Серодиагностика гриппа в ртга
Обновлено: 19.04.2024
Современные препараты для лабораторной диагностики гриппа и ОРВИ
И. В. Амосова, к.б.н., ведущий научный сотрудник лаборатории биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, “Научно-исследовательский институт гриппа” Минздрава России (ФГБУ “НИИ гриппа” МЗ РФ), ООО “Предприятие по производству диагностических препаратов” (ООО “ППДП”), Санкт-Петербург, Россия
На сегодняшний день грипп и другие острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ) остаются серьезной медицинской и социальной проблемой, о чём свидетельствуют высокие показатели заболеваемости и смертности, особенно среди детей, пожилых людей и пациентов с хроническими заболеваниями. Для организации эффективных процессов лечения, профилактики и надзора за гриппом необходимо своевременное проведение лабораторной диагностики, позволяющей выявить возбудителя инфекции. Всемирная организации здравоохранения (ВОЗ) рекомендует использовать для идентификации возбудителей ОРВИ методы иммунофлуоресценции (ИФ) и реакции торможения гемагглютинации (РТГА) наряду с выделением вирусов в культуре клеток или полимеразной цепной реакцией (ПЦР)1.
ООО “Предприятие по производству диагностических препаратов” (ООО “ППДП”) организовано в 2013 году с целью обеспечения учреждений здравоохранения препаратами для диагностики вирусов гриппа А, В и других ОРВИ: вирусов парагриппа 1, 2 и 3 типов, РС-вируса
и аденовирусов. Основной учредитель Предприятия – ФГБУ “НИИ гриппа” Минздрава России, выполняющий в качестве Федерального центра по гриппу одну из ключевых функций в системе надзора за заболеваемостью гриппом в России и являющийся признанным Национальным центром по гриппу ВОЗ в рамках глобального контроля этой инфекции.
В основе производства – научные разработки и многолетний опыт лаборатории биотехнологии диагностических препаратов НИИ гриппа, а также современные методы накопления, очистки и концентрации вирусов, иммунохроматографии, иммуноблоттинга, иммуноферментного и ИФ- анализа и методы гибридомной технологии, позволяющие создавать новые препараты моноклонального типа.
Предприятие выпускает и реализует следующие диагностические препараты:
Наименование препарата
Кол-во анализов
Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие гриппозные сухие (ИФ-Г):
грипп А (Н1N1)pdm 09
Ранняя диагностика ОРВИ по выявлению антигенов: вирусов гриппа А или В; адено- или РС-вирусов; вирусов парагриппа 1, 2 или 3 типа, вирусов герпеса 1 или 2 типов в клетках цилиндрического эпителия носа от больных с симптомами ОРВИ; обнаружение вирусных антигенов в препаратах клеточных культур, инфицированных материалами от больных.
Материалом для исследования служат мазки из носа, взятые от больных ОРВИ, содержащие клетки цилиндрического эпителия слизистой оболочки глубоких отделов носовой полости.
Иммуноглобулин диагностический флуоресцирующий аденовирусный антигексоновыйсухой (ИДФАГ)
Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие парагриппозные сухие (ИФ-ПГ):
парагрипп 1 типа
парагрипп 2 типа
парагрипп 3 типа
Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие
РС-вирусные сухие (ИФ-РС)
Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие герпетические сухие (ИФ-Герпес):
герпес 2 типа
Диагностикумы гриппозные для реакции торможения гемагглютинации сухие (ДИГ):
грипп А (Н1N1)pdm09
грипп В (Викторианская линия)
грипп В (Ямагатская линия)
Диагностика гриппозной инфекции по выявлению прироста антител в сыворотках реконвалесцентов, оценка коллективного иммунитета, оценка иммуногенности гриппозных вакцин, научные исследования.
Диагностикумы парагриппозные для реакции торможения гемагглютинации сухие (ДИ-ПГ):
парагрипп 1 типa
парагрипп 2 типа
парагрипп 3 типа
Наименование препарата
Кол-во анализов
Сыворотка диагностическая гриппозная для реакции торможения гемагглютинации сухая (СДГ):
грипп А(Н1N1)pdm 09
грипп В (Викторианская линия)
грипп В (Ямагатская линия)
Идентификация типов/ субтипов вирусов гриппа А и В, выделенных из материалов от больных, изучение антигенной структуры вирусного гемагглютинина, контроль специфичности штаммов вирусов гриппа.
Сыворотка диагностическая парагриппозная для реакции торможения гемагглютинации сухая (СД-ПГ):
парагрипп 1 типа
парагрипп 2 типа
парагрипп 3 типа
Иммуноферментная тест-система для определения антител класса IgG
к вирусу гриппа А (H1N1)pdm 09
к вирусу гриппа А (H3N2)
к вирусу гриппа B
к вирусу парагриппа 1 типа
к вирусу парагриппа 3 типа
Определение антител классов IgG в сыворотках людей, переболевших вирусными ОРВИ по приросту уровня специфических антител (IgG).
Материалом для исследования служат парные сыворотки крови от больных ОРВИ, взятые в первые 5 дней болезни и через 14-30 суток от начала заболевания.
Набор реагентов для культивирования клеток и выделения вирусов гриппа в культуре клеток
Выделение вирусов гриппа, надзор и быстрая расшифровки эпидемий гриппа.
Флуоресцирующие иммуноглобулины обеспечивают быструю (в течение 1,5-2-х часов) возможность непосредственной детекции вирусных антигенов в клинических материалах или в клеточных культурах, инфицированных материалами от больных.
Иммуноглобулины диагностические
флуоресцирующие гриппозные сухие
РУ № ФСР 2009/05255 от 09.07.2009 г.
Иммуноглобулин диагностический флуоресцирующий аденовирусный антигексоновый сухой
РУ № ФСР 2008/03940 от 26.12.2008 г.
Иммуноглобулины диагностические
флуоресцирующие парагриппозные сухие
РУ № ФСР 2009/05254 от 09.07.2009 г.
Иммуноглобулины диагностические
флуоресцирующие РС-вирусные сухие
РУ № ФСР 2009/05256 от 09.07.2009 г.
В лаборатории биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ “НИИ гриппа” МЗ РФ разработаны и широко используются в практике здравоохранения Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие сухие, которые представляют собой коньюгат очищенных противовирусных антител с флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ). Препараты имеют красящий титр не ниже 1:16, содержат консервант – мертиолат 1:10000, лиофилизированы, выпускаются во флаконах по 0,5 или 1 мл. Флаконы упаковывают в коробки. Количество флаконов в коробке от 1 до 5.В коробку вкладывают Инструкцию по применению. Срок годности препаратов – 2 года.
Диагностикумы гриппозные/парагриппозные для реакции торможения гемагглютинации сухие
Гриппозные диагностикумы для реакции торможения гемагглютинации (РТГА) используют в качестве подтверждающего теста при поступлении больных в стационар на 6-10 сутки заболевания, когда другие тесты (ИФЛ, ПЦР, выделение вируса) оказываются уже мало чувствительными.
Диагностикумы предназначены для субтиповой серодиагностики гриппа (по 4-х кратному приросту титров антител в сыворотках реконвалесцентов); контроля популяционного иммунитета населения; оценки иммуногенности живых и инактивированных гриппозных вакцин.
Препараты готовятся по оригинальным технологиям из антигенно актуальных штаммов, в соответствии с рекомендациями ВОЗ, не содержат инфекционного вируса, включают наполнитель, препятствующий сорбции антигенов на полистироловых планшетах. 1 мл препарата достаточно для тестирования 100 сывороток микрометодом РТГА.
Диагностикумы выпускаются в лиофилизированном виде, во флаконах по 1 мл. Флаконы упаковывают в коробки. Количество флаконов в коробке от 1 до 5. В коробку вкладывают Инструкцию по применению. Срок годности препаратов – 2 года.
Диагностикумы гриппозные для реакции торможения гемагглютинации сухие РУ № ФСР 2009/05253 от 09.07.2009 г.
Специфические сыворотки для идентификации возбудителей ОРВИ
Высокоспецифичные диагностические сыворотки предназначены для идентификации вирусов гриппа А (субтипов H1, H2, H3, H5, Н7, H9) и В (обеих современных эволюционных ветвей), а также других возбудителей ОРВИ в ИФА, реакциях торможения гемагглютинации и микронейтрализации.
Сыворотки выпускаются в лиофилизированном виде, во флаконах по 1 мл. Флаконы упаковывают в коробки. Количество флаконов в коробке от 1 до 5. В коробку вкладывают Инструкцию по применению. Срок годности препаратов – 2 года.
Сыворотка диагностическая гриппозная для реакции торможения гемагглютинации сухая РУ № ФСР 2009/05257 от 09.07.2009 г.
Иммуноферментные тест-системы (ИФТС) для определения антител класса IgG к ОРВИ и гриппу
Современные методы иммунодиагностики с определением классов и субклассов IgG открывают новые возможности в исследовании структуры иммунитета и формирования иммунопатологических состояний.
Характерными особенностями разработанных ИФТС являются:
• высокая чувствительность анализа;
• возможность использования микроколичеств сывороток (0,5 – 1 мкл);
• снижение трудоемкости анализа за счет исключения операций титрования сывороток;
• возможность индикации класс-специфических противовирусных антител;
• сокращение сроков проведения анализов.
Иммуноферментные тест-системы представляет собой 13-компонентный набор, основными реагентами которого являются очищенные вирусные антигены, позитивные и негативные контрольные образцы сывороток, а также конъюгаты моноклональных антител к IgG человека.
Тест-системы предназначены для детекции антител классов IgG в сыворотках людей, переболевших вирусными ОРЗ, рассчитаны на проведение 96 анализов, включая контрольные пробы. Предназначены для серодиагностики инфекций по определению достоверного прироста уровня специфических IgG.
Материалом для исследования служат парные сыворотки крови от больных ОРВИ, взятыми в первые 5 дней болезни и через 14-30 суток от начала заболевания.
Парные сыворотки от одного больного исследуют одновременно, в одной постановке реакции. Постановку реакций осуществляют в соответствии с прилагаемыми Инструкциями по применению. Срок годности ИФТС – 6 месяцев.
ООО “ППДП” оказывает информационную поддержку и консультационные услуги по всему ассортименту своей продукции, а также принимает участие в организации и проведении конференций, семинаров, и других научно-практических мероприятий на базе ФГБУ “НИИ гриппа” Минздрава России.
Поставить диагноз на грипп птиц можно путём выделения вируса и идентификации его в РСК, РН и РТГА, а также выявления специфических AT в процессе эпизоотии или по прошествии её (ретроспективная диагностика). В нашей стране биопромышленность выпускает 2 диагностических набора:
а) набор специфических АГ и сывороток к ним для диагностики гриппа птиц 13-и серотипов;
б) диагностический набор для идентификации вируса НБ и Ш (актуального эпизоотического типа).
Заражение куриных эмбрионов. Испытуемую суспензию инокулируют 9-10-дн КЭ (не менее 5 на одну пробу) в аллантоисную или амниотическую (лучше) полости общепринятым методом и инкубируют в течение 72 ч. Экстраэмбриональную жидкость каждого эмбриона раздельно проверяют на ГА-активность капельной РГА с 1 %-ной взвесью эритроцитов кур. При отсутствии положительной РГА проводят еще 3-5 слепых пассажей, используя для заражения КЭ эмбриональную жидкость предыдущего пассажа. Если титры ГА низкие, проводят таким же образом еще 2-3 дополнительных пассажа. Проба испытуемого материала считается отрицательной, если в 3-5 слепых пассажах не будет обнаружено ГА и патогенного действия вируса (гибели КЭ). При положительной РГА проводят идентификацию выделенного вируса.
Заражение культуры клеток. Вирус после 2-5 пассажей хорошо развивается в культуре фибробластов КЭ. ЦПД обычно проявляется через 24-48 ч (в зависимости от дозы и адаптации). Присутствие его устанавливают при помощи РГА и РГАд. Предложен ускоренный метод титрования инфекционности вируса гриппа в культуре клеток путем подсчета гемадсорбирующих клеток. Метод позволяет получить результат через 8 ч после заражения.
Биопроба на цыплятах. Испытуемую суспензию инокулируют цыплятам 2-3-месячного возраста. Летальную инфекцию у цыплят можно вызвать при любом методе заражения (подкожно, внутримышечно, в мозг, конъюнктиву) подтипами А1, А7 и А5. Заражение per os с кормом и водой удается непостоянно, лишь в случае высокой патогенности эпизоотического изолята гриппа. Зараженные цыплята, как правило, гибнут через 36-72 ч в зависимости от дозы и вирулентности возбудителя.
Индикация и идентификация вируса. Для этой цели широко используют методы ИФ, цитоскопию, биопробу (на птице и КЭ) и серологическую идентификацию. С помощью монАТ можно идентифицировать не только разные группы вирусов (ВГП и ПМВ), но и определять подтипы ВГП и серотипы ПМВ птиц, и даже штаммы внутри одного подтипа, а также локализацию компонентов вириона в зараженных клетках (МРВГП - МА клонов 1С6, 5С10, N:2 - МА клоны 303 и т.д.). На основе монАТ можно готовить диагностические препараты для выявления АГ и AT в РТГА, НИФ, РСК, ИФА и др. реакциях.
РГА. Для индикации вируса в патологическом материале можно использовать РГА. Надосадочную жидкость после центрифугирования суспензии проб из органов и тканей больной птицы, а также смывов исследуют в капельной или пробирочной РГА с 1%-ной суспензией эритроцитов кур или 0,5%-ной взвесью эритроцитов морской свинки. Реакцию учитывают через 20 мин и 1 ч. Специфичность определяют в РТГА.
Цитоскопия. Метод заключается в исследовании тканевых элементов в отпечатках, полученных со слизистой оболочки верхних дыхательных путей (лучше) и органов. Препараты высушивают и окрашивают одним из методов: по Романовскому, Пигаревскому, Быковскому и т. п. При окраске по Быковскому и Пигаревскому в цитоплазме клеток при гриппе обычно обнаруживают тельца-включения ярко-красного цвета; при окраске по Романовскому - фиолетового цвета. Внутриклеточные включения находят не только в клетках цилиндрического эпителия, но и в цитоплазме макрофагов, лейкоцитов и плоского эпителия. В настоящее время этот принцип исследования используется с применением люминесцентной микроскопии.
Метод простого флюорохромирования. На мазки-отпечатки из органов и смывов наносят 1-2 капли рабочего раствора акридина оранжевого (1:10000), покрывают покровным стеклом и свежий препарат (в течение 10 мин после приготовления) рассматривают в люминесцентном микроскопе. Ядра клеток выявляются по изумрудно-зеленому свечению, РНК плазмы клеток - в виде не резко ограниченных гранул красного или оранжевого цвета. В препарате, имеющем вирус гриппа, выявляются включения в виде четко отграниченных ярко-красных гранул в цитоплазме клеток.
Серологическая идентификация
Для идентификации гриппа млекопитающих и птиц наиболее простым и высоко достоверным методом является РТГА. РН - штаммоспецифическая и также высоко достоверная, но используется в диагностике значительно реже. Ее обычно применяют при некоторых неясных и спорных случаях.
Реакция связывания комплемента. Используют для определения типоспецифичности выделенного вируса, когда в РТГА не удается установить родственных связей между выделенным и эталонными штаммами вируса гриппа по антисывороткам к ним. В этом случае в РСК с эталонными иммунными сыворотками против вирусов гриппа типов А, В и С устанавливают типовую принадлежность штамма.
В последнее время для типирования нейраминидазы вируса начали применять РТНА, но в диагностической ветеринарной практике она пока еще не применяется. Ее используют, в основном, для изучения АГ связей различных штаммов вируса гриппа.
Реакция торможения гемагглютинации. Идентификацию испытуемого вируса проводят с набором эталонных штаммоспецифических гриппозных сывороток к его АГ вариантам. Для дифференциации в реакцию вводят сыворотку против вируса НБ. РТГА ставят микро- или макрометодом по общепринятой методике.
Иммуноферментный метод. Может быть использована как экспресс-метод диагностики гриппа птиц. Препараты готовят непосредственно ex tempore от убитой больной или свежепавшей птицы. Прямой метод ИФ позволяет определять АГ ВГП в мазках-отпечатках тканей птиц, идентифицировать АГ данного вируса из различных тканей организма, инкубационных яиц, печени зараженных эмбрионов и культур клеток фибробластов; выявить вирусный АГ даже в тех случаях, когда вирус из пораженных тканей выделить не удается.
В ветеринарной диагностической практике для идентификации выделенного вируса РДП не используют, так как необходимы концентрированные и очищенные АГ. В основном применяют ее для изучения АГ структуры вирусов гриппа. Разработаны наборы для ИФА с монАТ, непосредственно обнаруживающие ГА, нуклеокапсидный или матриксный белки вируса гриппа. Идентификацию вирусспецифической нуклеиновой последовательности предлагается осуществлять ПЦР с 2-мя типами праймеров (на основе генов неструктурного белка и ГА). Тест стандартизован для определения AT к ВГП в сыворотке крови у индеек.
Минимальные АГ различия между вариантами и родительским вирусом выявлялись только монАТ, продуцируемыми клетками гибридомы PEG-1 или фрагментами селезенки гипериммунных животных. МонАТ дают возможность точно проследить филогенетические взаимоотношения между вирусными штаммами в составе субтипа, а в сочетании с методами пептидного картирования и определения последовательности а.к. - выяснить молекулярную структуру АГ участка ГА.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Обнаружение анти-ГА, ВНА и КСА - надежный признак протекающей или уже прошедшей инфекции ГП в стаде.
РСК применяют для обнаружения АГ и AT в целях ранней и ретроспективной диагностики гриппа. Ставят с аллантоисными жидкостями КЭ или с очищенными диагностикумами. РДП широкого применения не нашла, так как необходимы высокие концентрации чистых АГ. Среди исследователей нет единого мнения о чувствительности этой реакции. Некоторые авторы указывают, что чувствительность РДП сравнительно невысока, поскольку достоверные положительные результаты получали лишь при исследовании сывороток с титром AT в РТГА 1:80 и выше.
Реакция радиального гемолиза. В настоящее время используется для сероэпидемиологических исследований и при оценке эффективности противогриппозных вакцин. РРГ с ВГ А обладает выраженной штаммовой специфичностью: диаметр зон гемолиза с гомологичными АГ при исследовании сывороток хорьков, зараженных 6-ю различными вирусами, были в 1,5-3 раза больше, чем с гетерологичными. При правильном подборе штамма РРГ может быть с успехом использована для определения анти-ГА.
Показано хорошее совпадение результатов титрования AT в ELISA, РСК и ИФ. Однако в ELISA значительно выше (титр 1:481-1:1520), чем в РСК и РИФ. Сенсибилизацию лунок панелей проводят РНК-АГ вируса гриппа А. Предложен новый метод приготовления AT эритроцитарных диагностикумов к вирусам гриппа, которые с успехом могут быть изготовлены на основе любых штаммов вируса гриппа. Они позволяют определять типовую принадлежность эпизоотических и межэпизоотических штаммов ВГП, свиней и лошадей. В практической работе врачу ветеринарной лаборатории, возможно, придется встретиться не только с гриппом кур и уток, но и с гриппом индеек.
Таблица 107 - Лабораторные методы дифференциации гриппа и ньюкаслской болези птиц
Умея диагностировать грипп кур и уток, имея набор диагностикумов, врач лаборатории при необходимости сможет поставить диагноз при гриппозной инфекции индеек.
При респираторных вирусных болезнях КРС, свиней и птиц (грипп, парагрипп, РС-инфекция) разработан направленный тест. Это новый иммуноферментный мембранный тест быстрого обнаружения вирусов гриппа в носоглоточных смывах. Чувствительность направленного метода Flu-А составляла 90%. С помощью этого теста более легко обнаруживается клеточно-ассоциированный АГ, присутствующий в клинических пробах, чем свободный вирус. С помощью Flu-А теста удалось обнаружить вирусы гриппа А птиц (субтипы ГА Н3 и Н6) и свиней (H1N1) в клоачных смывах и гомогенатах.
Дифференциальная диагностика. КЧП (H7N1) и другие формы гриппа птиц следует отличать от НБ, ИБ, ИЛТ, гемофилеза и респираторного микоплазмоза. Для идентификации вирусов НБ и КЧП используется диагностический набор.
В сомнительных случаях для дифференциального диагноза ставят РН на КЭ и заражают птиц, иммунных к вирусу НБ.
Лабораторная диагностика гриппа свиней
Грипп свиней (инфлюэнца свиней, энзоотическая бронхопневмония) - высоко контагиозная, остро протекающая болезнь, возникающая в холодное время года и характеризующаяся внезапным началом, резко выраженной лихорадкой, общей слабостью и поражением органов дыхания. Вирус гриппа свиней (ВГС) может вызвать заболевание людей и, наоборот, установлена возможность заражения свиней вирусом гриппа человека.
Выделение вируса. Выделение вируса на лабораторных животных. Используют хорьков, белых крыс, но чаще белых мышей. В качестве исходного материала для выделения вируса используют кусочки лёгкого, трахеи, бронхиальный экссудат, носовые смывы от больных свиней.
Мышей заражают интразально под эфирным наркозом и в течение 5- 7 дн наблюдают за ними, обращая внимание на общее состояние животных. Если животные не гибнут, их убивают. На вскрытии отмечают изменения в лёгких. Затем проводят ещё 3-4 пассажа. По мере адаптации вирулентность вируса для белых мышей значительно возрастает, они гибнут на 4-7-й, а иногда на 14-й день после заражения.
Выделение вируса в культуре клеток. Культура клеток почек поросёнка - универсальная биологическая система, применяя которую можно выделить вирус от больных свиней. Для быстрой индикации вируса гриппа в 1-слойных культурах почечного эпителия поросят используют РГАД с эритроцитами курицы, морской свинки или 0-группы человека. ГАд, положительная РГА, а также дегенеративные изменения клеток указывают на присутствие вируса в исследуемом материале. Вирус, вызвавший явление ГАд, должен адаптироваться к КЭ и вызывать накопление ГА.
Обнаружение вируса в РГА. При постановке РГА обычно используют эритроциты кур или морской свинки. Берут 0,5 мл носового смыва, добавляют 0,5 мл 0,5%-ной взвеси эритроцитов, тщательно встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 1-2 ч. Результаты реакции учитывают общепринятым методом. Чувствительность реакции можно повысить, увеличив объем испытуемых смывов. РГА со смывами используют только при массовом заболевании гриппом, так как процент специфических реакций не превышает 30.
Выявление противовирусных антител ( AT ) в сыворотке крови. РТГА. РСК. РИФ. Иммуносорбционные методы выявления противовирусных антител.
Более простой и доступный подход — выявление противовирусных антител ( AT ) в сыворотке. Образцы крови необходимо отбирать дважды: немедленно после появления клинических признаков и через 2~3 нед. Чрезвычайно важно исследовать именно два образца сыворотки. Результаты однократного исследования нельзя считать окончательными из-за невозможности связать появление AT с настоящим случаем. Вполне возможно, что эти AT циркулируют после предшествующей инфекции. В подобной ситуации роль исследования сыворотки, полученной в период рекон-валесценции, трудно переоценить. На наличие заболевания в период отбора первой пробы указывает не менее чем четырёхкратное увеличение титра AT, выявленное при исследовании второй пробы.
Перечисленные ниже методы не позволяют дифференцировать антитела ( AT ), образующиеся во время болезни и циркулирующие после выздоровления (продолжительность этого периода вариабельна для различных инфекций). Поскольку для адекватной диагностики необходимо подтвердить достоверное увеличение титров AT в двух пробах, то первую пробу исследуют в острой фазе, а вторую — в период выздоровления (через 2-3 нед). Полученные результаты носят ретроспективный характер и более пригодны для проведения эпидемиологических обследований.
РТГА выявляет AT, синтезируемые против гемагглютининов вирусов (например, вируса гриппа). Метод позволяет легко выявлять подобные антитела ( AT ) в сыворотке больного.
РСК — основной метод серодиагностики вирусных инфекций (среди доступных). Реакция выявляет комплементсвязывающие IgM и IgG, но не дифференцирует их; для оптимизации получаемых результатов постановка реакции требует определённых навыков персонала.
РИФ. При возможности получить биоптат инфицированной ткани и доступности коммерческих наборов AT, меченных флюоресцеином, диагноз может подтвердить реакция прямой иммунофлюоресценции. Постановка реакции включает инкубацию исследуемой ткани с AT, их последующее удаление и люминесцентную микроскопию образца.
Иммуносорбционные методы выявления противовирусных антител
Иммуносорбционные методы (например, ИФА и РИА) более информативны, поскольку выявляют IgM и IgG по отдельности, что позволяет делать определённые выводы о динамике инфекционного процесса или состоянии реконвалесценции. Для выявления AT известный Аг сорбируют на твёрдом субстрате (например, на стенках пробирок, пластиковых микропланшетах, чашках Петри) и вносят различные разведения сыворотки пациента. После соответствующей инкубации несвязавшиеся AT удаляют, вносят антисыворотку к Ig человека, меченную ферментом, повторяют процедуру инкубирования и отмывания несвязанных AT и вносят какой-либо хромогенный субстрат (чувствительный к действию фермента). Поскольку изменение окраски пропорционально содержанию специфических AT, то вполне возможно определение их титра спектрофотометрическим способом. В диагностике ВИЧ-инфекции наи- большее распространение нашёл метод иммуноблотннга.
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.
Диагностика гриппа. Лечение гриппа. Профилактика гриппа.
Материалы для исследования при гриппе — смывы и мазки из носоглотки, мазки-отпечатки из носовой полости и кровь.
Основные методы диагностики гриппа — вирусоскопические, вирусологические и серологические. К методом экспресс-диагностики гриппа относят определение Аг вируса в мазках-отпечатках из носа и смывов носоглотки в РИФ и ИФА.
Выделение возбудителя гриппа проводят заражением 10-11-суточных куриных эмбрионов или, реже, различных клеточных культур. Вирусы гриппа проявляют слабый цитопатический эффект и чаще определяют феномен гемадсорбции. Типовую принадлежность вирусов идентифицируют в РСК; подтип гемагглютинина — в РТГА (вирусы гриппа агглютинируют эритроциты человека и различных животных); подтип нейраминидазы — в реакции ингибирования активности фермента.
Лечение гриппа
Препараты выбора при лечении гриппа —- амантадин или ремантадин, ИФН и его индукторы, противогриппозный у-глобулин. Терапевтические мероприятия следует начинать как можно раньше.
Профилактика гриппа. Иммунопрофилактика гриппа.
Разработаны методы активной и пассивной иммунопрофилактики гриппа. Для пассивной иммунизации применяют противогриппозный иммуноглобулин человека, приготовленный из крови доноров, иммунизированных гриппозными вакцинами.
Для активной иммунизации против гриппа применяют живые и инактивированные вакцины. Живые аттенуироеанные вакцины проявляют большую иммуногенность. Инактивированные вакцины включают вирионные (приготовлены из высоко-очищенных культур вирусов), субвирионные или расщеплённые (получают обработкой высоко-очищенных культур вирусов детергентами), субъединичные (содержат только гемагглютинин и нейраминидазу) препараты. Вакцинацию осуществляют в периоды наибольшего риска развития эпидемий. Она в большей степени показана лицам младшего и преклонного возраста, страдающим обструктивными лёгочными и сердечно-сосудистыми заболеваниями, а также сотрудникам ЛПУ.
Применение убитых вакцин от гриппа требует ежегодной ревакцинации; их эффективность не превышает 60-70%. Поскольку антигенные вариации возбудителя наблюдают часто, то набор Аг соответствующего вируса для иммунизации может быть определён только после начала вспышки заболевания.
Клиника и диагностика гриппа. Современное лечение гриппа
Болезнь чаще всего начинается внезапно, ознобом и быстрым повышением температуры до высоких цифр, головной болью с локализацией в области лба и глазниц, мышечной болью, резкой слабостью. Ведущим синдромом является общая интоксикация, катаральные явления со стороны верхних дыхательных путей менее выражены. Интоксикация достигает апогея в первые-вторые сутки. В тяжелых случаях появляются головокружение, тошнота, возможны рвота, носовые кровотечения, нарушения сна, сознания, судороги.
Объективные данные обычно скудные: легкая одутловатость и гиперемия лица, глаза блестящие, кожа горячая и влажная. В первый день-тахикардия, а затем брадикардия; тоны сердца приглушены, АД вначале повышено, а позднее понижено. Несколько позднее присоединяются катаральные воспаления слизистых оболочек верхних дыхательных путей: насморк со скудным отделяемым, заложенность носа, першение в горле, болезненность за грудиной (трахеит), сухой болезненный кашель, охриплость, чувство стеснения в груди, одышка. Слизистые оболочки носа, глотки, гортани, особенно трахеи отечны и гиперемированы, иногда с кровоизлияниями.
В неосложненных случаях температура постоянного или ремитирующего характера длится 3-4 дня, реже 6-7 дней и снижается литически. Иногда температурная кривая имеет двугорбый характер.
Клинические проявления могут варьировать, что наиболее полно отражено в классификации, предложенной Ф.Г. Эпштейном. В зависимости от типа вируса, возраста больных и иммунитета формы гриппа могут быть бессимптомными (афебрильная форма гриппа), без выраженных катаральных явлений (акатаральная форма), тяжелые гиперпиретические с быстрым летальным исходом.
Наиболее частыми осложнениями гриппа являются бактериальные суперинфекции (пневмонии, другие очаговые инфекции).
В практике используют чаще всего серодиагностику, применяя метод исследования парных сывороток (кровь у больного берется в первые дни и спустя 5-7 дней); осуществляют постановку РТГА, РСК и др. Возможна экспресс-диагностика: берут мазки-отпечатки со слизистой носа и проводят иммунолюминес-центное исследование - свечение вируса гриппа наблюдается в цитоплазме, тогда как при аденовирусных инфекциях- в ядре. Для определения циркулирующего штамма вируса в данном эпидемическом сезоне проводят вирусологические исследования смывов из ротоглотки и материала, полученного тампоном из носа. Проводят заражение куриных эмбрионов и культур тканей.
Современное лечение гриппа
Во время лихорадки и спустя 2 дня больной гриппом должен соблюдать постельный режим. При гриппе, независимо от тяжести течения, работающим выдают лист нетрудоспособности на 5 дней, при необходимости его продлевают. Лечение основной массы больных проводится на дому. Показанием для госпитализации является тяжелое течение гриппа, наличие сопутствующих заболеваний легких, сердечнососудистой системы и др., при которых высока степень их обострений.
Рекомендуется молочно-растительная витаминизированная (особенно витамином С) диета, обильное питье теплой подкисленной жидкости (чай с лимоном, клюквенный морс, фруктовые соки без консервантов). Показано горячее питье из плодов малины, калины, эвкалипта, цветов ромашки и др., а также горячее молоко с медом.
Назначение противовирусных препаратов показано при тяжелом течении гриппа и больным гриппом с сопутствующими заболеваниями, обострение которых может представлять угрозу для жизни больного. При гриппе А хорошо зарекомендовали препараты этиотропного действия: ремантадин внутрь по схеме. В самом начале болезни показано применение человеческого лейкоцитарного или рекомбинантного интерферона по 3-5 капель в каждый носовой ход через 1-2 ч в течение 2-3 дней. Для лечения ринита используют оксалиновую мазь. При затрудненном носовом дыхании галазолин, нафтизин, эфедрин в виде капель в носовые ходы. Жаропонижающие препараты назначают только при гиперпирексии (аскофен, аспирин, парацетамол и др.); при температуре до 38,5°С назначение их нецелесообразно, так как лихорадочная реакция носит защитно-приспособительный характер (усиливается, в частности, выработка эндогенного интерферона).
Всем больным гриппом показано назначение поливитаминов, особенно аскорбиновой кислоты до 1,0 г в сутки. При мучительном кашле - кодтерпин, коделак, либексин и др. При нарушении сна - микстуру Бехтерева, валокордин.
Проводят дезинтоксикационную терапию: полиглюкин, реополиглюкин, 5% раствор глюкозы, гемодез, плазму в объеме парентерально вводимой жидкости не более 500-800 мл в сутки. Назначают сердечно-сосудистые препараты (коргликон, кордиамин, солюкамфокаин и др.); оксигенотерапию, при геморрагических проявлениях - аскорутин.
Антибактериальные средства назначают только при осложненных формах гриппа; назначение антибиотиков с целью профилактики осложнений недопустимо, так как они профилактическим действием не обладают.
Читайте также: