Резистентность вируса гепатита с к противовирусной терапии

Обновлено: 23.04.2024

Метод определения полимеразная цепная реакция (ПЦР), секвенирование по Сэнгеру. Выявляют и идентифицируют кодонные замены в геномных регионах NS3, NS5A и NS5 вируса гепатита С. Регистрируют клинически значимые мутации резистентности, с порогом >15% популяции.

Выявление полиморфизмов NS3/NS5A/NS5B геномных регионов вируса гепатита С, ассоциированных с возможной резистентностью к терапии препаратами прямого противовирусного действия (для пациентов с генотипом вируса 1a, 1b или 3).

Вирусный гепатит C (ВГС) – инфекционное заболевание печени, вызываемое РНК-содержащим вирусом, склонное к длительному хроническому течению с риском развития цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы. В терапии этого заболевания за последние годы достигнуты прорывные успехи – она стала эффективнее, проще, с меньшим числом побочных эффектов.

Терапией выбора при ВГС являются препараты прямого противовирусного действия (ПППД), воздействующие непосредственно на ферменты вируса, способные приводить к его полной элиминации. ПППД делятся на 3 основных класса – ингибиторы протеазы региона NS3/4A (участвует в посттрансляционной модификации вируса), ингибиторы белка NS5A (компонент репликационного комплекса вируса) и ингибиторы фермента NS5B (РНК-полимераза вируса). Действие таких лекарственных средств приводит к остановке деления вируса и препятствует заражению новых клеток. Однако, несмотря на высокую эффективность этих препаратов, примерно у 5% больных лечение с применением ПППД оказывается неэффективным. Установлена важная роль в этом ассоциированных с лекарственной резистентностью мутаций вируса.

Наиболее часты мутации в регионе NS5A при генотипах вируса 1а и 3. Степень резистентности к препарату может варьировать в зависимости от позиции полиморфизма. Клиническое значение выявленной мутации резистентности соотносится с определенным классом ПППД, иногда - конкретным препаратом, а также генотипом вируса, клиническими характеристиками пациента (по факту предыдущего лечения, наличию цирроза) и планируемым режимом комбинированной терапии.

Для клинической интерпретации полученных результатов следует ориентироваться на текущие рекомендации экспертных сообществ по лечению ВГС и информацию о значимых мутациях в рекомендациях по применению соответствующего препарата. Резистентность к одному препарату может компенсироваться активностью другого при использовании лечения комбинациями ПППД разных классов или увеличением длительности лечения. В условиях свободного доступа к разным режимам терапии, позволяющим оптимизировать лечение для лиц групп повышенного риска лекарственной резистентности, проводить исследования связанных мутаций вируса обычно не требуется. Однако, в условиях ограниченной доступности препаратов такие исследования могут быть полезны для выбора тактики терапии (EASL 2016, 2018).

Исследование проводится только пациентам с вирусным гепатитом С генотипов 1а, 1b или 3. Требуется заранее определить и указать выявленный генотип вируса гепатита С (протокол регистрации результатов исследования мутаций резистентности будет зависеть от указанного генотипа).

При уровне вирусной РНК в крови ниже 50 000 МЕ/мл проведение исследования невозможно - следует иметь представление о текущей вирусной нагрузке*.

Комплексное обследование, включающее определение уровня вирусной нагрузки и наличия и выраженности антительного ответа, рекомендуется пациентам с вирусным гепатитом С для контроля эффективности терапии.

Синонимы английские

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.
Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

В настоящее время для лечения хронического гепатита С (ХГС) применяются схемы терапии с использованием препаратов прямого противовирусного действия (ПППД).

Мониторинг противовирусной терапии (ПВТ) хронического гепатита С (ХГС) с использованием ПППД должен проводиться в соответствии с существующими рекомендациями по лечению ХГС. Российские рекомендации по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом С, опубликованные в 2013 г., содержат рекомендации по проведению стандартной терапии и терапии с использованием NS3-ингибиторов протеазы первой волны – боцепревира и телапревира и, соответственно, не могут быть использованы для ведения противовирусной терапии ХГС другими ПППД, в т.ч. при безинтерфероновой терапии.

В настоящее время при проведении лечения ХГС с помощью ПППД необходимо руководствоваться рекомендациями двух ведущих мировых гепатологических организаций - Европейской ассоциации по изучению печени (EASL), опубликованных 2015 году, и/или Американской ассоциации по изучению заболеваний печени (AASLD) 2016 года. В соответствии с этими рекомендациями мониторинг противовирусной терапии необходимо проводить с использованием ультрачувствительных качественных тестов по выявлению РНК HCV и/или ультрачувствительных количественных тестов, позволяющих определить концентрацию РНК HCV в процессе проведения лечения и после его окончания. Значения аналитической чувствительности этих тестов отличаются в рекомендациях по лечению ХГС, разработанных различными гепатологическими ассоциациями - в российских рекомендациях 2013 года при проведении терапии с использованием ПППД рекомендованная чувствительность качественного исследования - 10 МЕ/мл, в рекомендациях EASL - 15 МЕ/мл и выше, в рекомендациях AASLD - 25 МЕ/мл и выше.

AASLD рекомендует следующую схему контроля эффективности противовирусной терапии с использованием ПППД – определение концентрации РНК HCV на 4 неделе терапии и 12 неделе после ее окончания. Дополнительное аналогичное тестирование желательно (но необязательно) провести непосредственно после окончания терапии (ответ по окончании терапии) и через 24 недели после завершения лечения. Устойчивый вирусологический ответ - УВО определяется у всех пациентов, завершивших терапию. Лечение не следует прерывать, без проведения мониторинговых исследований. В случае выявления РНК HCV на 4 неделе терапии, не прерывая терапию, следует провести дополнительное тестирование через 2 недели (на 6-й недели терапии), при возрастании вирусной нагрузки более чем в 10 раз, по сравнению с предыдущим тестированием, рекомендуется завершить лечение. Во остальных случаях лечение должно быть продолжено.

Для оценки эффективности проведенной терапии определение уровня РНК HCV проводится на 12 или 24 неделе после завершения терапии, вне зависимости от результатов оценки ответа по окончании терапии, в том числе у пациентов с выявленной в конце терапии РНК HCV.

Согласно рекомендациям EASL, мониторинг эффективности терапии должен проводиться с использованием одних и тех же тест-систем, желательно в одной и той же лаборатории - для обеспечения объективности при сопоставлении результатов исследования.

Исследование одномоментно позволяет оценить эффективность терапии по двум основным показателям: элиминации вируса из организма и напряженности специфического иммунитета.

Когда назначается исследование?

При подтвержденном вирусном гепатите С, независимо от формы инфекционного процесса, для контроля эффективности противовирусной терапии (ПВТ).

Что означают результаты?

Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:

Длительность ПВТ и периодичность количественного определения РНК зависит от генотипа вируса и степени повреждения печени.
Эффективность лечения оценивается по уровню РНК в динамике (до, во время (4 и 12 неделя) и через 24 недели после курса ПВТ).
Подтверждение вирусемии: РНК HCV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций (7,5×10 2 – 1,0×10 8 копий/мл образца).

Эффективная терапия - вирусная нагрузка крови снижается на 2 порядка в первые 4-12 недель лечения и не обнаруживается после окончания курса.

Неэффективная терапия - отсутствие снижения виремии через 12 недель ПВТ.

(200 копий/мл = 400 МЕ/мл)

Не обнаружено или значение ниже предела чувствительности метода

Концентрация ниже линейного диапазона

Низкая виремия (наиболее благоприятный прогноз течения заболевания и эффективности терапии)

> 1,0х10 8 копий/мл

Выше линейного диапазона концентрации

В первые 2 недели болезни в сыворотке крови у инфицированных вирусным гепатитом С появляются антитела класса IgM (и сохраняются около 2 месяцев), в период ранней реконвалесценции в крови определяются антитела классов IgM и IgG, а в период поздней реконвалесценции - только IgG. Определение суммарных антител к различным антигенам вируса гепатита С является стандартом диагностики данного заболевания и используется в качестве скринингового метода.

Выработка антител к ВГС

IgM – начинают вырабатываться спустя 2 недели после развития клинической картины острого ВГС или обострения ХГС и обычно исчезают спустя 4-6 месяцев.

IgG – начинают определяться в период ранней реконвалесценции (11-12 неделя болезни), сохраняются весь период реконвалесценции.

Комплексное исследование, рекомендуемое пациентам с диагностированным вирусным гепатитом С для уточнения характера инфекционного процесса (определение генотипа и активности вирусемии и наличие и интенсивность антительного ответа), что является необходимым для выбора схемы этиотропной терапии.

Синонимы русские

Антитела к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С; вирусная нагрузка гепатита С.

Синонимы английские

HCV, генотипирование, РНК; HCV, РНК количественно, РНК ВГС.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.
Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Хронический гепатит С – это заболевание печени, вызванное вирусом, который разрушает клетки печени и при длительном течении может приводить к развитию цирроза и рака печени. Поэтому при выявлении вирусного гепатита С необходимо пройти обследование печени у гепатолога и начать противовирусное лечение.

На этапе предварительной диагностики сдают анализы крови, которые оценивают характеристики вируса, активность воспаления в печени.

Различают антитела к структурным (ядерным, core) и неструктурным (nonstructural, NS) белкам вируса. Целью их определения является установление активности вируса, вирусной нагрузки, вероятности хронизации процесса, степени повреждения печени.

Anti-HVC core IgG – это антитела, которые появляются при хронизации процесса, поэтому для определения острой фазы ХВГС не используются. Своей максимальной концентрации эти иммуноглобулины достигают к пятому-шестому месяцу болезни, а у длительно болеющих и не получающих лечения пациентов они определяются в течение всей жизни.

Anti-HVC IgМ являются антителами острого периода и говорят об уровне виремии. Их концентрация нарастает в течение первых 4-6 недель болезни, а после перехода процесса в хронический уменьшается вплоть до исчезновения. Повторно в крови больного иммуноглобулины класса М могут появляться при обострении заболевания.

Антитела к неструктурным белкам (Anti-HVC NS) выявляются в разные сроки болезни. Диагностически значимыми из них являются NS3, NS4 и NS5. AntiHVC NS3 – самые ранние антитела к вирусу ХВГС. Они являются маркерами острого периода болезни. По титру (количеству) этих антител определяют вирусную нагрузку на организм пациента.

Anti-HVC NS4 и NS5 – антитела хронической фазы. Считается, что их появление связано с поражением ткани печени. Высокий титр Anti-HVC NS5 указывает на наличие в крови вирусной РНК, а его постепенное снижение – на начало фазы ремиссии. Эти антитела длительное время после выздоровления присутствуют в организме.

Для определения длительности лечения следует установить генотип вируса. Также до начала противовирусной терапии необходимо определить исходную вирусную нагрузку (количество РНК ВГС).

Количественная нагрузка - ПЦР HCV - один из самых важных критериев, который позволяет оценить концентрацию вирусной РНК (вирусную нагрузку) в крови. Этот показатель выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы на миллилитр). Вирусная нагрузка показывает степень инфицирования и количество вирусов в крови.

Генотип вируса гепатита С – второй важнейший анализ, именно он помогает косвенно определить шансы на успешное лечение, подобрать необходимые дозы препаратов и длительность терапии. Это напрямую влияет на выбор препаратов для лечения. Генотип не меняется в течение жизни, и в редких случаях у человека может быть несколько генотипов.

Генотипов несколько: от 1 до 6 (иногда выделяют 11), при этом у первого есть подтипы - 1а и 1б, - которые могут лечиться разными препаратами в зависимости от тяжести течения и наличия сопутствующих заболеваний.

Исследование одномоментно позволяет охарактеризовать инфекционный процесс – определить генотип возбудителя, выраженность вирусемии и специфического иммунного ответа, что необходимо для планирования продолжительности и эффективности противовирусной терапии (ПВТ), а в отдельных случаях – для расчета дозы противовирусных препаратов.

Когда назначается исследование?

При подтвержденном вирусном гепатите С (независимо от формы инфекционного процесса) перед началом лечения.

Что означают результаты?

Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:

Важные замечания

Решение о длительности выборе препаратов, их дозах и сроках терапии может принять только лечащий врач на основании совокупности клинико-лабораторных и данных инструментального обследования (при необходимости).
Схемы терапии разрабатываются с учетом пола и возраста пациента, клинических и лабораторно-инструментальных данных.
У пациентов с хроническим гепатитом С (ХГС) при неполной или неправильной трактовке полученных лабораторных данных ПВТ может вызвать развитие гепатологических осложнений.
Применение генотипирования вируса позволяет не только выбрать эффективную схему, но и спрогнозировать ответ на нее: генотип 1 хуже поддается лечению, чем генотипы 2 и 3.

Читайте также: