводный инструктаж по биологической безопасности. Сотрудники, осуществляющие деятельность с ПБА или посещающие "заразную" зону, проходят периодические инструктажи по биологической безопасности.
156. Инструктаж сотрудников подразделений, а также прикомандированных лиц по вопросам биологической безопасности проводит заведующий подразделением с отметкой в журнале инструктажей или личной карточке сотрудника (приложение 5 к Санитарным правилам).
157. Внеплановые инструктажи с отметкой в журнале инструктажей или личной карточке инструктажей сотрудника проводят: при перерывах в работе более чем на 30 календарных дней; при введении в действие новых или переработанных стандартов, правил, инструкций по биологической безопасности, а также изменений к ним; при изменении технологического процесса, замене или модернизации оборудования, приспособлений и инструмента, исходного сырья, материалов и других факторов, влияющих на безопасность проведения работ с ПБА; при нарушении сотрудниками требований биологической безопасности, которые могут привести или привели к аварии; по требованию органов надзора.
158. Специалистов, выполняющих работы с ПБА, в отношении которых разработаны средства специфической профилактики, приведенные в календаре профилактических прививок по эпидемическим показаниям, вакцинируют против тех ПБА, работа с которыми входит в круг его профессиональных обязанностей. При выявлении у работающего специалиста медицинских противопоказаний, допуск к работе осуществляют на основании личного заявления работника и отдельного приказа руководителя организации. К работе в аэрозольных лабораториях и с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность возбудителем лихорадки Ку, а также к работе с ПБА, в отношении которых не разработаны методы специфического лечения, эта категория сотрудников не допускается.
Методческие указания подготовили:
сотрудники кафедры эпизоотологии и микробиологии СтГАУ
профессор Ожередова Н.А.
доцент Веревкина М.Н.
доцент Светлакова Е.В.
Доктор ветеринарных наук, профессор кафедры паразитологии
и ветеринарно-санитарной экспертизы, анатомии
и патанатомии им. С.Н.Никольского
доктор ветеринарных наук, профессор кафедры
терапии и фарамакологии
Общая вирусология: Методические указания / Н.А. Ожередова, М.Н. Веревкина, Е.В. Светлакова; Ставропольский государственный аграрный университет. – Ставрополь: АГРУС, 2013. - 50 с.
Рекомендованы к печати методическим советом СтГАУ
(протокол № от 2013 г.)
Занятие №1
Знакомство с работой и оборудованием вирусологической лаборатории. Техника безопасности при работе с вирусами. Схема вирусологических исследований.
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Ознакомить студентов с особенностями
устройства вирусологических лабораторий, правилами техники безопасности при работе с вирусами и вируссодержащим материалом.
МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ:
- Смонтированные керамические бактериальные фильтры;
- пестики, электромагнитная мешалка;
- флаконы с физиологическим раствором;
- флакон с раствором Хенкса;
- среды для культур клеток 199;
- гидролиз am лактальбумина;
- штатив с пробирками и кватчиками;
- лабораторные и сельскохозяйственные животные (кролики, морские свинки, крупный рогатый скот, овцы и др.)
Вирусологические отделы ветеринарной лаборатории организуются по типу бактериологических отделов, но с учетом специфики и некоторых особенностей вирусологических исследований.
Вирусологические лаборатории (отделы) должны иметь все, что имеется в бактериологических отделах (лабораториях). Это лабораторная посуда, питательные среды, боксы, световые микроскопы, центрифуги, холодильники, сушильные шкафы, термостаты, автоклавную, набор хирургических инструментов, виварий, дезосредства и др.
Кроме перечисленного оборудования и материальных средств, которым располагает бактериологический отдел ветеринарной лаборатории, в вирусологической лаборатории (отделе) должны быть: лабораторный инкубатор для выращивания куриных эмбрионов, используемых для культивирования вирусов суперцентрифуги со скоростью 25 - 30 об / мин., дополнительный бокс для приготовления культур клеток, холодильные камеры с температурой -20- -30 0 С - -70 0 С. Для более длительного хранения музейных Вакцинных штаммов вируса и другого вируссодержащего материала используются камеры (баллоны) с жидким азотом, где температура понижается до – 190 0 С.
Работа вирусологической лаборатории не мыслима без люминесцентного микроскопа, набора различных вирусов - диагностикумов и гипериммунных диагностических сывороток, меченных флуорохромами (люминесцентными красками). Люминесцентный микроскоп является уникальным прибором для постановки РИФ (реакции иммунофлуоресценции), которая позволяет быстро и точно поставить диагноз на любое бактериальное и вирусное заболевание. Поэтому люминесцентный микроскоп широко применяется и в бактериологических отделах лаборатории, обычно люминесцентный микроскоп устанавливается в помещении с темными шторами.
В учебных вирусологических лабораториях и в вирусологических лабораториях научно - исследовательских институтов ветеринарного и медицинского профиля должен быть электронный микроскоп с отдельными помещениями, штатом сотрудников, фотолабораторией и не обходимым оборудованием.
В вирусологической лаборатории должен быть широкий набор бактериальных и вирусозадерживающих фильтров, гомогенизаторы для измельчения тканей, необходимые сбалансированные солевые растворы (раствор Хенкса, фосфатно - буферный раствор), различные питательные среды для куш тур клеток ( среда 199,5 % гидролизата лактабулина и др. ).
Для работы с патологическим материалом, лабораторными животными, куриными эмбрионами необходим достаточный набор инструментов. Таких как: ножниц, шприцов, игл, шпателей, резиновых перчаток, защитных очков ступок, пестиков, различных пипеток с резиновыми грушами, спирта, эфира, хлороформа для наркоза лабораторных животных.
Вирусологическая лаборатория (отдел) должны иметь следующую документацию:
Журнал поступления патологического материала.
Журнал вирусологических исследований (экспертиз).
Журнал учета зараженных животных, куриных эмбрионов.
Журнал учета выделенных вирусов и их уничтожения.
Журнал учета движения производственных или музейных штаммов вирусов.
Лабораторные столы, стены, пол рабочих помещений и боксов, где проводится работа с вирусами, должны быть хорошо освещены и иметь специальное покрытие. Стены бокса и других лабораторных комнат должны быть выкрашены масляной краской светлых тонов или выложены кафельными плитками.
Пол также покрывается кафельными плитками или специальным пластиком. Лабораторные столы должны быть покрыты нержавеющей жестью, толстым стеклом или пластиком для удобства проведения и качества дезинфекции.
У входа в рабочие помещения, в предбокснике, в виварии, в помещении для содержания зараженных животных, должен находиться дезоковрик, пропитанный 5% раствором карболовой кислоты.
Все сотрудники лаборатории должны работать в чистых белых халатах, головных уборах (чепчиках, косынках). В боксах работа проводится в стерильной спецодежде и маске.
Лабораторные комнаты, боксы, где проводится работа с патологическим материалом или вирусом, должны ежедневно дезинфицироваться. Для этой цели используются бактерицидные лампы, которые включаются на 2 - 3 часа, или растворы дезосредств, распыляемых при помощи специальных распылителей. Одним из лучших дезосредств является 5% раствор лизола.
Трупы лабораторных животных, погибшие куриные эмбрионы, присланный патологический материал обезвреживаются путем сжигания в специальных печах (крематориях) или автоклавируются в специальных бачках.
Техника безопасности при работе с вирусом или вируссодержащим материалом требует строгого соблюдения следующих основных требований:
Не допускать рассеивания вируса во внешней среде.
Предотвратить загрязнение исследуемого материала бактериальной микрофлорой.
Настоящая Инструкция определяет требования к организации защиты АС организации от разрушающего воздействия компьютерных вирусов и устанавливает ответственность руководителей и сотрудников подразделений, эксплуатирующих и сопровождающих АС, за их выполнение.
К использованию в организации допускаются только лицензионные антивирусные средства, централизованно закупленные у разработчиков (поставщиков) указанных средств, рекомендованные к применению отделами автоматизации и безопасности информации.
В случае необходимости использования антивирусных средств, не вошедших в перечень рекомендованных, их применение необходимо согласовать с отделами автоматизации и безопасности информации.
Установка средств антивирусного контроля на компьютерах на серверах и рабочих станциях АС осуществляется уполномоченными сотрудниками отдела автоматизации в соответствии с "Инструкцией по установке, модификации и техническому обслуживанию программного обеспечения и аппаратных средств АС".
Настройка параметров средств антивирусного контроля осуществляется сотрудниками ОА в соответствии руководствами по применению конкретных антивирусных средств.
Применение средств антивирусного контроля
Антивирусный контроль всех дисков и файлов рабочих станций должен проводиться ежедневно в начале работы при загрузке компьютера (для серверов - при перезапуске) в автоматическом режиме.
Обязательному антивирусному контролю подлежит любая информация (текстовые файлы любых форматов, файлы данных, исполняемые файлы), получаемая и передаваемая по телекоммуникационным каналам, а также информация на съемных носителях (магнитных дисках, лентах, CD - ROM и т.п.). Разархивирование и контроль входящей информации необходимо проводить непосредственно после ее приема на выделенном автономном компьютере или, при условии начальной загрузки операционной системы в оперативную память компьютера с заведомо "чистой" (не зараженной вирусами) и защищенной от записи системной дискеты, - на любом другом компьютере. Возможно применение другого способа антивирусного контроля входящей информации, обеспечивающего аналогичный уровень эффективности контроля. Контроль исходящей информации необходимо проводить непосредственно перед архивированием и отправкой (записью на съемный носитель).
Файлы помещаемые в электронный архив должны в обязательном порядке проходить антивирусный контроль. Периодические проверки электронных архивов должны проводиться не реже одного раза в месяц.
Установка (изменение) системного и прикладного программного обеспечения осуществляется на основании "Инструкции по установке, модификации и техническому обслуживанию программного обеспечения и аппаратных средств автоматизированной системы организации".
Устанавливаемое (изменяемое) программное обеспечение должно быть предварительно проверено на отсутствие вирусов. Непосредственно после установки (изменения) программного обеспечения компьютера должна быть выполнена антивирусная проверка:
Х на защищаемых серверах и PC - ответственным за обеспечение информационной безопасности подразделения;
Х на других серверах и PC AC не требующих защиты, - лицом, установившим (изменившим) программное обеспечение, - в присутствии и под контролем руководителя данного подразделения или сотрудника, им уполномоченного.
Факт выполнения антивирусной проверки после установки (изменения) программного обеспечения должен регистрироваться в специальном журнале подразделения за подписью лица, установившего (изменившего) программное обеспечение, и лица, его контролировавшего.
Действия при обнаружении вирусов
В случае обнаружения при проведении антивирусной проверки зараженных компьютерными вирусами файлов сотрудники подразделений обязаны:
Х приостановить работу;
Х немедленно поставить в известность о факте обнаружения зараженных вирусом файлов руководителя и ответственного за обеспечение информационной безопасности своего подразделения, владельца зараженных файлов, а также смежные подразделения, использующие эти файлы в работе;
Х совместно с владельцем зараженных вирусом файлов провести анализ необходимости дальнейшего их использования;
Х провести лечение или уничтожение зараженных файлов (при необходимости для выполнения требований данного пункта привлечь специалистов ОА);
Х в случае обнаружения нового вируса, не поддающегося лечению ' применяемыми антивирусными средствами, передать зараженный вирусом файл на гибком магнитном диске в ОА для дальнейшей отправки его в организацию, с которой заключен договор на антивирусную поддержку;
Х по факту обнаружения зараженных вирусом файлов составить служебную записку в отдел обеспечения безопасности информации, в которой необходимо указать предположительный источник (отправителя, владельца и т.д.) зараженного файла, тип зараженного файла, характер содержащейся в файле информации, тип вируса и выполненные антивирусные мероприятия.
Ответственность
Ответственность за организацию антивирусного контроля в подразделении, эксплуатирующем подсистему АС, в соответствии с требованиями настоящей Инструкции возлагается на руководителя подразделения.
Ответственность за проведение мероприятий антивирусного контроля в подразделении и соблюдение требований настоящей Инструкции возлагается на ответственного за обеспечение безопасности информации и всех сотрудников подразделения, являющихся пользователями АС.
Периодический контроль за состоянием антивирусной защиты, а также за соблюдением установленного порядка антивирусного контроля и выполнением требований настоящей Инструкции сотрудниками подразделений организации осуществляется отделом службой обеспечения безопасности информации.
Боксы и предбоксники, кроме ежедневной влажной дезинфекционной обработки, необходимо облучать бактерицидными лампами в течение 30-40 мин перед началом и после работы. В предбокснике можно проводить вспомогательные работы: фильтровать сыворотки, солевые растворы, проводить трипсинизацию тканей и т.д. Для этого пользуются фильтрами Зейтца с электрическими вакуумными насосами, гомогенизаторами, газовыми горелками, розетками для подключения приборов в электросеть и т.д.
В боксе, кроме рабочих столов и стульев, должно быть все необходимое для работы: стерилизаторы для инструментов, банки с дезрастворами для отработанных пипеток, бак с дезраствором для сбора отработанных материалов, баночки со спиртом, йодом, штативы для пробирок, пробирки с бульоном для проверки бактериального загрязнения, стерильные пипетки, ступки и т.д.
Потолок и стены лабораторных комнат покрывают масляной краской (стены на 1,5 м от пола можно выложить кафельными плитками), пол — линолеумом или кафельными плитками. Рабочие столы в боксах должны быть покрыты стеклом или оцинкованной жестью.
ГЛАВА 1. ВИРУСОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ
ЗАНЯТИЕ 1. Правила работы в вирусологической лаборатории
Цель занятия: ознакомиться с планировкой и оборудованием вирусологической лаборатории, ее документацией, правилами и техникой безопасности при работе с вируссодержащим материалом.
Оборудование и материалы: помещение вирусологической лаборатории, подготовленное в соответствии с установленными правилами и нормами, электронный и люминесцентный микроскопы, центрифуги, журнал регистрации студентов, получивших инструктаж по технике безопасности при работе в вирусологической лаборатории, документация лаборатории.
Краткие теоретические сведения
Вирусологическая лаборатория (рис.1) предназначена для проведения диагностических исследований на вирусные инфекции, контроля состояния и напряженности специфического противовирусного иммунитета и участия в организации и проведении профилактических мероприятий в борьбе с вирусными заболеваниями.
Современные вирусологические лаборатории, независимо от специализации, должны размещаться в чистых светлых помещениях с необходимым оборудованием и мебелью. Их следует изолировать от других лабораторий (бактериологических, биохимических и прочих). Независимо от характера выполняемой работы в них необходимо поддерживать идеальную чистоту. Кроме ежедневной обычной уборки, помещения периодически обрабатывают растворами дезинфицирующих веществ (карболовой кислоты, лизола, хлорной извести, хлорамина и т.п.) и подвергают ультрафиолетовому облучению. Комнаты, предназначенные для работы с вирусами, должны быть хорошо освещены и состоять из двух отделений, разобщенных стеклянной перегородкой: предбоксника и бокса. В боксах, организованных по типу операционных, над рабочим столом на расстоянии 50-70 см от поверхности устанавливают бактерицидные лампы БУВ-15, БУВ-30 или БУВ-60 для уничтожения спороносных бактерий и микроскопических грибов. Для облучения гомогенизаторов в боксе желательно иметь передвижную кварцевую лампу ПРК-4. У входа в бокс должен лежать половичек, пропитанный дезраствором (дезподушка). В предбокс-нике в биксах должны быть стерильные халаты, шапочки, маски, которые одевают перед работой.
Лаборатория должна иметь 5-6 комнат, отдельный вход для сотрудников и для посетителей с тамбуром, обязателен гардероб и душевая.
Для регистрации поступающего на исследование патологического материала предназначена приемная. Пол в ней должен быть бетонный, стены покрыты масляной краской или керамической плиткой, окна заделаны железными решетками. При входе необходимо положить войлочный коврик, пропитанный дезинфицирующим раствором. В приемной размещают несколько столов, обитых оцинкованной жестью, бак с дезинфицирующим раствором (чаще всего с 5%-ным раствором фенола).
В комнате для предварительной обработки материала проводят, вскрытие трупов и отбор материала для дальнейшего исследования. В ней должны быть бокс с предбоксником, соединенный окном с виварием для инфицированных животных. В боксе разбирают поступившие пробы, готовят и фиксируют мазки — отпечатки и т.д. В комнате также должны быть столы для вскрытия трупов и обработки материала. На столе для вскрытия трупов помещают инструментарий (ножницы, пинцеты, скальпели, корнцанги), эмалированный тазик, сосуды с дезинфицирующими растворами, стерильную посуду для сбора материала.
Комнату для вирусологических исследований оборудуют двумя боксами для получения культур клеток и работы с вирус -содержащим материалом, столами (число их зависит от количества работающих), термостатами, холодильниками, центрифугами, торсионными и аналитическими весами, электроплитками, фильтрами, насосами, водяными банями, электромагнитными мешалками. Лабораторию снабжают в достаточном количестве биксами, фильтрами Зейтца, ящиками для хранения сред, эмалированной и стеклянной посудой — матрацами, флаконами, колбами разных объемов, градуированными пипетками, микропипетками; цилиндрами и стаканами, пробирками серологическими, бактериологическими и центрифужными, ампулами и резиновыми пробками разных размеров, металлическими штативами для пробирок, карандашами по стеклу, фильтровальной бумагой, лейкопластырем и т.д.
На столах для определенных операций за каждым работающим закрепляют рабочее место. Здесь размещают нужную аппаратуру, соответствующие дезинфицирующие средства, краски, реактивы. На операционном столе необходимы микроскоп, набор инструментов (пинцеты, ножницы, скальпели и др.), вата, пастеровские пипетки, стерильные и обезжиренные покровные и предметные стекла, физраствор. При работе с куриными эмбрионами должны быть подставки для яиц, овоскопы, инструменты для вскрытия (ножницы, глазные пинцеты).
Комнаты-боксы, предназначенные для работы с вирусами, должны быть хорошо освещены и иметь два отделения, разобщенные стеклянной перегородкой: предбоксник и бокс. В боксе устанавливают бактерицидные лампы. У входа в бокс должен лежать войлочный коврик, пропитанный дезинфицирующим раствором. В предбокснике должны быть стерильные халаты, тапочки, маски, которые надевают перед работой.
В автоклавной стерилизуют посуду, питательные среды, аппаратуру и приборы, обезвреживают заразный материал. Необходимо иметь два автоклава, для чистых материалов и для инфицированных, бак для сбора инфицированного материала, сушильные шкафы, дистилляторы, столы и шкафы для стерильной посуды.
Моечная предназначена для мытья посуды, аппаратуры и приборов. В ней должна быть машина для посуды и белья, сушильные шкафы и т.д. Посуду, пипетки и инструменты, загрязненные инфицированным материалом, моют только после стерилизации.
Помещение, используемое для выращивания и содержания лабораторных животных, называется виварием. В правильно организованном виварии имеется карантинное отделение, комнаты для экспериментальных и здоровых животных, мытья и дезинфекции клеток, инвентаря и спецодежды, кухня для приготовления пищи, кладовая, фуражная, трупосжигательная печь и др. Все помещения вивария должны быть изолированы друг от друга и иметь самостоятельные входы с дезковриками. Кроме того, они должны быть непроницаемыми для грызунов и различных насекомых. Виварий должен быть теплым, светлым (с источником дневного света) и сухим. В холодное время года здесь поддерживают температуру 12-20 °С.
Чистку клеток и вивария делают ежедневно, используя мыльно-карболовый раствор. После уборки тщательно моют руки и обрабатывают их 2%-ным раствором хлорамина.
Сотрудники вирусологической лаборатории обязаны соблюдать следующие правила, предупреждающие попадание бактерий и плесневых грибов в исследуемый материал и возможность внут-рилабораторных заражений персонале и распространения инфекции.
1. Работать разрешается в специальной одежде — халате и шапочке. При работе с особо опасным материалом дополнительно одевают резиновые перчатки, марлевую маску и защитные очки. В боксе работают в стерильном халате, маске, шапочке, при необходимости надевают резиновые перчатки и очки. Обязательно меняют обувь. В виварии во время мытья посуды и уборки на халат надевают передники, а на ноги — резиновые сапоги.
2. Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнюю одежду на халат.
3. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу.
4. Не допускаются хождение, разговоры во время работы.
5. Весь материал, поступающий в лабораторию на анализ, должен рассматриваться как инфицированный.
6. При распаковке материала необходимо соблюдать осторожность. Банки следует обтирать снаружи дезинфицирующим раствором и ставить их на подносы или кюветы.
7. Переливание жидкостей, содержащих вирусы, производят над сосудом, наполненным дезраствором.
8. В случае попадания заразного материала на халат, руки, стол, обувь и т.д. надо сообщить об этом заведующему лабораторией (в учебных заведениях — преподавателю) и немедленно произвести под его контролем дезинфекцию. При подозрении на заражение необходимо обратиться к врачу.
9. Зараженный материал подлежит обязательному уничтожению (автоклавирование, сжигание), по возможности в тот же день. Инструменты, а также поверхность рабочего стола после работы сразу же дезинфицируют.
10. При работе с пипетками для разлива жидкого инфицированного материала пользуются резиновыми баллончиками (грушами) небольшого объема.
11. В журнале регистрации ежедневно делают записи относительно использованного заразного материала и его уничтожения.
12. Запрещается выносить из лаборатории оборудование, инвентарь, материалы и т.д. без предварительной дезинфекции их на месте.
13. Пипетки, предметные и покровные стекла и другую* посуду, бывшую в употреблении, обеззараживают, погружая в 5%-ный раствор лизола, фенола или серной кислоты, которые всегда должны быть на столах.
14. Запрещается оставлять на рабочих столах бактериологические чашки, пробирки и другую посуду с заразным материалом.
15. По окончании работы рабочее место приводят в порядок и тщательно дезинфицируют. Вируссодержащий материал, необходимый для дальнейшей работы, ставят на хранение в сейф-холодильник и опечатывают. Руки тщательно дезинфицируют мыльным спиртом, 70°-ным спиртом и др.). Лабораторию закрывают и опечатывают.
Учреждения, где систематически проводят работы с патогенными вирусами, должны иметь коллекции их штаммов, которые хранят в музее живых культур. Музейные культуры используют в качестве эталонов для диагностических целей.
Для всех вирусологических лабораторий установлен единый порядок обращения о вирусами, предусматривающий правила их хранения, регистрации, передачи от одного сотрудника другому внутри лаборатории и за ее пределы.
Культуру вирусов хранят в холодильнике -(20. 70 °С) под замком с пломбой или печатью. Все пробирки и пенициллиновые флаконы, закрытые резиновыми пробками, должны иметь этикетки из лейкопластыря с указанием вида вирусов, индивидуального номера штамма и стабилизирующей среды, в которой он находится. Лучшим способом сохранения вирусов является лиофил изация.
В вирусологической лаборатории должна быть следующая документация.
1. Инвентарная книга музейных штаммов вирусов.
2. Журнал учета движения вируссодержащего материала в лаборатории.
3. Журнал учета стерилизации и уничтожения инфицированного материала.
4. Журнал учета зараженных подопытных животных.
5. Журнал вирусологических исследований (экспертиз).
6. Журнал учета выделяемых вирусов.
В ходе самостоятельной работы студентов необходимо
1. Ознакомиться с вирусологической лабораторией кафедры и ее основным оборудованием.
2. Изучить документы лаборатории.
Примерный план занятия (2 ч)
1. Объяснение преподавателя.
2. Запись в тетради требований при работе с вирусным материалом и основных правил выполнения этих требований.
3. Роспись в журнале по технике безопасности.
4. Демонстрация: а) лаборатории и ее основного оборудования; б) организации рабочего места в боксе при работе с вирусами. Ознакомление с документацией лаборатории.
5. Самостоятельная работа студентов.
6. Подведение итогов.
7. Задание к следующему занятию.
Занятие можно организовать следующим образом. После объяснения преподавателя и демонстрации (см. п.4 занятий) студенты должны подготовить рабочее место для работы с вирусным материалом. Для этого они проводят его дезинфекцию раствором хлорамина, ставят на стол сосуд с 2%-ным дезраствором, контейнер для отходов, спиртовку, баночку со стерильной ватой, готовят инструменты (шприц, иглы, пинцет) для стерилизации. Отрабатывают приемы работы с пипеткой и грушей.
Для ознакомления с документацией лаборатории можно использовать ветеринарное законодательство, инструкции о правилах работы в лабораториях.
Вопросы домашнего задания
1. Открытие вирусов и периоды развития вирусологии. Прпдмот и задачи вирусологии.
2. Взятие, пересылка и сохранение вируссодержащего материала.
3. Подготовка вируссодержащего материала для заражения лабораторных животных, куриных эмбрионов и культуры клеток.
ЗАНЯТИЕ 2. Подготовка вируссодержащего материала для заражения чувствительных объектов
Цель занятия: ознакомиться с техникой взятия, транспортировки, сохранения и подготовки вируссодержащего материала для заражения лабораторных животных, куриных эмбрионов и культуры клеток.
Оборудование и материалы: пенициллиновые флаконы с кусочками паренхиматозных органов, залитых раствором Хенкса и замороженных, стерильные фарфоровые ступки с пестиками, стерильный стеклянный песок, стерильные чашки Петри (по две на рабочее место), стерильные центрифужные пробирки (количество их должно соответствовать числу рабочих мест), раствор Хенкса, пенициллин и стрептомицин, МПА, МПБ в пробирках на каждое рабочее место, стерильные пенициллиновые флаконы, стерильные резиновые пробки №14 или 14,5, ножницы, пинцеты, спиртовки, центрифуга, бумажные фильтры, таблицы по теме. Краткие теоретические сведения
Вирусологическое исследование сводится к выделению вируса из патматериала, его серологической идентификации и подробному изучению различных свойств (патогенность, антигецность, культивируемость в лабораторных условиях, морфологические признаки).
Читайте также: