Вирусы какого цвета по капилляроскоп

Обновлено: 17.04.2024

Микозы стоп являются актуальной медико-социальной проблемой в связи с широкой распространенностью. По данным ВОЗ грибковые заболевания регистрируются у 1/3 жителей планеты. Известно, что в России поверхностные микозы кожи составляют 14% среди дерматологических заболеваний, 34,6% из которых приходится на микозы стоп. Заболеваемость рожей нижних конечностей также не имеет тенденции к снижению и на протяжении многих лет остается стабильно высокой, особенно у лиц старшей возрастной группы. Результаты ряда исследований подтверждают роль коморбидных состояний в патогенезе и характере клинического течения рожи, в особенности таких, как сердечно-сосудистые нарушения, хроническая лимфовенозная недостаточность, эндокринная патология. Рецидивирующее течение рожи, частая антибиотикотерапия этого заболевания, а также сопутствующие заболевания способствуют присоединению грибковой инфекции, ее диссеминации, длительному упорному течению и низкой эффективности стандартных схем терапии микозов стоп и рецидивирующей рожи нижних конечностей. В связи с этим имеется необходимость поиска вариантов дополнительных диагностических мероприятий и эффективных вариантов комплексного лечения, расширения стандартных схем терапии микозов стоп у пациентов с рецидивирующей рожей нижних конечностей.

1. Белоусова Т.А., Горячкина М.В. Современный взгляд на проблему онихомикоза // Фарматека. 2010. № 11(205). С. 32-37.

2. Потекаев Н.Н., Корсунская И.М., Серов Н.Д. Микотическая инфекция в России: заболеваемость, клинические характеристики, опыт терапии отечественными антимикотиками // Клиническая дерматология и венерология. 2006. № 3. С.92-95.

3. Разнатовский К.И., Родионов А.Н., Котрехова Л.П. Дерматомикозы. Руководство для врачей. СПб.: Издательский дом СПбМАПО, 2006. С.184.

5. Котрехова Л.П. Сахарный диабет и онихомикоз стоп. Этиология, клиника, лечение // Вестник дерматологии и венерологии. 2008. № 6. С. 89-93.

6. Гудкова Ю.И., Котрехова Л.П., Разнатовский К.И., Колб З.К., Шурпицкая О.А., Выборнова И.В., Фролова Е.В., Долго-Сабурова Ю.В. Микозы кожи и ее придатков у пациентов, длительно получающих системные глюкокортикостероиды // Проблемы медицинской микологии. 2006. № 8. С. 5-11.

7. Еровиченков А.А., Брико Н.И., Малышев Н.А., Потекаева С.А., Ковалева Е.В., Кардонова Е.В., Иванова И.В., Михайленко О.С., Санин Б.И., Прохорова Н.А., Синицына О.В., Пирожкова Г.Ю., Черняева Т.А., Борисенкова Л.И., Адамовская Т.В. Клинико-эпидемиологическая характеристика рожи в г. Москве в последние годы // Инфекционные болезни. М. 2015. Т.13. №1. С.46-52.

8. Соколова Т.В., Малярчук А.П., Малярчук Т.А. Клинико-эпидемиологический мониторинг поверхностных микозов в России и совершенствование терапии // Клиническая дерматология и венерология. 2011. № 4. С.27-31.

10. Улащик В.С. Магнитотерапия. Теоретические основы и практическое применение. Минск, 2015. С.20-31.

Высокий уровень распространенности грибковых заболеваний кожи, поразивших по данным отечественных и зарубежных исследований 20–25% популяции, можно оценивать как актуальную медико-социальную проблему [1, 2].

По данным многоцентровых исследований, проведенных в России в 2010–2013 гг., доля больных с поверхностными микозами кожи среди дерматологических заболеваний составила 14%, из них 34,6% приходилось на микоз стоп. Более половины больных (55,4%) имели дерматофитии, в структуре которых лидировал микоз стоп, составляя 35,7% всех случаев [3, 4].

Ряд факторов, в частности сахарный диабет, метаболический синдром, ВИЧ-инфекция, прием иммуносупрессивных препаратов (антибиотиков, системных глюкокортикостероидов, цитостатиков и др.), предрасполагают к распространенному характеру и торпидному течению микотического поражения кожи [5, 6].

Заболеваемость рожей также на протяжении длительного времени остается стабильно высокой, достигая 10–20 на 10 000 взрослого населения. Результаты ряда исследований подтверждают роль коморбидных состояний в патогенезе и характере клинического течения рожи, при этом указывая на ведущее значение сердечно-сосудистых нарушений, хронической лимфовенозной недостаточности, эндокринной и кожной патологии [7, 8, 9].

Так, по данным Л.И. Ратниковой и соавторов, у 25,2% больных рожей имели место различные кожные заболевания: микоз (9,6%), экзема (7,8%), трофические язвы (3,5%), атопический дерматит (3,5%), псориаз (2,6%), акне (0,9%) [4].

Рецидивирующее течение рожи, частая антибиотикотерапия этого заболевания, а также сопутствующие заболевания, снижающие реактивность организма, способствуют присоединению грибковой инфекции, ее диссеминации, длительному упорному течению и низкой эффективности стандартных схем антимикотической терапии, что в свою очередь определяет необходимость поиска эффективных вариантов комплексного лечения микозов стоп у больных с рецидивирующим рожистым воспалением.

Цель исследования заключалась в оценке показателей состояния микроциркуляторного русла у пациентов с микозами стоп и рецидивирующей рожей нижних конечностей на этапах до лечения и после проведенной терапии, а также в анализе эффективности и степени влияния на состояние микроциркуляторного русла стандартных схем терапии микозов стоп, ассоциированных с рецидивирующей рожей нижних конечностей, и комплексного подхода с применением магнитотерапии [10].

Пациенты, получавшие системную антимикотическую терапию (n=112), были разделены на 2 подгруппы: А1 – больные, получавшие стандартную терапию микоза в сочетании со стандартной терапией рожистого воспаления нижних конечностей (n=56); А2 – больные, получавшие стандартную терапию микоза в сочетании со стандартной терапией рожистого воспаления нижних конечностей и курсом магнитотерапии (n=56).

Методами исследования являлись клинические, лабораторные методы исследования и капилляроскопия сосудов ногтевого ложа.

Определение клинической формы микоза стоп основывалось на данных клинического осмотра. Кроме того, при постановке диагноза учитывались также данные анамнеза заболевания и жалобы пациента (сухость кожи, зуд или болезненность в местах поражения).

Для диагностики микоза кожи и онихомикоза стоп всем пациентам проводилось микроскопическое исследование чешуек с кожи стоп и ногтевых пластин. Пациентам с положительными результатами данного исследования проводили видовую идентификацию возбудителя путем культурального исследования. Было проведено трехкратное микроскопическое и однократное культуральное исследование.

Для видовой идентификации гриба проводили культуральное исследование. Для оценки состояния микроциркуляторного русла всем пациентам на этапе обследования и 112 пациентам сразу после лечения и через 3 месяца после окончания терапии была проведена капилляроскопия ногтевого ложа I пальца левой и/или правой стопы.

Капилляроскопия производилась по общепринятой методике с помощью специально модифицированного микроскопа. Анализ полученных изображений включал:

– подсчет количества функционирующих капилляров в 1 мм 2 ;

– измерение диаметров артериальных и венозных отделов капилляра с последующим расчетом соотношения диаметра венозной и артериальной бранши;

– оценку окраски фона (мутно-розовый, светло-розовый, мраморный);

– оценку степени периваскулярного отека (умеренно выраженный, выраженный по диаметру, выраженный сливной вокруг группы капилляров);

– оценку формы капилляров (классическая петля, атипичная, умеренно извитая петля, клубочковая, завиток, извитость, петлистость, перекрещенный капилляр);

– измерение длины капилляра.

Плотность функционирующих капилляров измеряли подсчетом капилляров в поле зрения, для чего использовали сетчатый окуляр-микрометр со специально встроенной рамкой, площадь которой составляла 1 мм 2 . Диаметр капилляров измеряли в средней части артериального и венозного отделов с помощью окуляра-микрометра (в мкм).

Было выделено 5 типов капилляроскопической картины: атонический, спастический, спастико-атонический, застойный и нормальный.

Все пациенты получали стандартную терапию микоза стоп и рожи нижних конечностей, соответствующую диагнозу.

Стандартная терапия микоза стоп зависела от клинической формы, вида возбудителя, результатов лабораторных и инструментальных исследований, а также от коморбидного фона пациента и включала местную и системную антимикотическую терапию. Также применялись кератолитические средства и проводились профилактические мероприятия (уход за кожей стоп с целью профилактики микротравм, дезинфекция обуви).

Местная терапия назначалась при микозе кожи стоп (сквамозная, сквамозно-гиперкератотическая, интертригинозная, дисгидротическая формы) без поражения ногтевых пластин, а также при наличии противопоказаний для назначения системных антимикотических препаратов.

Местная антимикотическая терапия осуществлялась кремом тербинафин 2 раза в сутки наружно до клинического выздоровления. При выраженном гиперкератозе в очагах микоза на стопах применялось кератолитическое средство бифоназол, крем 1 раз в сутки до полного удаления инфицированных участков.

Системная антимикотическая терапия назначалась при онихомикозе и проводилась итраконазолом по схеме пульс-терапии: по 200 мг 2 раза в сутки после еды в течение 7 дней per os, повторный курс проводили через 3 недели. Длительность лечения составила 3 месяца с ежемесячным контролем биохимических показателей. Больным, у которых не было достигнуто микологическое излечение, антимикотическая терапия была продолжена, но уже вне рамок настоящего исследования.

Стандартная терапия рожи нижних конечностей зависела от клинической формы рожи, степени тяжести, данных анамнеза о рецидивах и лабораторных данных. Пациентам с эритематозной, эритематозно-геморрагической, эритематозно-буллезной формами рожи нижних конечностей легкой и средней степени тяжести чаще всего назначался ципрофлоксацин по 2,0 х 2 раза в/м или в/в в день 7–10 дней, пациентам с эритематозно-буллезной, эритематозно-геморрагической, буллезно-геморрагической формами рожи тяжелой степени тяжести – ципрофлоксацин в виде монотерапии по 2,0 х 2 раза в/м или в/в в день 12 дней либо в сочетании с офлоксацином 400 мг 2 раза в день в/в капельно, 10 дней.

Всем пациентам проводилась местная антисептическая обработка ежедневно, в течение всего курса лечения.

Также пациентам была назначена магнитотерапия.

Процедура проводилась путем наложения на кожные покровы магнитных индукторов (аппликаторов). Экспозицию осуществляли непосредственно в месте воздействия.

Кожа предварительно была очищена и обработана дезинфицирующими средствами, после чего производилось наложение прибора с оставлением воздушной подушки. На курс – от 10 до 15 процедур ежедневно, с увеличением продолжительности процедуры с 10 до 20 мин.

Все участники исследования подписывали информированное согласие.

Протокол исследования одобрен этическим комитетом ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России, г. Новосибирск. Протокол № 79 от 19 ноября 2015 г.

Результаты исследования и их обсуждение

У 100% пациентов отмечалась извитость сосудов, в то время как мутный фон, нечеткость контуров микрососудов и отек периваскулярного пространства встречались редко – в 12,4% случаев.

Капилляры пациентов обеих групп исследования имели удлиненную форму, среднее значение длины микрососудов составило 574,2±0,5 мкм, что в 1,4 превышало верхнюю границу нормы (p=0,6). Количество функционирующих капилляров было в пределах нормы. Имело место снижение среднего значения диаметра артериального отдела капилляра на 1 мкм ниже нормы (р=0,0001). Венозный отдел был значительно расширен, его диаметр превышал нормальные показатели в 1,2 раза (р=0,04). Диагностировано компенсаторное увеличение переходного отдела микроциркуляторного русла в 1,3 раза относительно верхней границы нормы. Соотношение диаметров у пациентов было в 1,7 раза больше нормальных показателей.

В капилляроскопической картине у больных чаще всего встречался спастико-атонический тип нарушения микроциркуляции, диагностированный у 109 (83,9%) больных. В 5 раз реже встречался спастический тип (у 16% больных) (р<0,0001). Не было выявлено ни одного пациента без патологии в сосудистом русле и с атоническим типом нарушения микроциркуляции.

Типы нарушения микроциркуляции не имели особенностей по половому признаку. Преобладал спастико-атонический тип нарушения микроциркуляции, он был диагностирован у 82,7% женщин и 85,7% мужчин (р=0,7). В равной степени редко встречался спастический тип (17,3% женщин и 14,3% мужчин) (р=0,7).

Количество пациентов, у которых было достигнуто клиническое излечение онихомикоза, в подгруппе А2 превысило аналогичный показатель в подгруппе А1 на 14,3% (89,3% и 75,0% соответственно).

В группе А2 были достигнуты и более высокие результаты по микологическому излечению пациентов. Количество пациентов с микологическим излечением онихомикоза в подгруппе А2 превысило аналогичный показатель в подгруппе А1 на 17,8% (98,2% и 80,4% соответственно).

Всем пациентам проводилась капилляроскопия: перед началом курса лечения, сразу после проведения курса лечения и через 3 месяца после окончания терапии.

По результатам проведенной капилляроскопии в подгруппах А1 и А2 до лечения показатели изменений микроциркуляции были одинаковыми: мутный фон, нечеткость контуров микрососудов, периваскулярный отек наблюдались у 7 (12,5 %) пациентов в каждой подгруппе соответственно, извитость капилляров встречалась у всех пациентов в обеих подгруппах.

В результате проведенной капилляроскопии сразу после окончания курса лечения среди пациентов подгруппы А1 отмечалась тенденция к уменьшению количества пациентов, у которых имелись изменения микроциркуляции: мутный фон, нечеткость контуров микрососудов, периваскулярный отек встречались в 8,9% случаев, то есть у 5 пациентов, и извитость капилляров – у 50 пациентов (89,2%). У пациентов этой же группы по данным капилляроскопии, проведенной через 3 месяца после лечения, изменения микроциркуляции встречались реже по сравнению с данными до начала лечения и сразу после окончания лечения; мутный фон, нечеткость контуров микрососудов, периваскулярный отек отмечались всего у 3 пациентов (5,3%), извитость капилляров – у 66%.

В подгруппе А2 также отмечалась тенденция к снижению количества пациентов с изменениями микроциркуляции. Сразу после лечения было всего 4 (7,1%) человека с мутным фоном, нечеткостью контуров микрососудов и периваскулярным отеком, в то время как извитость капилляров встречалась у 45 (80%) пациентов. По результатам капилляроскопии через 3 месяца по окончании курса лечения данные изменения встречались еще реже: мутный фон, нечеткость контуров микрососудов, периваскулярный отек имели место у 2 (3,5%) и извитость капилляров – у 32 (57%) пациентов.

Таким образом, по результатам проведенной капилляроскопии в динамике: до лечения, сразу после окончания курса лечения и через 3 месяца после окончания курса лечения – отмечается тенденция к снижению количества пациентов с изменениями микроциркуляции по данным капилляроскопии. Сравнительный анализ обеих подгрупп показал, что у пациентов, получавших стандартную терапию микозов, стандартную терапию рожи и магнитотерапию, изменения микроциркуляции встречались реже, чем у пациентов, которым не проводилась магнитотерапия.

По данным исследования пациентов до лечения капилляры имели удлиненную форму, среднее значение длины микрососудов составило 570,2±0,5 мкм (р=0,6) среди пациентов подгруппы А1 и 569,2±0,5 мкм у пациентов подгруппы А 2 (р=0,6). После лечения данный показатель снизился, его среднее значение составило 410,2±0,5 мкм у пациентов А1 и 390,7±0,2 мкм (р=0,6). Через 3 месяца после лечения данный показатель в обеих подгруппах был в пределах нормы и составил 380,2±0,5 мкм и 380,5±0,5 мкм соответственно (р=0,6).

Соотношение диаметров у пациентов до лечения практически в 1,5 раза превышало норму, в то время после лечения и через 3 месяца после окончания курс было в пределах нормы.

Венозный отдел также был значительно расширен в обеих подгруппах: до лечения его диаметр превышал нормальные показатели в 1,2 раза, после лечения среднее значение данного показателя было в пределах нормы, а спустя 3 месяца среднее значение диаметра венозного отдела было ниже: 14,9±0,2 в и 12,2±0,5 в подгруппах А1 и А2 соответственно до лечения, 14,5±0,2 и 12,1±0,5 через 3 месяца после лечения (р=0,04).

Диагностировано компенсаторное увеличение переходного отдела микроциркуляторного русла в 1,3 раза до лечения в обеих подгруппах, после лечения данный показатель составил 16,4 ± 0,2 и 14,5 ± 0,2 до лечения и через 3 месяца после лечения соответственно, а среди пациентов подгруппы А2 до лечения – 14,8±0,5, через 3 месяца после лечения – 13,9±0,5 (р=0,04).

Артериальный отдел был сужен у пациентов до лечения и в подгруппе А1, и в подгруппе А2, после лечения и через 3 месяца находился в пределах нормы в обеих подгруппах. Количество функционирующих капилляров и до лечения, и после лечения отмечалось в пределах нормы у всех пациентов. Таким образом, по результатам капилляроскопии показатели изменения микроциркуляторного русла сразу после лечения и через 3 месяца после лечения были в пределах нормы среди пациентов подгрупп А1 и А2.

Все пациенты подлежали наблюдению в течение 6 месяцев после окончания курса лечения. За этот период у пациентов основной группы исследования М+Р рецидивов микозов и рожи не отмечалось, в то время как 10 (10%) пациентов группы Р обратились в стационар за помощью в связи с рецидивом рожи нижних конечностей.

У 83,9% пациентов с микозом стоп и рецидивирующей рожей нижних конечностей регистрировался спастико-атонический тип нарушения микроциркуляции. Комплексное лечение микоза стоп с применением магнитотерапии позволило добиться снижения средних значений диаметра венозного отдела микроциркуляторного русла в 1,5 раза; привести средние значения диаметров артериального и переходного отделов в пределы нормальных показателей; а также повысить частоту клинического излечения на 14,3%, а микологического излечения – на 17,8% (до 89,3% и 98,2% соответственно) по сравнению со стандартной терапией.

Выводы. В результате полученных данных можно сделать вывод о целесообразности применения капилляроскопии у пациентов с микозами стоп, ассоциированными с хронической рецидивирующей рожей нижних конечностей, с целью определения типа микроциркуляции и характера изменений микроциркуляторного русла, что играет значимую роль в выборе терапии у данной категории пациентов.

Показано, что комплексная терапия микозов стоп у пациентов с хронической рецидивирующей рожей нижних конечностей с применением магнитотерапии в сочетании со стандартными методами лечения приводит к значительному улучшению показателей состояния микроциркуляции и микроциркуляторного русла. Признаки изменений микроциркуляторного русла после лечения отмечались в 2 раза реже, чем до лечения, что доказывает необходимость комплексного подхода в лечении микозов у пациентов с рецидивирующей рожей нижних конечностей.

Капилляроскопия - метод исследования самых крошечных сосудов - капилляров - есть только у нас ! Если у Вас "холодные пальцы", системное заболевание соединительной ткани, вибрационная болезнь - Вам нужно срочно к нам ! Достоверно оценим патологию, доктор назначит единственно правильное лечение!

Капилляроскопия (от лат. capillaris — волосяной и др.-греч. σκοπέω — смотрю) — это неинвазивный метод исследования капилляров крови. На основании состояния капилляров делаются выводы о состоянии микроциркуляции в сосудистой системе человека.. Согласно А.С. Залманову (основоположнику капилляроскопии в России), состояние капилляров является одним из основных показателей здоровья человека.

Компьютерный капилляроскоп - это прибор для диагностики системы микроциркуляции крови, который позволяет оценивать количественно особенности самого капилляра (морфология), а также изучать динамические особенности кровотока в нем. Исследования проводятся неинвазивно, безболезненно, в реальном времени.

Капилляроскопия дает представление о состоянии всего организма, отражает метаболические нарушения, позволяет предположить развитие заболевания на доклинических стадиях, тонко количественно оценивать изменение состояния в динамике, проводить подбор терапии.

Физиология капилляров

Капилляры – мельчайшие сосуды человеческого организма. Они представляют собой тонкую трубку цилиндрической формы диаметром от 2 до 30 мкм. Капилляры состоят из эндотелиальных клеток – клеток, составляющих внутренний слой любого кровеносного сосуда – и образуют барьер между кровью и внеклеточной жидкостью. Капиллярные клетки способны к фагоцитозу – задерживать и переваривать стареющие эритроциты, холестериновые комплексы, различные инородные тельца, клетки микроорганизмов.

Определяемые параметры:

Плотность капиллярной сети (краевая, площадная)
Форма капилляров
Ориентация капилляров
Размер периваскулярной зоны
Диаметры артериального, переходного, венозного отделов капилляров
Скорости капиллярного кровотока в артериальном и венозном отделах капилляра Наличие стаза (остановка капиллярного кровотока)
Структура капилляров
Агрегаты ( Сладж-феномен)
Наличие стазов (остановки кровотока)
Наличие экстравазатов (кровоизлияния – разрушенные капилляры)
Количество светлых форменных элементов крови
Ассиметрии капилляроскопической картины на конечностях.

При необходимости возможен расчет производных параметров микроциркуляции:

объемная скорость капиллярного кровотока по отделам (артериальному, венозному);
ускорение линейной скорости капиллярного кровотока по отделам (артериальному,венозному);
перфузионный баланс.

Ход исследования:

Объект исследований - капиллярная сеть эпонихия (кутикулы) пальцев рук, ног, десны и др. областей в зависимости от сферы применения прибора. Для проведения исследования (при изучении капилляров кутикулы) на эпонихий выбранного пальца наносится иммерсионное масло и палец фиксируется в специальном ложе под объективом микроскопа. Капилляры ногтевого ложа подводятся в фокус оптической системы для получения четкого изображения на экране монитора. Сначала выполняется обзорное исследование при увеличении 200х, затем - основное исследование при увеличении 400х-800х, в процессе которого определяются (рассчитываются) все ключевые параметры микроциркуляции с помощью компьютерной программы. По результатам формируется протокол исследования.

Исследование проводится неинвазивно (особенно актуально в педиатрии), безболезненно, в течение 10-15 минут.

Врач имеет возможность проводить исследование в различных режимах и условиях: удаленный доступ, единичные исследования, мониторинг, в условиях операционной, отделения интенсивной терапии и реанимации, у постели больного в палате или в кабинете функциональной диагностики.

Процедура капилляроскопии

Процедура капилляроскопии проста и безболезненна, не занимает много времени. Для прохождения капилляроскопии требуется минимальная подготовка: накануне нужно ограничить потребление жидкости и стараться избегать воздействия на кожу пальцев рук химических веществ, ведь именно пальцы, а точнее, ногтевое ложе, станет прямым объектом исследования. Необходимо также отсутствие маникюра (либо педикюра, если объектом исследования будет ногтевое ложе пальцев ног). Палец пациента вводится в фокус капилляроскопа, оптическая система которого позволяет четко увидеть капиллярную сеть пациента, после чего записывается видеофрагмент и происходит расчет основных параметров микроциркуляции. Помимо статических параметров, таких как плотность капиллярной сети, диаметры отделов капилляров и др. анализируются скорость капиллярного кровотока, время остановки кровотока, наличие светлых включений и эритроцитарных агрегатов.

Здоровый капилляр похож на дамскую шпильку. Разнообразные отклонения от идеала говорят о патологии. Получив данные капилляроскопии, врач направляет пациента к специалисту, который назначает профилактические мероприятия.

Преимущества капилляроскопии:

Применение

Данный метод необходим при диагностике и оценке эффективности терапии следующих заболеваний.

1. Кардиология

Определение признаков, характерных для артериальной гипертензии, выявление наличия скрытых отеков при динамической оценке сердечной недостаточности, особенно на фоне коррекции проводимой терапии, определение свертывающей и противосвертывающей системы крови для пациентов с кардиальной, патологией, предполагающей высокий риск тромбообразования (мерцательная аритмия, искусственные клапаны, стенты).

2. Эндокринология

Выявление сахарного диабета на ранних стадиях: изменения в системе микроциркуляции обнаруживаются уже на стадии нарушения толерантности к глюкозе (НТГ). Оценка гипотериоза: проблема гипотиреоза заключается не в его диагностике, а в решении вопроса о необходимости заместительной терапии. Суть проблемы – в расхождении клинических признаков и лабораторных анализов. В этой ситуации капилляроскопия может дать врачу необходимую информацию для назначения наиболее эффективного лечения.

3. Акушерство и гинекология

Предположение развития гестоза и венопатии на доклинической стадии, определение состояния гиперэстрогении у женщин, оценка эффективности гормональной терапии.

4. Флебология

Оценка хода лечения патологии вен с развитием варикозной болезни и хронических тромбофлебитов.

5. Ревматология

Наиболее информативный метод диагностики синдрома Рейно, выявление ревматических заболеваний (СКВ, системная склеродермия, васкулиты).

6. Дерматология

Диагностика кожных заболеваний, контроль эффективности лечения.

7. Вертебрология

Диагностика патологии позвоночника и оценка эффективности его мануально-терапевтического лечения.

8. Стоматология

Оценка эффективности применяемой терапии, выявление пародонтозов.

9. Лечение гемангиом

10. Спортивная медицина

Индивидуальная разработка и оценка тренировочного и восстановительного процесса, воздействия стимулирующих препаратов, режима питания.

Выявление с помощью капилляроскопии ранних (доклинических) стадий различных заболеваний открывает совершенно новые возможности их профилактики, а контроль назначенной терапии дает возможность проводить оптимальное лечение индивидуально для каждого пациента.

Капилляроскопия (от лат. capillaris — волосяной и др.-греч. σκοπέω — смотрю) — это неинвазивный метод исследования капилляров крови. На основании состояния капилляров делаются выводы о состоянии микроциркуляции в сосудистой системе человека. Согласно А.С. Залманову (основоположнику капилляроскопии в России), состояние капилляров является одним из основных показателей здоровья человека.

Капилляроскопия выполняется на Компьютерном капилляроскопе - это прибор для диагностики системы микроциркуляции крови, который позволяет оценивать количественно особенности самого капилляра (морфология), а также изучать динамические особенности кровотока в нем. Исследования проводятся неинвазивно, безболезненно, в реальном времени.

Ход исследования

Объект исследований - капиллярная сеть эпонихия (кутикулы) пальцев рук, ног, десны и др. областей в зависимости от сферы применения прибора. Для проведения исследования (при изучении капилляров кутикулы) на эпонихий выбранного пальца наносится иммерсионное масло и палец фиксируется в специальном ложе под объективом микроскопа. Капилляры ногтевого ложа подводятся в фокус оптической системы для получения четкого изображения на экране монитора. Сначала выполняется обзорное исследование при увеличении 200х, затем - основное исследование при увеличении 400х-800х, в процессе которого определяются (рассчитываются) все ключевые параметры микроциркуляции с помощью компьютерной программы. По результатам формируется протокол исследования.

Исследование проводится неинвазивно (особенно актуально в педиатрии), безболезненно, в течение 10-15 минут.

Определяемые параметры:

Плотность капиллярной сети (краевая, площадная).
Форма капилляров.
Ориентация капилляров.
Размер периваскулярной зоны.
Диаметры артериального, переходного, венозного отделов капилляров.
Скорости капиллярного кровотока в артериальном и венозном отделах капилляра Наличие стаза (остановка капиллярного кровотока).
Структура капилляров.
Агрегаты (Сладж-феномен).
Наличие стазов (остановки кровотока).
Наличие экстравазатов (кровоизлияния – разрушенные капилляры).
Количество светлых форменных элементов крови.
Ассиметрии капилляроскопической картины на конечностях.

Данный метод необходим при диагностике и оценке эффективности терапии следующих заболеваний:

3. Акушерство и гинекология.

Оценка хода лечения патологии вен с развитием варикозной болезни и хронических тромбофлебитов.

6. Дерматология: диагностика кожных заболеваний, контроль эффективности лечения

7. Вертебрология – диагностика патологии позвоночника и оценка эффективности его мануально-терапевтического лечения

8. Стоматология: оценка эффективности применяемой терапии, выявление пародонтозов.

10. Спортивная медицина: индивидуальная разработка и оценка тренировочного и восстановительного процесса, воздействия стимулирующих препаратов, режима питания.

Ход исследования

Исследование проводится неинвазивно (особенно актуально в педиатрии), безболезненно, в течение 10-15 минут.

Определяемые параметры:

Плотность капиллярной сети (краевая, площадная).
Форма капилляров.
Ориентация капилляров.
Размер периваскулярной зоны.
Диаметры артериального, переходного, венозного отделов капилляров.
Скорости капиллярного кровотока в артериальном и венозном отделах капилляра Наличие стаза (остановка капиллярного кровотока).
Структура капилляров.
Агрегаты (Сладж-феномен).
Наличие стазов (остановки кровотока).
Наличие экстравазатов (кровоизлияния – разрушенные капилляры).
Количество светлых форменных элементов крови.
Ассиметрии капилляроскопической картины на конечностях.

Данный метод необходим при диагностике и оценке эффективности терапии следующих заболеваний:

3. Акушерство и гинекология.

Оценка хода лечения патологии вен с развитием варикозной болезни и хронических тромбофлебитов.

6. Дерматология: диагностика кожных заболеваний, контроль эффективности лечения

8. Стоматология: оценка эффективности применяемой терапии, выявление пародонтозов.

Эхоэнцефалография при сосудистой патологии мозга. Капилляроскопия

Исследования ряда авторов показали, что при патологии сосудов мозга полученная информация в большинстве случаев помогает уточнить диагноз заболевания. При острых нарушениях кровообращения в одном полушарии, протекающих по геморрагическому типу, выявляется смещение структур в сторону здорового полушария. При этом также появляются признаки отека мозга.

Наибольшая степень смещения М-эха наблюдается при локализации процессов в височной и теменной долях латерально от средней линии. При исследовании с пораженной стороны отмечается значительно большее число эхо-сигналов, что обусловлено отеком мозга.
При стволовых геморрагиях межполушарных асимметрий не выявляется. При субарахноидальном кровоизлиянии смещения М-эха не наблюдается или оно незначительно.

При ишемическом инсульте межполушарные асимметрии отсутствуют или незначительны. Они, как правило, нарастают в течение первых трех дней и по мере клинического улучшения имеют тенденцию к регрессу. Смещение М-эха здесь объясняется асимметричным отеком полушарий. Таким образом, эхоэнцефалографические исследования при сосудистой патологии позволяют не только уточнить топический диагноз, но и дают информацию для постановки правильного клинического диагноза.

У больных с менингоэнцефалитами отмечается небольшое (1—2 мм) смещение М-эха, выявляются признаки расширения лнкворной системы мозга. При церебральном арахноидите не отмечается смещения срединных структур мозга, но выявляются симптомы гидроцефалии в виде расширения желудочковой системы.

Эхоэнцефалография является ценным параклиническим методом исследования, обладающим диагностической информативностью. Этот вид исследования необходимо проводить во всех городских неврологических отделениях.

Капилляроскопия

При заболеваниях нервной системы применяется большое число различных методов исследования, не нашедших широкого применения в связи с их сложностью, недостаточной информативностью, отсутствием серийных моделей аппаратуры или апробированных методов расшифровки полученных данных.

Капилляроскопия — прижизненное изучение кровеносных капилляров. Для наблюдения применяется капилляроскоп с увеличением до 40—100 раз. При этом чаще всего исследуют капилляры ногтевого ложа IV пальца кисти. Кроме визуального наблюдения проводят и фотографирование, которое представляет определенные трудности. Обращают внимание на цвет и прозрачность фона, число, форму, величину капиллярных петель, соотношение венозных и артериальных браншей, динамичность изменения капилляроспокической картины, скорость кровотока.

В норме наблюдается прозрачный розового цвета фон с 3—4 рядами изогнутых в форме дамской шпильки или реже в форме восьмерки каппилляров, число которых составляет около 8 в 1 мм2. Часть капилляров периодически суживается, другая расширяется, некоторые постоянно не заполняются кровью.

Некоторые авторы выделяют спастико-атонический синдром, спазм, атонию капилляров, их склероз и активную дилатацию. Современные данные говорят о том, что изменения капиллярного русла являются отражением общей регуляции кровообращения в основном за счет изменений кровотока по прекапиллярным артериям, в которых имеются мышечные жомы (сфинктеры), выполняющие роль кранов.

Описывают запустевание капилляров, при котором бывает неравномерность кровотока, образование стазов, которое может смениться признаками венозного застоя, например, при охлаждении конечностей.

У людей с ангиовегетодистонией этот переход происходит более резко, при болезни Рейно запустевание капилляров сменяется выраженным венозным застоем; то же может наблюдаться при введении некоторых фармакологических веществ (никотиновая кислота и др.), травме периферических нервов, при быстром развитии центральных гемипарезов и т. д.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Относящийся к данному классу атомно-силовой микроскоп оказался инструментом, подходящим для исследования биологических объектов и позволил не только визуализировать наноразмерные структуры, но и манипулировать ими. В частности, принципиально возможной оказалась манипуляция одиночными вирионами и прямое измерение сил, возникающих при их контакте с поверхностью клетки. Такие эксперименты позволяют получать подробные данные о самом первом и во многих случаях еще недостаточно исследованном этапе заражения клетки — адгезии вируса к ее поверхности. Данные исследования представляют и значительный практический интерес, т.к. могут дать ключ к созданию эффективных противовирусных препаратов, защищающих клетки от проникновения вирусов.

Об авторе

Вирусы являются чрезвычайно малыми объектами — их размеры лежат в диапазоне от нескольких десятков до нескольких сотен нанометров. Первым и на долгое время единственным методом прямой визуализации наноразмерных частиц стала электронная микроскопия (ЭМ), которая начала развиваться в 1930-е гг. Метод, оказавшийся очень информативным, позволил не только детально охарактеризовать структуру различных вирусов, но и исследовать процессы, происходящие в зараженной клетке.

Оказалось, что форма вирусных частиц отличается большим разнообразием: от правильных сфер до сложных структур, напоминающих кирпичи, обклеенные трубочками (вирус натуральной оспы), или щетинистых червей (вирус геморрагической лихорадки Эбола).

Вне клетки любой вирус является всего лишь молекулярным контейнером с генетическим материалом (ДНК или РНК) и вряд ли может считаться полноценным живым организмом, хотя по этому вопросу в научной среде до сих пор нет окончательной терминологической определенности.

Так, исследование репликации вируса методом просвечивающей электронной микроскопии на ультратонких срезах выглядит следующим образом: зараженные клетки обрабатывают фиксирующим раствором, обезвоживают спиртом и заливают специальной смолой. После отвердевания смолы с помощью специального прибора — ультратома — делают ультратонкие (≈ 50 нм) срезы, которые затем наносят на специальную сетку и обрабатывают растворами солей тяжелых металлов. Во время самого микроскопического исследования образец находится в вакуумной камере и подвергается действию пучка электронов с энергией в несколько десятков кэВ. Очевидно, что прижизненная визуализация в данном случае принципиально невозможна.

В течение почти полувека электронная микроскопия оставалась единственным методом визуализации наноразмерных объектов. Однако в начале 1980-х гг. эта монополия была нарушена появлением сканирующей зондовой микроскопии (СЗМ). Основным принципом СЗМ является сканирование — прецизионное (с высокой точностью) перемещение зонда вблизи исследуемой поверхности, сопряженное с отслеживанием определенного параметра, характеризующего взаимодействие между зондом и образцом. Результатом такого сканирования является топографическая карта рельефа поверхности образца.

Первым прибором СЗМ стал сканирующий туннельный микроскоп (СТМ), который мог лишь весьма ограниченно использоваться для визуализации биологических объектов, так как для его работы требовалась высокая электрическая проводимость исследуемой поверхности.

В 1986 г. швейцарский физик Г. Бинниг и его коллеги создали новый прибор семейства СЗМ — атомно-силовой микроскоп (АСМ). В основе его работы лежит силовое (Ван-дер-Ваальсово) взаимодействие атомов зонда и поверхности. АСМ не требуется электрическая проводимость поверхности образца, и он может осуществлять съемку в жидкой среде. Поэтому этот прибор оказался удобным инструментом для исследования биологических объектов.

Принципиальная схема работы атомно-силового микроскопа (АСМ). Чувствительным элементом АСМ является упругая консоль (кантилевер), на конце которой закреплен острый зонд. Силы, возникающие между атомами острия зонда и исследуемой поверхностью приводят к деформации кантилевера, которая в свою очередь фиксируется при помощи оптической системы, реализованной в большинстве современных АСМ на основе полупроводникового лазера и четырехсекционного фотоприемника. Размер кантилевера — 100÷300 × 20÷40 мкм при толщине около 2 мкм. Высота зонда — около 10 мкм

С момента появления атомно-силового микроскопа было опубликовано огромное число работ, посвященных АСМ-визуализации самых разнообразных биологических образцов. Следует все же признать, что в большинстве случаев в плане визуализации АСМ не дает ничего принципиально нового в сравнении с обычной электронной микроскопией, поэтому зачастую данный метод воспринимается биологами как техническая экзотика, а не как полноценный исследовательский инструмент.

Однако важнейшим, пусть и почти единственным преимуществом визуализации биологических объектов при помощи АСМ по сравнению с электронной микроскопией является возможность выполнения исследований нативных, природных образцов без какой-либо фиксации и специальной пробоподготовки, при физиологических параметрах среды.

Помимо визуализации рельефа поверхности с субнанометровым разрешением АСМ позволяет осуществлять прямое измерение сил, возникающих при взаимодействии одиночных наноразмерных объектов.

Проводятся такие измерения следующим образом: один объект закрепляется на острие зонда АСМ, а второй фиксируется на подложке, после чего зонд подводится к поверхности подложки до достижения механического контакта, а затем возвращается обратно. В ходе этого перемещения отслеживается деформация упругой консоли (кантилевера). Зависимость этого параметра от расстояния между зондом и подложкой называется силовой кривой. С ее помощью можно определить величину силы, действующей между исследуемыми объектами. Этот метод, названный атомно-силовой спектроскопией (АСС), может использоваться для исследования силовых характеристик взаимодействия самых разнообразных малых объектов: от неорганических наночастиц до вирусов и живых клеток.

Метод атомно-силовой спектроскопии позволяет определить величину силы, действующей между исследуемыми объектами. Для этого один объект закрепляется на острие зонда АСМ, а второй фиксируется на подложке. Зонд подводится к поверхности подложки и затем поднимается обратно. Зависимость деформации кантилевера от расстояния между зондом и подложкой называется силовой кривой

Начальным этапом заражения клетки вирусом является адгезия (прилипание) вирусной частицы (вириона) к клеточной поверхности с последующим проникновением генетического материала вируса внутрь клетки. Этот процесс, определяемый взаимодействием белковых рецепторов, расположенных на поверхности клетки, с поверхностными белками вириона, является критически важным для размножения вируса. И, надо отметить, в большинстве случаев изучен недостаточно.

Однако фиксация одиночной вирусной частицы на острие зонда атомно-силового микроскопа является весьма непростой задачей. Для успешного проведения эксперимента требуется большая подготовительная работа:

получить как можно более чистый и концентрированный препарат вируса;
подготовить на острие зонда площадку подходящего размера для посадки вириона;
химически активировать поверхность зонда для образования ковалентных связей при контакте с белками вируса;
убедиться в том, что на зонде закрепился действительно вирион, а не молекулы свободного белка или мелкие фрагменты клеток, всегда присутствующие в препаратах вирусов.

Оценка концентрации и степени чистоты препарата вируса обычно проводится методом просвечивающей электронной микроскопии. Площадку на острие АСМ-зонда, которое обычно изготавливают из кремния или его нитрида, формируют путем длительного сканирования кремниевой или сапфировой подложки при больших значениях развертки и силы прижатия зонда к поверхности. Наиболее наглядной иллюстрацией для этого процесса служит изменение формы острия карандаша в ходе интенсивного рисования.

Адекватным методом контроля геометрических параметров зонда атомно-силового микроскопа (а) при создании площадки для посадки вириона, является электронная микроскопия, как сканирующая, так и просвечивающая: б — площадка на острие зонда для посадки крупной вирусной частицы; в — вирусоподобная частица, закрепленная на острие зонда. Просвечивающая электронная микроскопия (JEM 1400, Jeol, Япония)

По меркам микроскопии, клетка высших организмов является относительно крупным (≈ 10 мкм) объектом, поэтому хорошо видна в световом микроскопе, при помощи которого на нее наводится кантилевер атомно-силового микроскопа. Но как быть с самим зондом, на острие которого предполагается наличие вириона? Строго говоря, вместо вириона там может оказаться все, что угодно: монослой белковых молекул, фрагмент клетки или вириона, агрегат из нескольких вирионов, случайное загрязнение и т. д. Кроме того, в процессе измерения вирион может разрушиться или оторваться от зонда. Визуализация же зонда с вирусной частицей методом электронной микроскопии до силовых измерений недопустима, так как под воздействием высушивания, вакуума и пучка электронов вирион приобретет необратимые изменения.

Наиболее эффективным методом решения данной проблемы оказалась визуализация острия зонда АСМ с помощью электронной микроскопии, осуществляемая непосредственно после силовых измерений. Если на острие будет обнаружена вирусная частица, уцелевшая в ходе эксперимента, то все сомнения развеются.

В течение последних пятидесяти лет в результате поистине титанической работы, проделанной электронными микроскопистами всего мира, накоплен огромный багаж знаний в области ультраструктурных аспектов репликации различных вирусов. Создание атомно-силового микроскопа и техники силовой спектроскопии позволило вплотную приблизиться к произвольной механической манипуляции одиночными вирусными частицами. Это выводит изучение взаимодействия вируса с клеткой на принципиально другой уровень — от структурных исследований к функциональным.

При этом атомно-силовая спектроскопия не является конкурентом для электронной микроскопии, а открывает новое самостоятельное направление исследований — наномеханику взаимодействия вирусной частицы с поверхностью клетки. Весьма вероятно, что в самом ближайшем будущем в данном направлении будут совершены фундаментальные открытия, соизмеримые по значимости с достижениями электронной микроскопии в середине прошлого века.

Изучение механизмов связывания вирусных частиц с поверхностью клетки вызывает значительный интерес не только с позиции фундаментальной науки, но и в контексте практических приложений. Более детальное понимание этих механизмов на молекулярном уровне может дать человечеству ключ к созданию эффективных противовирусных препаратов, защищающих клетки от проникновения вирусов.

В публикации использованы фото автора

* Просвечивающая электронная микроскопия с использованием специальной жидкостной ячейки и сканирующая электронная микроскопия при атмосферном давлении позволяют исследовать биологические объекты без фиксации, но из-за ряда технических трудностей и относительно низкого пространственного разрешения эти методы не получили широкого распространения.

Читайте также: