Вирус парагриппа 3 крупного рогатого скота
Обновлено: 22.04.2024
Парагрипп-3 крупного рогатого скота
Парагрипп-З (ПГ-3) КРС (транспортная лихорадка КРС, параинфлюэнца-3) — острая контагиозная вирусная болезнь, главным образом телят, характеризующаяся поражением органов дыхания.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Диапазон проявления болезни разнообразен: от легких ринитов или бронхитов до тяжелой бронхопневмонии. Течение болезни обусловливается многими факторами: способом заражения животных, их иммунным и физиологическим состоянием, вирулентностью штамма. Ввиду того, что симптомы ПГ-3 сходны с клиническими проявлениями ВД-БС, ИРТ, аденовирусной инфекции и хламидиозов, клиническое течение болезни изучали путем постановки опытов на телятах-гнотобиотах. Инкубационный период болезни длится 24—30 ч. Клинические признаки проявляются через 24—36 ч после введения вируса. Первые симптомы — повышение температуры тела и серозные истечения из носа. Максимально температура повышается на 3—5-й день до 40,9—41,5 °С, нормализуется на 7—10-й день. У животных выражены угнетение, одышка, кашель, серозно-слизистые истечения из носа, которые переходят в гнойные, дыхание поверхностное и частое, хрипы продолжаются до 12—14-го дня. Животное отказывается от корма. Если нет осложнений секундарной бактериальной микрофлорой, через 2—3 недели наступает выздоровление.
В естественных условиях животные имеют AT, но вирус способен вызывать инфекцию. В зависимости от титра AT проявляется реакция. Наиболее продолжительное выделение вируса наблюдается у телят, не имеющих AT. В естественных условиях заболевание существенно отличается от экспериментального, так как может наблюдаться присутствие нескольких вирусных агентов, осложнение стрессовыми факторами, снижающими резистентность организма и соответствующими секундар-ными инфекциями. У телят при подостром и хроническом течениях отмечают слизисто-гнойные выделения из носа и глаз, признаки пневмонии и плеврита, иногда энтериты. При вскрытии: бронхопневмонию, плеврит, фибринозный перикардит, иногда гидроторакс, гнойное воспаление кишечника.
У буйволов болезнь сопровождается поражением органов дыхания и диареей, у молодняка наблюдается взъерошенность, а иногда и выпадение шерстного покрова. На исход болезни влияют вирулентность циркулирующего штамма вируса и факторы, осложняющие течение болезни. Тяжелое течение болезни, приводящее животных к гибели, — результат одновременного инфицирования вирусом ПГ-3 и пастерелла-ми, а также воздействия стрессов; в то же время, каждый фактор в отдельности не приводит к столь тяжелому течению болезни. У взрослых животных болезнь, как правило, не сопровождается симптомами респираторного заболевания. У стельных коров инфекция может привести к внутриутробному заражению плода, абортам или рождению нежизнеспособных телят.
Патологоанатомические изменения, в основном, наблюдаются в органах дыхания: катаральное воспаление слизистой оболочки верхнихдыхательных путей; в течение 7—9 дней (в острый период) слизистая оболочка отечна, гиперемирована. В полостях носа и околоносовых пазух слизисто-гнойный, в просветах трахеи и бронхов се-розно-гнойный экссудат. В брюшной и грудной полостях скапливается серозный экссудат. Отмечается бронхопневмония. Пораженные участки от сине-красного до серого цвета, увеличены, плотны. Поверхность разреза влажная, при надавливании отделяется большое количество мутной жидкости. Средостенные лимфоузлы отечны и пронизаны кровоизлияниями. Обильные точечные и пятнистые кровоизлияния находят в тимусе, на плевре, брюшине, эпикарде. На слизистой оболочке сычуга, кроме кровоизлияний, наблюдают также эрозии и язвы. Слизистая оболочка кишечника отекшая и с кровоизлияниями.
Морфология и химический состав. Морфология ВПГ-3 сходна с таковой вируса НБ. О существовании пяти структурных белков вируса было известно ранее: — фос-фопротеин (Р, Мол. м. 83 кД), ГА-нейраминидазный гликопротеин (HN, мол. м. 69 кД), главный нуклеокапсидный протеин (NP, мол. м. 66 кД), гликопротеин (F, мол. м. 55 кД), матричный белок (М, мол. м. 38 кД). Шестой белок L (мол. м. 180 кД) является, очевидно, полимеразой. Клеточный активный белок А(мол. м. 43 кД), ассоциированный со многими оболочечными вирусами, обнаружен как седьмой белок.
ВПГ-3 не обладает высокой устойчивостью, быстро разрушается под действием высокой температуры и УФ-излучения. При 37 °С титр вируса в течение 2—4 суток снижается на 1—3,5 lg ТЦД; прогревание при 56 °С в течение 30 мин ведет к утрате инфекционной и ГА-активности. Вирус инактивируется в условиях нагревания при 60 °С в течение 30 мин, при 50 °С — за 120 мин, при обработке 0,5 %-ным раствором формалина и 1 %-ным раствором (3-пропиолактона повреждаются ГА и уничтожается инфекционность вируса; 0,2 %-ный раствор додецилсульфата натрия и 1 М раствор MgCb снижает как инфекционную, так и ГА-активности. Обработка 0,4 %-ным этиленимином в течение 20 ч не действует на ГА-активность, но уничтожает инфекцион-ность вируса. Под воздействием жирорастворителей (хлороформа, эфира) полностью теряется инфекционная активность вируса. Раствор (8 М) мочевины уничтожает ГА-активность вируса. Дезоксихолат натрия при 37 °С в течение 1 ч действует на вирус слабее: при концентрации 0,1 % титр ГА снижался в 8 раз, а инфекционный титр падал на 5—6 lg ТЦД50. ЭМ показала, что детергент растворяет только липиды, оставляя в свободном виде ГА. На вирус губительно действуют низкие значения рН: при 6,8—7,5 он хорошо сохраняется, но при рН 3,4 быстро инактивируется. Изучено влияние температуры и относительной влажности на выживаемость ВПГ-3 в аэрозоле. Наибольшая стабильность его в аэрозоле наблюдалась в среде Игла при 6 °С и относительной влажности 30 %.
Антигенная структура, вариабельность и родство. ВПГ-3 обладает выраженной АГ-активностью и имеет два типа АГ, различающихся по свойствам и специфичности: рибонуклеопротеидный, или S-АГ, и поверхностный V-АГ. 1-й обнаруживается в РСК, 2-й - в РСК и РТГА.
АГ-вариабельности штаммов вируса ПГ-3 не установлено. Все штаммы в разных странах от телят и взрослых животных по АГ - структуре идентичны и соответствуют прототипному шт. SF-4, выделенному в США. Установлены различия в вариантах вируса ПГ-3 по ГА-, нейраминидазной и синцитий-образующей активности. Вирусы ПГ-3 КРС и человека АГ сходны между собой. Их прототипные штаммы различаются между собой в перекрестной РЗГА только 4-кратно. В HN-АГ идентифицировано шесть АГ-сайтов, три из которых связаны с нейтрализацией и содержат 11 эпитопов. HN-гликопротеины вирусов ПГ-3 человека и КРС имеют три общих эпитопа. Остальные 10 HN-эпитопов ВПГ-3 человека у ВПГ-3 КРС отсутствуют. У обоих вирусов обнаруживается значительная консервативность и гомология в аминокислотной последовательности NP-, Р-, С - и М-белков. ПГ-3 КРС отличается от вируса ПГ-3 человека по белку HN. Однако белок F ПГ-3 КРС имеет 80,44 и 22 % гомологии с аналогичными белками ПГ-3 человека, вирусов Сендай и НБ.
С помощью ПЦР и последующего секвенирования фрагментов гена HN показана возможность индикации и штаммовой дифференциации вируса парагриппа-3 КРС. Нуклеотидная последовательность на анализируемом участке гена HN у двух изоля-тов полностью идентична с таковой производственного штамма SF-4/32 вируса ПГ-3. Уровень различий между штаммом SF-4/32 и тремя другими изолятами вируса составил около 8 % при сравнении нуклеотидных последовательностей и около 4 % При сравнении аминокислотных последовательностей. Показана возможность использования амплификации фрагмента гена HN в сочетании с нуклеотидным секвенирова-нием к ДНК для индикации и штаммовой дифференциации вируса ПГ-3 КРС. Сравнительный анализ первичной структуры изучаемого фрагмента гена HN показал, что среди исследованных штаммов и изолятов вируса выделяются две генетические группы. Одну из них образуют североамериканские штаммы вируса и российские изоляты, первичная структура которых имеет высокий уровень гомологии с первичной структурой штамма SF-4/32, а другую — российские изоляты вируса, имеющие высокий уровень гомологии данного фрагмента с последовательностями японских штаммов.
Вирус ПГ-3 относится к возбудителям, которые оказывают прямое воздействие на респираторный тракт. При попадании в носовую полость или другие участки дыхательной системы вирионы внедряются в эпителиальные клетки, где они быстро размножаются. Затем большое число их выделяется на поверхность слизистых оболочек, поступает в слизь, тем самым разрушая важный защитный барьер — слизистую оболочку, что создает благоприятные условия для секундарной микрофлоры. Движение слизи и воздуха способствует распространению вирусных частиц по всей дыхательной системе с последующим заражением других эпителиальных клеток.
ВПГ-3 удается изолировать от экспериментально инфицированных и естественно больных животных: через 1—9 дней после заражения — из экскретов респираторного тракта, через 3—10 дней — из гортани и трахеи, через 1 — 17 дней — из легких, в течение 2—4 дней — из миндалин и надгортанных, бронхиальных лимфоузлов; в течение 1—2 дней — из селезенки, печени, сердца, надпочечников. Его также изолируют из те-стикул теляти быков-продуцентов и часто из спермы быков-производителей.
Антигенная активность. АГ-активность штаммов не зависит от нейраминидазной активности. Как при естественной инфекции, так и при иммунизации появляются специфические AT, которые обнаруживаются в РН, РСК, РТГА, РДП. У экспериментально зараженных телят анти-ГА появляются первыми — на 6—7-й день, титр их быстро нарастает и в периоде 15-го по 21-й день достигает 1:256 и более, сохраняясь на этом уровне в течение 6 месяцев. ВНА играют незначительную роль в образовании иммунитета к ПГ-3, который обусловлен, главным образом, секреторными AT. При нормальном развитии беременности материнские AT не проникают через плацентарный барьер в эмбрионы. Поэтому присутствие специфических AT в сыворотке крови плода доказывает возможность внутриутробной инфекции.
Различные белки одного и того же вируса отличаются по АГ-активности, например, гликопротеины HN вируса ПГ-3 вызывали более выраженный АТ-ответ, чем гликопротеин F.
Экспериментальная инфекция. Лабораторные животные невосприимчивы. Заражение телят удается в случае отсутствия у них специфических AT. Пики цитотоксичности, которые колебались от 12 до 53 %, наблюдали на 6—9-й день после заражения при соотношении эффекторных клеток и клеток-мишеней 100:1. Гибель инфицированных вирусом ПГ-3 клеток не превышала 5 %.
Культивирование. ВПГ-3 хорошо размножается в первичных культурах клеток ПТ, ПЭК, легких и тестикул теленка; наиболее чувствительны клетки почки, легкого и тонкого кишечника, менее чувствительны клетки лимфоузлов, тестикул, тимуса и печени. В различных культурах клеток КРС все штаммы ПГ-3 вызывают сходное ЦПД, характеризующееся образованием синцития и вакуолей. Сроки проявления гемадсорбции и ЦПД зависят не от штамма, а от вида культуры клеток.
ВПГ-3 размножается в диплоидных перевиваемых культурах клеток: Hela, Hep-2, KB, МДВК, ВНК-21, Vero, АИ-ВЕК. В стационарных 2—3-суточных культурах MDBK и ПС (почка сайги) в течение 10 пассажей титр вируса ПГ-3 составлял 4,75—5,0 lg ТЦД50/МЛ и 7,0-7,5 lg ТЦД50/МЛ соответственно. ВПГ-3 размножается в КЭ, зараженных на ХАО, валлантдисную и амниотическую полости, накапливаясь в титрах 103—108
ВПГ-3 агглютинирует эритроциты морской свинки, кролика, свиньи, обезьяны, коровы, мышей, голубя, буйвола, овцы, козы, плохо агглютинирует эритроциты человека и не агглютинирует эритроциты лошади. Данные об агглютинации эритроцитов кур противоречивы. Изучена антигенная структура и некоторые биологические характеристики гемагглютинина-нейраминидазы (HW) и гликопротеина слияния (F) вируса ПГ-3.
В основе явления гемадсорбции лежит сродство рецепторов ВПГ-3, находящихся на поверхности пораженной клетки, с рецепторами эритроцита, что приводит к их взаимному сцеплению аналогично РГА. Преимущество этой реакции состоит в том, что она становится положительной еще до появления отчетливых цитопатических изменений в инфицированных клетках уже через 4 ч после заражения. Клетки, инфицированные ВПГ-3, лучше всего сорбируют эритроциты морской свинки, слабее — эритроциты кролика, белой мыши и других животных. Вирус вызывает диффузную адсорбцию эритроцитов. Для постановки реакции используют 0,5 %-ную взвесь стерильно взятых и отмытых эритроцитов морской свинки, которые добавляют по 0,2 мл в пробирки с испытуемой клеточной культурой.
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции — больные телята, которые в острой стадии болезни выделяют вирус в количестве 10б—107>5 ТЦДбо/мл - Заражение телят происходит воздушно-капельным путем и, возможно, перорально, так как установлено выделение вируса с молоком, фекалиями и вагинальными истечениями. Не исключается передача возбудителя и половым путем.
Иммунитет и специфическая профилактика. Для специфической профилактики ПГ-3 применяют живые и инактивированные вакцины. Однако последние пока еще не нашли широкого применения. Широкое использование живых вакцин против ПГ-3 более 20 лет показало их высокую эффективность. Кроме того, вследствие индукции интерферона они обладают лечебным эффектом и могут быть использованы в первые дни болезни животных с целью быстрого прекращения эпизоотической вспышки.
Независимо от способа введения живых вакцин рекомендуется двукратная иммунизация телят. Первая (за 2—3 недели до перевода на комплекс) — в 2—4-недельном возрасте и вторая — через 4 до 8 недель в комплексе. Телят, вакцинированных в неблагополучных стадах в возрасте 1—2 месяцев, через 4—8 недель ревакцинируют. Все чаще применяют живые комбинированные вакцины, содержащие аттенуированные штаммы вирусов ПГ-3, ИРТ, ВД-БС и аденовироза. Иногда к таким вакцинам добавляют инактивированные пастереллы. Следует отметить, что интраназальная вакцинация не всегда создает достаточно выраженный иммунитет.
Не оставлена идея создания инактивированной вакцины против ПГ-3. В настоящее время ученые и практики высоко оценивают инактивированные вакцины, разработанные на основе новой технологии. Так, трехвалентная инактивированная вакцина из вирусов ИРТ и ВД-БС КРС, ПГ-3 зарекомендовала себя надежным препаратом Vira shield-4 TM.
При вакцинации молодняка КРС велико значение колострального иммунитета. Чем выше уровень молозивных AT, тем труднее добиться желаемого иммунизирующего эффекта при вакцинации. Колостральные AT даже в низких титрах (1:16) препятствуют активной продукции сывороточных AT в связи с блокированием вакцинного АГ. По этой причине рекомендуют прививать телят интраназально.
Молозивные AT в титрах 4,3—6,3 log2 ингибируют АГ-ответ у 2—2,5-месячных телят после подкожного введения вакцины. Однако при интраназальном введении вируса они практически не препятствуют образованию поствакцинальных анти-ГА, но чем выше уровень молозивных AT, тем менее выраженную сероконверсию наблюдают у привитых телят. Однократная вакцинация телят с молозивными AT не вызывает увеличения титров сывороточных AT Повышение уровня AT происходит только после ревакцинации, которая вызывает их быстрое накопление.
Разработана и предложена эффективная схема лечебно-профилактических мероприятий при ИРТ и ПГ-3, обеспечивающая надежную защиту КРС от этих инфекций в течение не менее 8 месяцев (срок наблюдения), а также снятие напряженной эпизоотической ситуации.
Телята получают материнские AT в зависимости от уровня AT в организме матери. У коров титр молозивных анти-ГА в день отела составлял 1:640 — 1:5120, а в сыворотке крови—до 1:60— 1:1280. Период полураспада молозивных AT потомства — 3—14 дней (в зависимости от класса глобулинов), но при достаточно высоком начальном титре они могут сохраняться до 2—3 и даже 5 месяцев. Гуморальные и секреторные поствакцинальные AT у вакцинированных телят сохраняются от 6 месяцев до одного года. Повторное подкожное введение живой вакцины вызывало АГ-ответ с максимальным пиком AT на 14—15-й день, продолжительность их циркуляции составляла 4—4,5 месяца. При интраназальной ревакцинации AT персистировали в 1,5 раза дольше. После интраназального введения живого вируса титр секреторных AT сохранялся в течение 6—8 недель, после ревакцинации AT выявляли до 5 месяцев. Продолжительность и напряженность постинфекционного или поствакцинального иммунитета ПГ-3 обеспечиваются преимущественно IgG и секреторными AT IgA, выработка которых стимулируется инфекционным и активным вакцинальным процессом. Считают, что уровень сывороточных AT не всегда коррелирует с устойчивостью вакцинированных животных к заражению. Привитые телята с титром гуморальных AT 6,3—10,3 log2 оказались устойчивыми.
Что касается роли материнского иммунитета в резистентности животного к ПГ-3, то в этом отношении нет однозначной точки зрения. Так, заражение телят с колост-ральными AT аэрозольно вирусом ПГ-3 вело к развитию заболевания, но в несколько меньшей степени, чем у серонегативных животных, лишенных молозива. У телят с молозивными AT уровень гуморальных и секреторных AT не увеличивался. В то же время было показано, что телята с титром материнских AT 1:32 и выше были устойчивы к интраназальному заражению, тогда как титр AT 1:20 и ниже не предохранял их от болезни. Считают, что молозивные AT предохраняют в среднем менее 50 % Телят месячного возраста.
Многие авторы доказали, что интраназальная прививка сокращает продолжительность выделения вирулентного вируса. Животные, иммунозированные внутримышечно, после аэрогенного заражения вирулентным вирусом ПГ-3 выделяли вирус в течение 6—9 дней, а привитые интраназально — в среднем 0,8—1,8 дня. Выделение вируса ПГ-3 зависит от метода введения вакцины, а продолжительность выделения — от иммунного статуса животных. В защите против ПГ-3 преобладают гуморальные факторы, но также хорошо выражен и клеточный иммунитет. Наличие его регистрируют в различного рода тестах: реакции кожной гиперчувствительности, реакции стимуляции лимфоцитов и реакции ингибиции миграции лейкоцитов.
Парагрипп-3 (ПГ-3) крупного рогатого скота (транспортная лихорадка) — острая контагиозная болезнь главным образом телят, характеризующаяся лихорадкой и поражением органов дыхания.
Характеристика возбудителя. Вирус относится к семейству Paramyxoviridae, подсемейству Paramyxovirinae, роду Respirovirus. Вирионы вируса плеоморфные, но чаще сферической или нитевидной формы, диаметр 150 нм и более. Состоят из нуклеокапсида спиральной симметрии и липопротеидной оболочки, на поверхности которой имеются характерные выступы. Геном представлен единой односпиральной линейной молекулой минус-РНК.
Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Вирус чувствителен к многократному замораживанию и оттаиванию, быстро погибает под действием УФ-излучения; воздействие жирорастворителями (эфир, хлороформ) ведет к полной потере инфекционной активности. Низкие значения pH губительно действуют на вирус, он хорошо сохраняется при pH 6,8—7,5. Прогревание при 50 °С в течение 80 мин ведет к его полной инактивации. Обработка 0,4%-ным раствором формалина и 1%-ным раствором (β-пропиолактона уничтожает инфекционность вируса. Воздействие 0,4%-ным этиленимином в течение 20 ч не действует на гемагглютинирующую активность, но уничтожает инфекционность вируса. Вирус хорошо переносит лиофилизацию.
Антигенная структура. В вирионах обнаружено шесть полипептидов (L, P, NP, М, HN, F), три из которых (L, P, NP) связаны с нуклеокапсидом и три (М, HN, F) входят в состав липопротеидной оболочки; два из них (HN, F) являются гликопротеинами, которые образуют выступы наружной оболочки. Они ответственны за гемагглютинирующую, нейраминидазную активность, адсорбцию вирионов на клеточной поверхности и за слияние клеток.
Антигенная вариабельность. В антигенном отношении все штаммы вирусов ПГ-3, выделенные в различных странах, идентичны и соответствуют прототипному штамму SF-4, выделенному в США. Установлены некоторые различия в гемагглютинирующей, нейраминидазной и синцитийобразующей активности. Установлено сходство (но не идентичность) между штаммами вируса ПГ-3 крупного рогатого скота и овец. Близкое антигенное родство вируса ПГ-3 крупного рогатого скота имеет с вирусом парагриппа человека третьего серотипа.
Антигенная активность. Вирус ПГ-3 обладает выраженной антигенной активностью. Как при естественной, так и при искусственной иммунизации появляются специфические антитела, которые обнаруживаются в РТГА, PH, РСК и РДП. Первыми выявляют антигемагглютинины (на 6—7-й день), которые обнаруживаются на значительном уровне (1 : 64—1 : 256) в течение 6 мес.
Культивирование вируса. Для размножения вируса ПГ-3 можно успешно применять первичные культуры клеток почек эмбриона крупного рогатого скота (ПЭК), почек, легких телят (ПТ, ЛТ) и тестикул бычков (ТБ). Кроме того, вирус ПГ-3 размножается и в перевиваемых линиях клеток: Таурус 1, МДВК, ПС (почки сайги), ПЛЭК, ВНК-21 и др. Все штаммы вируса вызывают сходное цитопатическое действие, характеризующееся образованием синцития и вакуолей. Сроки проявления гемадсорбции и ЦПД зависят не от штамма, а от вида культуры клеток. Вирус ПГ-3 размножается также в развивающихся куриных эмбрионах, однако зараженные эмбрионы не погибают.
Гемагглютинирующие свойства. Вирус хорошо агглютинирует эритроциты морской свинки и с меньшей активностью — эритроциты кролика, свиньи, коровы, обезьяны, мыши, буйвола, голубя, овцы, козы; не агглютинирует эритроциты лошади. Данные об агглютинации эритроцитов кур противоречивы. Свежевыделенные штаммы вируса лучше агглютинируют эритроциты при 4°С, чем при 37 °С. Гемагглютинирующая активность вируса повышается значительно после обработки эфиром и твином.
Гемадсорбирующие свойства. Клетки, инфицированные вирусом ПГ-3, приобретают свойство адсорбировать на своей поверхности эритроциты морской свинки и слабее — эритроциты других видов животных. Вирус вызывает диффузную адсорбцию эритроцитов. Важно отметить, что гемадсорбция проявляется раньше, чем цитопатическое действие в инфицированных клетках.
Экспериментальную инфекцию можно воспроизвести на телятах при отсутствии у них специфических антител. Лабораторные животные к вирусу невосприимчивы. Некоторым исследователям удалось вызвать экспериментальную инфекцию у ягнят, поросят и мышей-сосунов.
У животных отмечают повышение температуры тела до 41—42 °С в течение 1—2 нед, угнетение, одышку, серозно-слизистые истечения из носа, глаз, иногда развивается диарея, отказ от корма. Если нет осложнений секундарной бактериальной микрофлорой, то через 2—3 нед животные выздоравливают. При тяжелом течении болезни наблюдают сильный кашель, интенсивные выделения из носа, глаз, ротовой полости, появление эрозий на слизистой оболочке рта. У телят при подостром и хроническом течениях отмечают слизисто-гнойные выделения из носа и глаз, признаки плеврита, пневмонии, иногда энтерита. У взрослых животных инфекция, как правило, не сопровождается симптомами респираторного заболевания, однако у стельных коров она может привести к внутриутробному заражению плода, абортам или рождению нежизнеспособных телят.
На исход болезни влияют многие осложняющие стрессовые факторы, вирулентность циркулирующего штамма вируса, одновременное инфицирование животных другими вирусами (аденовирусы, вирусы инфекционного ринотрахеита, диареи и др.), хламидиями и пастереллами.
Патологоанатомические изменения. В основном находят в органах дыхания: катаральное воспаление слизистой носа, гиперемия слизистой и слизисто-гнойный экссудат в трахее, бронхах, уплотненные очаги в легких, признаки эмфиземы. Заглоточные и бронхиальные лимфатические узлы отечные, с кровоизлияниями. На плевре, брюшине, эпикарде — точечные кровоизлияния. На слизистой сычуга — кровоизлияния, эрозии и язвы. Слизистая кишечника отекшая, с кровоизлияниями.
Локализация вируса. Вирус ПГ-3 быстро размножается в клетках респираторного тракта и других органов. Через 1 — 10 дней после заражения его можно выделить из экскретов респираторного тракта, гортани, трахеи, легких, регионарных лимфатических узлов, селезенки, печени, надпочечников. Изолируют также из тестикул телят и быков и довольно часто из спермы быков-производителей.
Источник инфекции — больные животные. Заражение происходит воздушно-капельным путем и, возможно, перорально с молоком больных коров. Не исключается возможность передачи возбудителя половым путем, так как его обнаруживают в сперме, вагинальных выделениях, тканях абортированных плодов.
Диагностика. Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомических изменений и лабораторных исследований.
ПГ-3 диагностируют с использованием набора диагностикумов, выпускаемых биологической промышленностью. Ее обычно проводят параллельно с исследованием материала на аденовирусную, респираторно-синцитиальную инфекции, инфекционный ринотрахеит и вирусную диарею крупного рогатого скота.
Предварительный диагноз на ПГ-3 ставят в течение 2—3 дней на основании положительных результатов обнаружения вирусного антигена в патологическом материале в РИФ с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков и патологоанатомических изменений. Окончательно болезнь диагностируют в течение 10—30 дней на основании совпадения результатов РИФ с выделением и идентификацией вируса, обнаружения 4-кратного и более прироста антител в парных пробах сывороток крови.
Взятие и подготовка материала. Такие же, как при аденовирусной инфекции.
Лабораторная диагностика. Обнаружение вирусного антигена в патологическом материале (мазках-отпечатках) проводят с помощью РИФ; вирусную нуклеиновую кислоту определяют с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Изоляцию вируса из патологического материала проводят в первичной культуре клеток ПЭК, ЛЭК, ПТ, ТБ или в перевиваемых линиях клеток Таурус 1, ПЛЭК и др. Вирус считают выделенным, если он вызывает стабильное однотипное ЦПД и положительную (РГАд) с эритроцитами морской свинки.
Вирус ПГ-3 можно выделять и на куриных эмбрионах, которые лучше заражать в амниотическую полость. Выделение вируса на естественно-восприимчивых животных не проводят вследствие дороговизны и большой трудности в подборе телят, не имеющих специфических антител. Лабораторные животные нечувствительны к вирусу ПГ-3.
Идентификацию выделенного вируса проводят в серологических реакциях: РТГАд, РИФ, РТГА, PH, ИФА. Наиболее быстрый метод идентификации выделенного вируса, обладающего гемадсорбирующими свойствами, — РТГАд с эритроцитами морской свинки.
Ретроспективная диагностика. Для этой цели исследуют парные сыворотки крови, взятые не менее чем от 10—15 животных с интервалом 2—3 нед. Сыворотки исследуют в серологических реакциях: РТГА (чаще), ИФА, PH. Предложена очень чувствительная и простая реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Кроме исследования парных сывороток крови при серодиагностике ПГ-3 рекомендуется метод выявления секреторных антител в РТГА. Для этого берут пробы носовых секретов от 10—15 животных, проявивших клинические признаки болезни, и повторно — через 6—8 дней.
Положительным результатом исследования на ПГ-3 считают в случае выявления антител во второй пробе носовых секретов в титре 1 : 16 и выше (при отсутствии антител в первой пробе) или в случае установления 4-кратного и более увеличения титра антител во второй пробе по сравнению с первой.
Дифференциальная диагностика. Лабораторными исследованиями исключают ряд болезней, протекающих клинически сходно: аденовирусную, респираторно-синцитиальную инфекции, инфекционный ринотрахеит, вирусную диарею, хламидиоз, хотя эти инфекции очень часто протекают в различных ассоциациях.
Иммунитет и специфическая профилактика. Переболевшие животные в течение 3—4 мес невосприимчивы к повторному заражению. Важный фактор иммунитета — локальная невосприимчивость клеток слизистой оболочки респираторных органов, вызванная образованием секреторных антител и интерферона, чаще выявляемых в более высоком титре после интраназальной вакцинации живым вирусом, чем после подкожной вакцинации инактивированным вирусом. Гуморальные антитела после вакцинации сохраняются у животных в течение 6—12 мес. В защите против парагриппа-3 преобладают гуморальные факторы, но хорошо выражен также клеточный иммунитет. Телята, родившиеся от иммунных коров, получают антитела с молозивом. Продолжительность колострального иммунитета составляет 1,5—2 мес. Однако некоторые исследователи считают, что молозивные антитела предохраняют около 50 % телят месячного возраста. Вакцинация телят более эффективна в период угасания материнских антител, так как колостральные антитела препятствуют активной продукции сывороточных антител в связи с блокированием вакцинного антигена, поэтому рекомендуют прививать телят интраназально.
Для специфической профилактики парагриппа-3 применяют в основном живые вакцины из аттенуированных штаммов вируса. Все чаще применяют живые комбинированные вакцины, содержащие аттенуированные штаммы вирусов ПГ-3, ИРТ, ВД и инактивированные пастереллы и хламидии.
Парагрипп-3 крупного рогатого скота (Parainfluenza-3) – острая контагиозная болезнь преимущественно телят, характеризующаяся поражением респираторных органов.
Синонимы: параинфлуенца-3, острый катар верхних дыхательных путей, транспортная лихорадка.
Вирус парагриппа-3 впервые выявлен в США в 1959 г., затем его выделили во многих местах, у нас эта болезнь регистрируется с 1968 г.
ЭТИОЛОГИЯ. Возбудитель относится к РНК-содержащим вирусам семейства Paramixoviridae. Форма вирионов округлая, диаметр 150– 300 нм, тип симметрии спиральный. У него нет антигенных вариантов. Он обладает гемагглютинирующими свойствами.
Вирус не отличается высокой устойчивостью, прогревание быстро его инактивирует. Вне клетки он быстро погибает уже при 31– 36°С, а при 56°С инактивируется в течение 30 мин. Ультрафиолетовое облучение губительно действует на вирус. Он утрачивает инфекционные свойства под действием трипсина, дезоксихалата натрия, эфира, хлороформа.
Низкие температуры консервируют вирус. При 4°С он сохраняет инфекционную активность в течение 3–4 мес. Вирус хорошо агглютинирует эритроциты морской свинки, кролика, свиньи, коровы и др. Культивируют его на куриных эмбрионах и клеточных культурах.
АССОЦИАЦИИ ВИРУСА. Вирус парагриппа участвует в широко распространенных вирусно-бактериальных ассоциациях, обуславливающих возникновение пневмоэнтеритов, в этиологическом комплексе которых насчитывается до десятка вирусных и такое же количество бактериальных агентов. Часто вирус парагриппа сочетается с вирусами инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, пастереллой, сальмонеллами, эшерихиями и т. д.
ЭПИЗООТОЛОГИЯ. Источником инфекции служат больные телята, особенно болеющие данной инфекцией в острой форме. Передача инфекции происходит в основном воздушно-капельным путем, возможен алиментарный способ заражения. Болеет телята до года, хотя антитела также обнаруживают у овец, коз и верблюдов. Удавалось выделить вирус у буйволов, лошадей, собак и крыс. С носовым истечением вирус выделяется уже на 2 – 10 день после заражения.
О широком распространении заболевания свидетельствует тот факт, что бывает трудно найти телят, не имеющих специфических к параг-риппу-3 антител.
Заболевание регистрируется всюду в странах с развитым скотоводством.
ПАТОГЕНЕЗ. При заражении аэрогенным путем вирус локализируется в слизистой оболочке респираторного тракта и регулярно обнаруживается в слизи носовой полости, его выделяют из ткани легкого через 2–17 дней после заражения.
Вирус размножается в эпителиальных клетках респираторного тракта и в альвеолярных макрофагах. При этом происходит потеря ресничек у реснитчатых клеток бронхов и бронхиол. Вирус способен разрушать клетки и обуславливать развитие воспалительного процесса. Накопившиеся продукты распада и размножившийся вирус попадают в кровь и вызывают общую реакцию организма. Появление лихорадки объясняется выделением пирогенных веществ лейкоцитами, которые способны освобождать эти вещества под воздействием данного вируса. При этом снижается их фагоцитарная активность, что способствует активизации бактериальной микрофлоры, которая осложняет течение болезни.
КЛИНИЧЕСКАЯ КАРТИНА. Инкубационный период длится около суток. Болезнь проявляется подъемом температуры до 41– 42 °С, потерей аппетита, общим угнетением
У телят появляются истечения из носа, развивается кашель. При тяжелом течении вместе с ринитов появляются конъюнктивиты с обильным истечением из углов глаз, усиливается слюноотделение и иногда возникает диарея. Со временем истечения из носа приобретают слизисто-гнойный характер. В ротовой полости могут появляться эрозии. У больных животных возможно развитие бронхопневмонии и даже плевритов.
ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ проявляются в виде интерстициальной эмфиземы и бронхопневмонии, очаги которой обнаруживаются в передних долях легких, но они могут распространяться на все легкие. В трахее, бронхах и бронхиолах слизистая оболочка воспалена, в просвете скапливается тягучий экссудат, отмечается увеличение средостенных и бронхиальных лимфатических узлов.
ДИАГНОЗ. Постановка диагноза на парагрипп затруднительна в силу сходства болезни с другими респираторными заболеваниями. При постановке диагноза надо учитывать клинические, эпизоотологические и патологоанатомические данные о болезни, но окончательный диагноз ставят на основании вирусологических и серологических исследований. Вирус удается выделить из содержимого респираторного тракта и крови на 4–6-й день после заражения, а на 17-й день его обнаруживают в ткани легкого. Для выделения возбудителя берут тампоном пробу из носа, глотки и конъюнктивы, а при вскрытии трупа и из трахеального экссудата, пораженных легких и регионарных лимфатических узлов. Вирус удается изолировать из этих проб, если болезнь протекала остро.
При серологических исследованиях используют парные сыворотки. Применяют РГА, РЗГА, РН, РСК, РИФ, ИФА.
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНУЮ ДИАГНОСТИКУ проводят в отношении инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной болезни и аденовирусной инфекции с использованием серологической идентификации возбудителя.
Иммунофлуоресцентное исследование дает возможность выявлять вирусный антиген. В мазках-отпечатках со слизистой оболочки носовой полости выявляют вирус в десквамированных эпителиальных клетках.
В лечебных и профилактических целях телятам применяют сыворотку реконвалесцентов, которая дает хороший эффект при трехкратном применении в виде аэрозоля или подкожно с интервалом 12 дней.
Получают сыворотку от переболевших животных.
Для неспецифической терапии и профилактики парагриппа-3 разработан метод аэрозольного применения 0,25%-ного раствора этония с 10%-ным раствором сульфаниламидов из расчета 5 мл на 1 м3 помещения в течение 5–6 дней. Такую серию обработок можно повторить через 5 дней до устранения клинических симптомов заболевания.
Кроме того, для лечения парагриппа-3, обычно проявляющегося в ассоциации с условно патогенной и вирулентной микрофлорой, рекомендуется сочетание антибиотиков, сульфаниламидных и общестимулирующих препаратов.
МЕРЫ БОРЬБЫ И ПРОФИЛАКТИКИ при парагриппе-3 предусматривают оптимизацию кормления и содержания, исключение стрессовых воздействий в отношении телят и стельных коров.
Диагноз ставится на основании учета и анализа эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных, а главное, по результатам комплекса вирусологических и серологических исследований, проводимых в лаборатории. Клинико-эпизоотологические и патологоанатомические признаки служат лишь основанием для постановки предположительного диагноза, поскольку сходные с парагриппом симптомы отмечаются при ряде других болезней. Окончательный диагноз устанавливают только после результатов вирусологических и серологических исследований [2].
Парагриппом болеют животные всех возрастов, но более восприимчив молодняк в возрасте до 3-6 месяцев, реже болеют более старшие животные. В естественных условиях к вирусу парагриппа восприимчивы также овцы, лошади, верблюды, свиньи, собаки, дикие животные. Источником возбудителя инфекции являются больные и переболевшие животные, а также взрослые животные-вирусоносители. Во внешнюю среду вирус выделяется с выдыхаемым воздухом, носовой слизью, слезой, экскрементами, а также с молоком больных коров. Инфекция возникает в любое время года, но чаще в осенне-зимний период.
Болезнь характеризуется высокой контагиозностью, чаще проявляется небольшими вспышками и редко принимает характер эпизоотии.
Наиболее характерными признаками инфекции является повышение температуры тела до 41-42°С в течение 1-2 недель, угнетение, одышка, серозно-слизистые истечения из носа, глаз, иногда развивается диарея, отказ от корма. При тяжелом течении болезни наблюдают сильный кашель, интенсивные выделения из носа, глаз, ротовой полости, появление эрозий на слизистой оболочке рта. У телят при подостром и хроническом течениях отмечают слизисто-гнойные выделения из носа и глаз, признаки плеврита, пневмонии, иногда энтерита. У взрослых животных инфекция не сопровождается симптомами респираторного заболевания, однако у стельных коров она может привести к внутриутробному заражению плода, абортам или рождению нежизнеспособных телят [3].
Лабораторный диагноз на парагрипп устанавливают на основании серологических и вирусологических исследований.
Для серологического исследования направляют парные пробы сыворотки крови, т. е. взятые от одних и тех же животных первый раз в начале заболевания, а затем второй раз через 14-20 дней. Для диагностики парагриппа используют реакцию задержки гемагглютинации (РЗГА) и РНГА, РН и реакцию нейтрализации вирусных гемагглютининов (РНВГ), иммуноферментного анализа (ИФА), иммунофлюоресценции (ИФ), полимеразной цепной реакции (ПЦР). Диагноз считается установленным в одном из случаев: 4-кратное и более увеличение титра антител в парных сыворотках крови; выделение вируса из патологического материала и его идентификация.
Для вирусологического исследования направляют следующий материал: пробы экссудата с конъюнктивы глаз, слизистой оболочки носовой полости. Материал отбирают в стерильные флаконы или пробирки, добавляют незначительное количество (2-3 мл) стерильного физиологического раствора. От вынужденно убитых и павших животных отбирают кусочки слизистой оболочки носовой полости, гортани, трахеит, легкого (на границе здоровой и пораженной ткани), селезенки, заглоточные, средостенные, бронхиальные и брыжеечные лимфоузлы. При наличии конъюнктивита или кератита берут ткани глаз. Отобранный материал помещают в стерильные стеклянные флаконы с притертыми пробками РШИ в стерильные полиэтиленовые мешки, срочно замораживают в морозильных камерах и доставляют в лабораторию в термосе со льдом или в сосуде Дюара с жидким азотом. Лабораторная диагностика включает: обнаружение антигена в патологическом материале (мазках, отпечатках, срезах), полученном от больных животных, в РИФ; выделение возбудителя из патологического материала в культуре клеток почки или легких эмбриона коров и его идентификацию в РТГА, РНГАд, РИФ и др.; выявление антител в сыворотке крови больных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в РТГА. Для выделения вируса из патологического материала применяют метод заражения культуры клеток и реакцию иммунофлюоресценции. Идентификацию вирусного антигена на культуре клеток проводят в реакции нейтрализации, используя заведомо известные специфические сыворотки. Ретроспективная серологическая диагностика парагриппа-3 заключается в выявлении специфических антител в сыворотке крови больных или переболевших животных.[4]
При вскрытии трупов телят обнаруживают гистологические изменения характеризующиеся пневмонией с вовлечением в патологический процесс бронхиального и альвеолярного эпителия, утолщением эпителиального слоя бронхиол, просветы которых часто закупорены некротическими массами. В эпителиальных клетках бронхиол и альвеол присутствуют эозинофильные цитоплазматические и внутриядерные включения, которые могут служить характерным признаком парагриппозной инфекции [5].
Для специфической профилактики используют живые и инактивированные моно- и ассоциированные вакцины, гипериммунные сыворотки. Для ликвидации заболевания используют общие противоэпизоотические мероприятия – ограничение движения скота, дезинфекция, карантинирование больных животных.
Для лечения используют гипериммунные сыворотки и сыворотки реконвалесцентов, в которых имеются антитела к вирусу ПГ одновременно с антибактериальными и иммуностимулирующими препаратами. Применяют также симптоматические методы лечения [3].
Библиографический список
2. Сюрин, В.Н. Частная ветеринарная вирусология / В.Н. Сюрин, Н.В. Фомина. – М.: Колос, 1991. - С. 61-67.
Мартынов, Ю.В. Вакцинопрофилактика парагриппа-3 крупного рогатого скота. / Ю.В. Мартынов, П.А. Иванов, Н.И. Цунская // Инфекционные болезни сельскохозяйственных животных:сборник научных трудов. –Новосибирск, 1984. – С. 100-102.
Читайте также: