Вектор бест инструкции к наборам гепатит с

Обновлено: 27.03.2024

Характеристика и принцип работы набора

2.1 Состав набора:

Положительный контрольный образец (К + )

Отрицательный контрольный образец (К – )

Слабоположительный контрольный образец (Ксл + )

Раствор для разведения конъюгата №1 (РР-К1)

2 флакона по 6 мл

Раствор для разведения конъюгата №2 (РР-К2)

2 флакона по 6 мл

Буферный раствор для субстрата (БРС)

2 флакона по 13 мл

25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т×25)

2 флакона по 28 мл

Комплект ванночки для реагентов с наконечниками для многоканальных пипеток

2.2 Основные компоненты набора "ИФА-HBsAg" – иммуносорбент, конъюгат №1 и конъюгат №2.

Иммуносорбент представляет собой полистирольный планшет, в лунках которого сорбированы поликлональные антитела к HВs-антигену.

Конъюгат №1 представляет собой меченые биотином моноклональные антитела к HBs-антигену.

Конъюгат №2 представляет собой стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой хрена.

Положительный контрольный образец – сыворотка крови человека, содержащая НВs-антиген, не содержащая антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2 и вирусу гепатита С, инактивированная прогреванием в течение 3 ч при температуре 56 ºC.

Отрицательный контрольный образец – сыворотка крови человека, не содержащая НВs-антиген, антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С, инактивированная прогреванием в течение 3 ч при температуре 56 ºC.

Слабоположительный контрольный образец – лиофилизированный препарат сыворотки крови человека, содержащей рекомбинантный НВs-антиген с концентрацией 0,25 нг/мл, не содержащей антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С и НВs-антиген, инактивированной прогреванием в течение 3 ч при температуре 56 ºC.

Принцип работы набора. При внесении в лунки планшета конъюгата №1 и образцов сывороток (плазмы) инфицированной крови HВs-антиген связывается как с поликлональными антителами к HВs-антигену, сорбированными на твердой фазе, так и с моноклональными антителами к HBs-антигену, входящими в состав конъюгата №1, образуя комплексы антитело-антиген-конъюгат. Иммунные комплексы антитело-антиген-конъюгат выявляются конъюгатом №2. После отмывания несвязавшихся компонентов связавшийся конъюгат №2 выявляют, добавляя в лунки планшета раствор субстрата пероксидазы (перекись водорода) и хромогена ТМБ.

Пероксидазную реакцию останавливают, добавляя стоп-реагент (0,9 М раствор серной кислоты), и интенсивность окрашивания раствора в лунках измеряют на спектрофотометре как величину оптической плотности (ОП) при длине волны 450 нм.

Величина ОП прямо пропорциональна концентрации HВs-антигена в образце сыворотки или плазмы крови человека. Чем выше содержание HВs-антигена в образце сыворотки, тем выше интенсивность окрашивания.

2.3 Набор рассчитан на проведение 24 постановоки ИФА: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 192 определения, включая контрольные образцы.

3.1 Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. Однако работа со всеми исследуемыми образцами сыворотки (плазмы) крови человека, которые следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции, с отработанными растворами и жидкостями, различным оборудованием, которое может быть загрязнено в процессе анализа, требует определенных мер безопасности при использовании набора:

- работу необходимо проводить в специально оборудованном помещении;

- работать необходимо с применением средств индивидуальной защиты и с соблюдением мер предосторожности в соответствии с требованиями [1], [2], и [3].

3.2 Стоп-реагент, содержащий серную кислоту, обладает раздражающим действием. При попадании на кожу и слизистые немедленно промыть большим количеством воды.

3.3 При работе с набором рабочие места должны быть обеспечены приточно-вытяжной вентиляцией.

3.4 Все лица, работающие в лаборатории с наборами, должны проходить обязательный медицинский осмотр в соответствии с требованиями [4].

3.5 Утилизация медицинских отходов и/или неиспользованных наборов с истекшим сроком годности должна производиться в соответствии с требованиями [5].

4.1 Для исключения ложных результатов исследуемые образцы необходимо готовить и хранить в условиях, предотвращающих бактериальный пророст. Необходимо осветлять образцы сывороток, содержащие агрегированные компоненты сыворотки или осадок, при помощи центрифугирования в течение 15 мин при скорости вращения 3000 об/мин. Образцы сывороток можно хранить при температуре (2-8) °С не более 7 суток. Замороженные образцы (желательно до температуры не менее минус 20 °С) можно хранить не более 6 месяцев. Необходимо избегать повторных циклов замораживания-оттаивания образцов.

Необходимо помнить, что образцы с гемолизом, гиперлипидемией, бактериальным проростом, а также длительно хранившиеся без замораживания не пригодны для анализа.

Надежность результатов зависит от выполнения следующих правил:

- не допускается использование набора после окончания срока годности, а также смешивание компонентов наборов разных серий;

- для приготовления каждого реагента должна использоваться отдельная емкость;

- всю используемую для приготовления реагентов посуду не обрабатывать дезрастворами и моющими средствами. В случае необходимости промыть водой питьевой проточной, а затем пять раз ополоснуть дистиллированной водой;

- для работы с хромогеном ТМБ необходимо использовать отдельные емкости для растворов, наконечники для пипеток, посуду.

- необходимо обратить внимание на тщательное перемешивание реагентов;

- при внесении в лунки стрипов раствора Кг-1 в рабочем разведении или раствора Кг-2 в рабочем разведении нельзя касаться наконечником пипетки поверхности планшета и раствора, находящегося в лунках во избежание случайного заноса образца из одного стрипа в другой через наконечники;

- время между заполнением и опорожнением лунок планшета растворами и реагентами должно быть не менее 30 с. Не допускается подсыхание лунок на всех этапах постановки ИФА;

- при использовании промывателя следить за состоянием емкости для раствора для промывания планшета и соединительных шлангов: в них не должно быть признаков бактериального или грибкового роста;

- необходимо использовать пипетки автоматические со сменными наконечниками, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3 %);

- дозаторы и рабочие поверхности обрабатывать раствором с объемной долей спирта этилового 70 %. Не использовать хлорамин и другие хлорсодержащие вещества;

- для работы с исследуемыми сыворотками и контрольными образцами рекомендуется использовать одноразовые наконечники для пипеток. Каждый образец сыворотки, а также реагенты набора необходимо отбирать отдельным наконечником.

- во время проведения анализа следует избегать попадания прямых солнечных лучей на рабочую поверхность.

4.2 При вскрытии и растворении лиофилизированных компонентов необходимо следить, чтобы на крышке и стенках флаконов не оставалось сухого вещества.

5.1 Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий проводить измерения оптической плотности растворов в лунках планшета при длине волны 450 нм;

- полу- или автоматическое устройство для промывания планшетов (вошер);

- суховоздушный термостат типа ТС-80 М2, поддерживающий температуру (37±1) °С, или аналогичный ему по характеристикам;

- пипетки одноканальные автоматические со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 0,02 до 5,0 мл;

- мерный цилиндр вместимостью 1000 мл;

- колба лабораторная вместимостью 1000 мл;

- флаконы стеклянные вместимостью 20 мл;

- ванночки для реагентов или чашки Петри (диаметр 100 мм);

- вата медицинская гигроскопическая;

- перчатки резиновые хирургические;

- раствор с объемной долей спирта этилового 70 %;

- раствор с массовой долей перекиси водорода 6 %;

- вода деионизированная или дистиллированная;

- контейнер для сбора твердых отходов;

- контейнер для слива жидких отходов.

Содержимое флаконов с реагентами, входящими в состав набора, и все образцы исследуемых сывороток (плазмы) крови человека перед проведением анализа тщательно перемешать.

Расход реагентов набора для постановки анализа, который определяется количеством используемых стрипов, приведен в таблице А.1 Приложения А.

6.2 Подготовка иммуносорбента

Иммуносорбент готов к использованию.

Открыть пакет и установить на рамку необходимое количество стрипов. Оставшиеся стрипы хранить в плотно закрытом пакете с влагопоглотителем при температуре (2-8) °С в не более 3 месяцев.

6.3 Приготовление раствора для промывания планшета

Внимание! Раствор для промывания планшета готовить за 15 мин до начала проведения анализа!

Если флакон с ФСБ-Т×25 содержит осадок, его необходимо прогреть перед использованием при температуре (37±1) °С до полного растворения осадка.

В мерный цилиндр вместимостью 1000 мл внести содержимое флакона с ФСБ-Т×25, затем добавить дистиллированной воды до метки 700 мл и аккуратно перемешать раствор.

В случае использования одного или несколько стрипов содержимое флакона с ФСБ-Т×25 интенсивно встряхнуть в течение (20-30) с, отобрать необходимый объем раствора (таблица A.1 Приложения А) в мерный стакан или цилиндр, добавить необходимое количество дистиллированной воды и перемешать раствор.

Неиспользованный ФСБ-Т×25 можно хранить в плотно закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

6.4 Подготовка К + , К – , РР-К1, РР-К2, БРС и стоп-реагента

К + , К – , РР-К1, РР-К2, БРС и стоп-реагент готовы к использованию.

Неиспользованные РР-К1, РР-К2, БРС и стоп-реагент после вскрытия флаконов можно хранить в плотно закрытых флаконах при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

Остаток К + и К - после вскрытия флаконов можно хранить в плотно закрытых флаконах при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

6.5 Приготовление раствора Ксл +

Внимание! Раствор Ксл + готовить за 15 мин до начала проведения анализа!

Восстановленный Ксл + можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С не более 1 месяца , при температуре минус 20 °С – в течение шести месяцев. Допускается однократное замораживание-оттаивание восстановленного Ксл + .

6.6 Приготовление раствора Кг-1 в рабочем разведении

Из флакона с Кг-1 отобрать указанный в таблице А.1 Приложения А объем и перенести во флакон с РР-К1. Содержимое флакона тщательно перемешать, не допуская образования пены.

В случае использования одного или несколько стрипов в чистый флакон отобрать необходимое количество РР-К1, добавить Кг-1 в соответствии с таблицей А.1 Приложения А и перемешать раствор, не допуская образования пены.

Остаток Кг-1 можно хранить в плотно закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

6.7 Приготовление раствора Кг-2 в рабочем разведении

Из флакона с Кг-2 отобрать указанный в таблице А.1 Приложения А объем и перенести во флакон с РР-К2. Содержимое флакона тщательно перемешать, не допуская образования пены.

В случае использования одного или несколько стрипов в чистый флакон отобрать необходимое количество РР-К2, добавить Кг-2 в соответствии с таблицей А.1 Приложения А и перемешать раствор, не допуская образования пены.

Остаток Кг-2 можно хранить в плотно закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

6.8 Приготовление рабочего раствора субстрата

Флакон с хромогеном ТМБ необходимо прогреть перед использованием в течение (3-5) мин при температуре (37±1)° С до полного растворения кристаллов.

Из флакона с хромогеном ТМБ отобрать указанный в таблице А.1 Приложения А объем и перенести во флакон с БРС. Содержимое флакона тщательно перемешать, не допуская образования пены.

В случае использования одного или несколько стрипов в чистый флакон из темного стекла или пластика (прозрачный флакон обернуть флакон) отобрать необходимое количество БРС, добавить хромоген ТМБ в соответствии с таблицей A.1 Приложения А и перемешать раствор, не допуская образования пены.

Раствор необходимо предохранять от попадания света и контакта с металлами или ионами металлов. Перед использованием раствор субстрата должен быть бесцветным. Посуду, которая будет в ходе реакции контактировать с раствором субстрата, отмывать без применения синтетических моющих средств. Использовать только новую ванночку для реагентов и новые наконечники!

Остаток хромогена ТМБ можно хранить в плотно закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.

- на всех этапах промывания необходимо контролировать заполнение всех лунок и полное удаление (аспирацию) жидкости из них;

- необходимо при каждом промывании во все лунки планшета вносить не менее 380 мкл раствора для промывания планшета;

- необходимо выдерживать лунки, заполненными раствором для промывания планшета, в течение 30 с;

- при каждой аспирации тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием рамкой со стрипами в перевернутом положении по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге, положенной на лист полиэтилена;

- некачественное промывание планшета приводит к получению некорректных результатов.

8.1 В лунки, предназначенные для контрольных образцов внести:

- в две лунки планшета – по 0,1 мл (100 мкл) К + ;

- в две лунки планшета – по 0,1 мл (100 мкл) Ксл + ;

- в две лунки планшета – по 0,1 мл (100 мкл) К – .

Во все остальные лунки планшета внести по 0,1 мл (100 мкл) исследуемых образцов сыворотки (плазмы) крови человека.

Внести во все лунки планшета по 0,05 мл (50 мкл) раствора Кг-1 в рабочем разведении (п 6.6).

Внимание! При постановке ИФА на одном или двух стрипах допускается использовать для К – – две лунки, для К + – одну лунку, для Ксл + – одну лунку.

Внимание! Время внесения контрольных и исследуемых образцов не должно превышать (5-10) мин! Каждый образец необходимо отбирать одноразовым наконечником!

Содержимое лунок перемешать осторожным постукиванием по краю планшета

8.2 Планшет заклеить пленкой или закрыть крышкой и инкубировать при температуре (37±1) °С в течение 60 мин в термостате.

Внимание! За (1-2) мин до окончания инкубации приготовить раствор Кг-2 в рабочем разведении (п 6.7).

8.3 По окончании инкубации внести во все лунки планшета по по 0,05 мл (50 мкл) раствора Кг-2 в рабочем разведении (п 6.7). Содержимое лунок перемешать осторожным постукиванием по краю планшета

8.4 Планшет заклеить пленкой или закрыть крышкой и инкубировать при температуре (37±1) °С в течение 30 мин в термостате.

8.5 Удалить содержимое лунок, затем промыть лунки планшета раствором для промывания планшета (п 6.3) семь раз. Для этого во все лунки планшета необходимо внести не менее 380 мкл раствора для промывания планшета, а затем удалить содержимое лунок в емкость с дезраствором.

По окончании промывания тщательно удалить остатки жидкости из лунок, активно постукивая планшетом в перевернутом положении (лунками вниз) по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге, положенной на лист полиэтилена.

8.6 Во все лунки планшета внести по 0,1 мл (100 мкл) рабочего раствора субстрата (п 6.8). При приготовлении рабочего раствора субстрата (п.6.8) флакон с хромогеном ТМБ необходимо прогреть перед использованием в течение (3-5) мин при температуре (37±1)° С до полного растворения кристаллов

8.7 Планшет заклеить пленкой или закрыть крышкой и инкубировать в термостате при температуре (37±1) °С в защищенном от света месте в течение 15 мин.

Внимание! По окончании инкубации в лунках с образцами сывороток, содержащими HBs-антиген, произойдет изменение окраски раствора различной интенсивности в зависимости от концентрации HBs-антигена в исследуемом образце сыворотки: от бесцветной до голубой.

8.8 Остановить пероксидазную реакцию путем внесения во все лунки по 0,05 мл (50 мкл) стоп-реагента.

Внимание! В лунках с образцами сывороток, содержащими HBs-антиген, произойдет изменение окраски раствора: с голубой на желтую.

8.9 Не позже чем через 10 мин после остановки реакции определить значение ОП раствора в лунках в двухволновом режиме: 450 нм относительно (620-700) нм. Допускается измерение ОП в одноволновом режиме при длине волны 450 нм.


На нашем YouTube-канале опубликована серия видео по ИФА-диагностике респираторных инфекций. Подробнее

Новый набор для дифференциального выявления IgG к S- и N-белкам SARS-CoV-2. Подробнее

Бест анти-ВГС-IgM

РУ № РЗН 2021/15312

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита С

Бест анти-ВГС-авто (комплект 1)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов классов G и M к вирусу гепатита С для автоматических ИФА-анализаторов.

Бест анти-ВГС-авто (комплект 2/Чароит)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов классов G и M к вирусу гепатита С для автоматических ИФА-анализаторов.

Бест анти-ВГС (комплект 1)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов классов G и M к вирусу гепатита С.

Бест анти-ВГС (комплект 2)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов классов G и M к вирусу гепатита С.

Бест анти-ВГС (комплект 3)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов классов G и M к вирусу гепатита С.

Бест анти-ВГС (комплект 4)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов классов G и M к вирусу гепатита С.

Бест анти-ВГС-спектр

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов классов G и M к индивидуальным белкам вируса гепатита С (core, NS3, NS4, NS5).

Бест анти-ВГС-подтверждающий тест

Набор реагентов для иммуноферментного подтверждения наличия иммуноглобулинов классов G и M к вирусу гепатита С.

ВГС АГ/АТ-ИФА-БЕСТ (комплект 1)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител к вирусу гепатита С и core антигена ВГС.

ВГС АГ/АТ-ИФА-БЕСТ (комплект 2)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител к вирусу гепатита С и core антигена ВГС.

ВГС core-антиген-ИФА-БЕСТ

Набор реагентов для иммуноферментного выявления core-антигена вируса гепатита С.

ВЛК анти-ВГС

Набор для внутрилабораторного контроля качества ИФА "Сыворотка, содержащая антитела к вирусу гепатита С".

Анти-ВГС контрольная панель сывороток

Набор образцов сывороток крови, содержащих и не содержащих антитела к вирусу гепатита С. Для внутрилабораторного контроля качества (оценки правильности) исследований на анти-ВГС.

Анти-ВГС стандартная панель сывороток

Набор образцов сывороток крови, содержащих и не содержащих антитела к вирусу гепатита С.

1. Бушманова А.Д., Сухорук А.А., Иванова Н.В., Эсауленко Е.В. Характеристика вирусного гепатита А на фоне хронического вирусного гепатита С // Казанский медицинский журнал. 2017. Т.98. №4. С.521-526

2. Воропаев Е.В., Воропаева А.В., Зубов С.В., Павлович И.Л., Калинин А.Л., Жаворонок С.В. Использование метода иммуноферментного анализа для контроля за спектром антител к антигенам вируса гепатита С // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2000. №3. С.73-74

3. Дерябин Н.Г. Гепатит С: современное состояние и перспективы // Вопросы вирусологии. 2012. №S1. С.91-103

4. Ершова О.Н., Шахгильдян И.В., Коленова Т.В., Кузин С.Н., Самохвалов Е.И., Кириллова И.Л., Розова А.В. Естественные пути передачи вируса гепатита С – современный взгляд на проблему // Детские инекции. 2006. №1. С.16-18

5. Кудрявцева Е.Н., Ястребова О.Н.. Растегаева А.И., Корабельникова М.И., Кузина Л.Е., Брагинский Д.М., Мартынюк А.П., Лебедева Е.И., Сметанникова М.А., Туманова О.Ю., Кузин С.Н. О проблеме верификации результатов скрининговых исследований по определению антител к вирусу гепатита С // Альманах клинической медицины. 2011. №4. С.53-59

6. Кудрявцева Е.Н., Корабельникова М.И., Кузина Л.Е. Региональная программа внешней оценки качества определения антител к вирусу гепатита С // Альманах клинической медицины. 2012. №26. С.39-44

7. Николаева Л.И., Петрова Е.В., Макашова В.В., Токмалаев А.К., Рослый И.М. Динамика специфических антител при интерферонотерапии больных вирусным гепатитом С // Инфекционные болезни. 2004. Т.2. №;. С.22-46

8. Николаева Л.И., Макашова В.В., Петрова Е.В., Шипулин Г.А., Самохвалов Е.И., Токмалаев А.К., Львов Д.К. Снижение содержания антител к вирусу гепатита С при антивирусной терапии // Биомедицинская химия. 2009. Т.55. №2. С.201-212

9. Попонин Д.М., Горовиц Э.С., Тимашева О.А. Динамика титров специфических антител к белкам вируса гепатита С у лиц с острым вирусным гепатитом С на разных стадиях инфекционного процесса // ПМЖ. 2015 Т.22. №2. С.37-42

В настоящее время в Российской Федерации, как и в большинстве стран, сложилась неблагоприятная эпидемиологическая ситуация по парентеральному вирусному гепатиту. С 2001 года в нашей стране наблюдается тенденция к снижению заболеваемости острым гепатитом С (ОГС) [4]. После 2004 года выявление людей с хроническим гепатитом С (ХГС) стало снижаться. Однако до 2006 года наблюдалось увеличение числа больных ХГС среди детей. По данным специалистов, 1,4 - 2,4% граждан РФ заражены вирусом гепатита С (ВГС), при этом большинство этих людей уже имеют хроническую форму инфекции. ХГС характеризуется прогрессирующим течением, приводящим к циррозу печени (до 30%), первичной гепатоклеточной карциноме (до 15%) и экстракорпоральным проявлениям (до 74%) [9]. Вирус гепатита С - уникальный патоген, который может уйти от иммунного контроля, создавая новые генетические и антигенные варианты, задерживая образование Т-хелперного и Т-киллерного ответа при остром гепатите С и вызывать повторную инфекцию у выздоровевших людей. Интенсивное изучение инфекции HCV началось после идентификации её возбудителя в 1989 году и в первую очередь преследовало главную цель - создание профилактической вакцины [3, 5].

ВГС - вирусное заболевание, которое чаще всего возникает в виде посттрансфузионного гепатита с преобладанием безжелтушной и легких форм и склонно к хроническому протеканию процесса [7, 8]. Возбудитель - ВГС, содержит РНК. Геном HCV представлен одноцепочечной положительно заряженная РНК, которая кодирует 3 структурных (нуклеокапсидный белок core и нуклеопротеиды оболочки E1 - E2) и 5 неструктурных (NS1, NS2, NS3, NS4, NS5) белков. Антитела (АТ), обнаруженные в крови пациентов с ВГС, синтезируют к каждому из этих белков.

Отличительной особенностью ВГС является волнообразное течение заболевания, при котором выделяют три фазы: острую, латентную и фазу реактивации. Острая фаза характеризуется повышенной активностью печеночных ферментов в сыворотке крови, содержащей классы AT IgM и IgG (к нуклеокапсидному белку core) к HCV с ростом титров, а также РНК HCV. Латентная фаза характеризуется отсутствием клинических проявлений, наличием в крови АТ класса IgG (к нуклеокапсидному белку core и неструктурным белкам NS1 - NS5) к HCV в высоких титрах, отсутствии AT класса IgM и РНК HCV или их присутствии в низких концентрациях на фоне небольшого увеличения активности печеночных ферментов в периоды обострения. Фаза реактивации характеризуется появлением клинических признаков, повышенной активностью печеночных ферментов, наличием AT класса IgG (к нуклеотидному белку core и неструктурным белкам NS) в высоких титрах, наличием HCV РНК и ростом титров AT класса IgM до HCV в динамике [6, 9].

AT к HCV в сыворотке крови в норме отсутствует. Диагноз ВГС на основан выявлении суммарных АТ к HCV методом ИФА, которые появляются в первые 2 недели заболевания и указывают на возможное заражение вирусом или перенесенной инфекцией. Анти-HCV AT может сохраняться в крови реконвалесцентов в течение 8 - 10 лет с постепенным снижением их концентрации. Обнаружить АТ можно более года и более после заражения [1, 2]. При хронической ВГС АТ определяют постоянно и в более высоких титрах. Большинство тест-систем, используемых в настоящее время для диагностики ВГС, основаны на определении AT класса IgM, что позволяет верифицировать активную инфекцию. АТ класса IgM можно обнаружить не только при ОГС, но и при ХГС. Снижение их числа во время лечения пациентов ХГС может свидетельствовать об эффективной лекарственной терапии. В острой фазе инфекции отношение AT IgM\IgG составляет от 3 до 4 (преобладание AT IgM указывает на высокую активность процесса). По мере выздоровления это соотношение уменьшается в 1,5-2 раз, что указывает на минимальную репликационную активность [9].

Выявление суммарных AT IgG к HCV методом ИФА недостаточно для диагностики ВГС, необходимо подтвердить их наличие методом иммуноблоттинга, чтобы исключить ложноположительный результат исследования. Пациента исследуют на наличие IgG класса AT к различным белкам HCV и IgM класса AT к HCV в динамике. Результаты серологического исследования вместе с клинико-эпидемиологическими данными позволяют установить диагноз и стадию заболевания, что играет важную роль для правильного выбора метода лечения. В основе ИФА лежит иммунная реакция взаимодействия антиген с антителом. Для обнаружения образовавшихся иммунных комплексов используют фермент, который предварительно метется узнающий компонент (антиген или антитело). Сам фермент визуализируют с использованием хромогенного медиатора, продуцирующего цвет. Превращение бесцветного хромогена в окрашенное вещество хромофор, который несет цвет, происходит под действием фермента, для которого хромоген является субстратом [2].

Цель исследования: сравнить результаты определения антител к вирусу гепатита С в сыворотке крови методом ИФА двух тест-систем.

Материалы и методы.

Для достижения поставленной цели было проведено скрининговое обследование 7814 человек на обнаружение анти-HCV АТ методом ИФА. Было обследовано 2266 мужчин, что составило 29% и 5548 женщин (71%), дети в возрасте до 15 лет составили ,4% (267 человек). Иммуноферментный анализ проводит в несколько этапов:

1) проведение иммунной реакции: получение иммунохимического комплекса в результате поэтапного или одномоментного добавления иммунных реагентов, один из которых содержит ферментную резку;

2) промывка твердой фазы, целью которой является удаление не связавшихся компонентов;

3) проведение ферментативной реакции, начинающейся после добавления раствора субстрата и хромогена с последующим внесением стоп-реагента для остановки реакции;

4) учет результатов анализа;

5) оценка результатов анализа.

Результаты исследования и их обсуждения.

Тест — системы представляют собой набор реагентов, основой которых являются рекомбинантные антигены ВГС, соответствующие участкам белков, кодируемых структурной (соге) и неструктурной (NS) областью генома ВГС, иммобилизированные на поверхности лунок полистироловых планшетов. Основным свойством набора является способность выявлять в сыворотках крови человека антитела к ВГС (IgG b IgМ) за счет их взаимодействия с рекомбинантными антигенами, иммобилизированными на поверхности лунок планшета. Образование комплекса антиген — антитело вызывают с помощью иммуноферментного конъюгата.

Полученные результаты обследования 7814 человек установили, что антитела к вирусу гепатиту С были обнаружены в 7 % случаев (537 человек). Из 537 человек анти — НСV АТ были обнаружены у 213 мужчин, что составило 40 % и у 324 женщин, что составляет 60%. При сопоставлении исследуемых по полу результаты исследований показали, что у обследованных женщин (6%) 1,5 раза реже, чем у мужчин (10%) обнаруживаются анти — НСV АТ (Рисунок 1).


Рисунок 1. Выявляемость положительных результатов при ВГС – скрининге в зависимости от пола

Одновременное присутствие соге и NS белков в крови наблюдалось у 76,5% мужчин и у 66 % женщин. В то же время антитела только к ядерным белкам были обнаружены у 15% женщин и у 8% мужчин. Только NS антитела выявлены у 12% женщин и 6% мужчин. Из 537 положительных исследований наличие антител к вирусу гепатита С было подтверждено у 495 пациентов. В 42 (22 женщины и 20 мужчин) случаях наблюдалась ложноположительная реакция, которая не была подтверждена в подтвердающем тесте.

В 2 образцах сыворотки набор Monolisa “Anti — НСV PLUS Version 2” дал положительный результат на антитела к ВГС, при отрицательном результате в подтверждающей тест-системе (нуклеокапсидный белок соге и неструктурные белки NS3 - NS5 не обнаружены).

Т.Д, Григорьева, к.м.н., зав. ГКДЦ (вирусологический)

М.Ю. Фалилеева, врач клинической лабораторной диагностики ГКДЦ (вирусологический)

Е.П. Шаргородская, к.м.н., врач клинической лабораторной диагностики ГКДЦ (вирусологический)

Possibilities of using new test system for screening antibodies to hepatitis C produced by Alkor Bio company by ELISA during comparative laboratory tests

T.D. Grigorieva, M.Yu. Falileeva, E.P. Shargorodskaya

Clinical Infectious Diseases Hospital n.a. S.P. Botkin, Saint Petersburg, Russia

Резюме

Ключевые слова: вирус гепатита С, маркеры гепатита С, иммунологические и молекулярно-генетические методы диагностики, чувствительность тест-системы, коэффициент позитивности, иммуноферментный анализ.

Summary

Currently, despite the wide variety of methods and tests for screening blood serum for antibodies to HCV, there are no reliable criteria that guarantee a reliable result. To date, the interpretation of the results of anti-HCV detection in samples with low CP values (low optical density in ELISA) remains one of the major tasks of laboratory diagnostics. Continuous improvement of analytical sensitivity and specificity of laboratory tests remains one of the priority tasks for manufacturers of modern test systems. The purpose of this article was to assess the specificity and sensitivity of the new Hepatitis ELISA-anti-HCV test system produced by Alkor Bio when compared with test systems from other manufacturers in settings with sera from real patients and in a series of control seroconversion panels. The article is intended for doctors of clinical laboratory diagnostics, epidemiologists, virologists, infectious disease specialists, students of medical and biological universities.

Key words: hepatitis C virus, hepatitis C markers, immunological and molecular and genetic methods of diagnostics, test system sensitivity, positivity coefficient, linked immunosorbent assay.

Вирусный гепатит С до настоящего время остается серьезной эпидемиологической проблемой. Ежегодно, по данным ВОЗ, от осложнений данной инфекции умирают около 700 тысяч человек. Эпидемиологический процесс характеризуется как острыми, так и хроническими (преимущественно) формами гепатита, а также манифестным или скрытым течением инфекции [13]

Для лабораторной диагностики вирусного гепатита С используются серологические и молекулярно-биологические методы исследования.

Серологическим методом в сыворотке крови определяют наличие антител класса G к ВГС. Этот метод является самым доступным и экономически выгодным. Современные наборы для ИФА-диагностики на сегодняшний день отличаются высокой специфичностью и чувствительностью, однако при использовании любого ИФА-теста может быть получен как ложноположительный, так и ложноотрицательный результат, причем удельный вес ложноположительных результатов будет зависеть от многих факторов (специфичности теста, обследуемого контингента, качества анализируемого образца и т. д.) [3].

Материалы и методы

Пример 1


Бест анти-ВГС (комплект 4)
Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов классов G и M к вирусу гепатита С.
РЗН 2015/2352


Бест анти-ВГС-подтверждающий тест
Набор реагентов для иммуноферментного подтверждения наличия иммуноглобулинов классов G и M к вирусу гепатита С.
РЗН 2015/2895


Бест анти-ВГС-спектр
Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов классов G и M к индивидуальным белкам вируса гепатита С (core, NS3, NS4, NS5).
ФСР 2012/13933


ВГС core-антиген-ИФА-БЕСТ
Набор реагентов для иммуноферментного выявления core-антигена вируса гепатита С.
РЗН 2013/1181


ВГС АГ/АТ-ИФА-БЕСТ (комплект 2)
Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител к вирусу гепатита С и core антигена ВГС
ФСР 2010/09023


РекомбиБест анти-ВГС-IgM
Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита С.
ФСР 2007/00610

Если у Вас возникли вопросы по качеству продукции Вы можете заполнить форму на сайте и мы обязательно рассмотрим Ваш вопрос.

Вопросы-ответы

Вопрос:
Где можно заказать красители для подкрашивания стандартных сывороток, в частности А(II)?

Ответ:
Сссылка на красители, которые можно использовать для этой цели есть в таких документах как .

ВОПРОСЫ-ОТВЕТЫ

Вопрос:
Можно ли разводить краситель по Романовскому 1:5 ?

Ответ:
Не стоит отклоняться от инструкций. Интервал разведения красителей и время окрашивания подобрано для получения достоверных.

Читайте также: