Временное наставление по лабораторной диагностике гриппа лошадей

Обновлено: 27.03.2024

Цель занятия: изучить основные методы диагностики и систему противоэпизоотических мероприятий при вирусных респираторных болезнях лошадей.

Материалы и оборудование: таблицы, слайды, вакцины против гриппа, ринопневмонии, диагностикумы, ветеринарное законодательство.

Место проведения занятия: аудитория кафедры эпизоотологии.

Грипп — острая, чрезвычайно контагиозная болезнь. Возбудитель гриппа лошадей принадлежит к семейству Orthomyxoviridae.

Методы диагностики. Диагноз устанавливают на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных и лабораторного исследования.

По эпизоотологическим данным, восприимчивы лошади независимо от возраста, пола, породы. Молодняк болеет тяжелее, чем взрослые животные. Грипп чаще возникает в весенний и осенний периоды. Источником возбудителя инфекции служат больные животные. Путь заражения воздушно-капельный. Характерны: контагиозность, быстрое распространение, периодичность (2…4 года). Инкубационный период 1…6 дней.

Клинические признаки гриппа: высокая температура тела (до 41,5 °С) в течение 3…5 дней, конъюнктивит, отек век, фотофобия, серозные, а в дальнейшем серозно-гнойные выделения из носа, катаральный ринит, сухой болезненный кашель.

При патологоанатомическом исследовании обнаруживают катаральное воспаление верхних дыхательных путей и глаз, покраснение, набухание, отечность слизистых оболочек, катаральный экссудат. Легкие отечные, с плотными участками воспаления, серо-красного цвета. Сердечная мышца растянутая, дряблая, серо-розового цвета. Слизистая оболочка желудочно-кишечного тракта воспалена. Лимфоузлы головы, шеи и средостения увеличены, с признаками острого серозного воспаления.

Лабораторные исследования включают в себя серологический и вирусологический методы. Материалом для исследования служат от больных животных выделения слизистой оболочки носа (смыв), от павших — бронхиальный экссудат и кусочки легких. В лабораторию материал доставляют в термосе со льдом и не позднее чем через б…8 ч после взятия. Вирус выделяют на куриных эмбрионах при заражении в аллантоисную и амниотическую полости. Вирулентность вируса гриппа определяют в реакции торможения нейтраминидазной активности (РТНА).

Для серологической диагностики кровь берут в первые дни болезни и через 2…3 нед, затем исследуют в РГА, РТГА, РН, РСК, РИФ.

Профилактические и оздоровительные мероприятия. Ввозить в благополучное хозяйство больных и подозрительных по заболеванию гриппом лошадей строго запрещено. Всех поступающих лошадей содержат в карантине в течение 30 дней. В этот период их ежедневно осматривают. С целью профилактики инфекции иммунизируют поливалентной инактивированной жидкой вакциной лошадей, принадлежащих конным заводам, спортивным обществам и циркам; спортивных и племенных лошадей, направляемых за пределы хозяйства; а также животных любых хозяйств при угрозе возникновения гриппа. Молодняк вакцинируют начиная с 3 мес и старше, беременных кобыл — не позднее чем за 3 мес до родов. Прививают двукратно с интервалом 4…6 нед. Вакцинированных лошадей освобождают от работы на 3 дня. В последующем животных ревакцинируют однократно каждые 12 мес. Спортивных лошадей иммунизируют не менее чем за 7 дней до испытания на ипподроме. Вакцину вводят внутримышечно по 1,0 мл в область шеи или лопаток. Иммунитету привитых животных наступает на 14-е сутки.

При установлении диагноза на грипп хозяйство объявляют неблагополучным и вводят ограничения. Клинически здоровых лошадей вакцинируют. Больным животным назначают симптоматическое лечение (применяют сердечные средства, антибиотики, сульфаниламиды и др.), в дневное время в теплую сухую погоду содержат на открытом воздухе.

Помещения, где находятся больные и подозрительные по заболеванию животные, дезинфицируют 2%-м горячим раствором гидроксида натрия или 2%-м раствором формальдегида.

Шкуры, снятые с трупов лошадей, павших от гриппа, обеззараживают в течение 12 ч в растворе известкового молока (1 л свежегашеной извести на 20 л воды). Трупы утилизируют.

Ограничения с неблагополучного хозяйства снимают через 15 дней со дня выздоровления последней больной лошади и заключительных мероприятий.

Ринопневмония (вирусный аборт кобыл) — острая контагиозная болезнь лошадей, вызываемая вирусом семейства Herpesviridae.

Методы диагностики. Диагноз устанавливают на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.

По эпизоотологическим данным, болеют лошади, ослы, мулы, пони независимо от возраста, пола и породы. Молодняк более восприимчив. Животные заражаются алиментарным, респираторным, трансмиссивным путем, а также при случке. Инкубационный период до 10 дней.

Клинические признаки ринопневмонии: температура тела повышается до 40 °С и держится в течение 2…3 дней. Болезнь протекает в основном в респираторной и генитальной формах, реже — в нервной.

При патологоанатомическом исследовании обнаруживают типичные для септицемии изменения. Характерно, что у абортированного плода не бывает аутолиза; отмечают светлые участки на коже, копытах. Слизистые оболочки желтоватого цвета, вследствие скопления жидкости в брюшной и грудной полостях у плода вздутый живот.

Лабораторные исследования включают в себя вирусологические, гистологические и серологические методы.

Вирус выделяют в культуре клеток почечной ткани различных животных или же эмбрионов, на куриных эмбрионах, а также заражая лабораторных животных (мышат-сосунов и беременных морских свинок).

При серологической диагностике ринопневмонии используют РН, РСК, РТГА, РИФ, РТГАд, РДП, ИФА.

Профилактические и оздоровительные мероприятия. При установлении диагноза на ринопневмонию хозяйство считают неблагополучным и вводят ограничения.

Помещение и прилегающую территорию, где находились больные животные, дезинфицируют 2%-м горячим раствором гидроксида натрия, 5%-й горячей эмульсией креолина, 2%-м раствором формальдегида и т. д.

Для профилактической иммунизации применяют сухую культуральную вирусвакцину из штамма СВ-69.

Беременных кобыл иммунизируют двукратно: первый раз — на 1…3-м месяце беременности, повторно — через З…4мес, но не позднее 7-го месяца. Остальных лошадей вакцинируют двукратно с интервалом 3…4 мес.

Жеребят первый раз вакцинируют в возрасте 3 мес и повторно не позднее чем за 3…4 нед до отъема.

Животных ревакцинируют ежегодно двукратно с интервалом 3…4 мес. Спортивных лошадей повторно иммунизируют не позднее чем за 2 нед до отправки из хозяйства. Вакцину перед употреблением растворяют стерильным физраствором и вводят внутримышечно по 2 мл в области шеи. Иммунитет у привитых лошадей наступает на 10… 14-е сутки.

Ограничения снимают через 2 мес со дня последнего случая аборта или рождения нежизнеспособного жеребенка; при наличии в хозяйстве конематок во второй половине беременности — после благополучных родов; с ипподромов и других хозяйств, где нет беременных кобыл, — через 1 мес со дня выздоровления последней больной лошади.

ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

Решить эпизоотологическую задачу.

На конном заводе зимой среди жеребят в возрасте 6 мес и старше появилось заболевание с клинической картиной поражения верхних дыхательных путей (кашель, серозное истечение из ноздрей). Повышение температуры было незначительное в течение 2…4 дней. Больные животные через 5…7 дней клинически выздоровели. Вскоре заболевание с клинической картиной поражения органов дыхания и повышенной температурой тела обнаружили у кобыл. У одной кобылы на 7-м, у другой кобылы на 9-м месяце беременности отмечен аборт.

2. БОЛЕЗНИ ЛОШАДЕЙ

2.1. ВРЕМЕННОЕ НАСТАВЛЕНИЕ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ГРИППА ЛОШАДЕЙ

РЕКОМЕНДОВАНО 15 января 1973 г., б/н

Грипп лошадей - высококонтагиозное инфекционное вирусное заболевание, характеризующееся коротким инкубационным периодом, кратковременной сильной лихорадкой, общим угнетением, сильным сухим кашлем и конъюнктивитом.

Клинически грипп лошадей трудно диагностировать, поскольку он имеет сходство с другими респираторными заболеваниями лошадей как вирусной, так и невирусной этиологии.

Лабораторная диагностика гриппа лошадей основана на:

1) выделении вируса на развивающихся куриных эмбрионах;

2) идентификации вновь выделенного вируса в реакции торможения гемагглютинации с типоспецифическими гриппозными сыворотками;

3) установлении специфических антител в парных сыворотках животных.

Для лабораторной диагностики используют специальный диагностический набор, который состоит из антигенов и позитивных сывороток.

Антигены представляют собой инактивированную лиофилизированную вируссодержащую аллантоисную жидкость. Антигены готовят из штаммов A Equi-2/Miami/63 и A Equi-1/Cambridge/63, соответствующих двум антигенным разновидностям.

Антигемагглютинирующие - лиофилизированные гипериммунные сыворотки кроликов, полученные на два указанных штамма: A Equi-2/Miami/63 и A Equi-1/Cambridge/63.

I. ВЫДЕЛЕНИЕ ВИРУСА НА РАЗВИВАЮЩИХСЯ КУРИНЫХ ЭМБРИОНАХ

А. Взятие, пересылка и подготовка материала

1. С целью выделения вируса используют носовые смывы от больных лошадей в первые 2. 3 дня от начала заболевания. Материал из носовых полостей берут стерильными тампонами, смоченными физиологическим раствором поваренной соли. Такими тампонами тщательно протирают носовые ходы, после чего опускают тампоны в пробирки.

2. Если транспортировка материала занимает более 4 ч, тампоны следует поместить в термос со льдом и в таком виде доставить в лабораторию для исследования.

3. В лаборатории тампоны тщательно отжимают. Полученную жидкость, содержащую слизь, обрывки ткани и другие аморфные частицы, центрифугируют при 4 тыс. об/мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость отсасывают в стерильные пробирки, добавляют антибиотики (пенициллин и стрептомицин) по 500 ЕД/мл и выдерживают при 4°С в течение одного часа, после чего используют для заражения куриных эмбрионов.

Б. Заражение куриных эмбрионов

4. Для заражения используют эмбрионы 9. 10-дневного срока инкубации. Для исследования одной пробы материала заражают не менее 6 эмбрионов.

5. Перед заражением эмбрионы предварительно овоскопируют, карандашом на скорлупе отмечают границу воздушного пространства (пуги). Сбоку яйца между кровеносными сосудами отмечают участок для прокола скорлупы и инокуляции испытуемого материала. Отобранные для заражения эмбрионы переносят в бокс. Скорлупу со стороны пуги и участок, где намечено производить прокол и введение материала, тщательно протирают спиртом и обжигают. В центре воздушного пространства и в месте введения материала сбоку пробойником делают отверстия, затем через боковое отверстие на глубину 2. 3 мм вводят испытуемый материал в объеме 0,2 мл.

6. После заражения эмбрионов отверстия в скорлупе заливают парафином и переносят их в термостат, где инкубируют в течение 72 ч при температуре 37,5°С. В процессе инкубации их овоскопируют один раз в сутки, погибшие эмбрионы до вскрытия сохраняют в холодильнике при 4°С. На третий день инкубации все погибшие и выжившие эмбрионы вскрывают после предварительного их охлаждения при 4°С в течение 8 ч.

7. Перед вскрытием скорлупу над воздушным пространством дезинфицируют. Затем на границе с пугой стерильными ножницами срезают скорлупу, осторожно пинцетом снимают подскорлупную оболочку, разрывают хорионал-лантоис, отгибая в стороны на края скорлупы разорванные участки мембраны. Из одного куриного эмбриона можно собрать 6. 9 мл эмбриональной жидкости.

8. Контроль на стерильность взятых образцов эмбриональной жидкости производят путем посева 0,2 мл ее на МПА и МПБ. Посевы выдерживают в термостате в течение 5 сут. Помимо того, взятые из каждого эмбриона образцы эмбриональной жидкости проверяют на гемагглютинирующую активность. При наличии гемагглютинации и отсутствии бактериального загрязнения образец взятой жидкости титруют в реакции гемагглютинации. Если титры ГА выделяемого вируса низки, проводят еще 2. 3 дополнительно слепых пассажа его на куриных эмбрионах. При отсутствии ГА активности выделяемого вируса после 2. 3 пассажей дальнейшее выделение вируса из данного образца исследуемого материала прекращают.

Идентификацию выделенного вируса проводят в реакции торможения гемагглютинации с заведомо известными типоспецифическими сыворотками вируса гриппа лошадей.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа A (H1N1), у людей

Дата введения с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г.Г.Онищенко, Е.Б.Ежлова, Ю.В.Демина, А.А.Мельникова, Г.Ф.Лазикова, Н.В.Шеенков); ФГУЗ ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора (Шипулин Г.А., Яцышина С.Б.), ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора (Дроздов И.Г., Сергеев А.Н., Агафонов А.П., Шиков А.Н., Сергеев А.Н., Демина O.К., Суслопаров И.М., Терновой В.А.).

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 24.05.2009 г. 01/7161-9-34.

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

Список сокращений

Биобезопасность - биологическая безопасность

ЛПУ - лечебно-профилактические учреждения

МФА - метод иммунофлуоресцирующих антител

ОТ-ПЦР - метод обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции

1. Область применения

1.1. В настоящих методических рекомендациях определены порядок сбора, упаковки, хранения, транспортирования и выполнения лабораторных исследований биологического материала от больных (и умерших) пациентов при лабораторной диагностике заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа А (H1N1).

1.2. Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы лечебно-профилактическими и другими организациями, независимо от организационно-правовой формы.

2. Общие требования

Все работы по сбору, транспортированию и подготовке проб клинического и секционного материала осуществляют в строгом соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов.

3. Координация деятельности учреждений, осуществляющих диагностику заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа А (H1N1)

3.1. При эпидемическом неблагополучии в России и за рубежом по заболеваниям, вызванным высокопатогенными штаммами вируса гриппа А (H1N1), и при отсутствии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей на данной территории:

3.1.1. Забор материала от пациентов (или умерших) с подозрением на инфекцию, вызванную высокопатогенными штаммами вируса гриппа А (H1N1), проводят в лечебно-профилактических учреждениях (ЛПУ) после изоляции больного обученным персоналом в строгом соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов (приложение 2). Доставка материала в лабораторию для первичного исследования материала производится транспортом лечебно-профилактических учреждений по согласованию с управлением Роспотребнадзора субъекта Российской Федерации с учетом оптимальной транспортной схемы.

3.1.2. Первичное исследование материала от больного осуществляют методами ОТ-ПЦР, ПЦР в режиме реального времени или методом ПЦР с флуоресцентной детекцией результата по конечной точке на базе вирусологических лабораторий, лабораторий особо опасных инфекций ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации (в соответствии с перечнем - приложение 3), в региональных центрах по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности, в референс-лабораториях (приложение 1).

3.1.3. При выявлении положительных результатов первичного исследования материал от больного отправляется на обязательное подтверждающее тестирование в одну из референс-лабораторий и референс-центр по мониторингу за гриппом птиц и гриппом, вызванным высокопатогенными штаммами (в соответствии с приложением 3).

В связи с тем, что вследствие мутаций вновь появившиеся высокопатогенные штаммы вируса гриппа А (H1N1) изменили свои антигенные свойства, в настоящее время выявление вируса методом иммунофлуоресцирующих антител (МФА) может быть неэффективно (давать ложноположительные и ложноотрицательные результаты). В дальнейшем, при появлении специфических к вирусу гриппа А (H1N1) сывороток, возможно использование данного метода при лабораторной диагностике.

3.1.4. Подтверждающее тестирование положительных образцов осуществляется в одной из референс-лабораторий и референс-центре по мониторингу за гриппом птиц и гриппом, вызванным высокопатогенными штаммами (приложение 1, 3) с использованием, как минимум, двух перечисленных методов:

- вирусологическое исследование (выделение вируса должно осуществляться в условиях лаборатории с уровнем защиты BSL-3);

- секвенирование двух специфичных фрагментов генома, кодирующих гемагглютинин и нейраминидазу.

Результаты исследований в каждом случае передают в ЛПУ, направившее материал, и в учреждения Роспотребнадзора (управление Роспотребнадзора по субъекту Российской Федерации и ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации) в день получения результата.

3.1.5. При получении положительных результатов, подтверждающего тестирования, референс-лаборатория проводит изоляцию вируса, изучение его свойств и депонирование в Национальном центре верификации диагностической деятельности, осуществляющий функции государственной коллекции, расположенной на базе ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор".

3.2. При наличии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа А (H1N1), на данной территории и при наличии следующих данных эпидемиологического анамнеза:

- контакт в течение срока менее чем 7 дней до появления первых клинических признаков с больным, у которого лабораторно подтверждено инфицирование высокопатогенными штаммами гриппа;

- контакт в течение срока менее чем 7 дней до появления первых клинических признаков с больным острым респираторным заболеванием неясной этиологии, в том числе закончившимся летально;

- наличие профессионального риска инфицирования (врачи-инфекционисты, сотрудники подразделений, работающих с вирусом гриппа).

3.2.1. Забор материала проводит специально обученный персонал лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ) в строгом соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов (приложение 2). Доставка материала в лабораторию для первичного исследования материала производится транспортом лечебно-профилактических учреждений по согласованию с управлением Роспотребнадзора субъекта Российской Федерации с учетом оптимальной транспортной схемы.

3.2.2. Первичное исследование материала осуществляют на базе вирусологических лабораторий, лабораторий особо опасных инфекций ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации, в региональных центрах по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности, в референс-лабораториях (приложение 1, 3).

3.2.3. Подтверждающее тестирование положительных образцов осуществляется в одной из референс-лабораторий и референс-центре по мониторингу за гриппом птиц и гриппом, вызванным высокопатогенными штаммами (приложение 1, 3) с использованием, как минимум, двух перечисленных методов:

- вирусологическое исследование (выделение вируса должно осуществляться в условиях лаборатории с уровнем защиты BSL-3);

- секвенирование двух специфичных фрагментов генома, кодирующих гемагглютинин и нейраминидазу.

3.3. При исследовании образца от больного, имеющего в анамнезе контакт с лицами, которым был поставлен лабораторно подтвержденный диагноз "грипп, вызванный высокопатогенным штаммом вируса гриппа A (H1N1)":

3.3.1. Забор материала проводят в ЛПУ при подозрении на заболевание, вызванного высокопатогенными штаммами вируса гриппа типа А (H1N1) в строгом соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов (приложение 2). Доставка материала в лабораторию для первичного исследования материала производится транспортом лечебно-профилактических учреждений по согласованию с управлением Роспотребнадзора субъекта Российской Федерации с учетом оптимальной транспортной схемы.

3.3.2. Первичное исследование материала осуществляют на базе вирусологических лабораторий, лабораторий особо опасных инфекций ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации в региональных центрах по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности, в референс-лабораториях (приложение 1, 3) с использованием ОТ-ПЦР.

3.3.3. Обязательное подтверждающее тестирование в референс-лаборатории не проводится. Направление материала в референс-лабораторию осуществляется в случаях возникновения противоречивых результатов при первичном тестировании.

3.4. Во всех случаях при выявлении положительных образцов в подтверждающем тестировании, материал от больных направляется в национальный центр верификации диагностической деятельности, осуществляющий функции государственной коллекции на базе ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор".

4. Правила сбора клинического (секционного) материала

4.1. Сбор клинического материала и его упаковку осуществляет медицинский работник лечебно-профилактического учреждения, обученный требованиям и правилам биологической безопасности при работе и сборе материала, подозрительного на зараженность высокопатогенными штаммами вируса гриппа А (H1N1). Забор производят в стерильные одноразовые флаконы, пробирки, контейнеры, стерильными инструментами. От одного больного отбирают две пробы, одну пробу для проведения первичного исследования материала методами ПЦР, вторую - для проведения вирусологического исследования. Все виды работ проводят с соблюдением противоэпидемического режима, в строгом соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов (приложения 2, 3).

4.2. Упаковка, маркирование, условия хранения и транспортирования материала для проведения лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа А (H1N1) должны соответствовать требованиям действующих нормативно-методических документов (приложения 2, 3).

4.3. Для исследования забирают следующие виды клинического материала:

- смывы из полости носа и ротоглотки (для ОТ-ПЦР-анализа);

- мазки из полости носа (для ОТ-ПЦР-анализа) и ротоглотки (для ОТ-ПЦР-анализа);

- носоглоточное отделяемое (для выделения вируса, ОТ-ПЦР-анализа).

Целесообразно также включать в исследование аспираты из трахеи, бронхоальвеолярный лаваж и биоптаты легких при возможности их забора. Данные процедуры осуществляет подготовленный медицинский персонал в соответствии с действующими нормативно-методическими документами (приложения 2, 3).

Перечисленные выше процедуры по забору клинического материала обученный медицинский персонал осуществляет в средствах индивидуальной защиты органов дыхания (респиратор типа ШБ-1 или РБ "Лепесток-200"), защитных очках или щитках для защиты лица, бахилах, двойными резиновыми перчатками. После процедуры отбора материала перчатки обрабатываются растворами дезинфицирующих средств, руки после снятия перчаток обрабатываются антисептиками в соответствии с действующими нормативно-методическими документами.

Выбор времени забора клинического материала очень важен, так как наиболее высокое содержание вируса в дыхательных органах человека регистрируется в течение первых четырех дней после появления признаков заболевания. Образцы должны быть собраны в течение 3 суток после появления клинических признаков, указанных в п.6.1.

Для постмортальной диагностики используют аутоптаты легких, трахеи и селезенки.

От одного больного должно забираться не менее трех видов клинического материала. Обязательно следует забирать мазки из полости носа и ротоглотки и носоглоточное отделяемое. Каждый образец материала помещают в отдельную транспортную емкость.

4.4. Сбор материала производят в пробирки со стабилизирующей средой, приготовленной согласно приложению 4, и/или в пробирки с транспортной средой, предоставляемой (или рекомендуемой) фирмой-производителем тест-систем.

4.5. Отправку материала в лабораторию осуществляют в транспортной таре со стабилизирующей средой (приложение 4).

5. Упаковка и транспортирование образцов

5.1. Все материалы, доставляемые в лабораторию, должны быть герметично упакованы в соответствии с действующими нормативно-методическими документами:

1) в транспортную емкость (плотно закрывающиеся пластмассовые пробирки или флаконы с завинчивающимися крышками, проверенные на герметичность); плотно закрытый верхний конец транспортной емкости вместе с крышкой герметизируют различными пластификаторами (парафин, парафильм и др.); емкость маркируют.

2) в плотный полиэтиленовый пакет подходящего размера с ватой (или другим гигроскопичным материалом) в количестве достаточном для адсорбции всего образца в случае его утечки; полиэтиленовый пакет следует герметично заклеить или запаять.

5.1.1. В отдельный полиэтиленовый пакет вкладывают бланк направления с указанием: наименование направляющего учреждения, ФИО больного, возраст, место жительства, предварительный диагноз, эпидемиологический анамнез, вид материала, дата и время взятия материала.

5.1.2. Пакеты с образцами от одного пациента вместе с направлением упаковывают во второй плотный полиэтиленовый пакет. Не допускается упаковывание образцов материалов от разных людей в один и тот же пакет.

5.2. Герметично закрытые полиэтиленовые пакеты помещают в термоизолирующий плотно закрывающийся контейнер (термос, сумка-холодильник), приспособленный для транспортирования биологических материалов.

5.2.1. В термоконтейнеры и термосы помещают охлаждающие элементы или пакеты со льдом. К наружной стенке термоконтейнера или термоса прикрепляют этикетку с указанием вида материала, условий транспортирования, названия пункта назначения. Сроки и условия транспортирования упакованных проб клинического материала указаны в приложении 2.

5.3. Транспортирование проб клинического материала в лаборатории для первичного исследования материала осуществляется нарочным(и), информированным о правилах доставки материала в соответствии с действующими нормативно-методическими документами.

6. Порядок проведения лабораторных исследований

6.1. При отсутствии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей на данной территории лабораторные исследования с целью диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа A (H1N1), следует проводить у пациентов с респираторными заболеваниями тяжелого течения и неясной этиологии при наличии как минимум двух из перечисленных симптомов:

Грипп лошадей – особо опасное заразное заболевание, вызываемое РНК-вирусом из семейства Ortomyxoviridae. Болезнь проявляется поражением органов дыхания – ринит, бронхопневмония, трахеит. У коней наблюдают обильное отделение экссудата, кашель. Болезнь причиняет огромный ущерб коневодческим хозяйствам, в том числе и в России. Ситуация осложняется отсутствием специфических средств лечения гриппа лошадей, а также постоянной мутацией вируса, что приводит к невозможности использования вакцин.

Содержание статьи

Характеристика заболевания

Вакцинация от гриппа

Клинические случаи гриппа лошадей регистрировались довольно давно, но определить этиологический фактор удалось относительно недавно. В 1956 году на территории Чехословакии была вспышка этой болезни, в ходе которой ветеринарным врачам удалось получить от больной лошади чистую культуру возбудителя. Спустя 9 лет в Соединенных Штатах также выделили возбудителя, но он отличался антигенным составом, поэтому его отнесли ко 2 штамму (H3N8). На территории нашей страны регистрировались оба штамма, а также тип, близкий по антигенному составу к вирусу гриппа человека.

Особенности возбудителя

Грипп лошадей вызывает РНК-вирус, принадлежащий семейству Orthomyxoviridae. Возбудитель находится в тесном родстве с вирусом гриппа человека. По антигенному составу выделено два штамма, которые разнятся типами геммаглютинина и нейраминидазы:

  • H7N7, впервые обнаружен в Чехословакии в 1956 году, поэтому первое название было дано – А/лошадь-1/Прага/56;
  • H3N8 , выделен у больных лошадей в США, другое название – А/лошадь-2/Майами/63.

Выявлено два типа вируса гриппа лошадей, отличающихся антигенами наружных гликопротеидов – H7N7 и H3N8.

Возбудитель состоит из фрагментированных РНК, покрытых липопротеиновой оболочкой, образующих сферическую форму в 80-120 нм. Покрывающие вирион белки имеют важное диагностическое значение. Они отвечают за спецификацию возбудителя, позволяя определить штамм и правильно подобрать вакцину для профилактики. Геммагглютин и нейраминидаза отвечают за токсические свойства и изменчивость.

Любой штамм вируса гриппа не устойчив во внешней среде. Солнечное или УФ-облучение инактивирует возбудителя за 5 минут. Дезинфекционными (препараты хлора, фенол, едкий натр) и антисептическими (70% раствор спирта, настойка йода) средствами вирус уничтожается за 5-30 минут.

Эпизоотологические данные

Грипп лошадей распространен во многих государствах с развитым коневодством. Первое упоминание о болезни относится к 1688 году, когда на территории Англии была описана подобная респираторная болезнь, названная инфлюэнцей лошадей. Постепенно инфекция распространилась в других странах и сейчас регистрируется на всех населенных континентах кроме Австралии.

Лечение гриппа лошадей

Вспышки лошадиного гриппа регистрируются каждый год. В настоящее время вирус приобретает тенденцию к изменению, так, обнаружены подтипы обоих штаммов в Англии и Франции, которые впоследствии регистрировались и в других государствах. За последние годы количество стран, неблагополучных по болезни увеличивается:

Большая вспышка гриппа лошадей в России произошла в 2008 году, когда на территорию Якутии и Тувы вирус проник из Монголии. По результатам исследований тогда в эпизоотический процесс было вовлечено до 60% поголовья всех коней края.

К вирусу гриппа восприимчивы лошади, а также большинство однокопытных (ослы, зебры). Наиболее тяжелая форма проявляется у жеребят, а старые животные, переболевшие болезнью ранее, обладают высокой устойчивостью, даже к другим штаммам. Заражение болезнью других животных не выявлено, хотя вирус по строению и свойствам близок к возбудителям человеческого и птичьего гриппа.

Во внешнюю среду вирус выделяется вместе с мокротой легких. Основной путь заражения – аэрогенный, возможен контактный путь передачи, случаев половой передачи или плацентарной не обнаружено. Вспышки болезни наблюдаются весной и осенью среди лошадей табунного содержания, когда происходят массовые перегруппировки поголовья, смены содержания и рационов.

В ответ на проникновение вируса у лошадей формируется иммунный ответ. Но из-за острого течения защитные силы организма запаздывают и основная роль в защите принадлежит местным иммунным комплексам верхних дыхательных путей. Образующиеся в дальнейшем антитела к гемагглютинину и нейраминидазе позволяют защитить лошадь от повторных заражений.

Методы диагностики

Выявить грипп лошадей можно по клиническим признакам, патологическим изменениям и результатам лабораторных исследований. Попав в легкие вместе с воздушными массами, возбудитель поражает слизистую, вызывая воспаление и отторжение эпителиальных клеток. Это приводит к развитию бронхитов, пневмоний и других воспалений дыхательных путей. Часто патология осложняется бактериальной и другой микрофлорой, что осложняет процесс.

Сравнительная характеристика респираторных инфекционных болезней лошадей

Инкубационный период 1-3 дня, лихорадка с повышением температуры до 40 градусов, сухой кашель, катаральные истечения. Острое течение.

Катар легких, трахеи, носовых ходов, миокардит, плеврит.

Массовое заражение лошадей от 2-х недель до 5 лет.

Острая инфекция с поражением органов дыхания и пищеварения. Среди молодняка наблюдается 100% смертность.

Воспаления легких и кишечника.

Контактный путь передачи возбудителя, из-за чего контагиозность небольшая. Наиболее восприимчивы чистокровные и арабские жеребята.

Перемежающаяся лихорадка на раннем этапе болезни. Развивается отек легких, слизистые бледные.

Анемичность слизистых и серозных покровов, отеки в подкожной клетчатке, точечные кровоизлияния на внутренних органах.

Заболевание затрагивает новорожденных жеребят.

Инкубационный период - 3-7 дней. Кашель, лихорадка, обильные слизисто-гнойные истечения, абсцессы на заглоточных лимфоузлах.

Катаральное воспаление легких, фарингит, трахеит.

Периодические вспышки болезни, массовое вовлечение поголовья.

Клиническая картина

Носовые истечения у коня

После проникновения в организм лошади вирус гриппа осуществляет первичное размножение – инкубационный период обычно длится 1-5 дней, хотя у истощенных животных и с другими заболеваниями может сократиться до 15-20 часов. В дальнейшем наблюдается характерная картина для воспалительных заболеваний респираторной системы:

  • выделение катарального экссудата;
  • характер кашля – сухой, приступообразный, усиливающийся при проходке;
  • болевая реакция при пальпации трахеи;
  • сдавливанием верхних колец трахеи провоцируется приступ кашля;
  • температура повышается до 40 градусов;
  • осмотром слизистых рта и носа устанавливают гиперемию;
  • учащение сердечных сокращений до 80 ударов;
  • общее состояние угнетенное с ухудшением аппетита.

У лошадей различают несколько форм. Их проявление зависит от возраста животного, состояния иммунной системы, наличия вторичных заболеваний, штамма вируса гриппа. Чаще встречается типичная форма с признаками, описанными выше. Также при ней отмечают увеличение заглоточных лимфоузлов.

Часто при заражении коней пражским вирусом (H7N7) развивается легкая форма без характерных признаков поражения органов дыхания. Кашель бывает редко, он слабый. Возможны небольшие истечения из носовых ходов. Температура, если и повышается, то незначительно. Атипичная форма также возможна при повторном заражении гриппом.

У истощенных молодых лошадей может развиться злокачественная форма, которая обычно осложняется бактериальной инфекцией. Патология сопровождается изнуряющим сильным кашлем. Во время приступов конь старается опустить голову и вытянуть шею. В это время обильно выделяется гной. Дыхание сопровождается хрипами. При аускультации легких обнаруживают мелкопузырчатые хрипы, крепитацию, напряженное дыхание.

При возникновении вспышки гриппа лошадей, инфекция стремительно охватывает большое поголовье, при этом у пораженных животных наблюдаются воспалительные явления органов дыхания, лихорадка и кашель.

Болезнь приводит к нарушениям в работе сердечнососудистой системы. Пульс повышенный, часто наблюдают нарушения ритма. Нередко возможна гибель лошадей от дистрофии сердечной мышцы, особенно если сохранили нагрузку на животное.

  • лейкоцитоз;
  • гемоглобинемия;
  • эритроцитопения;
  • повышение скорости оседания эритроцитов.

Патологоанатомические изменения

При вскрытии павших или убитых с диагностической целью лошадей обнаруживают тягучий экссудат светло-желтого цвета. Часть долей легкого имеют темно-красный оттенок из-за ателектаза. Кровеносные сосуды легкого инициированы. Наибольшие изменения затрагивают переднюю часть легких. На разрезе видны утолщения стенок бронхов, а их просвет заполнен гноем.

Возможно обнаружение спаек листов плевры и экссудата. Значительные изменения происходят в сердце – миокард приобретает дряблую консистенцию, серый цвет. Визуально сердце увеличено, но стенка истончена. В ряде случаев сердечная сумка заполнена экссудатом, перикардиальный жир представлен в небольшом количестве. Изменения в других органах не характерны.

Лабораторные исследования

Для диагностики у больных животных отбирают пробы экссудата из носовых ходов. От павших животных отбирают кусочки легкого, содержимое бронхиол, участки слизистых оболочек верхних дыхательных путей. Патологический материал высевают на куриные эмбрионы 9-11 дней в аллантоисную или амниотическую оболочку. В дальнейшем производят идентификацию вируса реакцией гемагглютинации.

На практике возможно выявление антител к вирусу гриппа в сыворотке крови. Для этого берут парные пробы – при выявлении патологии и спустя 2 недели. В зависимости от изменения титра антител будет заключен диагноз. Метод достаточно длителен, а поставить диагноз по наличию антител невозможно – многие лошади являются пожизненными носителями гуморального иммунитета.

Терапевтические мероприятия

Специфических методов лечения гриппа лошадей не разработано. Основной упор в терапии ставится на предупреждение осложнений и поддержание защитных сил организма. Первым делом добиваются улучшения условий содержания коней – их размещают в отдельных денниках, а в теплую и сухую погоду рекомендуется выпускать в загоны. Кормление должно быть питательным, но легким, не следует перекармливать животных – основой рациона должно стать качественное сено. На время лечения следует полностью исключить работу.

Для подавления возбудителя и активации иммунной реакции используют интерферон, миксоферон. Чтобы предотвратить бактериальные осложнения, рекомендуется давать антибиотики и сульфаниламидные средства, особенно при повышении температуры. Хороший эффект дает симптоматическое лечение в виде ингаляций и аэрозолей антисептических, бронхолитических препаратов.

Профилактика и ликвидация болезни

Взятие проб патматериала

Грипп лошадей отличается высокой заразностью из-за особенностей передачи возбудителя. Поэтому основным методом борьбы с инфекцией является строгая изоляция и соблюдение всех ограничительных мер. Важно не допустить занос вируса на ферму, так как болезнь может вспыхнуть даже среди иммунных животных, если их число менее 70% от всего поголовья.

  • месячный карантин всех ввозимых животных на ферму с обязательной диагностикой на грипп;
  • не допускается завоз лошадей из неблагополучных регионов;
  • если в хозяйстве была инфекция, то из него нельзя вывозить животных, корма и инвентарь до соответствующего разрешения;
  • вакцинация всего поголовья животных;
  • вакцины от гриппа лошадей применяют с месячного возраста с повтором каждые полгода;
  • на выставки, соревнования и другие мероприятия не допускаются неиммунизированные животные.

Если в хозяйстве обнаружен возбудитель гриппа, то немедленно вводятся ограничения. Всех больных животных, а также с повышенной температурой и неясной клинической картиной изолируют и лечат. Всех остальных лошадей хозяйства, а также поголовье в угрожаемой зоне (район до 100 км) немедленно подвергают внеочередной иммунизации.

На время действия карантина запрещен ввоз и вывоз лошадей, не допускается перегруппировка коней, за исключением ветеринарных мероприятий. В хозяйстве производят регулярные дезинфекции, хорошим эффектом обладает распыление дезинфицирующих средств в помещениях вместе с лошадьми. Через 14 суток после последнего выздоровления и иммунизации всех лошадей производят заключительную дезинфекцию конюшен, навоз подвергают биотермическому обеззараживанию и снимают ограничения.

Читайте также: