Свиной грипп диагностика лабораторная диагностика
Обновлено: 19.04.2024
Российские эпидемиологи создают отечественную диагностическую систему для диагностики"свиного гриппа". Об этом рассказал в интервью корр.ИТАР-ТАСС директор ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора академик Валентин Покровский.
"Мы ожидаем доставки вирусов, сывороток и тест-систем по линии Всемирной организации здравоохранения /ВОЗ/, чтобы создать отечественную тест-систему на распознавания штамма вируса гриппа А/Н1N1 "Калифорния 042009", - рассказал ученый. Он пояснил, что сейчас имеются тест-системы для определения обычного вируса Н1N1, однако в данном случае они не подходят.
"Именно нашему институту предстоит заниматься вопросами диагностики", - сообщил академик, напомнив, что ЦНИИ эпидемиологии занимался диагностикой атипичной пневмонии и птичьего гриппа. "Думаю, что в течение недели после поступления вирусных культур мы сможет создать тест-систему", - уточнил Покровский.
Ученый считает "вполне реальной" возможность создания вакцины против вируса "свиного гриппа". "Российские профильные научные учреждения могут создать такую вакцину, это не представляется крайне сложным", считает Валентин Покровский. По его мнению, возможно, имея нынешнюю вакцину против обычного вируса Н1N1, заменить в ней основной субстрат.
Ситуацию с распространенностью "свиного гриппа" академик считает крайне серьезной. Сегодняшнее объявление ВОЗ о присвоении пятого уровня опасности, по мнению Покровского, свидетельствует об этом. На памяти 80-летнего академика нет ни одного случая, когда бы ВОЗ объявила пятый уровень.
"Заболеваемость распространилась уже на девять стран, а это преддверие пандемии",- сказал он. "Еще месяц назад я говорил о том, что грипп птиц - не самое страшное. Настоящая опасность - это когда вирус переходит на млекопитающих", - напомнил Покровский.
Согласно квалификации ВОЗ, всего уровней опасности шесть. На первом - третьем уровне заболеваемость регистрируется в основном среди животных, среди людей лишь несколько случаев. На четвертом уровне констатируется устойчивая передача инфекции от человека к человеку. Пятый уровень характеризуется распространением вируса от человека к человеку не менее, чем в двух странах в масштабах, когда болеют целые населенные пункты.
"Это является мощным сигналом того, что пандемия неизбежна", - говорится в документах ВОЗ. "Это также означает, что времени на сдерживающие меры осталось очень мало", - определяет пятый уровень ВОЗ. Шестой уровень, если до него дойдет, будет означать глобальную пандемию. Пандемией называется эпидемия, охватывающая большую часть страны или континента.
Сейчас "свиной грипп" поразил уже девять стран, заражены 2,5 тысячи человек, более 150 умерли.
Выявление вируса гриппа серотипов А и В (Influenza virus A/B), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (РНК) вируса в образце биоматериала.
Синонимы русские
Синонимы английские
Influenza serotypes A/B, RNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокроту.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Influenza virus – это оболочечный вирус, характеризующийся наличием сегментированного негативного РНК-генома и нуклеокапсида в форме спирали. Он относится к семейству Orthomixoviridae. На основании структурных различий нуклеопротеида выделяют 3 серотипа Influenza: A, B и С. Серотип A встречается как людей, так и у животных, в то время как варианты B и C поражают преимущественно людей. Именно серотип А ответственен за подавляющее большинство случаев сезонных (эпидемических) и пандемических вспышек гриппа.
Идентификация вируса гриппа должна быть осуществлена в кратчайшие сроки, что связано с высокой заразностью этого заболевания. Кроме того, эффективность противовирусных препаратов максимальна при их назначении в первые 48 часов после инфицирования, что также диктует необходимость своевременной постановки окончательного диагноза. Среди многих "быстрых" диагностических тестов особое место занимает полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (РТ-ПЦР). Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в мокроте) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Благодаря высокой чувствительности и специфичности метода, а также возможности получить результат в наболее короткие сроки, РТ-ПЦР заменила другие, применяемые ранее, методы диагностики гриппа: выделение вируса в культуре клеток, а также серологические исследования и иммуноферментный анализ.
В отличие от других тестов, чувствительность исследования РТ-ПЦР практически не изменяется при взятии материала на фоне начатой терапии противовирусными препаратами. Это связано с тем, что в реакции выявляется не сам вирусный агент, а фрагмент вирусной ДНК. По этой же причине положительный результат исследования не всегда указывает на наличие живого вируса (репликацию) и не всегда означает, что пациент остается заразным для окружающих.
В отличие от других лабораторных тестов (в первую очередь, экспресс-тестов для определения антигена вируса гриппа), результат РТ-ПЦР в меньшей степени зависит от распространенности гриппа среди населения. РТ-ПЦР характеризуется редкими ложноположительными и ложноотрицательными результатами как во время эпидемии, так и в период низкой заболеваемости гриппом.
При обследовании пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции верхних дыхательных путей следует выполнить анализ отделяемого носо/ротоглотки. При обследовании пациента с признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей анализ мазков из зева и носа необходимо дополнить исследованием мокроты. Исследование мокроты также должно быть осуществлено при отрицательном результате, который дал анализ отделяемого верхних дыхательных путей у пациента с клиническими признаками гриппа. Следует повторить РТ-ПЦР при отрицательном результате исследования мокроты у пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей.
Для более точной диагностики Influenza рекомендуется сочетание РТ-ПЦР с дополнительными общеклиническими исследованиями. Кроме того, необходимо исключить бактериальную суперинфекцию.
Типирование Influenza virus A (H1N1, H3N2) – идентификация субтипов вируса гриппа типа А путем качественного выявления в исследуемом материале вирусной нуклеиновой кислоты (РНК).
Синонимы русские
Идентификация субтипов H1N1 и H3N2 вируса гриппа А методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР).
Синонимы английские
Influenza virus A RT-PCR subtyping, Influenza virus reverse transcription PCR test.
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокрота.
Общая информация об исследовании
Вирус гриппа относится к РНКсодержащим вирусам. Род вирусов гриппа включает три типа вирусов: А, В и С. Вирусная частица имеет сферическую форму, в центре которой находится генетический материал вируса – РНК, а в оболочке присутствуют сложные белки – гемагглютинин (Н) и нейраминидаза (N). Для вирусов гриппа типа А характерна постоянная изменчивость этих поверхностных белков: на данный момент известно 15 вариантов гемагглютинина и 9 вариантов нейраминидазы. Их сочетание в определенной комбинации определяет субтип вируса. Вирусы субтипов H1N1 и H3N2 вызывают сезонный грипп человека.
Попадая в организм человека, вирус гриппа проникает в клетки эпителия слизистой оболочки дыхательных путей и размножается в них. Пораженные вирусом клетки дегенерируют, погибают и отторгаются. Таким образом, в отделяемом дыхательных путей (слизь, мокрота и т.п.) присутствуют погибшие эпителиальные клетки вместе с вирусными частицами.
Идентификация субтипа вируса проводится методом полимеразной цепной реакции. Принцип метода основан на обнаружении в материале специфичных фрагментов вирусной РНК, их избирательном синтезе с образованием огромного числа копий, что позволяет их легко детектировать, в том числе визуально. К преимуществам метода ПЦР можно отнести:
прямое определение наличия возбудителя – выявление специфического участка РНК возбудителя дает прямое указание на присутствие вируса;
высокую специфичность – в исследуемом материале идентифицируется уникальный, характерный только для данного вируса фрагмент РНК;
высокую чувствительность – ПЦР позволяет обнаружить возбудитель, даже если его исходная концентрация в исследуемом материале чрезвычайно мала.
Однако стоит отметить, что обнаружение вирусной РНК методом ПЦР не обязательно указывает на обнаружение жизнеспособного вируса или продолжающееся его размножение.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
При нетипичных проявлениях заболевания;
при высоком риске осложнений от гриппа (возраст более 65 и менее 2 лет, беременные, а также женщины в период первых двух недель после родов, лица с хроническими заболеваниями легких, сердца, почек, пациенты с иммунодефицитом или гематологическими заболеваниями);
при идентификации возбудителя у пациентов, заболевших вне эпидемиологического сезона.
Что означают результаты?
Референсные значения: не обнаружено.
Положительный результат – если искомый фрагмент вирусной РНК обнаружен - инфицирование вирусом гриппа А определенного субтипа.
Отрицательный результат – если искомый фрагмент вирусной РНК не обнаружен – отсутствие инфекции.
Что может влиять на результат?
Количество дней, прошедшее от начала болезни (после 4 дней возрастает вероятность необнаружения вируса).
Исследуемый образец – при инфекции нижних дыхательных путей вирус может не выявляться в образце, полученном из верхних дыхательных путей (мазки из носа, ротоглотки). В таких случаях необходимо повторить анализ с исследованием отделяемого нижних дыхательных путей.
Важные замечания
- У иммунокомпетентных лиц с неосложненным гриппом вирусовыделение в верхних дыхательных путях, как правило, значительно уменьшается после 4 дней болезни, соответственно, снижается вероятность выделения возбудителя. Поэтому образцы для исследования у таких пациентов должны быть получены в первые четыре дня заболевания, когда выделение вируса максимально. И напротив, у пациентов с ослабленным иммунитетом и при инфекции нижних дыхательных путей (вирусная пневмония) выделение вируса в бронхиальный секрет сохраняется дольше.
- Ожидание результата исследования или отрицательный результат при очевидной клинической картине не должны быть препятствием для назначения противовирусной терапии.
Также рекомендуется
Общий анализ крови с лейкоцитарной формулой
Influenza virus A/H1, РНК [реал-тайм ПЦР]
Mycoplasma pneumoniae, ДНК [ПЦР]
Adenovirus, ДНК [реал-тайм ПЦР]
Streptococcus pneumoniae, ДНК [реал-тайм ПЦР]
Кто назначает исследование?
Инфекционист, терапевт, врач общей практики, педиатр, эпидемиолог.
Литература
Инфекционные болезни: национальное руководство / Под ред. Н. Д. Ющука, Ю. Я. Венгерова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. С. 701-710.
Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство: в 2 т. – T. II / Под ред. В. В. Долгова, В. В. Меньшикова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. С. 649-653.
Guidance for Clinicians on the Use of RT-PCR and Other Molecular Assays for Diagnosis of Influenza Virus Infection by Centers of Disease Control and Prevention, U.S. Department of Health and Human Services, 2016.
Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Page 1316.
Сам вирус свиного гриппа был открыт в 1930 году Ричардом Шоупом (США). В течение 50-60 лет данный вирус встречался и циркулировал только среди свиней в Северной Америке и Мексике. Затем свиной грипп регистрировался эпизодически у человека, в основном у работников свиных ферм, ветеринаров.
Все мы помним последнюю нашумевшую эпидемию свиного гриппа в 2009 году (так называемую Калифорнию/2009), о чем эмоционально и настойчиво информировали население средства массовой информации. Эпидемия распространялась с марта 2009 года.
Наибольшая восприимчивость отмечалась среди группы лиц от 5 до 24 лет, на втором месте дети до 5 лет. В ходе эпидемии вирусу присвоен 6 класс опасности (то есть регистрация пандемии свиного гриппа, который легко передается от человека к человеку, а болезнь захватывает многие страны и континенты).
Существует несколько подтипов вируса гриппа у свиней (H1N1, H1N2, H3N2, H3N1), однако высокопатогенные свойства и способность передаваться от человека к человеку приобрел только подтип H1N1.
Вирус гриппа А(H1N1) – результат скрещивания человеческого вируса гриппа А (H1N1) и вируса свиного гриппа, в итоге вирус мутировал и стал высокопатогенным, а называется он – пандемичный вирус Калифорния/2009.
Также как и обычный вирус гриппа человека, пандемичный вирус имеет в оболочке гемагглютинин (способствует прикреплению вируса к клетке) и нейраминидазу (способствует проникновению вируса внутрь клетки).
Причины распространения свиного гриппа
Источник инфекции - свиньи (больные или носители вируса) и больной человек. Больной человек становится заразным за сутки до появления симптомов заболевания и еще в течение недели болезни. Соответственно, большое эпидемическое значение имеют потенциальные больные в конце периода инкубации. До 15% больных на фоне лечения продолжают выделять вирус в течение 10-14 дней.
- аэрогенный (воздушно-капельный путь) – опасны выделения пациента при чихании, кашле – в диаметре 1.5-2 метра;
- контактно-бытовой – опасны выделения пациента на руках окружающих, а также на предметах обихода (столы, поверхности, полотенца, чашки) – вирус сохраняет свои свойства в течение 2х и более часов (занести можно вирус с рук на слизистые ротовой полости и глаз).
Восприимчивость к инфекции всеобщая. Существуют группы риска по развитию тяжелых форм свиного гриппа:
- дети до 5 лет;
- взрослые старше 65 лет;
- беременные женщины;
- лица с сопутствующими хроническими заболеваниями (хронические легочные заболевания, онкология, заболевания крови, болезни печени, мочевыводящей системы, сердца, сахарный диабет, а также инфекционные иммунодефициты, например, ВИЧ).
Симптомы свиного гриппа
Клинические симптомы свиного гриппа схожи с симптомами обычного сезонного гриппа с небольшими особенностями.
Другая группа жалоб связана с развитием респираторного синдрома (сухой кашель, выраженное першение в горле, чувство нехватки воздуха), а также вероятность быстрого развития одного из осложнений – развитие воспаления легких на ранних сроках (2-3й день болезни).
Отличием от сезонного гриппа является наличие у 30-45% больных диспепсического синдрома – у больных появляется постоянная тошнота, неоднократная рвота, нарушение стула.
Проявления тяжелых форм свиного гриппа
В первые дни болезни интенсивные головные боли, боли в глазных яблоках, светобоязнь, которая нарастает при движении глаз. Возможно развитие серозного менингита, энцефалита. Мышечные боли являются одним из выраженных симптомов болезни.
Одним из опасных осложнений при свином гриппе является развитие пневмонии .
Воспаление легких может явиться следствием воздействия вируса гриппа (первичная; может быть связана с присоединением вторичной бактериальной флоры (вторичная); может быть следствием действия и вируса и сопутствующего наслоения бактериальной флоры (смешанная).
Первичная пневмония развивается на вторые-третьи сутки от начала заболевания и характеризуется развитием симптомов острой дыхательной недостаточности: больной часто дышит (около 40 дыханий в минуту при норме - 16), в акте дыхания активно участвуют вспомогательные мышцы (диафрагма, мышцы живота), выраженный сухой или малопродуктивный кашель (отделяемое слизистое и прозрачное), выраженная одышка, посинение кожных покровов (цианоз). При выслушивании легких: влажные хрипы в нижних отделах легких преимущественно на высоте вдоха, притупление перкуторного звука при простукивании легких.
Нередко первичные пневмонии приводят к образованию респираторного дистресс-синдрома (развитие отека легкого) с возможным смертельным исходом.
Вторичная пневмония возникает на 6-10 день от начала заболевания. Чаще всего имеет место пневмококковая обсемененность (у 45% больных), реже золотистый стафилококк (не более 18%), а также гемофильная палочка.
Смешанные пневмонии имеют клинические симптомы и одной, и второй пневмонии, протекают длительно (проградиентно), трудно поддаются лечению.
Другие осложнения свиного гриппа включают в себя:
- Одышка и усиление ее в течение суток;
- Боли в грудной клетке при дыхании и кашле;
- Выраженное головокружение, появляющиеся внезапно;
- Периодически спутанное сознание (забывчивость, выпадение отдельных событий из памяти);
- Многократная и обильная рвота;
- Вторая волна с температурой, кашлем, одышкой.
Иммунитет после перенесенного свиного гриппа типоспецифический и непродолжительный (1 год).
Диагностика свиного гриппа
Предварительная диагностика затруднительна по причине схожести симптомов болезни с обычным сезонным гриппом. В помощь доктору будут следующие особенности:
- контакт с больным гриппом, а также приезд из эндемичной по свиному гриппу зоны (страны Северной Америки);
- жалобы пациента на желудочно-кишечные расстройства на фоне температуры и респираторного синдрома;
- невыраженные или отсутствие болей в горле на фоне сильного кашля преимущественно сухого;
- развитие на 2-3 сутки воспаления легких с характерными симптомами (описано выше).
Окончательная диагностика возможна после лабораторного подтверждения болезни:
- ПЦР-диагностика образцов носоглоточной слизи для выявления РНК вируса гриппа А (H1N1) Калифорния/2009;
- Вирусологический метод посева носоглоточной слизи, мокроты на определенные среды.
Лечение свиного гриппа
Основная цель лечения – снизить количество больных с тяжелым и осложненным течением свиного гриппа.
1. Организационно-режимные мероприятия – на момент постановки предварительного диагноза госпитализация проводится по клиническим показаниям (тяжелые формы, а также среднетяжелые у детей, лиц преклонного возраста и лиц с хроническими сопутствующими заболеваниями). При лабораторном подтверждении диагноза свиного гриппа проводится обязательная госпитализация с назначением специфической терапии. На весь лихорадочный период и 5-7 дней нормальной температуры назначается постельный режим с целью профилактики осложнений.
Ваши действия при подозрении на свиной грипп:
- При обнаружении симптомов свиного гриппа оставаться дома, не выходить в места скопления людей.
- Дома оградить окружающих Вас близких от распространения инфекции – надеть маску и менять ее каждые 4 часа.
- Вызвать врача на дом. Если вы приехали из эндемичных стран (Мексика, США), то скажите об этом врачу.
Для усиления сопротивляемости организма показан физиологически полноценный рацион с достаточным количеством белка и повышенным содержанием витаминов А, С, группы В. Для снижения лихорадки показан прием достаточного количества жидкости (лучше морсы из черной смородины, шиповника, черноплодной рябины, лимона). Все продукты назначаются в теплом виде, избегаются острые, жирные, жареные, соленые, маринованные блюда.
2. Медикаментозная терапия включает:
Противовирусные средства – осельтамивир (Тамифлю) и занамивир (Реленза), которые существенно влияют на выход новых вирусных частиц из клеток, что ведет к прекращению размножения вируса.
Прием тамифлю и реленза рекомендуется в следующих случаях:
1) Если у пациента есть один из перечисленных симптомов (высокая температура, заложенность носа, кашель, одышка);
2) Выделенный лабораторно вирус гриппа А/2009 (H1N1);
3) Возрастная группа младше 5 лет;
4) Лица преклонного возраста - старше 65 лет;
5) беременные женщины;
6) людям с тяжелыми сопутствующими заболеваниями и иммунодефицитом;
Обычно курс лечения составляет 5 дней, иногда больше в зависимости от тяжести.
Легкие и среднетяжелые формы свиного гриппа допускают назначение следующих противовирусных препаратов – арбидол, интерферон альфа 2b (гриппферон, виферон), интерферон альфа 2а (реаферон липинд) и гамма-интерферон (ингарон), ингавирин, кагоцел, циклоферон.
При возникновении пневмонии бактериального характера назначаются антибактериальные препараты (цефалоспорина III-IV поколения, карбапенемы, фторхинолоны IV поколения, ванкомицин).
Патогенетическая терапия включает инфузионную дезинтоксикационную терапию, глюкокортикостероиды, симпатомиметики с целью снижения проявлений интоксикации, облегчения дыхания (проводится в стационаре). В домашних условиях при легкой форме свиного гриппа показано обильное питье (морсы, чай, медовая вода).
Симптоматические средства: жаропонижающие (парацетамол, ибупрофен), сосудосуживающие для носа (назол, тизин, називин, отривин и прочие), для облегчения кашля (туссин, стоптуссин, амброксол, ацц и другие), антигистаминные (кларитин, зодак).
Особое внимание уделяется детям и беременным женщинам. Детям – прием аспиринсодержащих препаратов запрещен из-за опасности развития синдрома Рея (энцефалопатия с отеком головного мозга и развитие печеночной недостаточности), поэтому из группы жаропонижающих предпочтение отдается парацетамолу, нурофену. Из противовирусных средств показаны – тамифлю, реленза, виферон 1, гриппферон, реаферон липинд, кагоцел с 3х лет, анаферон.
Беременным – обильное питье при отсутствии отеков;
- при легких формах - из противовирусных средств – виферон в свечах, гриппферон, арбидол, при невозможности принимать таблетки (рвота) – введение панавира внутримышечно; при тяжелых формах тамифлю, реленза, виферон;
- для снижения выраженности лихорадки – парацетамол, аскорутин;
- при развитии бактериальной пневмонии – цефалоспорины III-IV поколения, макролиды, карбапенемы;
- в период эпидемии показана обязательная госпитализация всем беременным с выраженной интоксикацией.
Профилактика свиного гриппа
Мероприятия для здоровых (по рекомендации ВОЗ):
• Чаще мойте руки с мылом, можно спиртсодержащими растворами.
• Избегайте близкого контакта с больными людьми.
• Избегайте объятий, поцелуев и рукопожатий.
• Если вы заболели, оставайтесь дома и ограничьте контакты с другими людьми.
• При появлении симптомов гриппа немедленно обращайтесь за медицинской помощью. Если вы заболели, оставайтесь дома в течение 7 дней после выявления симптомов во избежание инфицирования окружающих.
Для неспецифической медикаментозной профилактики используются следующие препараты: кагоцел, арбидол, анаферон, гриппферон, виферон для беременных, тамифлю.
Для специфической профилактики на сегодняшний день создана вакцина от высокопатогенного вируса свиного гриппа (H1N1). Данная вакцина защищает от гриппа В, и штаммов A/H1N1 (свиной) и H3N2 гриппа А (Гриппол плюс), то есть и от свиного гриппа, и от сезонного гриппа. Заболеть после прививки невозможно, так как она не содержит цельный вирус, а содержит только поверхностные антигены вирусов, которые сами по себе вызвать болезнь не могут. Вакцина вводится ежегодно.
Читайте также: