Тестирование по противовирусным препаратам
Обновлено: 18.04.2024
Изучены противовирусные свойства препарата Ингавирин ® в отношении вируса парагриппа как актуального респираторного патогена человека двумя методами - иммуноферментного анализа и микротетразолиевого теста. Полученные результаты свидетельствуют о том, что помимо прямой противовирусной активности Ингавирин ® обладает неспецифическим цитопротекторным действием. Влияя на синтез вирусных белков, препарат снижает проявление вирусного цитопатогенного действия. Применение препарата значительно снижало долю клеток бронхиального эпителия, погибших в острой стадии инфекции.
Ключевые слова: вирусы парагриппа, Ингавирин ® противовирусная эффективность, цитопротекторное действие.
Experimental Investigation of Ingavirin ® Antiviral Activity Against Human Parainfluenza Virus
V. V. Zarubaev, V. Z. Krivitskaya, V. E. Nebolsin, О. I. Kiselev
Research Institute of Influenza, North-West Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, St.Petersburg Valenta Farm Co., Moscow
The Ingavirin ® antiviral properties with respect to the parainfluenza virus, as an actual human respiratory tract pathogen, were investigated by two methods, i.e. immunoenzymatic analysis and microtetrazolium test. The results showed that along with the immediate antiviral activity Ingavirin ® had nonspecific cytoprotective properties. While affecting the virus proteins synthesis, Ingavirin ® lowered the virus cytopathogenic action. The drug significantly decreased the portion of the bronchial epithelium cells killed at the stage of acute infection.
Key words: parainfluenza virus, Ingavirin ® , antiviral activity, cytoprotective action.
Введение
Несмотря на успехи в области вакцинации, химиопрофилактики и химиотерапии респираторных вирусных инфекций, эти заболевания по-прежнему занимают ведущее место в структуре инфекционной патологии человека. Появление в человеческой популяции вирусов гриппа птиц H5N1 и свиней H1N1, вызывающих заболевания человека в последние годы, свидетельствует о том, что эпидемический потенциал гриппа по-прежнему высок. Помимо гриппа, существенную долю респираторных инфекций составляют заболевания, вызванные вирусами других семейств: корона-, адено- и парамиксовирусами (респираторно-синцитиальный вирус и вирус парагриппа).
Вирусы парагриппа классифицированы в 4 серотипа. Они способны вызывать поражения верхних дыхательных путей у пациентов всех возрастных групп, при этом наибольшая тяжесть заболевания отмечается у детей от полугода до 3 лет [1]. Подъём заболеваемости обычно наблюдается в конце года. Вызываемые ими заболевания представлены ларинготрахеобронхитами, бронхиолитами и пневмониями, приобретающими особую тяжесть у пациентов с иммунодефицитами различной природы. В ряде случаев вирусы парагриппа связывают с развитием острого респираторного дистресс-синдрома, цистического фиброза, миокардита, гепатита и ряда неврологических заболеваний, таких как рассеянный склероз и подострый склерозирующий панэнцефалит [1].
Таким образом, весьма актуальной является проблема поиска и разработки новых противовирусных препаратов, не обладающих побочными эффектами и возможно более широкого спектра действия. Ранее была показана активность препарата Ингавирин ® (2-(имидазол-4-ил)-этанамид пентандиовой-1,5 кислоты) в отношении вируса гриппа. Ингавирин ® является низкомолекулярным аналогом эндогенного пептидоамина, выделенного из морского моллюска Aplysia californica. Как в опытах in vitro [7], так и in vivo на модели гриппозной инфекции [8] было показано, что препарат способен ограничивать репликацию вируса в культуре клеток, а также обладает высокой протективной активностью при экспериментальном гриппе у мышей.
Цель настоящего исследования - оценка противовирусных свойств препарата Ингавирин ® в отношении вируса парагриппа как актуального респираторного патогена человека.
Вирусы и клетки. В работе был использован вирус парагриппа человека 3 типа штамм С-243 (ПГЗ) из коллекции вирусных штаммов НИИ гриппа СЗО РАМН. Вирус культивировали в клетках МА-104.
Изучение противовирусной активности препаратов. Из исходного вируссодержащего материала готовили серию десятикратных разведений от 10 -1 до 10 -6 на среде MEM. Клетки инфицировали ПГЗ в присутствии исследуемых препаратов. Заражённые клетки культивировали при 37° С в атмосфере 5% С02 в газопроточном инкубаторе Sanyo-175. Срок культивирования составлял 72 часа.
Микротетразолиевый тест. Репликация вируса в присутствии препаратов была дополнительно изучена по проявлению цитопатогенного действия вируса в культуре клеток. Вирус культивировали в присутствии препаратов, как описано выше, клетки были промыты 2 раза по 5 минут фосфатно-солевым буфером, и количество живых клеток было оценено при помощи микротетразолиевого теста (MTT), характеризующего интенсивность митохондриального дыхания живых клеток [9]. С этой целью в лунки планшетов было добавлено по 100 мкл раствора (5 мг/мл) 3-(4,5-диметилтиазолил-2) 2,5-дифенилтетразолия бромида (ICN Biochemicals Inc., Aurora, Ohio) на физиологическом растворе. Клетки были инкубированы при 37°С в атмосфере 5% С02 в течение 2 часов и промыты в течение 5 минут фосфатно-солевым буфером. Осадок растворяли в 100 мкл на лунку ДМСО, после чего оптическую плотность в лунках планшетов измеряли на многофункциональном ридере Victor 1420 (Perkin Elmer, Финляндия) при длине волны 535 нм. Тест на наличие вируса считали положительным, если оптическая плотность в лунке была в два и более раз меньше, чем в контрольных лунках без вируса.
За титр вируса в обоих тестах принимали величину, противоположную десятичному логарифму наибольшего разведения вируса, способного вызвать положительную реакцию в половине инфицированных лунок планшета. Титр выражали в логарифмах 50% цитотоксической дозы (lg CTD50). О вирусингибирующем действии соединений судили по снижению титра вируса в присутствии препарата по сравнению с соответствующими контрольными лунками без препаратов.
Результаты и обсуждение
В настоящем исследовании противовирусная активность Ингавирина ® в отношении вируса парагриппа человека 3 типа была изучена при помощи двух методов - иммуноферментного анализа (ИФА) и микротетразолиевого теста (МТТ).
Данные по влиянию Ингавирина ® на продукцию специфических вирусных белков в культуре клеток суммированы в табл. 1.
Таблица 1.
Противовирусная активность Ингавирина ® в отношении вируса парагриппа 3 типа по результатам иммуноферментного анализа
| Препарат, концентрация | Оптическая плотность (1000XOD450) в лунках при разведении вируса | Титр вируса, lg ЭИД50* | ||||
| 10 -2 | 10 -3 | 10 -4 | 10 -5 | 0 (контроль препарата) | ||
| Ингавирин ® 500 мкг/мл | 895±27 | 854±33 | 826±6 | 152±11 | 136±2 | 4,0±0,0 |
| Ингавирин ® 170 мкг/мл | 978±3 | 866±17 | 853±10 | 169±8 | 137±2 | 4,3±0,3 |
| Ингавирин ® 50 мкг/мл | 965±14 | 862±8 | 849±24 | 829±13 | 156±6 | 4,7±0,3 |
| Рибавирин ® 50 мкг/мл | 890±16 | 851±21 | 754±14 | 212±9 | 142±5 | 4,3±0,3 |
| Контроль вируса | 947±6 | 867±8 | 836±17 | 829±14 | 5,0±0,0 | |
| Контроль клеток | 137±5 | - | ||||
По результатам ИФА применение Ингавирина ® приводило к 10-кратному снижению вирусной продукции в культуре клеток, при этом активность Ингавирина ® в максимальной концентрации вдвое превосходила активность препарата сравнения - рибавирина. При помощи регрессионного анализа была рассчитана 50% эффективная доза (ЕС50) Ингавирина ® для вируса парагриппа, составившая 203 мкг/мл. Из ранее полученных данных 50% цитотоксическая доза Ингавирина ® составляет >1000 мкг/мл, что дает индекс селективности >5. Исходя из полученных результатов, Ингавирин ® следует характеризовать как этиотропный препарат против вируса парагриппа.
Данные по противовирусной активности Ингавирина ® , полученные при помощи МТТ, суммированы в табл. 2.
Таблица 2.
Противовирусная активность Ингавирина ® в отношении вируса парагриппа 3 типа по результатам микротетразолиевого теста
| Разведение вируса | Оптическая плотность (OD535) в присутствии препаратов | ||||||
| Ингавирин ® , мкг/мл | Рибавирин, мкг/мл | Контроль вируса | |||||
| 500 | 170 | 50 | 300 | 100 | 30 | ||
| -1 | 178±8 | 166±3 | 114±5 | 240±17 | 307±23 | 233±8 | 120±9 |
| -2 | 267±7 | 249±12 | 189±3 | 356±21 | 408±19 | 339±33 | 151±6 |
| -3 | 383±30 | 324±13 | 282±9 | 528±6 | 548±5 | 361±18 | 249±14 |
| -4 | 607±6 | 513±7 | 409±6 | 461±14 | 594±3 | 488±20 | 310±23 |
| -5 | 616±4 | 591±26 | 607±20 | 569±12 | 656±11 | 673±15 | 493±11 |
| -6 | 690±13 | 679±18 | 698±12 | 615±33 | 661±14 | 657±14 | 700±16 |
| Контроль клеток | 683±15 | ||||||
| Титр вируса* (lg EID50/0,2mL) | 2,0±0,0** | 2,7±0,3** | 3,0±0,0** | 0,7±0,3** | 1,3±0,3** | 1,7±0,5** | 3,8±0,2 |
Примечание. * - титр вируса вычислен из трёх параллелей на планшете; ** - отличия от контроля вируса достоверны при р
По результатам МТТ применение Ингавирина ® приводит к снижению инфекционного титра вируса на 1,8 lg EID50/0,2 мл, т. е. снижению вирусной продукции приблизительно в 60 раз. В то же время синтез вирусспецифических белков, регистрируемых при помощи ИФА, при воздействии Ингавирина ® снижается в 10 раз. Полученные данные можно объяснить двумя различными и дополняющими друг друга механизмами действия препарата. Помимо прямой противовирусной активности Ингавирин ® обладает неспецифическим цитопротекторным действием. Влияя на синтез вирусных белков, препарат, кроме того, снижает проявление вирусного цитопатогенного действия. Цитопротекторное действие Ингавирина ® было ранее показано на модели гриппозной инфекции у животных [10]. Использование этого препарата значительно снижало долю клеток бронхиального эпителия, погибших на острой стадии инфекции. Такие свойства Ингавирина ® могут играть определенную роль и в случае парагриппозной инфекции в культуре клеток. Кроме того, можно также предполагать влияние Ингавирина ® на процесс сборки и/или почкования вирионов потомства.
Следует отметить, что на моделях вирусной инфекции in vivo активность химиопрепаратов не ограничивается, как в гомогенной клеточной культуре, прямым противовирусным действием. Механизмы противовирусного действия соединений в этом случае могут включать в себя иммуномодулирующую, антиоксидантную, противовоспалительную, антитоксическую активность, и т. д. С учётом ранее полученных данных на модели гриппозной инфекции [8] можно предполагать наличие у Ингавирина ® противовирусной активности при парагриппозной инфекции у животных и человека.
Помимо рибавирина в доклинических испытаниях, активностью против вируса парагриппа обладают ингибиторы нейраминидазы (занамивир), ингибиторы синтеза белка (пуромицин), ингибиторы нуклеинового синтеза, аскорбиновая кислота, и ряд других природных и синтетических соединений, включая олигопептидные ингибиторы синцитиеобразования. Ни одно из них не разрешено для терапии парагриппозной инфекции, в том числе и рибавирин, оказавшийся неэффективным в виде аэрозоля при лечении парагриппозной пневмонии [1]. Учитывая вышеизложенное, данные по противовирусному действию Ингавирина ® в отношении парагриппа следует считать важными для дальнейшей разработки комплексных схем и методов лечения этой инфекции.
В целом, полученные результаты свидетельствуют о противовирусной активности Ингавирина ® в отношении парагриппа. Дополнительные исследования в этом направлении могут дать информацию о механизмах как прямого, так и опосредованного противовирусного действия препарата.
Препараты против гриппа и простуды: как выбрать? В чем отличие между комбинированными препаратами, противовирусными средствами, иммуномодуляторами? Эффективны ли те или иные популярные препараты. Разбираемся вместе в нашем обзоре.
Противовирусные препараты и иммуномодуляторы, которые обещают помочь в лечении гриппа или ОРВИ, в этом году особенно популярны. Как врачи, так и пациенты в отношении данных препаратов разделились на два лагеря: одни не доверяют подобным средствам, считая их бесполезными, другие же верят в них как в панацею.
Но стоит ли принимать противовирусные препараты или иммуномодуляторы, комбинированные средства или отдать предпочтение традиционной симптоматической терапии, дав своему организму возможность самому подавить болезнь?
Что обещают препараты?
Многие уже знают, что при простуде и гриппе нельзя принимать антибиотики (если нет осложнений, или их не назначил врач). Поэтому пациенты переключили свое внимание на иммуностимулирующие и противовирусные препараты, которые широко и активно рекламируют по ТВ и в СМИ. Производители заявляют – основной принцип действия иммуномодулирующих средств – стимуляция собственного иммунитета, активизация синтеза антител и гуморальных защитных факторов. Кроме того, препараты обещают сократить время болезни и ее тяжесть. Препараты позиционируются как средства для взрослых и детей, но важно понимать – влияние на иммунитет и последствия приема этих средств при ОРВИ и простуде могут быть разными.
Есть категория пациентов, которым принимать эти средства не рекомендовано. Это касается лиц, имеющих аутоиммунные патологии, при которых собственная иммунная система проявляет агрессию в отношении тканей тела. Кроме того, вопрос о приеме этих препаратов при иммунодефицитах тоже очень спорный, равно как и у детей, чья иммунная система еще окончательно не сформировала. Сюда же относят лиц пожилого возраста, принимающих комплекс препаратов, будущих мам и кормящих женщин.
Какие бывают препараты
Среди средств, предназначенных для лечения простуд, ОРВИ или гриппа, можно выделить несколько групп:
- Интерфероны;
- Противовирусные средства прямого действия;
- Иммуностимулирующие (модулирующие) средства.
Каждая группа имеет свои особенности применения, состав и побочные эффекты, противопоказания. Кроме того, у этих препаратов разная доказательная база в плане эффективности и безопасности.
Группа интерферонов
Препараты на основе готовых интерферонов считаются наиболее безопасными в применении при ОРВИ или гриппе, простудных заболеваниях. Основа этих препаратов - специфические белки (интерфероны), которые синтезируются организмом для того, чтобы защитить клетки от проникновения в них вирусных частиц. Интерфероны выделяются и собственным телом, но их синтез задерживается обычно на 2-3 дня, и за это время вирусы могут серьезно навредить. При достаточном объеме интерферонов клетки теряют восприимчивость к возбудителям, что тормозит размножение вируса и распространение болезни.
Применяют как натуральные интерфероны (например, лейкоцитарный) полученные из плазмы доноров, так и лимфобластные интерфероны, которые получают из культуры клеток, обработанных веществами, стимулирующими иммунный ответ. Есть еще рекомбинантные интерфероны (синтезированы лабораторно), они обладают противовирусной активностью, но на иммунитет влияют не очень сильно. Самые современные – это ПЭГ-интерфероны, в соединении с этиленгликолем, что позволяет продлить действие вещества в теле.
Чаще всего эта группа препаратов применяется в лечении серьезных вирусных инфекций, тяжелого течения гриппа, вирусных гепатитов, лиц с ослабленным иммунитетом. Средства с рекомбинантными интерферонами допустимы к применению при ОРВИ у детей и взрослых. Примеры препаратов – Инферон, Альфаферон, Интерферон лейкоцитарный человеческий, Виферон, Кипферон, Реаферон, Пегасис, ПегИнтрон, Ингарон.
Группа противовирусных средств
Среди истинных противовирусных средств, которые эффективны против вирусов, можно выделить противогерпетические препараты – ацикловир, валцикловир и аналоги. Но на вирусы ОРВИ и гриппа они не влияют. Есть также препараты против ВИЧ, гепатитов, цитомегалии. Но, в отношении гриппа, доказанной эффективностью обладают римантадин и амантадин (в последнее время появились данные, что на современные штаммы уже не действует), а также озельтамивир и занамивир.
Примеры препаратов – Римантадин, Тамифлю, Реленза, Амантадин, Мидантан. Все эти средства назначаются строго по показаниям, имеют побочные эффекты, о которых стоит заранее знать. Они не действуют на многочисленные вирусы ОРВИ, и в том числе на коронавирусы.
Иммуностимулирующие или модулирующие средства
Это самая многочисленная и разношерстная группа препаратов. Сюда входят индукторы эндогенного интерферона, которых много на рынке. Они обещают сокращение времени болезни, стимуляцию собственного иммунитета и даже борьбу с вирусами. Особенно популярны у нас и в странах СНГ, а вот в Европе и США к ним относятся очень прохладно.
Несмотря на сотни публикаций об этих препаратах, нигде нет однозначных доказательств их эффективности, а стоят эти лекарства недешево.
К группе стимуляторов иммунитета относят и витаминно-минеральные комплексы, а также препараты, влияющие на микрофлору кишечника. Да, они обладают определенным влиянием, но в период ОРВИ или гриппа они сильно не улучшат ситуацию.
Поэтому, применять ли их или нет – вопрос сложный. Особенно если речь идет о комбинированных средствах, в которые, помимо иммуномодулирующих средств, добавлены витамины, минералы или симптоматические средства. Как этот коктейль поведет себя в организме, не навредит ли он напряженному иммунитету – это вопрос.
В любом случае, препараты для иммунитета и против вирусов должен советовать врач. И даже если он назначает препарат, всегда можно уточнить – каким эффектом обладает препарат, будет ли он реально эффективен, есть ли данные по доказательной базе и какие побочные эффекты стоит ожидать.
Будьте здоровы и обязвтельно читайте инструкцию препарата (показания, противопоказания) перед его приемом.
Выбирая лекарство от гриппа и простуды, в первую очередь нужно обратить внимание на то, что эти заболевания вызваны вирусами. Основу терапии в данном случае будут составлять противовирусные препараты, а также средства, снимающие такие неприятные проявления ОРВИ, как, повышенная температура, насморк, кашель, боль в горле.
Противовирусные средства
Неотложной помощью при первых признаках простуды считается прием противовирусных препаратов: Амиксин, Арбидол, Амизон, Ремантадин, Ацикловир. Чем быстрее вы начнете принимать подобные лекарства от гриппа и простуды, тем больше шансов на быстрое и успешное выздоровление. Действие подобных средств высоко избирательно, и для здоровых клеток организма они не представляют никакой опасности.
Коварные вирусы способны развивать устойчивость к этой группе препаратов, иногда же эффект может не наступать из-за слабой иммунной активности организма. В этом случае назначают прием интерферонов, обычно в виде назальных капель (Назаферон, Интерферон) и ректальных свечей Виферон, Генферон.
Восстановить функции иммунной системы при затяжном течении заболевания помогают иммуномодуляторы: таблетки и капли Иммунал, Рибомунил, Бронхомунал, спрей ИРС-19, а также растительный препарат, хорошо зарекомендовавшей себя компании Бионорика – Имупрет.
Избавляемся от симптомов
Устранить чувство заложенности носа помогут назальные капли на основе ксилометазолина (Галазолин, Длянос, Отривин) и оксиметазолина (Називин, Нокспрей, Назалонг). Также для сужения сосудов слизистой носа принимают таблетки и чаи, в состав которых входит фенилпропаноламин или фенилэфрин: Колдфлю и Фармацитрон.
Снизить температуру и снять воспаление способна Мефенаминовая кислота, которые также способствуют образованию интерферона в организме, оказывая тем самым дополнительное противовирусное действие.
К лечению кашля подходят исходя из того, влажный он или сухой. Отхаркивающие препараты не эффективны при сухом кашле. И наоборот, если при наличии мокроты назначить средство, подавляющее кашлевой рефлекс, ее застой может привести даже к развитию пневмонии.
Антибиотики при гриппе и простуде
Антибиотики бессильны в борьбе с вирусами и не оказывают на них абсолютно никакого влияния. К сожалению, из-за повсеместной любви к самолечению, их прием часто не обоснован и приносит больше вреда, чем пользы. Уничтожая полезную микрофлору кишечника, антибиотики тем самым ослабляют естественный иммунитет, делая организм еще более уязвимым перед вирусом.
Когда высокая температура (выше 38 градусов) держится более трех дней и улучшений состояния больного не наблюдается – это признак присоединения вторичной бактериальной инфекции, и без антибиотика здесь просто не обойтись. При развитии таких осложнений гриппа, как бронхит и пневмония врач после проведения проб на чувствительность возбудителя к антибиотику может назначить Амоксициллин, Амоксиклав, Аугментин.
Иногда назначают цефалоспорины в уколах: Цефотаксим, Цефтриаксон или макролиды: Сумамед, Клацид, Фромилид. В тяжелых случаях прибегают к помощи фторхинолонов (Левофлоксацин).
Несмотря на то, что каждый из нас хотя бы однажды сталкивался с простудой и боролся с симптомами самостоятельно, не стоит недооценивать данное заболевание и пускать его на самотек. Ведь самостоятельно отличить простуду от проявлений гриппа способны далеко не все, а грипп, как известно, опасен своими осложнениями. Не возлагайте также надежд на одно чудодейственное средство, лекарство от гриппа и простуды должен подбирать врач, применяя комплексное лечение и учитывая индивидуальные особенности организма.
Молнупиравир компании Merck, находясь на доклиническом этапе к моменту наступления пандемии COVID-19, также получил преимущество в качестве ускорения разработки.
FDA в настоящее время рассматривает оба препарата для получения экстренного разрешения на применение (EUA). Консультативный комитет FDA 30 ноября проголосовал 13 против 10 в пользу EUA для молнупиравира, подготовив базу для принятия решения об одобрении в ближайшие недели. Европейские агенства по лекарственным средствам (EMA) также рассматривают молнупиравир, и заявке от Pfizer тоже непременно придет свое время.
Предварительные данные говорят о том, что оба препарата обладают преимуществами по сравнению с ремдесивиром от Gilead — противовирусным препаратом для внутривенного введения, который получил разрешение для EUA в мае 2020 года и полное одобрение FDA в октябре 2020 года для госпитализированных пациентов. Этот противовирусный препарат уже подвергался критике в ходе клинических испытаний до начала пандемии. Он редко используется за пределами США.
Появление пероральных противовирусных препаратов, которые могут применяться для амбулаторных пациентов, дает инфекционистам надежду.
Как только был опубликован геном SARS-CoV-2, исследователи начали анализировать 29 белков вируса на предмет уязвимостей. Следуя примеру изучения других вирусных заболеваний, многие ученые начали с того, что сосредоточились на механизме репликации вирусов. Паксловид от Pfizer является самым продвинутым из ингибиторов основной протеазы (Mpro).
Pfizer также задействовала предыдущую работу над SARS-CoV-1 и использовала все преимущества противовирусного средства под названием PF-00835231. Этот препарат основан на рупинтривире — соединении, которое имитирует пептидный субстрат протеазы риновируса человека. Протеазы риновируса и коронавируса не очень похожи, но обе расщепляют свой субстрат после остатков глутаминовой кислоты (Gln). Часть рупинтривира имитирует Gln. Pfizer модифицировал рупинтривир так, чтобы он лучше подходил для Mpro SARS-CoV-1; полученный PF-00835231 ковалентно связывается с активным центром протеазы, инактивируя фермент.
К счастью, Pro SARS-CoV-2 и Mpro SARS-CoV-1 гомологичны и совпадают на 96 %. Таким образом, Pfizer смогла быстро продвигать ингибиторы Mpro SARS-CoV-2 как для перорального, так и для внутривенного введения. PF-07304814, кандидат для внутривенного применения, является фосфатной пролекарственной формой PF-00835231. PF-07321332, кандидат для перорального введения, включил в себя субструктуры ингибитора протеазы HCV боцепревира и дополнительные усовершенствования для повышения биодоступности при пероральном применении. Чтобы получить паксловид, Pfizer объединила PF-07321332 с ритонавиром, лекарством от ВИЧ, которое ингибирует цитохром Р450 и замедляет метаболизм ингибиторов протеазы.
По итогам промежуточного анализа эффективности паксловида у 1219 пациентов лечение сократило риск госпитализации или смерти на 89 % при введении препарата в течение трех дней с момента появления симптомов. Эти результаты легли в основу заявки Pfizer для EUA.
Другие соединения против SARS-CoV-2, действие которых направлено на Mpro, также находятся в разработке; некоторые из них специально созданы в рамках пандемии (Таблица 1). Подобно соединениям от Pfizer, большинство из них имитируют пептиды, расщепляемые Mpro, ковалентно связываясь с остатками цистеина в активном центре фермента для его ингибирования.
Таблица 1 | Разрабатываемые антивирусные препараты против COVID-19
Сам молнупиравир был создан в лаборатории Джорджа Пейнтера Университета Эмори. В 2013 году Пейнтер искал препарат для лечения венесуэльского энцефалита лошадей (ВЭЛ) — заболевания, переносимого комарами, которые распространены на юге США. Рассматривая RdRp как мишень, Пейнтер надеялся разработать противовирусный препарат широкого действия для вирусов с генетическим материалом в виде РНК. Он решил исследовать аналоги нуклеозидов, потому что они, как правило, эффективны, имеют высокие барьеры устойчивости и могут быть доступны для перорального введения.
В начале пандемии Пейнтер и его коллеги сообщили, что молнупиравир показал широкую противовирусную активность против SARS-CoV-2, MERS-CoV, SARS-CoV-1 и вируса гриппа в доклинических моделях заболевания. В марте Эмори лицензировал терапию для Ridgeback Biotherapeutics, а Merck получила эксклюзивные права по всему миру на разработку и коммерциализацию препарата всего два месяца спустя.
Вследствие широкого потенциала ингибиторов RdRp молнупиравир не нуждался в каких-либо специфичных для COVID-19 модернизациях до того, как он вступил в фазу I испытаний в апреле 2020 года. Merck начала фазы II/III испытания MOVe-OUT в октябре 2020 года, а в октябре 2021 года представила промежуточные результаты FDA для EUA. Merck также тестирует возможность профилактического применения своего препарата.
Основные результаты применения молнупиравира у 1433 пациентов показывают, что препарат снижает риск госпитализации или смерти на 30 % при его назначении в течение пяти дней с момента появления симптомов. Более значимые промежуточные результаты, демонстрирующие снижение риска вышеперечисленных показателей на 48 %, были получены на меньшей выборке; во второй половине испытания у молнупиравира не было преимущества.
На заседании консультативного комитета FDA по препарату эксперты единогласно проголосовали за разрешение. Но десять участников дискуссии сочли, что преимущества препарата не оправдывают его риски.
Поскольку молнупиравир вызывает ошибки при репликации вирусной РНК, одна из ключевых проблем заключается в том, что теоретически он также может ускорить эволюцию вируса. Этот риск наиболее высок у пациентов с ослабленным иммунитетом, которые могут дольше инкубировать и выделять вирус, а также у пациентов, которые принимают более низкие дозы или более короткие курсы лекарств, чем назначено. Контраргумент Merck в пользу того, что вирус не был обнаружен в конце лечения в клинике и что предположительно возникающие мутантные вирусы быстро устраняются, убедил не всех членов комитета.
Другая проблема заключается в том, что молнупиравир может быть встроен в человеческую ДНК, вызывая мутации в быстро делящихся тканях человека, включая плод. Эта теория мутагенеза не является новой: Pharmasset, как сообщается, отказалась от разработки структурно сходных соединений в 2003 году из-за их мутагенного потенциала.
Молнупиравир показал положительный результат в тесте Эймса, который оценивает мутагенный потенциал на бактериальных клетках. В недавнем контрольном исследовании на мышах были продемонстрированы неоднозначные результаты, а в другом исследовании, как показала Merck, препарат не вызвал мутаций ни у одного из животных. Некоторые члены комитета поставили под сомнение модели и контрольные группы компании.
При одобрении препаратов Pfizer и Merck могли бы кардинально изменить ход пандемии. Оба препарата, скорее всего, будут применяться в амбулаторных условиях как у вакцинированных, так и у невакцинированных пациентов вне стационаров. США в ожидании одобрения уже обязались закупить 10 миллионов курсов препарата Pfizer и 1,7 миллиона курсов Merck, заплатив около 530–700 долларов США за курс соответственно.
Ремдесивир, разрешенный только для стационарного применения, в то же время может быть более эффективным, если его назначать амбулаторным пациентам. Испытание препарата для внутривенного введения на 562 амбулаторных пациентах показало, что лечение сократило риск госпитализации или смерти на 87 % при назначении препарата в течение четырех дней с момента постановки диагноза COVID-19 и в течение семи дней с момента появления симптомов.
В стационаре же это сокращает время до выздоровления, но не оказывает статистически значимого влияния на выживаемость.
Своевременное вмешательство — в первые три — семь дней — зависит от доступа к своевременному тестированию. Таким образом, доступность тестирования на COVID-19 является важным рычагом для новейших противовирусных препаратов.
Подобно тому, как препараты-кандидаты, которые первоначально были разработаны для атипичной пневмонии, стали ключевыми моментами для разработки лекарств против COVID-19, молнупиравир и PF-07231332 могут иметь решающее значение для создания противовирусных препаратов против будущих вспышек.
Исследовательские программы, изучающие структуры ключевых вирусных белков и свойства молекул, которые их связывают, также должны дать преимущество будущим противовирусным препаратам. Хильгенфельд считает, что этим платформам следует сосредоточиться на сходных мишенях и процессах, включая RdRp и основные протеазы. Различные программы, в том числе проект быстрого реагирования ЕС на коронавирусную терапию стоимостью 2,5 миллиона евро, ускоренные исследования и разработки IMI в Европе на сумму 75 миллионов евро и Противовирусная программа США на три миллиарда долларов для борьбы с пандемиями, делают именно это.
Читайте также: