Вирулицидная активность дезинфицирующих средств в отношении вирусов

Обновлено: 18.04.2024

Изучение и оценка вирулицидной активности дезинфицирующих средств

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ ФГУН НИИ дезинфектологии Роспотребнадзора (М.Г.Шандала, Л.Г.Пантелеева); ГУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН (Д.К.Львов, Н.Н.Носик, Д.Н.Носик, П.Г.Дерябин); ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН (М.И.Михайлов, Н.А.Замятина, К.К.Кюрегян, Р.М.Элбакян); Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Л.С.Бойко, О.В.Романченко).

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ К УТВЕРЖДЕНИЮ Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 апреля 2008 г. N 1).

3. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г.Онищенко 13 декабря 2008 г.

4. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН "Методических рекомендаций по определению вирулицидной активности препаратов" N 1119-73.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания содержат описание методов изучения и оценки вирулицидной активности дезинфицирующих средств (ДС) и субстанций (активных компонентов целевого действия ДС). Указания гармонизированы с Европейским стандартом 14476 "Химические дезинфектанты и антисептики. Вируцидный количественный суспензионный тест для химических дезинфектантов и антисептиков, используемых в медицине. Тест-методы и требования (фаза 2/ступень 1)", 2005; "Протоколом тестирования эффективности дезинфектантов, используемых для инактивации вируса гепатита В уток и поддержания соответствующего уровня требований", США, ЕРА 2000 г.; "Комиссии по антивирусной дезинфекции Немецкого Объединения по борьбе с вирусными заболеваниями (DVV)", 2004.

1.2. Методические указания предназначены для специалистов лабораторий, аккредитованных на исследования и испытания ДС в целях их государственной регистрации и сертификации в России.

2. Нормативные ссылки

3. Общие положения

3.1. Вирусы обладают разной устойчивостью к действию физических и химических факторов, в т.ч. ДС и субстанций. Устойчивость вирусов к ДС определяется их структурой и химическим составом. Более устойчивы к действию ДС вирусы без липидсодержащей оболочки, например пикорнавирусы, парвовирусы. Вирусы с липидсодержащей оболочкой, например вирусы гриппа, герпеса, ВИЧ относительно легко инактивируются. Механизм действия ДС на вирусы различен и зависит от химического состава. Они могут избирательно повреждать нуклеиновую кислоту вируса, белки нуклеокапсида или липопротеины суперкапсидной оболочки. Возможно синхронное воздействие на эти структурные элементы, дезинтеграция вирусной частицы или блокировка рецепторов на ее поверхности за счет накопления амфотерных веществ дезинфектанта. Для оценки вирулицидной активности следует использовать несколько тест-вирусов с различной устойчивостью, что позволяет оценить активность ДС в отношении широкого спектра вирусов.

3.2. Результаты исследований вирулицидной активности ДС зависят также от характера используемого вируссодержащего материала, метода индикации вируса, метода определения вирулицидных свойств ДС, состава испытываемого ДС (действующие вещества - ДВ и другие компоненты).

3.3. При изучении вирулицидной активности ДС необходимо иметь его подробную характеристику с указанием рецептуры, физико-химических свойств (включая растворимость и стабильность), подтвержденных результатами входного химического контроля.

3.4. ДС, принимаемые для исследований, должны отвечать следующим требованиям: обладать хорошей растворимостью в воде, сохранять свою активность в присутствии органических веществ (кровь и другие биологические субстраты), быть нетоксичными или мало токсичными для людей (и животных), не иметь неприятного запаха, не портить обеззараживаемых предметов.

3.5. Непременным условием при исследованиях вирулицидной активности ДС является использование нейтрализатора.

4. Тест-вирусы, модельные системы, критерии оценки и основные условия, которые необходимо соблюдать при исследованиях вирулицидной активности ДС и их субстанций, применение нейтрализатора

4.1. Тест-вирусы

4.1.1. При исследованиях вирулицидной активности ДС необходимо использовать как РНК-, так и ДНК-содержащие тест-вирусы. При этом следует учитывать наличие лабораторной модели; безопасность для лиц, работающих с вирусом.

4.1.2. Обязательным для всех ДС является испытание на двух тест-вирусах: вирусе полиомиелита I типа (вакцинном штамме Sabin (LSc-2ab) (далее - "полиовирус") и аденовирусе V типа (штамм Аденоид 75) (далее - "аденовирус").

Средство, показавшее способность инактивировать полио- и аденовирус, включают в группу ДС с вирулицидной активностью. ДС с вирулицидной активностью могут быть использованы для дезинфекции при любой вирусной (включая особо опасные) инфекции, имеющей значение в инфекционной патологии человека.

4.1.3. Для ДС, применяемых при повышенной (до 60 °С) температуре растворов (например, для обеззараживания белья), в качестве тест-вируса используют бычий парвовирус (штамм Хаден).

4.1.4. В связи с эпидемиологической и социальной значимостью гепатита А для дезинфекции в инфекционных очагах проводят также исследования с вирусом гепатита А. Для изучения и оценки активности ДС в отношении вируса гепатита А используют вирус гепатита А человека (штамм HAS-15). ДС, инактивирующие вирус гепатита А, входят в группу средств с вирулицидной активностью.

4.1.5. Для изучения вирулицидной активности ДС в отношении вируса гепатита В применяют суррогатный вирус - вирус гепатита В уток (ВГВУ), в отношении вируса гепатита С - суррогатный вирус - вирус диареи крупного рогатого скота ВД-БС (штамм ВК-1В1-N 28) или вирус гепатита С человека (штамм Д1).

4.1.6. Спектр тест-вирусов может быть расширен, в таком случае дают дополнительную информацию о результатах исследований на конкретном вирусе.

4.2. Модельные системы для исследований ДС и субстанций

4.2.1. Исследования in vitro в культуре клеток. В экспериментах используют культуры клеток, чувствительные к тест-вирусу (прилож.1).

4.2.2. Исследования in vivo. В экспериментах используют чувствительных лабораторных животных (белые мыши), уток и др.

4.3. Критерии оценки вирулицидной активности ДС и субстанций

4.3.1. Вирулицидное ДС (субстанция) должно подавлять инфекционность обязательных для испытаний тест-вирусов - полиовируса и аденовируса на исследуемых объектах не менее, чем на 4 ТЦИД (т.е. степень инактивации должна быть не менее 99,99%).

4.3.2. Критерием вирулицидной активности ДС (субстанций) для других тест-вирусов (включая вирусы - возбудители особо опасных инфекций) является отсутствие инфекционности, определяемое современными методами индикации.

4.3.3. Степень инактивации тест-вируса определяют в чувствительных модельных системах по подавлению инфекционной, цитопатической или бляшкообразующей активности вируса в культуре клеток, или по отсутствию маркеров инфицирования, или по специфической гибели лабораторных животных (белые мыши) и др. Для получения более точных результатов тест-вирус следует использовать с максимальным титром.

4.3.4. Показателем вирулицидной активности ДС (субстанций) является скорость инактивации, которая представляет собой соотношение концентрации тест-вируса, выраженное в десятичных логарифмах, до и после воздействия ДС за определенный промежуток времени (экспозиция). Степень снижения вирусной инфекционности вычисляется в десятичных логарифмах по разнице титров вируса до и после обработки ДС.

4.4. Основные условия, которые следует соблюдать при исследованиях вирулицидной активности ДС и субстанций

Использовать нейтрализатор, подобранный к конкретному ДС (или дезинфицирующей субстанции, далее в этом разделе - ДС).

При проведении сертификационных испытаний ДС хранить в соответствии с правилами сертификации.

Растворы ДС готовить на стерильной водопроводной дехлорированной воде.

Поддерживать температуру растворов исследуемых ДС в течение всего эксперимента в пределах (20±2) °С (если по условиям эксперимента не рекомендована другая температура), независимо от температуры окружающей среды.

Использовать рабочие растворы ДС, производимых в форме гранул, порошков, таблеток и др. только после полного их растворения.

Кратность постановки экспериментов должна быть не менее трех (при условии получения одинаковых результатов).

При отсутствии цитопатического эффекта пробы подвергают необходимой обработке с целью проведения второго, а при необходимости и третьего слепого пассажа для определения полноты ингибирования тест-вируса.

Эксперименты должны сопровождаться всеми необходимыми контролями, в т.ч. контролем полноты нейтрализации дезинфектанта, жизнеспособности тест-вируса, контаминации тест-объекта тест-вирусом, культуры клеток или лабораторных животных (мыши), утки и др.

Исследуемые ДС до, во время и после исследований (испытаний) должны храниться в соответствии с требованиями технических условий (ТУ). При отсутствии ТУ необходимо соблюдать общие требования: избегать попадания прямых солнечных лучей и влаги, воздействия высоких температур и замораживания.

При исследованиях ДС следует строго соблюдать рекомендуемые меры индивидуальной защиты (перчатки, очки, респираторы и др.).

4.5. Применение нейтрализатора ДС и субстанции

Для нейтрализации ДС (субстанции) используют вещество - нейтрализатор (или комплекс из нескольких веществ), останавливающее действие ДС. Нейтрализатор либо добавляют непосредственно в питательную среду, либо промывают им тест-объекты после воздействия ДС (субстанции, исследуемого вещества) для того, чтобы остановить его действие на тест-вирус через заданное время (экспозицию).

4.5.1. Для нейтрализации ДС в виде монопрепарата на основе окислителей (хлор-, йод-, кислородсодержащие средства) применяют 0,1-1,0% растворы тиосульфата натрия:

для катионных поверхностно-активных веществ - 0,1-1,0% растворы лаурилсульфата натрия (сульфонол) или растворы сульфонола с 10% обезжиренного молока;

для альдегидов - 1,0% раствор бисульфита натрия;

для кислот - щелочи в эквивалентном количестве;

для щелочей - кислоты в эквивалентном количестве;

для спиртов - воду;

для композиционных средств - "комплексный" нейтрализатор, например, содержащий Твин 80 (3%), сапонин (0,3-3,0%), гистидин (0,1%), цистеин (0,1%). Если в состав ДС входят окислители, в нейтрализатор дополнительно вводят тиосульфат натрия. Следует иметь в виду, что "комплексный" нейтрализатор обладает выраженным цитотоксическим действием на клеточные культуры.

4.5.2. Если не удается подобрать какой-либо из перечисленных нейтрализаторов, что проявляется в неспецифической дегенерации культуры клеток (или гибели мышей, уток), то используют 60-80% сыворотки (без консерванта) крупного рогатого скота (СКРС), инактивированную при 56 °С в течение 30 мин. СКРС нейтрализует большой перечень ДВ и наиболее близка к "универсальному" нейтрализатору.

4.5.3. При невозможности нейтрализовать токсическое действие ДС следует применять дополнительные методы удаления ДС - диализ смеси вирус-дезинфектант, например, с использованием сефадекса LH-20, G-75, осаждения вируса методом высокоскоростного центрифугирования, фильтрацией через мембранные фильтры.

5. Основные этапы и методы изучения вирулицидной активности ДС и субстанций

Исследование вирулицидной активности ДС осуществляется в два этапа.

1. Первый этап исследований - определение наличия вирулицидной активности. Проводится in vitro суспензионным методом или методом батистовых тест-объектов.

2. Второй этап исследований - изучение вирулицидной активности ДС при обработке ими различных тест-объектов, воздуха, контаминированных тест-вирусом.

В качестве тест-объектов могут использоваться:

различные изделия медицинского назначения;

предметы ухода за больными и игрушки;

белье, спецодежда и другие изделия из тканей;

посуда, в т.ч. лабораторная;

различные поверхности в помещениях (жесткой мебели, разных предметов, оборудования, в т.ч. санитарно-технического и др.);

Изучение и оценка вирулицидной активности дезинфицирующих средств

Дата введения: с момента утверждения

4. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН "Методических рекомендаций по определению вирулицидной активности препаратов" N 1119-73.

1. Область применения

2. Нормативные ссылки

3. Общие положения

4. Тест-вирусы, модельные системы, критерии оценки и основные условия, которые необходимо соблюдать при исследованиях вирулицидной активности ДС и их субстанций, применение нейтрализатора

4.1. Тест-вирусы

4.2. Модельные системы для исследований ДС и субстанций

4.3. Критерии оценки вирулицидной активности ДС и субстанций

4.4. Основные условия, которые следует соблюдать при исследованиях вирулицидной активности ДС и субстанций

При проведении сертификационных испытаний ДС хранить в соответствии с правилами сертификации.

Растворы ДС готовить на стерильной водопроводной дехлорированной воде.

4.5. Применение нейтрализатора ДС и субстанции

для альдегидов - 1,0% раствор бисульфита натрия;

для кислот - щелочи в эквивалентном количестве;

для щелочей - кислоты в эквивалентном количестве;

для спиртов - воду;

5. Основные этапы и методы изучения вирулицидной активности ДС и субстанций

Исследование вирулицидной активности ДС осуществляется в два этапа.

В качестве тест-объектов могут использоваться:

различные изделия медицинского назначения;

предметы ухода за больными и игрушки;

белье, спецодежда и другие изделия из тканей;

посуда, в т.ч. лабораторная;

22.09.2020

Вирулицидный эффект дезинфицирующего средства. Как правильно выбрать антисептик?

Как правильно выбрать антисептик?

В период активного распространения пандемии важно защитить свое здоровье. Основной метод профилактики заражения – частое мытье рук и использование антисептиков.

В аптеках и магазинах продается огромное количество санитайзеров и антисептиков, гелей с антибактериальным эффектом. Нередко они выпускаются изготовителями лакокрасочных материалов и жидкостей-незамерзаек, что вызывает сомнения в их эффективности и безопасности для кожи. Результат такого отношения – жалобы пользователей на дерматиты и экземы. Как правильно выбрать безопасный и действенный антисептик?

Что представляют собой дезинфицирующие средства?

Это химические компоненты, которые уничтожают патогенные микроорганизмы на различных объектах, находящихся во внешней среде. Кожные антисептики предназначены для обработки кожи рук, локтевых сгибов (например, у доноров крови).

Химический компонент, который вызывает гибель вирусов и бактерий, называется действующим веществом. В качестве таких веществ выступают ЧАС, кислородоактивные компоненты, спирты, альдегиды, соединения с фенолом.

Разновидности патогенных организмов

Для человека опасны следующие микроорганизмы:

Вегетативные формы бактерий (возбудители туберкулеза, сальмонеллеза, кишечная палочка).
Бактерии в споровой форме.
Вирусы (грипп, герпес, гепатита, коронавирус).
Грибковые возбудители (кандидозы).

Действующие вещества проявляют следующие виды активности в отношении возбудителей:

Бактерицидная активность.
Туберкулоцидное действие.
Активность против фунгицидов.
Активность против вирусов.
Спороцидная активность.

Большинство антисептиков активны по отношению к нескольким видам микроорганизмов одновременно.

Активность вирулицидного типа – способность вещества уничтожать вирусы. Стойкость патогенных микроорганизмов к дезинфектантам зависит от их структуры. Наиболее стойкими являются вирусы, у которых нет липидсодержащего верхнего слоя (например, группа пикорнавирусов). У вирусов герпеса, ВИЧ, коронавируса есть такая оболочка, поэтому они достаточно легко переходят в состояние инактивации.

О требованиях к дезинфицирующим средствам

Дезинфицирующее средство или антисептик могут использоваться и продаваться на территории страны при наличии трех важных документов:

Свидетельство, подтверждающее государственную регистрацию. Оно оформляется только в федеральном отделении Роспотребнадзора, обращение в территориальные управления этого ведомства не допускается.
Инструкция по использованию. Продавец должен представить данную инструкцию потребителю по первому запросу. В документе указывается информация об эффективном и безопасном применении продукции. Там же отмечается, в отношении каких патогенных организмов (бактерии, грибки, вирусы) средство является активным, указываются объекты использования, концентрация средства, особенности расхода.

Для подтверждения соответствия проводится дезинфектологическая экспертиза, которая предусматривает несколько стадий:

Химико-аналитические тестирования.
Определение степени антимикробной активности.
Оценка активности против вирусов.
Определение степени токсичности вещества, его безопасности.

Для определения активности против микробов вещество контаминируется тест-штаммами различных микроорганизмов (например, кишечной палочкой, грибами дрожжеподобного типа, сальмонеллами, плесенью). Обеззараживание тестируемой поверхности проводится посредством ее протирания, орошения и замачивания. В результате специалисты определяют число инактивированных микроорганизмов.

Для определения активности вирулицидного типа применяются тест-вирусы с неодинаковой устойчивостью, что дает возможность определить степень эффективности действующего вещества по отношению к большому количеству вирусов. В обязательном порядке проводятся испытания с вирусом полиомиелита и аденовирусом пятого типа.

Результаты испытаний оформляются в форме протоколов, на основании этих протоколов в дальнейшем разрабатывается инструкция по использованию.

После токсикологических тестирований выясняется класс опасности средства, способы безопасного использования, оптимальный режим для отмыва поверхностей.

Эффективность режима дезинфекции зависит от неукоснительного соблюдения режима обработки помещений и поверхностей, степени активности средства, соблюдения личной гигиены пользователей.

Материалы подготовлены по ГОСТ Р 56994-2016 Дезинфектология и дезинфекционная деятельность.

Как сохранить здоровье в период сохранения угрозы распространения пандемии? Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) важнейшей профилактической мерой считает регулярное тщательное мытье рук с мылом и обработку их антисептиком.

Рынок переполнен предложениями о продаже санитайзеров, дезинфекторов, антисептиков по рецептуре ВОЗ, антибактериальных гелей и т.п. Антисептики предлагают производители красок, незамерзайки и средств для розжига. Отслеживать их безопасность для кожи и эффективность действия, похоже, никто не собирается. В результате у покупателей массово развиваются нейродерматиты и экземы. Что делать и как выбрать? В результате прочтения этой статьи вы получите эффективный инструмент для оценки эффективности и безопасности предлагаемого вам антисептика.

Дезинфицирующие средства (ДС) – это химические соединения, обеспечивающие уничтожение патогенных микроорганизмов – возбудителей инфекционных болезней – на объектах внешней среды.
Кожные антисептики – это химические дезинфицирующие средства, обеспечивающие уничтожение патогенных микроорганизмов и предназначенные для обработки кожных покровов: рук хирургов, инъекционного и операционного полей, локтевых сгибов доноров, а также для гигиенической обработки рук.
Химическое вещество, входящее в состав ДС, способное вызывать гибель патогенных микроорганизмов, называется Действующее вещество (ДВ). Эффективность и безопасность дезинфицирующих средств и антисептиков обусловлены ДВ, входящими в их состав. К основным ДВ относятся: ЧАС, альдегиды, хлор- и кислородактивные соединения, производные гуанидинов, спирты, алкиламины, фенолсодержащие соединения.

Эпидемиологическую опасность для человека представляют следующие патогенные и условно-патогенные микроорганизмы:

бактерии в вегетативной форме (например, микобактерии, возбудители туберкулёза, кишечная и синегнойная палочки, стафилококк и сальмонеллёз и т.д.);
споровые формы бактерий;
вирусы (например, вирусы гриппа, герпеса, ВИЧ, гепатита, коронавирус и др.);
грибы (возбудители кандидозов и дерматофитий, плесень).

Эффективность ДС оценивается по их антимикробному действию в отношении патогенных микроорганизмов и включает:

бактерицидную активность;
туберкулоцидную активность;
фунгицидную активность;
вирулицидную активность;
спороцидную активность.

Как правило, дезинфицирующие средства и антисептики обладают активностью в отношении сразу к нескольким типам патогенных микроорганизмов.

Вирулицидная активность – способность химических соединений инактивировать вирусы. Вирусы обладают разной устойчивостью к действию дезинфицирующих средств. Устойчивость вирусов к дезинфектантам и антисептикам определяется их структурой и химическим составом. Более устойчивы к действию ДС вирусы без липидсодержащей оболочки, например, пикорнавирусы, парвовирусы. Вирусы с липидсодержащей оболочкой, например, вирусы гриппа, герпеса, ВИЧ и коронавирус относительно легко инактивируются.

порядок проведения государственной регистрации;
форму Свидетельства о государственной регистрации (СГР);
форму заявления о проведении государственной регистрации;
номенклатуру дезинфицирующих, дезинсекционных и дератизационных средств для применения в быту, в лечебно-профилактических учреждениях и на других объектах для обеспечения безопасности и здоровья людей.

Таким образом, ДС (дезинфектант и антисептик) разрешён для производства, реализации и использования при наличии следующих трёх документов:

В Декларации о соответствии указывается, что дезинфектант или антисептик соответствует требованиям следующих нормативных документов:

ü Массовая доля действующего вещества (ДВ);

ü Показатели эффективности средства (проверка режимов дезинфекции, указанных в Инструкции по применению, на патогенных штаммах (выборочно);

ü Физико-химические показатели (органолептические свойства, рН, плотность и т.д.).

Комплексная дезинфектологическая экспертиза включает следующие этапы:

химико-аналитические исследования;
оценка антимикробной активности;
оценка вирулицидной активности;
токсикологические испытания, оценка токсичности и безопасности средства.

При определении антимикробной активности средства поверхности из различных материалов контаминируют тест-штаммами бактерий (в зависимости от сферы применения средства они могут быть разными) – это может быть кишечная палочка (E. Coli), золотистый стафилококк (S. Aureus), дрожжеподобные грибы (C. Albicans), сальмонеллы, грибы (T. Gypseum), в том числе плесень (A. Niger). Далее способами протирания, орошения, замачивания проводят обеззараживание и определяют количество уничтоженных микроорганизмов.

Изучение и оценку вирулицидной активности дезинфектантов и антисептиков проводят согласно Методическим указаниям МУ 3.5.2431-08 "Изучение и оценка вирулицидной активности дезинфицирующих средств", утверждённым Главным государственным санитарным врачом РФ 13 декабря 2008 г.

Для оценки вирулицидной активности используют несколько тест-вирусов с различной устойчивостью, что позволяет оценить активность дезинфектантов и антисептиков) в отношении широкого спектра вирусов.

Обязательным для всех ДС (дезинфектантов и антисептиков) является испытание на двух тест-вирусах: вирусе полиомиелита I типа (вакцинном штамме Sabin (LSc-2ab) и аденовирусе V типа (штамм Аденоид 75).

Средство, показавшее способность инактивировать полио- и аденовирус, включают в группу ДС с вирулицидной активностью. Такие ДС (дезинфектанты и антисептики) с вирулицидной активностью могут быть использованы для дезинфекции при любой вирусной (включая особо опасные) инфекции, имеющей значение в инфекционной патологии человека.

Данные испытаний оформляют в виде протоколов, на основании которых затем разрабатывают режимы дезинфекции для Инструкции по применению.

Оценка токсичности и опасности проводится после разработки режимов дезинфекции с учётом назначения и условий применения средства в соответствии с требованиями:

В результате токсикологических испытаний определяется класс опасности средства и его рабочих растворов, методы безопасной работы, необходимость и режимы отмыва объектов.

Инструкция по применению в обязательном порядке дополняется сведениями, полученными в результате токсикологических испытаний.

Читайте также: