Тест на определение гриппа h1n1

Обновлено: 28.03.2024

Метод определения Полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени (Real-time PCR).

Определение РНК вируса гриппа в соскобе эпителиальных клеток ротоглотки и носоглотки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени.

Возбудители гриппа – РНК-содержащие вирусы, относящиеся к семейству Orthomyxoviridae, в котором выделяют три рода: Influenza A virus, Influenza B virus, Influenza C virus.

Вирусы гриппа А и В ежегодно вызывают эпидемии большей или меньшей интенсивности практически во всех странах мира. Вирусы гриппа А широко распространены в природе, их выделяют у большинства зверей и птиц, в связи с чем они имеют высокий пандемический потенциал, так как способны преодолевать межвидовый барьер. Основной причиной возникновения эпидемий и пандемий гриппа является высокая вариабельность вируса вследствие изменений в его геноме. Это касается фрагментов, кодирующих поверхностные антигены вирусов типов А и В и определяющих их специфичность.

Вирусы Influenza А и B поражают преимущественно верхние отделы дыхательных путей: нос, горло, трахею и реже бронхи. Однако симптомы общей интоксикации при гриппе доминируют над умеренными катаральными проявлениями. Обычно заболевание сопровождается резким повышением температуры, мышечными и головной болями, сильным недомоганием, сухим кашлем, болью в горле и слизистыми выделениями из носа. Для гриппа, обусловленного новым или значительно измененным вирусом (например, для гриппа птиц типа А(H5N1) и А(H7N9), реже А (H1N1) pdm 2009), характерно острейшее, молниеносное начало, развитие различных вариантов токсикоза (нейротоксикоза, инфекционно-токсического шока в сочетании с гемодинамическими расстройствами) и III степени ДВС-синдрома (гемокоагуляционного шока).

Диагностика инфекции осуществляется комплексно, на основании анамнестических данных о контакте с больными гриппом и характерной клинической картины. Подтверждение диагноза возможно с помощью лабораторных исследований, что целесообразно при наличии клинических проявлений гриппа, в эпидемический сезон роста заболеваемости острыми респираторными инфекциями, при тяжелом течении респираторных болезней.

В качестве базовых тестов могут быть использованы следующие лабораторные исследования: определение антигенов вируса гриппа в мазках слизистой носа и ротоглотки методом непрямой иммунофлуоресценции или иммунохроматографии; определение антител к антигенам вируса гриппа А/B в сыворотке крови методом ИФА. Результаты ИФА, как правило, оцениваются ретроспективно. Вследствие поздней диагностики они не влияют на коррекцию терапии, но применимы в научных целях и для эпидемиологического надзора и контроля за гриппом. Наиболее современным методом лабораторной диагностики гриппа является выявление РНК вируса методом ПЦР.

Максимального уровня специфичности и чувствительности достигают тесты на основе ПЦР-ОТ (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени, позволяющие обнаруживать в биологическом материале РНК возбудителя инфекции.

определяемый фрагмент – специфический участок нуклеиновой кислоты вирусов гриппа А (Influenza virus A) и гриппа В (Influenza virus B);

специфичность обнаружения – отсутствие неспецифических реакций в отношении других вирусных и бактериальных возбудителей ОРЗ.

Типирование Influenza virus A (H1N1, H3N2) – идентификация субтипов вируса гриппа типа А путем качественного выявления в исследуемом материале вирусной нуклеиновой кислоты (РНК).

Синонимы русские

Идентификация субтипов H1N1 и H3N2 вируса гриппа А методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР).

Синонимы английские

Influenza virus A RT-PCR subtyping, Influenza virus reverse transcription PCR test.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокрота.

Общая информация об исследовании

Вирус гриппа относится к РНКсодержащим вирусам. Род вирусов гриппа включает три типа вирусов: А, В и С. Вирусная частица имеет сферическую форму, в центре которой находится генетический материал вируса – РНК, а в оболочке присутствуют сложные белки – гемагглютинин (Н) и нейраминидаза (N). Для вирусов гриппа типа А характерна постоянная изменчивость этих поверхностных белков: на данный момент известно 15 вариантов гемагглютинина и 9 вариантов нейраминидазы. Их сочетание в определенной комбинации определяет субтип вируса. Вирусы субтипов H1N1 и H3N2 вызывают сезонный грипп человека.

Попадая в организм человека, вирус гриппа проникает в клетки эпителия слизистой оболочки дыхательных путей и размножается в них. Пораженные вирусом клетки дегенерируют, погибают и отторгаются. Таким образом, в отделяемом дыхательных путей (слизь, мокрота и т.п.) присутствуют погибшие эпителиальные клетки вместе с вирусными частицами.

Идентификация субтипа вируса проводится методом полимеразной цепной реакции. Принцип метода основан на обнаружении в материале специфичных фрагментов вирусной РНК, их избирательном синтезе с образованием огромного числа копий, что позволяет их легко детектировать, в том числе визуально. К преимуществам метода ПЦР можно отнести:

прямое определение наличия возбудителя – выявление специфического участка РНК возбудителя дает прямое указание на присутствие вируса;

высокую специфичность – в исследуемом материале идентифицируется уникальный, характерный только для данного вируса фрагмент РНК;

высокую чувствительность – ПЦР позволяет обнаружить возбудитель, даже если его исходная концентрация в исследуемом материале чрезвычайно мала.

Однако стоит отметить, что обнаружение вирусной РНК методом ПЦР не обязательно указывает на обнаружение жизнеспособного вируса или продолжающееся его размножение.

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

При нетипичных проявлениях заболевания;

при высоком риске осложнений от гриппа (возраст более 65 и менее 2 лет, беременные, а также женщины в период первых двух недель после родов, лица с хроническими заболеваниями легких, сердца, почек, пациенты с иммунодефицитом или гематологическими заболеваниями);

при идентификации возбудителя у пациентов, заболевших вне эпидемиологического сезона.

Что означают результаты?

Референсные значения: не обнаружено.

Положительный результат – если искомый фрагмент вирусной РНК обнаружен - инфицирование вирусом гриппа А определенного субтипа.

Отрицательный результат – если искомый фрагмент вирусной РНК не обнаружен – отсутствие инфекции.

Что может влиять на результат?

Количество дней, прошедшее от начала болезни (после 4 дней возрастает вероятность необнаружения вируса).

Исследуемый образец – при инфекции нижних дыхательных путей вирус может не выявляться в образце, полученном из верхних дыхательных путей (мазки из носа, ротоглотки). В таких случаях необходимо повторить анализ с исследованием отделяемого нижних дыхательных путей.

Важные замечания

  • У иммунокомпетентных лиц с неосложненным гриппом вирусовыделение в верхних дыхательных путях, как правило, значительно уменьшается после 4 дней болезни, соответственно, снижается вероятность выделения возбудителя. Поэтому образцы для исследования у таких пациентов должны быть получены в первые четыре дня заболевания, когда выделение вируса максимально. И напротив, у пациентов с ослабленным иммунитетом и при инфекции нижних дыхательных путей (вирусная пневмония) выделение вируса в бронхиальный секрет сохраняется дольше.
  • Ожидание результата исследования или отрицательный результат при очевидной клинической картине не должны быть препятствием для назначения противовирусной терапии.

Также рекомендуется

Общий анализ крови с лейкоцитарной формулой

Influenza virus A/H1, РНК [реал-тайм ПЦР]

Mycoplasma pneumoniae, ДНК [ПЦР]

Adenovirus, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Streptococcus pneumoniae, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Кто назначает исследование?

Инфекционист, терапевт, врач общей практики, педиатр, эпидемиолог.

Литература

Инфекционные болезни: национальное руководство / Под ред. Н. Д. Ющука, Ю. Я. Венгерова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. С. 701-710.

Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство: в 2 т. – T. II / Под ред. В. В. Долгова, В. В. Меньшикова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. С. 649-653.

Guidance for Clinicians on the Use of RT-PCR and Other Molecular Assays for Diagnosis of Influenza Virus Infection by Centers of Disease Control and Prevention, U.S. Department of Health and Human Services, 2016.

Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Page 1316.

Свиной грипп – это несколько подтипов вируса гриппа А, способных вызывать заболевание у свиней. Наиболее актуальным в плане эпидемиологической настороженности в настоящее время является подтип А/H1N1.

Так как серотипы и подтипы вируса гриппа отличаются друг от друга по некоторым генетическим последовательностям (например, по гену белка гемагглютинина, H1), с помощью исследования РТ-ПЦР возможно идентифицировать конкретный подтип вируса (Influenza A/H1).

Синонимы русские

Вирус гриппа H1/N1 (свиной грипп) [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени].

Синонимы английские

Swine influenza virus, SIV, pH1/N1, pndH1/N1, H1N1v, (swine flu, swine influenza, 2009 flu pandemic), RNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокроту.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Общая информация об исследовании

Influenza virus A/H1 – один из подтипов вируса гриппа, характеризующийся особой вирулентностью и приводящий к тяжелым формам заболевания и пандемиям. Грипп, вызванный Influenza virus A/H1 (грипп свиней, свиной грипп), отличается от сезонного (эпидемического) гриппа по нескольким характеристикам. Во-первых, возбудитель гриппа свиней – это новый вариант вируса гриппа, возникший в организме свиней в результате мутаций его генетического материала и затем распространившийся в популяции человека. Большинство людей не имеют иммунитета к нему, поэтому заболевание характеризуется очень высокой заразностью. Кроме того, оно чаще протекает в более тяжелой форме с вовлечением нижних отделов респираторного тракта и с осложнениями (в виде пневмонии, дыхательной и почечной недостаточности, энцефалопатии и др.), что обуславливает необходимость раннего и интенсивного лечения. Поэтому диагностика гриппа свиней должна быть произведена в кратчайшие сроки. На основании опыта борьбы с пандемией гриппа Influenza A H1/N1 в 2009 году был сделан вывод, что "золотым стандартом" идентификации этого подтипа вируса является полимеразная цепная реакция в режиме реального времени – метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в отделяемом носоглотки) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Такое исследование позволяет получить максимально точный результат в кратчайшие сроки.

РТ-ПЦР относится к так называемым быстрым методам диагностики гриппа, обеспечивающим возможность постановки окончательного, лабораторно подтвержденного диагноза еще до начала лечения. Это преимущество отличает РТ-ПЦР от выделения вируса в культуре клеток (требует 7-10 дней) и большинства серологических методов (требуют нарастания титра антител, 10-14 дней).

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

  • При постановке диагноза "грипп, среднетяжелая/тяжелая форма" и при осложнениях гриппа (пневмония, дыхательная недостаточность, энцефалопатия и др.).
  • При постановке диагноза "грипп" у пациента с факторами риска гриппа Influenza A/H1: возраст до 2 лет и старше 65 лет, беременность, хроническая обструктивная болезнь легких, хронические заболевания сердца, почек, печени, сахарный диабет, иммуносупрессия.
  • При отсутствии улучшения или при ухудшении состояния в течение 72 часов после постановки диагноза "грипп, легкая форма" у пациента без факторов риска Influenza A/H1.
  • При обследовании пациента, контактировавшего с больным с установленной Influenza A/H1-инфекцией.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

Причины отрицательного результата:

Важные замечания

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Инфекционист, эпидемиолог, педиатр, врач общей практики, анестезиолог-реаниматолог.

Определение генетического материала вируса гриппа в соскобе проводится для выявления причины возникшего острого респираторного заболевания. Грипп относится к одним из наиболее распространенных сезонных инфекций. Его своевременная диагностика позволяет своевременно начать лечение и избежать осложнений.

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Вирус гриппа А H1N1, РНК (HPAI Virus A, ПЦР) соскоб, кач.?

  1. Подозрение на заболевание вирусом гриппа;
  2. Дифференциальная диагностика ОРВИ и гриппа;
  3. Внезапное появление признаков ОРВИ;
  4. Недомогание после контакта с человеком, болеющим гриппом.

Подробное описание исследования

Вирус гриппа служит распространенным возбудителем острых респираторных заболеваний у детей и взрослых. Выделяют несколько типов данной инфекции: A, B, C. Среди них часто встречается вирус гриппа А.

Для гриппа характерно распространение по всему миру в осенне-зимнее время. Вирус передается воздушно-капельным путем. Источником инфекции служит человек в завершении инкубационного периода и первые 5-6 дней от начала симптомов болезни. Восприимчивость к гриппу высокая во всех возрастных группах. Это предопределяет эпидемиологический потенциал данной инфекции.

Вирус поражает клетки слизистой оболочки верхних отделов дыхательного тракта. Гемагглютинин позволяет ему прикрепиться к клеткам эпителия, а нейраминидаза обеспечивает проникновение внутрь.

Инкубационный период инфекции обычно короткий и составляет от 10-12 часов до 9 суток. В отличие от других острых вирусных респираторных инфекций (ОРВИ), грипп почти всегда имеет острое начало. Человек отмечает быстрое ухудшение самочувствия, повышение температуры тела, боль в горле, сухой кашель, ломоту в суставах и мышечные боли. Может наблюдаться головная боль, покраснение глаз.

Обычно заболевание протекает в легкой или среднетяжелой форме. При тяжелом течении гриппа поражаются нижние дыхательные пути и может возникнуть вирусная пневмония. Подобная ситуация характерна в основном для людей со сниженным иммунитетом. В группе риска находятся пожилые люди с сочетанием разных заболеваний, лица с ВИЧ-инфекцией или получающие иммуносупрессивную терапию, беременные и дети первых лет жизни. Некоторые штаммы H1N1, например, свиной грипп поражают преимущественно нижние дыхательные пути и вызывают изначально более тяжелое заболевание.

В отличие от других ОРВИ, раннее назначение противовирусных средств при гриппе помогает улучшить прогноз заболевания и уменьшить риск осложнений. Провести диагностику, основываясь только на симптомах, практически невозможно. Для этого требуется тест на наличие вируса гриппа в организме.

Появление антител к возбудителю в крови занимает время. Наиболее точно инфекцию можно выявить на ранней стадии, если сдать анализ для выявления частиц вируса методом ПЦР.

Выявление вируса гриппа серотипов А и В (Influenza virus A/B), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (РНК) вируса в образце биоматериала.

Синонимы русские

Синонимы английские

Influenza serotypes A/B, RNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокроту.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Общая информация об исследовании

Influenza virus – это оболочечный вирус, характеризующийся наличием сегментированного негативного РНК-генома и нуклеокапсида в форме спирали. Он относится к семейству Orthomixoviridae. На основании структурных различий нуклеопротеида выделяют 3 серотипа Influenza: A, B и С. Серотип A встречается как людей, так и у животных, в то время как варианты B и C поражают преимущественно людей. Именно серотип А ответственен за подавляющее большинство случаев сезонных (эпидемических) и пандемических вспышек гриппа.

Идентификация вируса гриппа должна быть осуществлена в кратчайшие сроки, что связано с высокой заразностью этого заболевания. Кроме того, эффективность противовирусных препаратов максимальна при их назначении в первые 48 часов после инфицирования, что также диктует необходимость своевременной постановки окончательного диагноза. Среди многих "быстрых" диагностических тестов особое место занимает полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (РТ-ПЦР). Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в мокроте) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Благодаря высокой чувствительности и специфичности метода, а также возможности получить результат в наболее короткие сроки, РТ-ПЦР заменила другие, применяемые ранее, методы диагностики гриппа: выделение вируса в культуре клеток, а также серологические исследования и иммуноферментный анализ.

В отличие от других тестов, чувствительность исследования РТ-ПЦР практически не изменяется при взятии материала на фоне начатой терапии противовирусными препаратами. Это связано с тем, что в реакции выявляется не сам вирусный агент, а фрагмент вирусной ДНК. По этой же причине положительный результат исследования не всегда указывает на наличие живого вируса (репликацию) и не всегда означает, что пациент остается заразным для окружающих.

В отличие от других лабораторных тестов (в первую очередь, экспресс-тестов для определения антигена вируса гриппа), результат РТ-ПЦР в меньшей степени зависит от распространенности гриппа среди населения. РТ-ПЦР характеризуется редкими ложноположительными и ложноотрицательными результатами как во время эпидемии, так и в период низкой заболеваемости гриппом.

При обследовании пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции верхних дыхательных путей следует выполнить анализ отделяемого носо/ротоглотки. При обследовании пациента с признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей анализ мазков из зева и носа необходимо дополнить исследованием мокроты. Исследование мокроты также должно быть осуществлено при отрицательном результате, который дал анализ отделяемого верхних дыхательных путей у пациента с клиническими признаками гриппа. Следует повторить РТ-ПЦР при отрицательном результате исследования мокроты у пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей.

Для более точной диагностики Influenza рекомендуется сочетание РТ-ПЦР с дополнительными общеклиническими исследованиями. Кроме того, необходимо исключить бактериальную суперинфекцию.

Читайте также: