Экспресс-методы индикации возбудителей паразитарных

Обновлено: 12.05.2024

Препарат готовится методом формалиново-эфирного обогащения (модификация - система PARASEP®), затем микроскопируется.

Клиническое значение: гельминты (глисты) паразитические черви, вызывающие группу болезней, называемых гельминтозами. Чаще всего у человека заболевание вызывают круглые (класс Nematoda) и плоские (класс ленточных червей Cestoidea и сосальщиков Trematoda) черви.

Выделяют две фазы заболевания острую и хроническую. Для первой характерна общая аллергическая реакция, лихорадка, эозинофилия и лейкоцитоз, нарушения белкового обмена; для второй — патология, связанная с локализацией и количеством паразитов.

Почти всегда возникают нарушения обмена и нервно-психической деятельности, анемия, образование иммунных комплексов, снижение защитных сил организма. Гельминты могут вызывать токсические и токсико-аллергические явления (аскариды, трихинеллы), травмировать стенку кишечника (анкилостомы), вызывать кровотечения, приводящие к анемизации, способствовать проникновению патогенных микробов из содержимого кишечника в кровь, закрывать просвет кишки, выводных протоков печени и поджелудочной железы (аскариды). Все гельминты используют питательные вещества из кишечника хозяина, что ведёт к нарушению обмена веществ и авитаминозам.

При лабораторной диагностике фекалий используют макро- и микроскопические методы, а также серологические методики (эхинококкоз и др.) и современные инструментальные методики.

Одноразовые концентраторы Parasep предназначены для концентрирования кишечных паразитов методом центрифугирования через специализированный фильтр (модификация формалин-эфирного метода). Данный концентратор позволяет выявлять описторхоз, клонорхоз, фасциолез, дикроцелиоз, метагонимоз, нанофиетоз, дифиллоботриоз, гименолепидоз, аскаридоз, трихоцефалез, анкилостомидозы, стронгилоидоз, трихостронгилез, некатороз, шистосомоз, кишечные протозоозы (лямблиоз, криптоспоридиоз, изоспороз). Основное преимущество использования систем Parasep - повышение выявляемости паразитов

На основании показателей электрического сопротивления бактерий разработан метод предэпидемической диагностики внутрибольничных инфекций. Объектом изучения служили спорадические и госпитальные штаммы бактерий (Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus и Escherichia coli) выделенные от больных, находящихся на лечении в лечебно-профилактических учреждениях г. Тюмени. В популяциях возбудителей инфекционных заболеваний выделенных в чистом виде в результате стрессового воздействия низкой температуры представилось возможным выделить изолированные колонии некультивируемых возбудителей инфекционных заболеваний. В исследуемом материале концентрация некультивируемых бактерий превышала концентрацию бактерий выделенных общепринятыми лабораторными методами микробиологических исследований. Разработан микробиологический способ получения изолированных колоний некультивируемых бактерий, а также способ индикации культивируемых бактерий в лабораторных условиях и бактерий, обладающих некультурабельными свойствами на основании изучения показателей их электрического сопротивления. Предложенный способ представляется возможным использовать в качестве предэпидемической диагностики инфекционных заболеваний, связанных с оказанием медицинской помощи.

Одной из основных причин роста заболеваемости внутрибольничными инфекциями (ВБИ) является селекция и формирование госпитальных штаммов, обладающих высокой вирулентностью и множественной лекарственной устойчивостью [4]. Известно значительное количество факторов, влияющих на генетическую и фенотипическую изменчивость микроорганизмов. Меняющиеся условия окружающей среды вызывают у бактерий состояние стресса, в результате которого меняется способность бактерий размножаться на питательных средах [10]. Под воздействием стрессовых факторов окружающей среды, влияющих на культуральные свойства бактерий, иногда даже значительное количество бактерий могут переходить в жизнеспособное некультурабельное состояние [1, 2, 9]. Установлено, что значительное количество бактериальных клеток, обладающих жизнеспособными патогенными свойствами, не размножаются в лабораторных условиях [12]. Так, при использовании стандартных микробиологических методов исследований проб морской воды только 0,01-0,1% бактерий культивировались в лабораторных условиях [11].

Итак, анализ данных периодической литературы свидетельствует, что в ряде случаев под воздействием стрессовых факторов бактерии могут терять способность размножаться в лабораторных условиях на питательных средах. Возможно, это состояние можно сравнить с анабиозом, когда микробные клетки остаются жизнеспособными, но теряют способность культивироваться в лабораторных условиях.

Проведенные нами исследования в предыдущие годы свидетельствуют, что бактерии на своей поверхности, в зависимости от поверхностного химического состава микробных клеток, в жидкой среде имеют ионогенные группировки, влияющие на изменение показателей электрического сопротивления растворов в зависимости от вида бактерий и их концентрации [3, 6, 7, 8]. Поэтому разработка методов выделения некультивируемых бактерий из микробных популяций, вызывающих патологический процесс в восприимчивых организмах, и изучение возможности их индикации по результатам определения показателей электрического сопротивления растворов, содержащих взвесь бактерий (возбудителей инфекционных заболеваний) является актуальным. Определение электрического сопротивления взвеси бактерий не требует материальных затрат и является экспресс-методом, основанным на электрокинетических свойствах микробных популяций. Разработка данного экспресс-метода позволит ускорить процесс эпидемиологического расследования вспышек инфекционных заболеваний, своевременно проводить противоэпидемические мероприятия при возникновении инфекций связанных с оказанием медицинской помощи (ИСМП) [5], а также качественно и своевременно осуществлять лечебно-профилактические мероприятия у пациентов с инфекционной патологией.

Цель исследования - определить возможность использования экспресс-метода индикации бактерий по величине показателей электрического сопротивления взвеси бактерий в жидкой среде для выявления культивируемых и некультивируемых бактерий в лабораторных условиях.

Задачи исследований

Разработать способ выделения некультивируемых бактерий в лабораторных условиях из микробных популяций возбудителей инфекционных заболеваний.

Разработать принципиальную схему устройства для накопления некультивируемых бактерий в лабораторных условиях.

Провести анализ показателей электрического сопротивления взвесей культивируемых и некультивируемых бактерий в жидкой среде.

Дать сравнительную характеристику показателей электрического сопротивления в жидкой среде популяций культивируемых и некультивируемых бактерий, вызывающих в восприимчивом организме инфекционный процесс.

Определить возможность использования электрического сопротивления взвеси бактерий в жидкой среде для предэпидемической диагностики ИСМП.

Материал и методы исследования

Объектом изучения служили спорадические и госпитальные штаммы бактерий Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus и Escherichia coli, выделенных от больных, находящихся на лечении в ЛПУ г. Тюмени. Некультивируемые бактерии в лабораторных условиях получали следующим способом: провели посев исследуемого материала на скошенный мясопептонный агар (МПА) для накопления микробной взвеси. Из культуры бактерий, выросших на МПА, по стандарту мутности в 5 единиц, соответствующей 500000 мк в 1 мл, получали взвесь бактерий, из которой готовили серийные разведения до 10 7 . Для определения количества культивируемых бактерий в лабораторных условиях, содержащихся в приготовленных серийных разведениях, проводили посев микробов на плотную элективную питательную среду для получения изолированных колоний, а затем определяли концентрацию микробной взвеси.

Результаты исследования и их обсуждение

Проведенные исследования показали, что в чистой культуре бактерий выделяемых в лабораторных условиях имеется значительное количество некультурабельных бактерий. В исследуемых популяциях бактерий, стандартизированных по стандарту мутности в 5 единиц, концентрация культивируемых бактерий составила 10 5 степени, а концентрация бактерий некультивируемых в лабораторных условиях составила 10 7 степени. Культивируемые и некультивируемые бактерии в лабораторных условиях обладали различными показателями электрического сопротивления и при минимальных концентрациях (10-15 микробных клеток) в зависимости от вида микроорганизма электрическое сопротивление некультивируемых бактерий превышало электрическое сопротивление культивируемых бактерий на 100-300 кОм (табл. 1, 2). Итак, на показатели электрического сопротивления некультивируемых бактерий оказывает влияние вид возбудителя инфекционного заболевания. Даже незначительное количество некультивируемых бактерий P.aeruginosa (1-2 микробных клетки) повышало электрическое сопротивление растворителя (физиологический раствор хлорида натрия) на 358 кОм, что дает основание для использования электрического сопротивления некультивируемых бактерий для выявления наличия их на различных объектах больничных помещений и в организме бактерионосителей, что можно использовать для проведения предэпидемической диагностики инфекционных заболеваний.

Значения показателей электрического сопротивления бактерий в зависимости от концентрации культивируемых и некультивируемых бактерий P. Aeruginosa (штамм спорадический № 557)

Показатели электрического сопротивления и количество бактерий в серийных разведениях

Показатели электрического сопротивления (в кОм)

Количество некультивируемых микробных клеток

Количество культивируемых микробных клеток

Разведения микробной взвеси

Значения показателей электрического сопротивления бактерий в зависимости от концентрации культивируемых и некультивируемых бактерий E.cоli (штамм спорадический № 209)

Показатели электрического сопротивления и количество бактерий в серийных разведениях

Показатели электрического сопротивления (в кОм)

Количество некультивируемых микробных клеток

Количество культивируемых микробных клеток

Разведения микробной взвеси

Предложенное устройство позволяет из популяций возбудителей инфекционных заболеваний выделять некультивируемые бактерии в лабораторных условиях, что повысит эффективность лабораторной диагностики за счет выделения некультивируемых бактерий и уменьшит количество ложноотрицательных результатов лабораторных исследований.

Выделение некультивируемых бактерий при лабораторной диагностике инфекционных заболеваний позволит в полном объеме выявлять ИСМП, циркулирующих в лечебно-профилактических учреждениях, а также позволит в более полном объеме проводить противоэпидемическое расследование при возникновении вспышек инфекционных заболеваний и более эффективно проводить расследование эпидемических вспышек и эффективно осуществлять противоэпидемические мероприятия, а также осуществлять эффективные противоэпидемические мероприятия, направленные на источник инфекционного заболевания.

Анализ показателей электрического сопротивления взвесей культивируемых и некультивируемых бактерий в жидкой среде показал, что показатели электрического сопротивления взвесей бактерий можно использовать для экспресс-индикации бактерий в жидкой среде при небольших концентрациях бактерий: от 1 до 20 микробных клеток в 1 мл раствора. Максимальную концентрацию бактерий в жидкой среде можно определить по показателям электрического сопротивления.

Используя цифровой мультиметр (Mini digital multimeter) марки М832 проведено определение электрического сопротивления взвеси бактерий от 1 до 2000 кОм. Параметры разрешающей способностью прибора: 1 кОм и точностью ± 0,8% единиц счета, при максимальном напряжении на электродах 2,8 В. При максимальном показателе электрического сопротивления в пределах 900-1500 кОм регистрировалась максимальная концентрация живых микробных клеток в процессе культивирования бактерий на питательных средах следующих видов бактерий: Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis, Citrobacter freundii и Pseudomonas aeruginosa. Результаты проведенных исследований оформлены в виде заявки на изобретение № 2010118749 от 13.05.2010 г. По данной заявке вынесено решение экспертизы по существу ФГБУ ФИПС о выдаче патента на изобретение по заявке от 05.10.2011 г.

Схема устройства хладотермостата для накопления в элективной питательной среде некультивируемых бактерий. Обозначения: 1 - рабочая камера хладотермостата; 2 - нагревательный элемент; 3 - охлаждающий змеевик; 4 - фильтр; 5 - испаритель; 6 - компрессор; 7 - приводной двигатель, 8 - пусковое защитное реле двигателя; 9 - цифровое программирующее устройство; 10 - датчик температуры

Установить корреляционной связи между нарастанием концентрации микробных клеток и увеличением или снижением показателей электрического сопротивления растворов, содержащих нарастающие концентрации бактерий не удалось.

На модели спорадических и госпитальных штаммов Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus и Escherichia coli, выделенных от больных, разработан способ и устройство для выделения и накопления некультивируемых бактерий в лабораторных условиях. Установлена возможность индикации в небольших концентрациях (1-20 микробных клеток) культивируемых и некультивируемых бактерий в лабораторных условиях с помощью экспресс-метода по определению электрического сопротивления взвеси бактерий в жидкой среде. Проведенные результаты исследований открывают новые возможности для диагностики инфекционных заболеваний, проведения эффективного специфического лечения и профилактики ИСМП, а также эпидемиологического расследования вспышек инфекционных заболеваний и предэпидемической диагностики инфекционных заболеваний.

Волянський Ю.Л. Некультурабельний стан аспорогенних бактерій: теоретичні аспекти проблеми та її практична значущість // Інфекційні хвороби. - 2004. - №1. - С. 5-9.

Головлев Е.Л. Другое состояние неспорулирующих бактерий // Микробиология. - 1998. - № 6. - С. 725-735.

Микробиологические аспекты электрического сопротивления бактерий / Л.Б. Козлов, А.М. Марченко, Е.В. Сперанская, В.В. Мефодьев, Ю.В. Устюжанин // Фундаментальные исследования. - 2010. - № 4. - С. 7-10.

Митрофанова Н.Н., Мельников В.Л., Слетов А.М. Результаты мониторинга видового состава и основных биологических характеристик микроценозов многопрофильного стационара // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион, 2009. - № 4. - С. 90-97.

Национальная концепция профилактики инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи. - М.: Минздрав России, 2011. - 22 с.

Сперанская, Е.В. Электрическое сопротивление взвеси бактериальной культуры как индикатор эпидемических и спорадических штаммов шигелл / Е.В. Сперанская, Л.Б. Козлов, В.В. Мефодьев // Журн. микробиол. - 2008. - № 3. - С. 10-13.

Colwell R. R. Bacterial death revisited // Nonculturable microorganisms in the environment / - Ed. D. J. Grimes. - Washington, D.C.. ASM Press, 2000. - P. 325-342.

Rollins D., Colwell R. Viable but nonculturable stage of Campylobacter jejuni and its role in survival in the natural aquatic environment // Appl. Environ. Microbiol. - 1986. - Vol. 52. - P. 531-538.

Kogure K., Simidu U., Taga N. Atentative direct microscopic method for counting living marine bacteria // Can. J. Microbiol. - 1979. - V. 25. - P.415-420.

3.1. ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ

ПОРЯДОК ОРГАНИЗАЦИИ И ПРОВЕДЕНИЯ ИНДИКАЦИИ ПАТОГЕННЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ АГЕНТОВ, В ТОМ ЧИСЛЕ НЕУСТАНОВЛЕННОГО СИСТЕМАТИЧЕСКОГО ПОЛОЖЕНИЯ

Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека: Ежлова Е.Б., Демина Ю.В., Пакскина Н.Д., Омариев З.М.; Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Роспотребнадзора: И.Н.Шарова, Е.С.Казакова, С.А.Щербакова, Т.Ю.Красовская, В.Е.Куклев, С.А.Портенко, Н.А.Осина, А.С.Абдрашитова, И.А.Касьян, И.Г.Карнаухов, О.В.Кедрова, В.В.Кутырев; Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека: А.Н.Куличенко, О.В.Малецкая, А.Г.Рязанова, А.С.Волынкина; Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека: С.В.Титова, О.С.Чемисова, Э.А.Москвитина, Л.Л.Трухачев, Н.В.Павлович, С.О.Водопьянов, А.С.Водопьянов, А.Б.Мазрухо, Р.В.Писанов; Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Иркутский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека: С.В.Балахонов, О.Д.Захлебная, Л.В.Миронова, А.К.Носков, М.Ю.Шестопалов; Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека: Ткаченко Е.А., Храпова Н.П., Захарова И.Б., Лемасова Л.В., Кузютина Ю.А., Маркин A.M., Шаров Т.Н., Шпак И.М., Викторов Д.В., Топорков А.В.; Федеральным бюджетным учреждением науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека: Дятлов И.А., Храмов М.В., Тюрин Е.А., Чекан Л.В., Богун Г.А., Кисличкина А.А.; Федеральным бюджетным учреждением науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор": Максютов Р.А., Пьянков О.В., Боднев С.А., Золин В.В., Оськина О.П., Терновой В.А., Гаврилова Е.В., Агафонов А.П.; Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Противочумный центр" Роспотребнадзора: Лопатин А.А., Иванова С.М., Безсмертный В.Е.; Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения "Федеральный Центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора: В.Ю.Ананьев. В.В.Мордвинова

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю.Поповой 31 мая 2018 г.

3. Введены впервые

I. Область применения

1.1. Настоящие методические рекомендации определяют порядок организации индикации патогенных биологических агентов, в том числе неустановленного систематического положения (неизвестного ПБА), в Центрах индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности на базе противочумных учреждений (далее - Центр индикации), Опорных баз Центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации (далее - Опорная база Центра индикации) и лабораториях мобильного комплекса специализированной противоэпидемической бригады (далее - МК СПЭБ) Роспотребнадзора, функционирующих на базе ФКУЗ "Противочумный институт" Роспотребнадзора.

1.2. Методические рекомендации определяют основные принципы индикации и лабораторной диагностики инфекционных болезней с тяжелым клиническим течением и (или) неясной клинической картиной, возбудителями которых могут быть в том числе и микроорганизмы неустановленного систематического положения (новые, ранее не известные, атипичные), схему лабораторной диагностики, номенклатуру и объем исследований, требования биологической безопасности при проведении работ.

1.3. Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и учреждений Роспотребнадзора, научных и медицинских организаций.

II. Общие положения

Установление этиологических факторов опасных инфекционных болезней бактериальной, вирусной, микотической и риккетсиозной природы, болезней с тяжелым клиническим течением и (или) неясной клинической картиной, возбудителями которых могут быть микроорганизмы неустановленного систематического положения, а также индикация ПБА в случае преднамеренного применения может осуществляется в лабораториях Центра индикации, Опорных баз Центра индикации и МК СПЭБ.

2.2. Для выявления и дифференциации этиологических факторов болезни используют подходы, изложенные в методических указаниях "Порядок эпидемиологической и лабораторной диагностики особо опасных, "новых" и "возвращающихся" инфекционных болезней".

Наличие одной из известных инфекционных болезней можно заподозрить на основании проведения клинико-эпидемиологической диагностики, алгоритм которой изложен в вышеуказанном методическом документе. Если предварительный диагноз поставить не удается, то проводится исследование материала на наличие ПБА неустановленного систематического положения. Поскольку в этом случае при проведении лабораторного исследования необходимо исключение всех известных на текущий момент возбудителей инфекционных болезней, то используют синдромный подход, предложенный ВОЗ (Руководство по сбору клинических образцов во время полевых расследований вспышек. WHO/CDS/CSR/EDC/2000.4).

Основными клиническими синдромами болезней являются: синдром острой диареи, синдром острой геморрагической лихорадки, острый желтушный синдром, острый неврологический синдром, острый респираторный синдром, острый дерматологический синдром, острый офтальмологический синдром, острый "системный" синдром. Для каждого из вышеуказанных острых синдромов существует перечень инфекционных болезней различной этиологии, для которых данный синдром может являться ведущим. В то же время, многие инфекционные болезни имеют не одну, а несколько клинических форм, каждая из которых характеризуется определенным синдромом. Наличие у больного одного из вышеуказанных синдромов при отсутствии известных предрасполагающих факторов служит основанием для проведения лабораторного исследования с целью подтверждения или исключения, прежде всего, возбудителей известных инфекционных болезней, которые характеризуются данным синдромом.

В случае отрицательных результатов лабораторных исследований на известные возбудители, требуется дальнейшее проведение исследований с целью выявления ПБА неустановленного систематического положения.

III. Порядок организации и проведения работ в лабораториях Центров индикации, Опорных баз Центров индикации и лабораториях МК СПЭБ

3.1. Номенклатура и объем исследований

3.1.1. В лабораториях Центров индикации осуществляют индикацию возбудителей опасных инфекционных болезней бактериальной, вирусной, паразитарной, микотической и риккетсиозной природы I-IV групп патогенности, выделение и идентификацию культур микроорганизмов возбудителей инфекционных болезней бактериальной природы I-IV групп патогенности и вирусной природы II-IV групп патогенности для решения следующих задач:

- установления этиологического фактора инфекционного заболевания в целях предупреждения или ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций, предупреждения завоза и распространения опасных инфекционных болезней на территории субъектов Российской Федерации;

- установления этиологического фактора опасных инфекционных болезней бактериальной и вирусной природы с тяжелым клиническим течением и (или) неясной клинической картиной, возбудителями которых могут быть микроорганизмы неустановленного систематического положения.

3.1.2. В лабораториях Опорных баз Центров индикации, а также лабораториях МК СПЭБ специалисты противочумных учреждений осуществляют индикацию возбудителей опасных инфекционных болезней бактериальной, вирусной, паразитарной, микотической и риккетсиозной природы I-IV групп патогенности, для установления этиологического фактора инфекционного заболевания в целях предупреждения или ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций, предупреждения завоза и распространения опасных инфекционных болезней на территории субъектов Российской Федерации.

3.1.3. Для выделения вирусов I-II группы патогенности, специалисты Центра индикации, Опорной базы Центра индикации или СПЭБ обеспечивают (по согласованию с Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека) передачу материала в Референс-центры по мониторингу или лабораторной диагностике особо опасных вирусных инфекционных болезней (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора, ФГУ "48 ЦНИИ МО РФ"). Для проведения вирусологических исследований с целью выделения культуры вирусов III-IV группы патогенности - в Референс-центры, определенные приказом Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 01.12.2017 N 1116 "О совершенствовании системы мониторинга, лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней и индикации ПБА в Российской Федерации". Транспортировку проб осуществляют в соответствии с действующими санитарно-эпидемиологическими правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.

3.2. Основные принципы индикации и лабораторной диагностики

3.2.1. Основным принципом индикации и лабораторной диагностики является использование единой комплексной схемы анализа (приложение 2), предусматривающей на первом этапе последовательное выявление или исключение маркеров:

- вирусов I-II группы патогенности;

- бактерий I-II групп патогенности;

- микромицетов II группы патогенности;

- известных возбудителей инфекционных болезней, обусловливающих определенный синдром.

На втором этапе - выделение и идентификацию культур возбудителей неустановленного систематического положения.

3.2.2. Использование единых методов исследования при проведении индикации ПБА и лабораторной диагностики инфекционных болезней.

3.2.3. Принцип двухэтапного исследования материала (нативного и после биологического накопления) после исключения наличия маркеров вирусов I-II группы патогенности с использованием методов экспресс-анализа, ускоренной диагностики.

3.2.4. Использование единой схемы передачи информации о результатах индикации.

3.2.6. Целесообразно одновременное (параллельное) использование двух-трех методов (ПЦР и МФА; МФА и РНГА; МФА и ИФА и т.д.) для получения наиболее достоверных результатов.

3.2.7. При отсутствии возможности использования двух методов допускается подтверждение результатов индикации с использованием препаратов разных производителей (серий) или направленных на выявление различных мишеней.

3.3. Схема индикации и лабораторной диагностики

3.3.1. В соответствии с единой схемой индикации ПБА предусмотрены следующие этапы:

- прием, сортировка и регистрация проб;

- первичная обработка проб и подготовка их к исследованию;

- исследование проб нативного материала с помощью комплекса методов МФА, ПЦР, ИФА.

3.3.2. При обнаружении в исследуемом нативном материале маркеров вирусов I группы патогенности - ДНК/РНК, антигены, антитела класса М, дальнейшую работу с материалом прекращают. Все пробы упаковывают в строгом соответствии с требованиями в соответствии с действующими санитарно-эпидемиологическими правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.

3.3.3. Индикацию и идентификацию возбудителей опасных инфекционных болезней вирусной природы при исследовании проб клинического материала и объектов окружающей среды осуществляют с помощью следующих методов:

- экспресс-диагностика (МФА, ИХА);

- ускоренная диагностика (ПЦР, ИФА, серологические реакции);

- выделение вируса на чувствительной биологической модели (выделение вирусов I группы патогенности и неустановленного систематического положения проводят в учреждениях, имеющих разрешение на деятельность, связанную с накоплением возбудителей особо опасных вирусных инфекционных болезней (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора, ФГУ "48 ЦНИИ МО РФ").

3.3.3.1. При невозможности установления возбудителя заболевания с использованием существующих ПЦР тест-систем используют дополнительно электронную микроскопию и молекулярно-генетические методы (в том числе секвенирование отдельных фрагментов и полногеномное секвенирование).

3.3.3.2. Для выделения, идентификации возбудителя и определения его вирулентных свойств осуществляют заражение перевиваемых культур клеток (Vero, СПЭВ), РКЭ и биопробных животных (новорожденные белые мыши-сосунки).

3.3.3.3. При выделении вируса с неизвестными ранее свойствами и невозможности его систематизировать по результатам секвенирования (нуклеотидной последовательности генома) составляют паспорт штамма с указанием всех полученных характеристик.

3.3.4. При выявлении в материале генетических маркеров вирусов II-III группы патогенности (вирусов денге, желтой лихорадки и других флавивирусов, вируса лихорадки Рифт-Валли, ККГЛ, хантавирусов, вызывающих геморрагический синдром, и др.) аликвоты проб направляют по согласованию в Референс-центры по соответствующей нозологии для дальнейших вирусологических исследований.

3.3.5. При отсутствии в исследуемом материале маркеров вирусов I-II группы патогенности - ДНК/РНК, антигены, антитела класса М, проводят исследования с использованием бактериологического и биологического методов.

3.3.6. Биологическое накопление предусматривает посев исследуемого материала на питательные среды и заражение биопробных животных (возможно заражение биопробных животных с искусственно сниженной резистентностью).

3.3.7. С целью выделения культуры патогена проводят посев на комплекс питательных сред (дифференциально-диагностических и селективных).

3.3.8. После биологического обогащения проводят исследование проб методами МФА, ПЦР, ИФА, ИХА для детекции маркеров возбудителей инфекционных болезней бактериальной этиологии.

3.3.9. При необходимости осуществляют постановку биологической пробы на токсины - заражение белых мышей.

3.3.10. Идентификация выделенных культур:

- идентификацию культур возбудителей опасных бактериальных инфекционных болезней осуществляют в соответствии с нормативно-методическими документами для каждого вида возбудителя;

- идентификацию культур возбудителей неустановленного систематического положения осуществляют с использованием расширенного спектра методов, включая морфометрический, молекулярно-генетический, масс-спектрометрический и другие виды анализа;

идентификация выделенных вирусов проводится электронномикроскопическими, иммунологическими и молекулярно-генетическими методами.

3.3.11. При выделении культуры микроорганизма, предположительно являющегося этиологическим агентом Болезни или агентом при преднамеренном применении ПБА, определяют его чувствительность к антибактериальным препаратам, при необходимости проводят фрагментарное или полногеномное секвенирование.

3.4. Характеристика методов индикации и идентификации, используемых в лабораториях Центров индикации, Опорных баз Центров индикации и лабораториях МК СПЭБ

3.4.1. Обязательными методами индикации являются МФА, ПЦР, ИФА и РНГА.

МФА - сочетает иммунологическое и морфологическое исследование с люминесцентным анализом. МФА отличается высокой специфичностью. Чувствительность составляет 510 м.к./мл пробы. В лабораториях Центров индикации и их Опорных баз, в том числе лабораториях МК СПЭБ при проведении индикации используют прямой метод флуоресцирующих антител с контрастированием неспецифического свечения альбумином, меченным производными родамина. Непрямые модификации используются для идентификации культур возбудителей.

3.4.2. ПЦР - метод многократного избирательного копирования определенного участка ДНК при помощи ферментов в условиях in vitro. ПЦР позволяет детектировать фрагменты генома бактериальных, микотических и вирусных патогенных биологических агентов, в том числе с измененными фенотипическими свойствами, труднокультивируемые, некультивируемые и др. ПЦР отличает высокая чувствительность 110-110 м.к./мл и специфичность. Для проведения анализа с помощью данного подхода не требуется предварительное культивирование исследуемого материала.

от 1 декабря 2017 года N 1116

О совершенствовании системы мониторинга, лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней и индикации ПБА в Российской Федерации

______________________________________________________________
Документ возвращен без госрегистрации
Министерства юстиции Российской Федерации.
- Письмо Минюста России от 26.12.2017 N 01/162049-ЮЛ
______________________________________________________________

В соответствии с пунктом 6 статьи 46 Федерального закона от 30 марта 1999 года N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" (Собрание законодательства Российской Федерации, 1999, N 14, ст.1650; 2002, N 1 (ч.1), ст.2; 2003, N 2, ст.167; N 27 (ч.1), ст.2700; 2004, N 35, ст.3607; 2005, N 19, ст.1752; 2006, N 1, ст.10; N 52 (ч.1), ст.5498; 2007 N 1 (ч.1), ст.21, ст.29; N 27, ст.3213; N м46*, ст.5554; N 49, ст.6070; 2008, N 29 (ч.1), ст.3418; N 30 (ч.2), ст.3616; N 44, ст.4984; N 52 (ч.1), ст.6223; 2009, N 1, ст.17; 2010, N 40, ст.4969; 2011, N 1, ст.6; N 30 (ч.1), ст.4563; N 30 (ч.1), ст.4590; N 30 (ч.1), ст.4591; N 30 (ч.1), ст.4596; N 50, ст.7359; 2012, N 24, ст.3069, N 26, ст.3446; 2013, N 27, ст.3447; N 30 (ч.1), ст.4079; N 48, ст.6165; 2014, N 26 (ч.1), ст.3366, ст.3377; 2015, N 1 (ч.1), ст.11; N 27, ст.3951; N 29 (ч.1), ст.4334, ст.4359; 2016, N 27 (ч.1), ст.4160; N 27 (ч.2), ст.4238; 2017, N 27, ст.3938) и в соответствии с пунктом 5.4, 5.5, 5.7 Положения о Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 30 июня 2004 г. N 322 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2004, N 28, ст.2899; 2006, N 22, ст.2337, N 52 (ч.III), ст.5587; 2008, N 40, ст.4548, N 46, ст.5337; 2009, N 30, ст.3823, N 33, ст.4081; 2010, N 9, ст.960, N 26, ст.3350; 2011, N 14, ст.1935, N 43, ст.6079, N 44, ст.6272; 2012, N 27, ст.3729; 2013, N 5, ст.405, N 22, ст.2812, N 45, ст.5812; 2015, N 2, ст.491, N 131, ст.4680; 2016, N 28, ст.4741; 2017, N 5, ст.807, N 39, ст.5705), пунктами 3 и 10 Положения о проведении социально-гигиенического мониторинга, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 2 февраля 2006 г. N 60 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2006, N 6, ст.713), п.13 Положения о разграничении полномочий Федеральных органов исполнительной власти в области обеспечения биологической и химической безопасности Российской Федерации, утвержденных постановлением Правительства Российской Федерации от 31.05.2005** N 303 "О разграничении полномочий федеральных органов исполнительной власти в области обеспечения биологической и химической безопасности Российской Федерации" (Собрание законодательства Российской Федерации, 2005, N 21, ст.2023; 2013, N 24, ст.2999; 2009, N 6, ст.738), в целях оптимизации системы мониторинга и лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней и индикации патогенных биологических агентов (ПБА) в Российской Федерации

* Текст документа соответствует оригиналу - Примечание изготовителя базы данных.

** Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать "от 16.05.2005". - Примечание изготовителя базы данных.

1.1. Перечень Центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности, созданных на базе противочумных учреждений, перечень Опорных баз Центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности, созданных на базе ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии", перечень научно-методических центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности с прикрепленными субъектами Российской Федерации (приложение N 1);

1.2 Перечень референс-центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней, центров лабораторной диагностики и научно-методических центров по отдельным направлениям деятельности с микроорганизмами (приложение N 2);

1.3. Перечень Центров верификации диагностической деятельности, осуществляющих функции государственных коллекций патогенных микроорганизмов (приложение N 3);

1.4. Положение о Центре индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности (приложение N 4);

1.5. Положение об Опорной базе Центра индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности (приложение N 5);

1.6. Положение о Научно-методическом центре по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности (приложение N 6);

1.7. Положение о Референс-центре по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней (приложение N 7);

1.8. Положение о Центре верификации диагностической деятельности (приложение N 8);

1.9. Стандарты оснащения и номенклатуру исследований центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности, опорных баз центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности, референс-центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней, центров верификации диагностической деятельности (приложение N 9);

1.10. Порядок взаимодействия федеральных бюджетных учреждений здравоохранения - центров гигиены и эпидемиологии, центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности, научно-методических центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности, референс-центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней, центров верификации диагностической деятельности (приложение N 10);

1.11. Перечень диагностических препаратов для оснащения центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности (приложение N 11).

2. Руководителям территориальных органов Роспотребнадзора, главным врачам федеральных бюджетных учреждений здравоохранения - центров гигиены и эпидемиологии, директорам противочумных учреждений и научно-исследовательских организаций Роспотребнадзора:

2.1. Обеспечить проведение мониторинга, лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней и индикации ПБА в рамках единой системы на территориальном, региональном и федеральном уровнях в соответствии с действующим санитарным законодательством, нормативными правовыми документами;

2.2. Обеспечить взаимодействие федеральных бюджетных учреждений здравоохранения - центров гигиены и эпидемиологии, центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности, научно-методических центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности, референс-центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней, центров верификации диагностической деятельности в соответствии с приложениями N 10 к настоящему приказу;

3. Главным врачам федеральных бюджетных учреждений здравоохранения - центров гигиены и эпидемиологии, директорам противочумных учреждений и научно-исследовательских организаций Роспотребнадзора:

3.1. Обеспечить взаимодействие и разработать схемы доставки проб биологического материала и объектов окружающей среды в центры индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности, выделенных культур микроорганизмов, биологического материала в референс-центры по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней и центры верификации диагностической деятельности в соответствии с утвержденным порядком взаимодействия и действующими нормативными методическими документами;

3.2. Принять меры по укреплению материально-технической базы лабораторий, дооснащению их необходимыми приборами и оборудованием для проведения мониторинга и лабораторной индикации инфекционных и паразитарных болезней, обеспечения требований биологической безопасности согласно приложению N 9 к настоящему приказу;

3.4. Обеспечить внедрение в работу лабораторий современных методов диагностики, индикации и идентификации возбудителей инфекционных и паразитарных болезней;

3.5. Обеспечить регулярную подготовку специалистов по вопросам современной лабораторной диагностики, индикации и идентификации возбудителей инфекционных и паразитарных болезней;

4. Директорам научно-исследовательских противочумных институтов Роспотребнадзора обеспечить готовность лабораторий из состава специализированных противоэпидемических бригад (далее - СПЭБ) для усиления органов и организаций Роспотребнадзора.

5. Директорам противочумных учреждений Роспотребнадзора:

5.1. Обеспечить оказание практической и методической помощи органам и организациям Роспотребнадзора, медицинским организациям по вопросам организации и проведения мониторинга инфекционных болезней, эпидемиологического надзора и профилактики природно-очаговых, зооантропонозных и опасных инфекционных болезней человека;

5.2. Обеспечить противоэпидемическую готовность противочумных учреждений по особо опасным инфекционным болезням в случае эпидемических осложнений на территории закрепленных субъектов;

5.3. Обеспечить оснащение центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности диагностическими препаратами для индикации ПБА согласно приложению N 11;

6. Руководителям центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности, научно-методических центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности, референс-центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней и центров верификации диагностической деятельности:

6.2. Обеспечить взаимодействие с органами и организациями Роспотребнадзора в закрепленных субъектах Российской Федерации в соответствии с действующим санитарным законодательством и настоящим приказом.

7. Главным врачам федеральных бюджетных учреждений здравоохранения - центров гигиены и эпидемиологии, руководителям противочумных учреждений, на базе которых формируются опорные базы центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности, обеспечить наличие условий для проведения индикации патогенных биологических агентов I группы патогенности и получение санитарно-эпидемиологического заключения на соответствие условий требованиям санитарно-эпидемиологических правил по безопасности работ с микроорганизмами I-II групп патогенности.

8. Руководителям Центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности, Научно-методических центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности осуществлять контроль готовности к проведению мониторинга и лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней в ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" на закрепленной территории. Информацию представлять в Федеральную службу по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ежегодно до 15 марта следующего за отчетным года.

9. Начальнику Управления эпидемиологического надзора (Е.Б.Ежлова) осуществлять координацию деятельности Центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности, Научно-методических центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности, Референс-центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней и Центров верификации диагностической деятельности.

10. Начальнику Финансово-экономического Управления (С.А.Румянцева) предусмотреть дополнительные средства на укрепление материально-технической базы лабораторий Центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности, опорных баз Центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности, Референс-центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней и Центров верификации диагностической деятельности.

12. Контроль за исполнением настоящего приказа оставляю за собой.

Приложение N 1
к приказу Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека
от 1 декабря 2017 года N 1116

Перечень центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности, Опорных баз центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности, Научно-методических центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности

Центры индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности

Опорные базы центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности

Научно-методические центры по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности

Центральный федеральный округ

Белгородская, Брянская, Владимирская, Воронежская, Ивановская, Калужская, Костромская, Курская, Липецкая, Московская, Орловская, Рязанская, Смоленская, Тамбовская, Тверская, Тульская и Ярославская области, г.Москва

ФКУЗ "Противочумный центр" Роспотребнадзора

ФБУН "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Роспотребнадзора

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Воронежской области"

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Курской области"

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Тверской области"

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Кировской области"

ФБУН "Центральный научно-
исследовательский институт эпидемиологии Роспотребнадзора"

ФБУН "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Роспотребнадзора

Северо-Западный федеральный округ

Республики Карелия, Коми, Ненецкий автономный округ, Архангельская, Вологодская, Калининградская, Ленинградская, Мурманская, Новгородская и Псковская области, г.Санкт-Петербург

ФКУЗ "Северо-Западная противочумная станция" Роспотребнадзора

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Мурманской области"

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Калининградской области"

ФБУН "Санкт-Петербургский научно-
исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера" Роспотребнадзора

Приволжский федеральный округ

Республики Башкортостан, Марий Эл, Мордовия, Татарстан, Удмуртская и Чувашская Республики, Пермский край, Нижегородская, Оренбургская, Пензенская, Самарская, Саратовская и Ульяновская области

ФКУЗ "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Роспотребнадзора

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Нижегородской области"

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Самарской области"

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Татарстан"

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Мордовия"

ФБУН "Нижегородский научно-
исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени академика И.Н.Блохиной" Роспотребнадзора

ФКУЗ "Противочумный центр" Роспотребнадзора

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Кировской области"

Уральский федеральный округ

Курганская, Свердловская, Челябинская области

ФКУЗ "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Роспотребнадзора

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Свердловской области"

ФБУН "Екатеринбургский научно-
исследовательский институт вирусных инфекций" Роспотребнадзора

Тюменская область, Ханты-Мансийский и Ямало-Ненецкий автономные округа

ФКУЗ "Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока" Роспотребнадзора

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Тюменской области"

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Ямало-Ненецком автономном округе"

ФБУН "Тюменский научно-
исследовательский институт краевой инфекционной патологии" Роспотребнадзора

Южный федеральный округ

Республика Адыгея, Краснодарский край

ФКУЗ "Причерноморская противочумная станция" Роспотребнадзора

Противочумное отделение ФКУЗ "Причерноморская противочумная станция" Роспотребнадзора в г.Сочи

ФКУЗ "Ставропольский научно-
исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора

ФКУЗ "Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора

ФКУЗ "Астраханская ПЧС" Роспотребнадзора

ФКУЗ "Элистинская ПЧС" Роспотребнадзора

Республика Крым, г.Севастополь

ФГКУЗ "ПЧС Республики Крым" Роспотребнадзора

ФКУЗ "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора

ФБУН "Ростовский научно-
исследовательский институт микробиологии и паразитологии" Роспотребнадзора

Северо-Кавказский федеральный округ

Республика Северная Осетия - Алания, Ингушская и Чеченская Республики, Ставропольский край

ФКУЗ "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора

ФКУЗ "Дагестанская противочумная станция" Роспотребнадзора

Кабардино-Балкарская и Карачаево-Черкесская Республики

ФКУЗ "Кабардино-Балкарская противочумная станция" Роспотребнадзора

Сибирский федеральный округ

Республика Хакасия, Красноярский край, Иркутская, Кемеровская, Новосибирская, Омская, Томская области

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Красноярском крае"

ФКУЗ "Иркутский научно-
исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока" Роспотребнадзора

Республика Алтай, Алтайский край

ФКУЗ "Алтайская противочумная станция" Роспотребнадзора

ФКУЗ "Тувинская противочумная станция" Роспотребнадзора

Республика Бурятия, Забайкальский край

ФКУЗ "Читинская противочумная станция" Роспотребнадзора

Дальневосточный федеральный округ

Республика Саха (Якутия)

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Саха (Якутия)"

ФБУН "Хабаровский научно-
исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии" Роспотребнадзора

Камчатский, Приморский края

ФКУЗ "Приморская противочумная станция" Роспотребнадзора

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Камчатской области"

Хабаровский край, Амурская, Магаданская, Сахалинская области, Еврейская автономная область, Чукотский автономный округ

Читайте также: