Вирусная гемагглютинация и ее торможение практическое применение

Обновлено: 24.04.2024

АГ вирусов. По структуре они тримеры (из 3 мономеров), каждый мономер состоит из 2 цепей: легкой и тяжелой. Одним участком легкая часть погружена в липидный суперкапсид, а другой участок дисульфидными связями соединена с тяжелым участком. Наружный участок тяжелой цепи – эпитоп (специфичность) и этим же участком прикрепляет вирус к сиаловым рецепторам дыхательных путей.У легкой части есть участок, обеспечивающий слияние суперкапсида с мембраной клетки.У легкой цепи есть участок одинаковый для всех вирусов одной группы – консервированный участок. Наличие Н-АГ определяют РГА, а тип Н-АГ определяют РТГА (реакция торможения агглюцинации).

Реакция торможения гемадсорбции (РТГадс). Принцип реакции базируется на явлении гемадсорбции. Оно заключается в том, что эритроциты приобретают способность адсорбироваться на поверхности культур клеток, которые испытали модификацию в результате появления в оболочке гликопротеинов вирусов. Антитела иммунной сыворотки при взаимодействии с поверхностными антигенами вирусов, представленными в оболочке, связывают их, вследствии чего тормозится адсорбция эритроцитов на клетках.

Компонентами реакции являются вирусы, способные к гемадсорбции, культура клеток, в которой они развиваются, противовирусная сыворотка с разведением 1:10 и больше, 0,4‑1,0 % завись эритроцитов петуха, гвинейской свинки или человека, трижды отмытая физраствором или раствором Хенкса. Специфические сыворотки, которые используют в опыте, предварительно обрабатывают ферментами, которые разрушают рецепторы, поддают температурному влиянию, чтобы освободить от неспецифических ингибиторов гемагглютинации. Реакцию ставят в пробирках или на специальных стеклянных пластинах, на которых есть монослой культуры клеток. Одно из преимуществ РТГадс заключается в том, что ее можно ставить к появлению цитопатического эффекта.




Практическая значимость использования реакций с метками (РИФ, ИФА, РИА и др.). Ингредиенты. Варианты постановки.

РИФ.Один из компонентов иммунной реакции , как правило АТ , метится ( конъюгируется ) флюоресцирующим красителем . Чаще всего для этого используют флюоресцеинизотиоционаты ( ФИТЦ ) – зеленое свечение в ультрафиолетовом свете и тетраметилродаминизотионат ( ТРИТЦ ) – оранжево -красное свечение. АТ , которые метят флюорохромом , должны обладать физико -химической гомогенностью . Наиболее подходящими для мечения являются моноклональные антитела . АГ ( искомым или известным ) для РИФ могут быть антигены , локализованные в клетке или на клетке , срезах тканей.

РИФ выявляют и идентифицируют:

4. микроорганизмы в чистых и смешанных культурах , в мазках - отпечатка ;

5. клетки , пораженные вирусами и другими микроорганизмами;

6. Т и В лимфоциты , нормальные киллеры и другие клетки иммунной системы.

4. для изучения биосинтеза иммуноглобулинов в плазмоцитах , их транспорта из клеток , иммуноглобулиновых рецепторов В лимфоцитов

5. для выявления титра антител при серодиагностике

6. для выяснения закономерностей возникновения и развития злокачественных новообразо- ваний на клеточном и тканевом уровне и т.д.

Варианты постановки РИФ:

3. Прямая РИФ. Для каждого изучаемого АГ должна быть гомологичная иммунофлюоресцентная сыворотка

4. Непрямая РИФ (РНИФ) основана на использовании двух различных антисывороток . Вначале применяют немеченые АТ к искомому АГ (или искомые АТ в сыворотке человека к известному АГ). На 2-м этапе образовавшийся комплекс АГ-АТ обрабатывают антилюминесцентной сывороткой, содержащей меченые флюорохромом АТ к иммуноглобулинам того вида животных , чья сыворотка использовалась на 1 этапе реакции

5. Антикомплементарный метод РИФ ( РИФСК ) основан на способности комплемента (сыворотки морских свинок) фиксироваться на иммунном комплексе. В этом варианте используют люминесцентные сыворотки против глобулинов ( комплемента ) морской свинки

6. РГИФ (реакция гашения иммунофлюоресценции). Используется для выявления титра АТ в исследуемой сы- воротке , при наличии известного клеточного АГ и специфической к нему люминесцентной сыворотки. На первом этапе на известный АГ наносят исследуемую сыворотку , и если в ней есть соответствующие антигену антитела , они занимают эпитопы АГ. При добавлении на втором этапе люминесцентной сыворотки к данным АГ, присоединение люминесцентных АТ к эпитопам происходить не будет . Свечения не наблюдается.

ИФА.Особенностью метода ИФА является использование функционально активной биологической молекулы фермента . Комплекс конъюгированных иммунореагентов с ферментами ( ф ) проявляет функциональную активность , т. е. сохраняется высокая специфичность иммунореагентов и способность фермента расщеплять добавленный субстрат ( с ) с образованием легко обнаруживаемых продуктов . В связи с этим можно регистрировать и учитывать количественно взаимодействие иммунореагента , например АТ с гомологичным АГ . Вначале ИФА использовали в иммуногистохимии для выявления локализации тканевых и клеточных АГ , а затем были разработаны варианты реакции , которыми можно качестdенно и количественно выявить иммунореагенты в жидкостях .

5. Ферменты применяют только те , которые расщепляют субстрат с образованием продуктов легко (улавливаемых) определяемых: ПХ ( пероксидаза хрена ), ЩФ (щелочная фосфатаза), каталаза, уреаза, фосфолипаза и др. Ферменты, используемые в ИФА должны отвечать следующим требованиям: содержать в структуре определенные реакционные группы , по которым идет связывание с молекулой иммунореагента не меняя его специфичности; быть чистыми; сохранять ферментативную активность в конъюгированном с иммунореагентом виде. Субстрарами в зависимости от реагента используют: 5- аминосалициловую кислоту, ортофенилендиамин, пирогаллол и другие

6. Иммунореагенты. В настоящее время иммунореагентами, с которыми связыdают ферменты, могут быть АТ, АГ. Фермент присоединяют к иммунореагенту с помощью бифункциональных реагентов: глутарового альдегида , периодат натрия , фенилендималеимида и др. Эти соединения обладают химически активными группировками , которыми они ковалентно взаимодействуют с биомолекулами. Так , глутаровый альдегид реагирует преимущественно с E аминогруппами аминокислот , в частности лизина , периодат натрия с углеводными остатками.

Классификация и варианты ИФА Существует множество вариантов ИФА. Прежде всего ИФА включает две группы способов постановки реакции : твердофазный ( гетерогенный ) – ТИФА и гомогенный - ГИФА . Они в свою очередь подразделяются на различные модификации.

Гетерогенный ( твердофазный ) способ - твердофазный иммуноферментный анализ ( ТИФА ).При этом способе АГ или АТ предварительно адсорбируют на твердый носитель ( сорбционно и ковалентно ). В качестве твердой фазы используют различные микропористые ( сефароза , стекло , биогель ) и непористые носители ( полистирол , полихлорвинил , нейлон , полистирен и другие ). По физическому состоянию это могут быть гели , шарики , диски , титрационные панели.

Варианты ТИФА Существуют неконкурентные и конкурентные варианты. При неконкурентных вариантах реакция АГ -АТ происходит на поверхности твердой фазы, ингредиенты добавляются последовательно и определяется количество метки, связавшейся с носителем. При этом количество связавшейся метки прямо пропорционально количеству искомого АТ или АГ в исследуемом образце. При конкурентных вариантах постановки реакции немеченый исследуемый образец и известное количество меченого искомого вносят в лунки , сенсибилизируют АГ или АТ одновременно , где происходит конкуренция между первым и вторым образцами за связывание с твердофазным иммуносорбентом . В этом случае количество связанной с твердой фазой метки обратно пропорционально количеству искомого образца .

Конкурентные методы. На первом этапе к ТФ прикрепляется АТ против искомого АГ. Затем вносят испытуемую пробу и известное количество АГ, меченого ферментом, который конкурирует за центры связывания антител ( важ-ным является правильный подбор концентрации меченого АГ ). Или на первом этапе к ТФ прикрепляется АГ к искомым АТ (например , в сыворотке больного ). Затем вносят исследуемую сыворотку ( АТ ? к АГ ) и известное количество коъюгирующей с ферментом иммунной сыворотки , т.е. сыворотку с АТхФ к данному АГ . Эти сыворотки конкурируют за связывание с эпитопами антигена.

ПРИМЕНЕНИЕ ИФА. Методы ИФА широко используются в различных областях биологии и медицины.РИА это методики , в которых наличие ИК определяется с помощью радиоактивной метки , предварительно введенной в состав антител или антигенов . Наиболее широко используют две разновидности РИА: радиоиммунопреципитация ( РИП ) и твердофазный радиоиммунологический анализ ( ТФ РИА ).

Методика РИП заключается в:

5. формировании в растворе радиоактивного иммунного комплекса (при предварительном введении в состав одного из участников реакции антиген -антитело радиоактивной метки),

6. отделении этого комплекса от не вошедших в него макромолекул

7. анализе его радиоактивного компонента.

В основе РГА лежит способность эритроцитов склеиваться при адсорбции на них определенных антигенов. В качестве исследуемого материала при гемагглютинации используют аллантоисную, амниотическую жидкость, суспензию хорионаллантоисных оболочек куринных эмбрионов, взвеси и экстракты из культур или органов животных, зараженных вирусами, нативный инфекционный материал. РГА не является серологической, поскольку происходит без участия иммунной сыворотки и используется для выбора рабочего разведения антигена для постановки РТГА или наличия антигена (вируса) в исследуемом материале (например, при гриппе). В реакции используются эритроциты животных, птиц, человека I (0) группы крови.

Для постановки ориентировочной РГА на предметное стекло наносят каплю 5% взвеси эритроцитов и каплю испытуемого материала, тщательно смешивают. При положительном результате через 1-2 минуты макроскопически наблюдают появление хлопьевидной агглютинации эритроцитов.

Для постановки РГА в развернутом ряду в лунках полистероловых планшетов готовят двукратно возрастающие разведения исследуемого материала на физиологическом растворе в объёме 0,5 мл. Во все пробирки вносят по 0,5 мл 0,25 - 1% взвеси эритроцитов. Результаты учитывают после полного оседания эритроцитов в контроле (эритроциты + физиологический раствор). Реакцию учитывают по характеру осадка эритроцитов. В положительных случаях степень агглютинации отмечают плюсами. Четырьмя плюсами оценивают реакцию, имеющую вид тонкой пленки из склеившихся эритроцитов, покрывающей дно пробирки (зонтик), реакцию с просветами в пленке отмечают тремя плюсами, наличие пленки с фестончатыми кружевными краями из склеившихся эритроцитов обозначают двумя плюсами, хлопьевидный осадок эритроцитов, окруженный зоной комочков агглютинированных эритроцитов соответствует одному плюсу. Резко очерченный осадок эритроцитов, неотличимый от контроля показывает отсутствие агглютинации. За титр принимают предельное разведение исследуемого материала, вызвавшее агглютинацию эритроцитов на два плюса.

При положительном результате РГА исследование продолжают, определяя тип выделенного вируса с помощью реакции торможения гемагглютинации типоспецифическими сыворотками.

РТГА основана на свойстве антисыворотки подавлять вирусную гемагглютинацию, так как нейтрализованный специфичными антителами вирус утрачивает способность агглютинировать эритроциты. При ориентировочном типировании вирусов используют капельный метод на стекле. Для окончательного установления типовой принадлежности выделенного вируса и титрования антител в сыворотках ставят развернутую РТГА в пробирках или в лунках. С этой целью готовят двухкратные разведения сывороток на физиологическом растворе и разливают по 0,25 мл. К разведениям сыворотки прибавляют по одной капле материала, содержащего вирус и по одной капле 1% взвеси эритроцитов.

При использовании РТГА для определения типа вируса, используют типоспецифические сыворотки, которые добавляют к равному объему рабочего разведения антигена. Типовую принадлежность выделенного вируса устанавливают по специфической иммунной сыворотке, показавшей наивысший титр антител к этому вирусу.

РГА и РТГА широко применяется для диагностики вирусных инфекций (клещевой энцефалит, грипп и др.) с целью обнаружения специфических антител и для идентификации многих вирусов по их антигенам.

В основе реакции гемагглютинации лежит способность некоторых вирусов склеивать эритроциты при адсорбции на них. Этой способностью обладают лишь сложно устроенные вирусы, в суперкапсидной оболочке которых имеется белок гемагглютинин (вирусы гриппа, ПГ и другие).

Для обнаружение гемагглютинирующего вируса в исследуемом материале;

Для определение гемагглютинирующего титра вируса

1% взвесь эритроцитов. Выбор эритроцитов зависит от гемагглютинирующих свойств предполагаемого вируса.

Для получения взвеси эритроцитов берут кровь при убое животного или птицы с антикоагулянтом (гепарин, лимонно-кислый натр, жидкость Альсевера. Эритроциты отмывают физраствором с последующим центрифугированием. Надосадочная жидкость должна быть прозрачной. Её удаляют, а из осадка делают 1% взвесь (на 1 кубик эритроцитов берут 100мл физраствора).

Методика постановки РГА.

Капельная РГА. На предметное стекло наносят каплю испытуемого ВСМ и каплю 1% взвеси эритроцитов, перемешивают. При наличии гемагглютинирующего вируса появятся красные хлопья в результате склеивания эритроцитов. Метод ориентировочный.

2 метод. Реакцию ставят на плексиглазовых пластинках с лунками. В 1 ряду 12 лунок, 6 рядов. В ряду лунок готовят ряд последовательных двукратных разведений. Для этого вносят в каждую лунку по 0,5мл физраствора. Затем в первую лунку добавляют 0,5мл ВСМ, из 1й после перемешивния (3хкратного) во вторую, из 2й в 3ю и так далее, из последней в дезраствор. Т.о. получают разведение 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 и т.д. в контрольной лунке смешивают равные объемы физраствора и эритроцитов, а в остальные добавляют по 0,5мл 1% взвеси эритроцитов.

Пластинки слегка встряхивают и оставляют на ровном месте на 35-40 минут.

Учет РГА. Если реакция положительная – на дне лунки образуется осадок в виде перевернутого раскрытого зонтика из склеенных эритроцитов. Значит, в исследуемом материале содержится гемагглютинирующий вирус. При отрицательной реакции и в контроле на дне лунки образуется осадок в виде красной пуговки (склеивания не наблюдается).

Реакцию учитывают в крестах.

+++ - 100% гемагглютинация; ++ - 50% гемагглютинация; + - 25% гемагглютинация; - - реакция отрицательная, 0% гемагглютинация.

Наибольшее разведение ВСМ, вызывающее гемагглютинацию не менее, чем на ++ называется гемагглютинирующим титром вируса и соответствует 1й гемагглютинирующей единице. (ГАЕ).

Если 1 ГАЕ = 1:32, то 4 ГАЕ = 1:8

Вид вируса с помощью РГА не определяют. РГА - не серологическая реакция, так как в ней не участвуют антитела.

82 Реакция торможения гемагглютинации (ртга) и её практическое использование в вирусологии, достоинства и недостатки.

В основе РТГА лежит взаимодействие антител с антигенами, причем антитела (антигемагглютинины) блокируют гемагглютинин вируса, и он утрачивает способность склеивать эритроциты. Эту реакцию используют:

Для идентификации вирусов (определяют антиген по заведомо известным антителам)

Для прижизненной серологической диагностики (исследуют сыворотку крови на наличие антител по заведомо известному антигену) – у реконвалесцентов, вакцинированных животных определяют таким образом напряженность иммунитета.

Принцип РТГА

В реакции торможения гемагглютинации выделяют 2 фазы:

Специфическая. В эту фазу смешивают сыворотку с антигеном. Если в сыворотке содержатся антитела, гомологичные антигену, то образуется комплекс антиген + антитело, и вирус утрачивает гемагглютинирующие свойства;

Индикаторная. Роль индикатора выполняет 1% взвесь эритроцтов, при добавлении которой гемагглютинации не наблюдается (если антитела и антиген гомологичны) – положительная реакция (осадок в виде пуговки). При отрицательной реакции, если антиген и антитела гетерологичны, блокировки вируса не происходит, на дне образуется осадок в виде зонтика.

Компоненты реакции

Испытуемый вируссодержащий материал или стандартный вирус (диагностикум)

Иммунная специфическая сыворотка или испытуемая сыворотка

Методика постановки РТГА

РТГА для идентификации вируса

Реакцию ставят на плексиглазовых пластинках с лунками. В ряду лунок готовят ряд последовательных двукратных разведений иммунной специфической сыворотки к предполагаемому вирусу. Для этого разливают по 0,25мл физраствора, а затем в первую вносят 0,25мл сыворотки и переносят в последующие, из последней в дезраствор. Таким образом, получают разведения 1:2, 4, 8, 16 и так далее.

В каждую лунку добавляют по 0,25мл ВСМ в количестве 4 ГАЕ (см. РГА) и выдерживают 20 минут при комнатной температуре или в термостате.

Во все лунки добавляют по 0,5мл 1% взвеси эритроцитов. Выбор эритроцитов такой же, как для РГА,

В контрольных лунках (2х) смешивают сыворотку с эритроцитами и физраствор с эритроцитами (по 0,5 каждого компонента). Выдерживают 20 минут при комнатной температуре и учитывают реакцию.

Если реакция положительная – на дне луно образуется осадок в виде красной пуговки, в контрольных лунках также должны быть пуговки. По антителам сыворотки определяют вид вируса.

Реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жид­кости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.

9. Методы микробиологической диагностики вирусных заболеваний. Методы выделе­ния и идентификации вирусов. Серологические реакции, используемые для диаг­ностики вирусных болезней.

Для диагностики вирусных заболеваний применяют следующие методы:

2) Иммунной электронной микроскопии.

7) Использование ДНК-(РНК)-зондов.

8) Цепная полимеразная реакция.

О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), кото­рое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток.

Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности.

Методов индикации вирусов:

1) Реакция гемадсорбции - основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорби­ровать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее по­становки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На по­верхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.

2) Реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жид­кости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.

Серологические методы могут быть использованы для обнаружения в исследу­емом материале как специфических антител, так и вирусных антигенов. Для этих це­лей могут быть использованы все известные серологические реакции:

1) Реакция связывания комплемента.

2) Реакция пассивной гемагглютинации и ее варианты (РНАг, РНАт).

3) Реакция торможения гемагглютинации.

4) Реакция гемагглютинации иммунного прилипания (комплекс антиген + анти­тело в присутствии комплемента адсорбируется на эритроцитах).

5) Реакции преципитации в геле.

6) Реакции нейтрализации вирусов.

7) Радиоиммунный метод.

8) Методы иммуноферментного анализа.

Из перечисленных методов все большей популярностью пользуются методы им­муноферментного анализа, отличающиеся высокой специфичностью и удобством использования.

10. Особенности противовирусного иммунитета. Роль фагоцитоза и гуморальных факторов в иммунитете. Интерфероны, характеристика основных свойств, классифи­кация. Особенности действия интерферонов на вирусы.

В защите организма от вирусов участвуют все системы иммунитета, однако про­тивовирусный иммунитет имеет существенные специфические черты. Они опреде­ляются тем, что в первую очередь на проникновение вируса в организм реагируют не системы комплемента и макрофагов, а системы интерферонов и Т-киллерных кле­ток. Другая особенность формирования иммунитета связана с тем, что вирусы ока­зывают слабое антигенное воздействие на В-лимфоциты и для их активирования, пролиферации и дифференцировки необходимо участие Т-хелперов и соответствен­но представление последним процессированного вирусного антигена (пептидных фрагментов) при участии молекул МНС класса II. Поэтому роль макрофагов и дру­гих антигенпредставляющих клеток заключается не столько в самом фагоцитозе, сколько в процессировании и представлении антигена.

На проникновение вируса раньше всего реаги­рует система интерферонов, которые подавляют внутриклеточное размножение вирусов. Кроме того, противовирусное действие оказывают находящиеся в сыворотке крови a- и b-ингибиторы. Альфа-ингибитор — термостабильный субстрат, входит в состав а-глобулинов, препятствует адсорбции вирусов на клетке, Разрушается нейраминидазой орто- и парамиксовирусов. Бета-ингибитор — термолабильный мукопептид, входит в состав b-глобулинов, подавляет размно­жение орто- и парамиксовирусов.

Однако интерферонов и ингибиторов оказалось недостаточно для защиты от вирусов, поэтому природа создала против вирусов другой, очень мощный механизм защиты на уровне организма. Он представлен прежде всего Т-цитотоксическими лимфоцитами и другими киллерными клетками. Эти клетки распознают все чуже­родные антигены, в том числе и вирусные, предсталяемые им молекулами МНС класса I. Главное биологическое значение Т-киллерных клеток и заключается в обнаружении и уничтожении любых клеток, инфицированных чужеродными антигенами.

Интерферон представляет собой семейство белков-гликопротеидов, которые синтезируются клетками иммунной системы и соединитель­ной ткани. В зависимости от того, какими клетками синтезируется интерферон, выделя­ют три типа: α, β и γ-интерфероны.

Альфа-интерферон вырабатывается лейко­цитами и он получил название лейкоцитар­ного; бета-интерферон называют фибробластным, поскольку он синтезируется фибробластами — клетками соединительной ткани, а гамма-интерферон — иммунным, так как он вырабатывается активированными Т-лимфоцитами, макрофагами, естественными киллерами, т. е. иммунными клетками.

Выработка интерферона резко возрастает при инфицировании виру­сами, помимо противовирусного действия интер­ферон обладает противоопухолевой защитой, так как задерживает пролиферацию (размноже­ние) опухолевых клеток, а также иммуномодулирующей активностью, стимулируя фагоцитоз, естественные киллеры, регулируя антителообразование В-клетками, активируя экспрессию главного комплекса гистосовместимости.

Механизм действия. Интерферон непосредственно на вирус вне клетки не действует, а связывается со спе­циальными рецепторами клеток и оказыва­ет влияние на процесс репродукции вируса внутри клетки на стадии синтеза белков.

Реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жид­кости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.

9. Методы микробиологической диагностики вирусных заболеваний. Методы выделе­ния и идентификации вирусов. Серологические реакции, используемые для диаг­ностики вирусных болезней.

Для диагностики вирусных заболеваний применяют следующие методы:

2) Иммунной электронной микроскопии.

7) Использование ДНК-(РНК)-зондов.

8) Цепная полимеразная реакция.

О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), кото­рое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток.

Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности.

Методов индикации вирусов:

1) Реакция гемадсорбции - основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорби­ровать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее по­становки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На по­верхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.

2) Реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жид­кости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.

Серологические методы могут быть использованы для обнаружения в исследу­емом материале как специфических антител, так и вирусных антигенов. Для этих це­лей могут быть использованы все известные серологические реакции:

1) Реакция связывания комплемента.

2) Реакция пассивной гемагглютинации и ее варианты (РНАг, РНАт).

3) Реакция торможения гемагглютинации.

4) Реакция гемагглютинации иммунного прилипания (комплекс антиген + анти­тело в присутствии комплемента адсорбируется на эритроцитах).

5) Реакции преципитации в геле.

6) Реакции нейтрализации вирусов.

7) Радиоиммунный метод.

8) Методы иммуноферментного анализа.

Из перечисленных методов все большей популярностью пользуются методы им­муноферментного анализа, отличающиеся высокой специфичностью и удобством использования.

10. Особенности противовирусного иммунитета. Роль фагоцитоза и гуморальных факторов в иммунитете. Интерфероны, характеристика основных свойств, классифи­кация. Особенности действия интерферонов на вирусы.

В защите организма от вирусов участвуют все системы иммунитета, однако про­тивовирусный иммунитет имеет существенные специфические черты. Они опреде­ляются тем, что в первую очередь на проникновение вируса в организм реагируют не системы комплемента и макрофагов, а системы интерферонов и Т-киллерных кле­ток. Другая особенность формирования иммунитета связана с тем, что вирусы ока­зывают слабое антигенное воздействие на В-лимфоциты и для их активирования, пролиферации и дифференцировки необходимо участие Т-хелперов и соответствен­но представление последним процессированного вирусного антигена (пептидных фрагментов) при участии молекул МНС класса II. Поэтому роль макрофагов и дру­гих антигенпредставляющих клеток заключается не столько в самом фагоцитозе, сколько в процессировании и представлении антигена.

На проникновение вируса раньше всего реаги­рует система интерферонов, которые подавляют внутриклеточное размножение вирусов. Кроме того, противовирусное действие оказывают находящиеся в сыворотке крови a- и b-ингибиторы. Альфа-ингибитор — термостабильный субстрат, входит в состав а-глобулинов, препятствует адсорбции вирусов на клетке, Разрушается нейраминидазой орто- и парамиксовирусов. Бета-ингибитор — термолабильный мукопептид, входит в состав b-глобулинов, подавляет размно­жение орто- и парамиксовирусов.

Однако интерферонов и ингибиторов оказалось недостаточно для защиты от вирусов, поэтому природа создала против вирусов другой, очень мощный механизм защиты на уровне организма. Он представлен прежде всего Т-цитотоксическими лимфоцитами и другими киллерными клетками. Эти клетки распознают все чуже­родные антигены, в том числе и вирусные, предсталяемые им молекулами МНС класса I. Главное биологическое значение Т-киллерных клеток и заключается в обнаружении и уничтожении любых клеток, инфицированных чужеродными антигенами.




Интерферон представляет собой семейство белков-гликопротеидов, которые синтезируются клетками иммунной системы и соединитель­ной ткани. В зависимости от того, какими клетками синтезируется интерферон, выделя­ют три типа: α, β и γ-интерфероны.

Альфа-интерферон вырабатывается лейко­цитами и он получил название лейкоцитар­ного; бета-интерферон называют фибробластным, поскольку он синтезируется фибробластами — клетками соединительной ткани, а гамма-интерферон — иммунным, так как он вырабатывается активированными Т-лимфоцитами, макрофагами, естественными киллерами, т. е. иммунными клетками.

Выработка интерферона резко возрастает при инфицировании виру­сами, помимо противовирусного действия интер­ферон обладает противоопухолевой защитой, так как задерживает пролиферацию (размноже­ние) опухолевых клеток, а также иммуномодулирующей активностью, стимулируя фагоцитоз, естественные киллеры, регулируя антителообразование В-клетками, активируя экспрессию главного комплекса гистосовместимости.

Механизм действия. Интерферон непосредственно на вирус вне клетки не действует, а связывается со спе­циальными рецепторами клеток и оказыва­ет влияние на процесс репродукции вируса внутри клетки на стадии синтеза белков.

Читайте также: