Иерсиниоз у крупного рогатого скота

Обновлено: 10.05.2024

ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗ И ИЕРСИНИОЗ (эпидемиология, клиника, диагностика, терапия)

Методические рекомендации содержат современные сведения по эпидемиологии иерсиниозов, особенности клинических проявлений и детальное освещение вопросов дифференциальной диагностики иерсиниозов с различными инфекционными и терапевтическими болезнями.

Особое внимание уделено методам обнаружения возбудителей (антигенов), эффективным средствам специфической диагностики.

Методические рекомендации предназначены эпидемиологам, инфекционистам, педиатрам и микробиологам.

Методические рекомендации разработаны специалистами:

ФГУ "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Пастера" - д.м.н. проф. Г.Я.Ценевой, н.с. Г.И.Кокориной, к.б.н. Е.А.Воскресенской; к.м.н. О.А.Шендерович;

ФГУ "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт детских инфекций" - д.м.н. проф. В.В.Ивановой, д.м.н. О.В.Тихомировой, к.м.н. М.К.Бехтеревой;

Министерства здравоохранения и социальной политики Российской Федерации - главным специалистом Т.Н.Фролочкиной.

Рецензенты: профессор В.В.Тэц

Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica широко распространены во многих странах мира, являясь причиной cпорадической и групповой заболеваемости, при этом псевдотуберкулез характерен, в основном, для территорий с умеренным и холодным климатом.

В России псевдотуберкулез регистрируется практически повсеместно, однако наиболее высокие показатели заболеваемости характерны для Сибирского региона (в 2003 г. 24,45 на 100 тыс.), Дальнего Востока (10,52 на 100 тыс.) и Северо-Запада (9,75 на 100 тыс.), включая Санкт-Петербург. Заболеваемость иерсиниозом в указанных регионах также примерно в 2-2,5 раза превышает заболеваемость по стране: показатели на 100 тыс. в 2003 г. составили 2,95; 3,08 и 4,39, соответственно.

Дети болеют псевдотуберкулезом, как и иерсиниозом, в 4-5 раз чаще, чем взрослые. В последние годы отмечается тенденция к росту рецидивирующих и хронических форм.

В настоящее время серотипирование иерсиний на ряде территорий России не проводится. Имеющийся набор коммерческих поликлональных диагностических сывороток не велик, а моноклональные сыворотки, разработанные в России, не имеют промышленного производства. Между тем серологическое типирование является обязательным. Оно необходимо для оценки этиологической значимости выделенных бактерий, а также регистрации новых серотипов в целях усовершенствования диагностики.

Вследствие полиморфизма клинических проявлений псевдотуберкулез и иерсиниоз могут сопровождаться проявлениями, сходными с аналогичными признаками 36 нозологических форм. В этой связи для повышения эффективности диагностики важно освещение вопросов дифференциальной диагностики иерсиниозов с различными инфекционными, терапевтическими и хирургическими болезнями.

Для совершенствования лабораторной диагностики представлены экспресс-методы, в том числе ПЦР, определены наиболее информативные биологические субстраты и оптимальные сроки их исследования, предложена общая тактика лабораторной диагностики заболеваний, обусловленных иерсиниями.

1. ПОКАЗАНИЯ И ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ МЕТОДА

Клинико-дифференциальную диагностику иерсиниоза и псевдотуберкулеза следует проводить с приведенным ниже перечнем инфекций во избежание гипо- и гипердиагностики.

Методы лабораторной диагностики иерсиниоза и псевдотуберкулеза необходимо внедрить во всех регионах России в качестве унифицированных.

2. МАТЕРИАЛЬНО-ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ МЕТОДА

Оборудование:

- стандартное оборудование для бактериологических лабораторий;

- стандартное оборудование для серологических лабораторий;

- стандартное оборудование для иммунологических лабораторий.

Диагностические наборы:

- сыворотки диагностические к Yersinia enterocolitica и Yersinia pseudotuberculosis распространенных сероваров О-моновалентные кроличьи сухие для РА на стекле;

- сыворотка диагностическая к вирулентным Yersinia enterocolitica адсорбированная кроличья сухая для РА на стекле (СВИ) (НИИЭМ им.Пастера, г.Санкт-Петербург) утв. МЗ 25.02.03;

- "Тест-система иммуноферментная для выявления антигенов иерсиний псевдотуберкулеза I серовара" (НИИЭМ им.Пастера, г.Санкт-Петербург) утв. МЗ 1995 г.;

- наборы для ПЦР "Иерпсевдоамплитест" и "Иерсэнтероамплитест" производства ЗАО "Ниармедик плюс" (г.Москва);

- "Латексный псевдотуберкулезный диагностикум" (Санкт-Петербургский НИИ вакцин и сывороток), рег. N 92/203/17;

- диагностикум эритроцитарный псевдотуберкулезный антигенный сухой (Санкт- Петербургский НИИ вакцин и сывороток) рег. N 94/161/71;

- диагностикум эритроцитарный кишечноиерсиниозный О:3 антигенный сухой (Санкт- Петербургский НИИ вакцин и сывороток) рег. N 94/161/383;

- диагностикум эритроцитарный кишечноиерсиниозный О:9 антигенный сухой (Санкт- Петербургский НИИ вакцин и сывороток) рег. N 94/161/383.

Питательные среды:

- питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза, рег. N 97/306/5;

- среда для определения чувствительности к антибиотикам (АГВ) (ФС 42-3521-98, НПО "Питательные среды");

- среда Игла, рег. N 94/16/81;

- сыворотка крупного рогатого скота, рег. N 91/28/5;

- питательная среда для выделения энтеробактерий сухая (агар+Эндо-ГРМ) (ГПЦПЦ, Оболенск), рег. N 98/306/5.

Химические реактивы:

- двузамещенный фосфорно-кислый калий (KНРО), ГОСТ 2493-75;

- фосфатно-солевой буфер, кат. N В-60201;

- KОН, СТ СЕВ 1439-78*.

* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: СТ СЭВ 1439-78**;

** На территории Российской Федерации действует ГОСТ 24363-80. - Примечание изготовителя базы данных.

3. ОПИСАНИЕ МЕТОДА

3.1. Этиология псевдотуберкулеза и иерсиниоза

Возбудители псевдотуберкулеза и иерсиниоза - микроорганизмы рода Yersinia семейства Enterobacteriaceae. Возбудитель псевдотуберкулеза впервые был выделен в 1883 г. L.Malasses и W.Vignal. Несколько позже C.Eberth (1886), выделив культуру и изучив ее на лабораторных животных как спонтанно болеющих, так и зараженных в эксперименте, отметил сходство патологоанатомических изменений внутренних органов погибших животных с таковыми при туберкулезной инфекции и назвал изучаемый микроорганизм "псевдотуберкулезным". У человека этот микроорганизм вызывает заболевание, сопровождающееся энтеритами, энтероколитами и тяжелой генерализованной инфекцией с множественными поражениями отдельных органов и систем.

Первые сведения о выделении Y. enterocolitica из клинического материала от больных людей появились в США в 1939 г. (Schlifstein J., Coleman N.). С 1962 года после регистрации эпизоотий, вызванных Y. enterocolitica среди шиншилл, микроорганизмы были изучены, идентифицированы и по предложению W. Frederiksen (1964) названы Y. enterocolitica. Название принято Международным подкомитетом по таксономии в 1967 г. В России Y. enterocolitica впервые была выделена М.А.Беловой, Г.В.Ющенко (1968). Этиологическая роль Y. enterocolitica аргументирована при возникновении илеитов, энтеритов и гастроэнтеритов, мезентериальных лимфаденитов, заболеваний печени и мочевыводяших путей, аппендицитов, других внекишечных проявлений (форм) иерсиниоза.

3.1.1. Биологические характеристики иерсиний

Морфологические свойства

Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis - грамотрицательные палочки с закругленными концами, диаметром 0,5-0,8 и длиной 1-3 мкм. Размеры палочек колеблются в зависимости от возраста культуры, температуры и среды выращивания. Микроорганизмы окрашиваются всеми анилиновыми красителями. В мазках имеют вид палочек, а из бульонных культур и отпечатков органов экспериментально зараженных животных - коккобактерии с биполярной окраской. В мазках из жидких питательных сред Y. pseudotuberculosis могут располагаться цепочками, что не наблюдается у Y. enterocolitica.

Культуральные свойства

Возбудители псевдотуберкулеза и иерсиниоза - факультативные анаэробы. Оптимальная температура их культивирования - 22-28 °С, но они могут размножаться при температуре от 2 до 40 °С, в том числе при 2-10 °С, что дало основание J.S.Peterson и R.A.Cook (1963) предложить метод выделения культуры после выдерживания посевов на холоде (4-6 °С) в фосфатном буфере (так называемое холодовое обогащение). При более высокой температуре культивирования иерсинии обоих видов неподвижны. Y. pseudotuberculosis имеет 3-5 жгутиков, расположенных перитрихиально или полярно, а Y. enterocolitica - множество расположенных перитрихиально. Благодаря жгутикам бактерии подвижны. При температуре выше 30 °С жгутики не активны, а также культуры слабо и/или не активны в серологических реакциях.

Иерсинии неприхотливы и не требовательны к питательным веществам; растут на обычных питательных средах (МПА, агары Хоттингера и Мартена, Эндо и др.). Оптимальной для роста является рН среды 7,2-7,4; хотя иерсинии могут расти при рН от 5,2 до 9,0. Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica способны размножаться на минимальной среде без добавлении аминокислот, что позволяет отнести их к прототрофам.

На плотных средах при температуре 22-28 °С через сутки иерсинии вырастают в виде мелких, выпуклых, полупрозрачных, бесцветных колоний с ровным или волнистым краем. При температуре 37 °С колонии становятся прозрачными и имеют неровные фестончатые края и выпуклый центр. Оба микроорганизма хорошо растут на средах Мак-Конки и дезоксихолатном агаре.

Как правило, Y. pseudotuberculosis, выделенные от больных и грызунов, находятся в S-форме при росте на плотной питательной среде, хорошо эмульгируются в физиологическом растворе, полупрозрачные, с ровным краем. При посеве старых, хранившихся в лабораторных условиях, культур и иногда при выделении Y. pseudotuberculosis из объектов окружающей среды бактерии растут в виде колоний с выпуклым, бугристым, коричневым центром и тонкой прозрачной "кружевной" периферической зоной (R-форма), имеющих сходство с колониями Y. pestis.

Полиморфизм колоний Y. enterocolitica менее выражен. Однако в условиях культивирования при 37 °С Y. enterocolitica диссоциируют на S-R варианты, колонии не прозрачны, имеют неровный фестончатый край, выпуклый, сферический, иногда бугристый или исчерченный центр. В жидкой питательной среде такие культуры растут в виде хлопьевидного осадка на дне, оставляя бульон прозрачным, а гладкие - равномерно мутят среду. Такой рост в жидкой среде характерен больше для Y. pseudotuberculosis. При росте Y. enterocolitica бульон не бывает прозрачным. Диссоциированные культуры слабо и/или не активны в серологических реакциях.

Биохимические свойства

В табл.1 представлены биохимические свойства, дифференцирующие Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica.

Основные биохимические свойства бактерий рода Yersinia, отличающие их от представителей семейства Enterobacteriaceae

Ввиду того что иерсиниоз является антропозоонозным заболеванием и обслуживающий животных, больных иерсинеозом, персонал на животноводческих фермах имеет реальную возможность заразиться данным заболеванием, рассмотрим, как данное заболевание протекает у человека.

Основным источником инфекции для человека являются инфицированные и больные иерсиниозом сельскохозяйственные животные, реже обитающие на фермах грызуны (крысы и мыши), а также контаминированные иерсиниями пищевые продукты.

Основной путь заражения — пищевой. 3аболевание гастроэнтероколитической формой происходит при употреблении инфицированных мясных продуктов, молока, овощей, воды и других пищевых продуктов. 3аболевание протекает в виде спорадических и групповых случаев.

Иерсиниоз у людей протекает как острое инфекционное заболевание и сопровождается поражением желудочно-кишечного тракта, опорно-¬двигательного аппарата, печени и других органов с явлениями общей интоксикации организма; в дальнейшем присоединяется экзантема. Для заболевания характерно длительное течение и возможность рецидива.

Клиническая картина.

Инкубационный (скрытый) период длится от 1 до б дней. Для иерсиниоза характерно многообразие клинических проявлений.

Желтушная форма протекает- либо одновременно с гастроэнтероколитической, либо спустя 2-Здня после поражения кишечника. При этой форме превалируют симптомы поражения печени т.к. развивается токсический гепатит. У больного появляются жалобы на тяжесть и боли в правом подреберье, иногда зуд кожи. Склера глаз и кожа на теле приобретает желтушное окрашивание. Печень увеличена, болезненная при пальпации. Моча темного цвета, кал бесцветный.

Экзантемная форма характеризуется синдромом интоксикации и экзантемой. Сыпь на коже появляется на 1- 6 -й день болезни. Она может быть точечной, мелко — или крупнопятнистой без зуда кожи. Сыпь бесследно исчезает через 2-5дней,оставляя после себя отрубевидное шелушение.

Артралгическая форма протекает с лихорадкой, интоксикацией и сильными ¬болями в суставах. Больные обычно жалуются на боли в суставах. Данная форма приводит к обездвиживанию больного и бессоннице. Суставы на внешний вид не изменены.

Cептическая форма бывает редко. Сопровождается высокой температурой, суточные колебания которой достигают 2 градуса, ознобом, увеличением печени, селезенки и поражением других органов с развитием эндокардита, пневмонии, нефрита с острой почечной недостаточностью, менингоэнцефалит, гепатит.

Осложнения возникают чаще на 2-З неделе заболевания. К ним относятся ¬крапивница, узловатая эритема, отек Квинке, артрит в основном крупных суставов, миокардит, уретрит, конъюнктивит, аппендицит.

Диагноз ставится комплексно на основании клиники — острого начала
болезни, интоксикации, лихорадки, симптомов острого гастроэнтероколита при наличии экзантемы, желтухи, поражения суставов; эпидемиологических оснований и лабораторного подтверждения иерсиниоза . Для лабораторного подтверждения иерсиниоза проводят посевы на питательные среды¬ крови, кала, ликвора, для серологического исследование используют
сыворотку крови.

Профилактика

Систематическая плановая борьба с грызунами — в т.ч. проведение регулярных дератизационных мероприятий совместно с ветслужбой .Соблюдение санитарно-гигиенических правил транспортировки, хранения, приготовления и реализации пищевых продуктов Постоянный санитарный надзор за водоснабжением. Соблюдение работниками животноводства, где установлено заболевание животных иерсиниозом, санитарно-гигиенических норм и правил при работе с больным животными. Проведение санитарно -просветительной работы среди населения.

Иерсиниоз - инфекционное заболевание, протекающее в 3 формах:

кишечной – гастроэнтериты
генерализованной – гепатит (воспалительное заболевание печени, часто сопровождающееся желтухой), нефрит (воспаление почек), бронхопневмония, сепсис
вторично-очаговой – артрит, энтероколит и др.- является следствием первых 2 форм, обычно развивается через 2-3 недели от начала болезни или в более поздние сроки

Заболевание вызывается двумя возбудителями рода Yersinia:

Yersinia enterocolitica
Yersinia pseudotuberculosis

Иерсинии – мелкие полиморфные микроорганизы (кокковидные, палочки, шарообразные, овоидные) из семейства энтеробактерий. Кишечные иерсинии подразделяют на 5 вариантов по биохимическим свойствам, из них наиболее патогенными для человека и животных является 3 и 4. Имеют сложную антигенную структуру, у Yersinia enterocolitica имеются сходные антигены с Yersinia pseudotuberculosis и возбудителем бруцеллеза, поэтому часто отмечается появление положительных реакций на бруцеллез.

Для заболевания имеют значение вирулентность и заражающая доза возбудителя, возраст и упитанность животного, предрасполагающие факторы: нарушение в кормлении и содержании, наличие других инфекционных заболеваний. Чаще всего ирсении погибают, попадая в кислую среду желудка, но при слишком высокой концентрации бактерий и сниженном иммунитете у животного, они проникают дальше в кишечник и поражают рядом расположенные лимфатические узлы. В зависимости от состояния иммунитета и наличия сопутствующих болезней, бактерии могут проникать в кровь, поражая органы и системы, но чаще всего кишечник.

Устойчивость

Иерсинии обладают выраженной чувствительностью к любым антибиотикам, исключение – устойчивы к препаратам группы пенициллинов.

Yersinia enterocolitica, или кишечный иерсиниоз - острое инфекционное заболевание, характеризующуюся поражением преимущественно желудочно-кишечного тракта.

Источником инфекции являются:

В основном сельскохозяйственные (чаще - свиньи, крупный и мелкий рогатый скот) и дикие животные (особенно восприимчивы олени и лани)
Часто - грызуны (шиншиллы, мыши, кролики и др.)
А также – землеройковые (бурозубки, белозубки и др.), насекомые, моллюски, ракообразные
Люди могут распространять инфекцию, но заражение от человека происходит очень редко.

Yersinia enterocolitica как самостоятельный вид была выделена у человека в 1939г., ее роль как возбудителя еще не была известна. В 1964 г. после крупных вспышек заболевания в хозяйствах по разведению шиншилл в Германии, Голландии, Швейцарии и обнаружению этих бактерий у людей с симптомами повышения температуры, поноса, частично артрита, а также- аппендицита, сепсиса, гепатита - болезнь была выделена как отдельная нозологическая единица. У здоровых собак этот возбудитель обнаруживался в 9-18% случаев. В случаях, когда понос возникал одновременно у людей и живших с ними собак, разносчиками заболевания автоматически считались собаки. По данным ВОЗ (Всемирная организация здравоохранения) отмечается рост заболеваемости кишечным иерсиниозом во многих странах, включая Россию. Естественная восприимчивость человека к иерсиниозу - низкая: здоровые люди практически не заболевают инфекцией с клиническими проявлениями, чаще заболевание наблюдается у детей, людей с ослабленным иммунитетом, хроническими заболеваниями.

Заражение происходит алиментарным путем (при поедании загрязненных бактерией продуктов питания), факторы передачи – фекалии, моча. Для человека - основные факторы передачи - мясо, молоко от больных животных, овощи, зелень, выращенные на полях, удобряемых навозом со свинокомплексов, питьевая вода.

Симптомы кишечного иерсиниоза

Инкубационный (скрытый) период 1-6 дней. Бактерия заселяет кишечник, в дальнейшем поражает лимфатический узлы кишечника, вызывая при этом различной степени выраженности воспалительный процесс. В случае прорыва лимфатического барьера кишечника возникает бактерии разносятся по организму, обуславливая развитие генерализованных форм заболевания с вовлечением в процесс различных органов и систем.

У щенков, редко у взрослых собак проявляется острым или хроническим - от слизистого до геморрагического, т.е. с примесью крови, - поносом.

У шиншилл наблюдается ухудшение аппетита, в дальнейшем тяжелое течение болезни на протяжении 2-10 недель; за 2-4 суток до гибели у них развивается анорексия (отказ от еды) и резко выраженная сонливость.

Yersinia pseudotuberculosis, или родентиоз, псевдотуберкулез. Характеризуется циклическим течением, интоксикацией, расстройством работы желудочно-кишечного тракта и узелковыми поражениями внутренних органов, скрытым течением.

Источник возбудителя: 60 видов млекопитающих и 27 видов птиц:

различные грызуны (кролики, зайцы, мыши, крысы, морские свинки, шиншиллы)
плотоядные (лисы, норки, нутрии, кошки, собаки)
дикие птицы
сельскохозяйственные животные
дикие животные (находящиеся в зоопарках и питомниках)
человек (обычно болеют дети и молодые люди)

Чаще всего Yersinia pseudotuberculosis встречается у грызунов и свиней, если рассматривать мелких домашних животных – то это заболевание чаще встречается у кошек, чем у собак и в основном не вызывают клинических признаков.

Симптомы родентиоза

Скрытый (инкубационный) период 9-14 дней.

В организм иерсинии попадают в основном алиментарным путем (с загрязненной возбудителем пищей, водой), для псевдотуберкулеза также возможен аэрогенный путь передачи.

Факторы передачи - моча, фекалии, корма и воды из загрязненных источников

Попав в организм, бактерия оседает в регионарных лимфатических узлах, вызывая их гнойное воспаление, или с током крови разносится по органам и тканям, воспаление лимфоузлов брюшной полости. Под воздействием токсинов образуются гнойно-некротические очаги в кишечнике, легких, множественные казеозные абсцессы печени, почек, селезенки. Заключительное звено в развитие возбудителя в организме - освобождение организма от бактерии, ведущее к выздоровлению, при этом антитела к возбудителю псевдотуберкулеза не обладают защитными свойствами, поэтому возможны повторные заболевания через несколько месяцев.

В основном у щенков, редко у взрослых собак, может сопровождаться повышением температуры тела, рвотой, поносом, в тяжелых случаях нефритом (воспаление ткани почек), желтухой, анемией, бронхопневмонией.

У кошек снижается масса тела, отмечается понос и желтуха

Диагностика

Основана на симптомах и исследование кала

Выделение бактерии из фекалий, крови, мочи, а также бакпосев со слизистой зева (экспресс диагностика на выявление антигена возбудителя с помощью ИФА, РКА,РЛА, РНИФ) Чувствительность РКА (реакция коагглютинации) повышается при тяжелом течении и хронизации процесса. Дополнительно проводят обнаружение РА и РИГА специфических антител в парных пробах сыворотки больных, взятых с интервалом 14 дней (реакциии становятся положительными с 6-7 дня заболевания). При развитии осложнений показано узи брюшной полости и др. исследования.

Антибиотики широкого спектра действия (тетрациклин, цефалоспорины, фторхинолоны и др), кроме группы пенициллинов и эритромицина, к которым отмечается устойчивость бактерий и симптоматическая терапия (Внутривенная капельница, спазмолитики и пр.)

Для генерализованной формы - комплексное лечение различными группами антибиотиков

Профилактика

Из вышесказанного следует, что собаки в редких случаях являются источниками иерсиниоза, домашние собаки чаще всего заражаются от бродячих собак.

Более важным источником заражения являются:

сельскохозяйственные животные
зелень и овощи с полей, удобряемых зараженным навозом или при поливке поступает вода из водоемов, в которые сливаются зараженные иерсиней нечистоты.
чаще всего продукты питания, зараженные иерсиней, недостаточно обработанные термически молоко и мясо, полученное от больных животных
из мелких домашних животных человек чаще всего заражается этим возбудителем от морских свинок, кроликов и кошек.

Профилактика сводится к соблюдению личной гигиены и гигиены питания. Одной из профилактических мер является борьба с грызунами (дератизация).

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
по лабораторной диагностике иерсиниоза животных и обнаружению возбудителя болезни в мясном сырье, молоке и растительных кормах

УТВЕРЖДАЮ Начальник Управления ветеринарии Федерального агентства по сельскому хозяйству В.А.Апалькин 3 октября 2005 г. N 5-1-14/971

РАЗРАБОТЧИКИ: д.в.н., профессор Каврук Л.С. (Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии); д.в.н., профессор Шумилов К.В., к.б.н., с.н.с. Мельниченко Л.П.; к.в.н., с.н.с. Скляров О.Д., д.б.н., профессор Обухов И.Л. (ФГУ "Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов"); д.м.н., профессор Смирнов И.В. (ЗАО "Инфамед"); д.м.н., профессор Зыкин Л.Ф., д.б.н., профессор Щербаков А.А. (Саратовский государственный аграрный университет им.Н.И.Вавилова).

1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1.1. Иерсиниоз - острое инфекционное заболевание людей и животных разных видов, включая птиц. Возбудителями болезни являются патогенные штаммы Yersinia enterocolitica, относящиеся к роду Yersinia, семейству Enterobacteriaceae.

1.2. Бактерии вида Y. enterocolitica широко распространены в природе ввиду высокой адаптации к сапрофитному образу жизни, что является одной из характерных биологических особенностей данного вида бактерий. Наряду с сапрофитными свойствами многие штаммы иерсиний проявляют патогенные свойства за счет токсигенности, адгезивности, инвазивности и способности противостоять фагоцитозу в организме теплокровных животных. Резервуаром возбудителя иерсиниоза помимо больных животных являются объекты окружающей среды - вода, почва, растительные корма, пищевые продукты, особенно молоко.

Большую роль в распространении возбудителя иерсиниоза играют синантропные грызуны (серые крысы, мыши), в связи с тем, что с их экскрементами иерсинии часто попадают на овощи в период хранения.

Температура от +4 до +40°С является благоприятной для размножения Y. enterocolitica, что способствует накоплению иерсиний на объектах животноводческих помещений - стойл, полов, подстилке, навозной жиже, овощехранилищах и пр.

1.3. Иерсиниоз чаще протекает в кишечной форме, но иногда развивается бактериемия с поражением различных внутренних органов. В зависимости от продолжительности болезни она может иметь острое и подострое течение.

Заболеванию особенно подвержен молодняк, у которого иерсиниоз проявляется в виде спорадических случаев или энзоотической вспышки, чему способствуют многие факторы, связанные с несоблюдением технологических, ветеринарно-санитарных, зоогигиенических и общих противоэпизоотических требований при его выращивании.

Клиническая картина болезни не имеет специфических особенностей и характеризуется признаками, свойственными кишечным инфекциям, вызванным другими микроорганизмами. У больных животных наблюдается потеря аппетита, понос, нарастающая слабость, адинамия, учащенное и поверхностное дыхание, учащенный пульс, интоксикация, поражение центральной нервной системы - судороги, депрессия, чередующаяся с возбуждением. При затяжном течении болезни возникает обезвоживание организма, западание глазных яблок, истощение. У некоторых животных могут быть серозно-катаральные или серозно-гнойные истечения из носовой полости, хрипы в области бронхов и легких, конъюнктивит, артриты. Температура тела обычно в пределах нормы или повышена на 0,5-1,0°С, в предагональном состоянии - ниже нормы.

При кишечной форме возбудитель болезни локализуется в желудочно-кишечном тракте и мезентериальных лимфатических узлах; при септической - еще и в паренхиматозных органах, крови, костном и головном мозге и регионарных лимфатических узлах.

У взрослых животных клинические признаки болезни обычно отсутствуют. В отдельных случаях могут быть артриты, аборты, эндометриты, маститы и еще реже - диарея.

Основной путь заражения - алиментарный. Не исключается возможность инфицирования при контакте с больными животными, а также с ранее переболевшими животными и работниками животноводческих ферм - бактерионосителями. Выздоровевшие животные могут длительное время оставаться бактерионосителями и выделять возбудителя болезни в окружающую среду.

У животных-бактерионосителей клинические признаки отсутствуют. У крупного рогатого скота иерсинии встречаются в кишечнике, у свиней - на слизистой корня языка, миндалинах глотки, в подчелюстных лимфатических узлах, у лактирующих животных - в молоке.

1.4. Патологоанатомические изменения у погибших от иерсиниоза животных имеют картину катарального или катарально-геморрагического гастроэнтерита с наличием точечных, пятнистых и полосчатых кровоизлияний на слизистой оболочке тонкого и толстого отделов кишечника; мезентериальные лимфатические узлы увеличены, на разрезе розово-красного или вишневого цвета. В брюшной полости может содержаться серозный экссудат светло-желтого цвета. Селезенка иногда имеет утолщенные края или слегка увеличена с точечными кровоизлияниями под капсулой; печень нередко перерождена, глинистого цвета, пульпа на разрезе имеет дряблую консистенцию и легко снимается при соскобе.

В почках под капсулой могут быть точечные кровоизлияния. На разрезе граница коркового и мозгового слоев в ряде случаев сглажена. На эпи- и эндокарде в области клапанов сердца часто отмечаются точечные и пятнистые кровоизлияния. Легкие могут иметь мраморный рисунок с наличием лобарной пневмонии. В бронхах и трахее - пенистый экссудат. Сосуды головного мозга сильно гиперемированы, мозговая ткань отечна.

Указанные изменения наблюдаются в отдельных или одновременно в нескольких органах.

1.5. Диагноз иерсиниоза у животных ставят на основании результатов бактериологического и молекулярно-генетического исследования (ПЦР) с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков болезни и патологоанатомической картины.

1.6. При убое и разделке туш животных-бактерионосителей может происходить контаминация иерсиниями мяса этих животных и получаемых от них субпродуктов в результате загрязнения частицами фекалий, помета птиц, содержимого кишечника, через режущие необеззараженные инструменты, тару и пр.

У лактирующих животных-бактерионосителей иерсинии могут содержаться в молоке и приготовленных из него сливках или попадать в молоко с контаминированной поверхности молочной железы во время доения коров, необеззараженных доильного оборудования и молочной посуды.

1.7. Возможность контаминации различных растений, корнеплодов, злаковых и бахчевых культур иерсиниями обусловлена способностью этих бактерий продолжительное время выживать и размножаться при температуре от +4 до +40°С в воде и влажной почве, богатой органическими веществами. В связи с этим растительные культуры и приготовленные из них салаты и корма могут быть источником заражения людей и животных патогенными штаммами иерсинии. Установлено, что в период вегетации растений, выросших на почвах, в которые попадают сточные воды с животноводческих ферм, иерсинии проникают внутрь растений. И хотя в таких случаях в смывах с овощей указанные бактерии не удается обнаружить, но при измельчении зеленой массы из выделяемого сока может быть выделена культура иерсиний.

2. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

2.1. Целью бактериологического исследования материала на иерсиниоз является выделение чистой культуры возбудителя болезни с изучением ее морфологических, тинкториальных, культуральных и ферментативных свойств и определение патогенности в пластинчатой РА с помощью диагностической агглютинирующей сыворотки к патогенным штаммам иерсиний (СПИ), входящей в состав "Тест-системы для идентификации патогенных штаммов Yersinia enterocolitica".

2.2. Взятие материала и пересылка его для лабораторного исследования

2.2.1. Для прижизненной диагностики иерсиниоза в лабораторию направляют материал от больных животных, не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами, отобранный в стерильные пробирки (флаконы) с резиновыми пробками:

а) фекалии в количестве 2-3 г, отобранные непосредственно из прямой кишки с помощью предварительно прокипяченного резинового катетера или в момент дефекации;

б) молоко в количестве 10-15 мл, взятое выборочно от 15-20 коров стада после санитарной обработки молочной железы и сдаивания первых порций молока - одна сборная проба. В зависимости от поголовья коров на ферме количество сборных проб молока может варьировать в пределах от 3 до 5. Молоко должно быть доставлено в лабораторию для исследования в день взятия пробы. При отсутствии такой возможности молоко консервируют кристаллической борной кислотой (0,1 г на 10 мл). Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 10 дней.

2.2.2. Для посмертной диагностики в лабораторию направляют материал от погибших или вынужденно убитых животных, желательно не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами.

Трупы мелких животных (поросят, пушных зверей, птиц и др.) направляют целиком (2-4 тушки).

От крупных животных посылают следующий материал: сердце, перевязанное лигатурой вблизи разреза сосудов и аорты; селезенку; долю печени с желчным пузырем; почку; пораженные участки тонкого или толстого отдела кишечника с содержимым, перевязанные с двух концов лигатурой, вместе с регионарными мезентериальными лимфатическими узлами (в отдельной посуде или полиэтиленовом пакете); голову; трубчатую кость; подчелюстные лимфатические узлы; у свиней и поросят еще и соскобы с задней стенки глотки, с поверхности корня языка и глоточных миндалин, взятые стерильным скальпелем.

2.2.3. Для диагностики иерсиниоза птиц из неблагополучных секций птичника направляют по 3-5 свежих трупов или 3-5 птиц с клиническими признаками диареи. Больную птицу убивают в лаборатории и подвергают патологоанатомическому и бактериологическому исследованию.

2.2.4. Пробы мясного сырья, молока и сливок для бактериологического исследования отбирают согласно правилам и в количествах, предусмотренных следующими ГОСТами:

- мясо - ГОСТ 7269-79. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести;

- мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи - ГОСТ Р 50396.0-92. Методы отбора проб и подготовка их к микробиологическим исследованиям;

2.2.5. Корнеплоды, хранящиеся в овощехранилищах или буртах, подвергают исследованию не ранее чем через 30 дней после их закладки. Пробы растительных кормов для исследования на наличие в них бактерий вида Yersinia enterocolitica отбирают согласно следующим ГОСТам:

- корма растительного происхождения - ГОСТ 27662-87*. Методы отбора проб (зеленый корм, сено, силос, сенаж);

* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 27262-87. - Примечание изготовителя базы данных.

- комбикорма, сырье - ГОСТ 13496.0-80. Методы отбора проб (кормовая мука, травяная мука, сушеный свекловичный жом, сухие кукурузные корма и т.д.);

- свекла столовая, кормовая свежая - ГОСТ Р 1811-2001*.

* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ Р 51811-2001. - Примечание изготовителя базы данных.

2.2.6. Пробы материала, отобранные для бактериологического исследования, упаковывают в полиэтиленовые пакеты или во влагонепроницаемую тару и в тот же день направляют в лабораторию. Если материал (органы, ткани и фекалии животных) доставить в лабораторию в течение 3-4 ч не представляется возможным, особенно в теплое время года, его консервируют стерильным 30%-ным водным раствором химически чистого глицерина, объем которого должен превышать объем материала в 2-3 раза.

СХЕМА бактериологического исследования патологического материала на иерсиниоз

2.3. Исследование материала

2.3.1. Присланный в лабораторию материал исследуют в день его поступления, соблюдая правила асептики.

2.3.2. Для выделения иерсиний из исследуемого материала используют жидкую селективную среду обогащения - И-бульон, разлитый в пробирки в количестве 4-5 мл, и одну из плотных дифференциально-диагностических или селективных сред, разлитую в чашки Петри и подсушенную в течение 40-60 мин в термостате: - И-агар; селективные среды для выделения иерсиний компании "HiMedia Laboratories Limited" или фирмы "OXOID" - СМ 653; агар Эндо; среду с желчью и индикатором бромтимоловым синим - СБТС; или среду для выделения иерсиний (г.Махачкала).

В тех случаях, когда пробы фекалий консервированы глицериновым раствором, последний сливают и 0,5 г фекалий разводят физиологическим раствором, последующее исследование проводят, как указано выше.

2.3.4. Из печени, селезенки, почки, лимфатических узлов вырезают ножницами кусочки размером не менее 1-1,5 мл, увлажняют спиртом, обжигают поверхность до сгорания спирта, после чего помещают в пробирки с 3-5 мл стерильного физиологического раствора, суспендируют и высевают взвесь по 0,2-0,3 мл в И-бульон в пробирке.

Внутренние органы можно исследовать и другим образом. Поверхность органа прижигают раскаленным шпателем. Стерильной пастеровской пипеткой в участке фламбированной поверхности отсасывают ткань в объеме 0,2-0,3 мл и высевают ее в И-бульон в пробирке.

2.3.5. Кровь из сердца, желчь, головной и костный мозг отсасывают по 0,2-0,3 мл пастеровскими пипетками и вносят в пробирки с И-бульоном, которые встряхивают для перемешивания материала.

2.3.6. Для исследования мяса и субпродуктов из средней пробы материала отвешивают навеску в 25 г, нарезают ножницами на мелкие кусочки, последние растирают в стерильной фарфоровой ступке с небольшим количеством стерильного физиологического раствора или дистиллированной воды, затем суспензии переливают в колбы, встряхивают и отстаивают в течение 10-15 мин для осаждения крупных частиц, надосадочную жидкость переносят в колбу, содержащую 100 мл И-бульона и тщательно перемешивают.

2.3.7. Пробы мясного фарша, сырого молока и полученных из него сливок в количестве по 25 г вносят в колбы, содержащие 100 мл И-бульона, которые встряхивают в течение 2-3 мин с целью размешивания материала.

2.3.8. Для исследования овощей (корнеплодов) из сборной пробы делают навески по 0,5 кг, обмывают поверхность корнеплодов ватно-марлевыми стерильными тампонами, смоченными стерильным физиологическим раствором или дистиллированной водой, которые затем погружают в колбу со стерильным физиологическим раствором или дистиллированной водой в объеме 80-100 мл.

Содержимое колбы тщательно встряхивают в течение 4-5 мин, отстаивают 10-15 мин для осаждения крупных частиц грунта и вносят по 25 мл в колбы со 100 мл И-бульона.

2.3.9. Пробы растительных кормов отбирают в количестве 25 г, измельчают предварительно прокипяченными ножницами или ножом на мелкие кусочки и вносят в колбы со 100 мл И-бульона, закрывают стерильными резиновыми пробками и тщательно встряхивают в течение 10-15 мин вручную или на шуттель-аппарате.

2.4. Выделение и изучение культур иерсиний

2.4.1. Пробирки (колбы) с засеянным исследуемым материалом в И-бульоне инкубируют при температуре 30-32°С в течение 24 ч.

2.4.2. Культуры, полученные в И-бульоне, пересевают бактериологической петлей частыми широкими штрихами в отдельные чашки Петри с И-агаром или одной из плотных питательных сред (см. п.2.3.2) по всей поверхности агара или на отдельные секторы чашек, которые помещают в термостат на 48 ч.

2.4.3. Через 24-48 ч учитывают характер роста колоний, выросших в чашках Петри на поверхности одной из плотных питательных сред, визуально и с помощью лупы.

Селективные и дифференциально-диагностические среды для выделения иерсиний подавляют рост многих видов посторонней микрофлоры, однако это обстоятельство не исключает необходимость идентификации культур бактерий, подозрительных на иерсинии, по биохимическим свойствам.

Характер роста Y. enterocolitica на различных средах

Характеристика колоний через 48 ч роста

Среда для выделения иерсиний (НПО "Питательные среды", г.Махачкала)

Колонии диаметром 0,5-1,5 мм, бледно-розовые с сиреневым оттенком, круглые, блестящие, выпуклые. Цвет среды не меняется, она остается светло-коричневой.

Среда с желчью и бромтимоловым синим - СБТС

Колонии диаметром 2-3 мм, темно-оливкового цвета, более светлые к периферии, сильно шероховатые, с выпуклым более темным центром, края изрезанные, фестончатые. Темно-зеленая с бирюзовым оттенком среда вокруг колоний обесцвечивается и приобретает оливковый цвет - более светлый, чем основной фон. Колонии других энтеробактерий выпуклые, сочные, округлой формы, более крупные, темно-зеленого, коричневого или черного цвета.

Колонии диаметром 1,0-1,5 мм, округлые. Периферическая часть колоний розовая, блестящая, прозрачная. Центр колоний выпуклый, шероховатый, окрашен в темно-розовый цвет. Цвет среды - бледно-розовый.

2.4.4. Типичные для иерсиний колонии отсевают на скошенный МПА (с каждой чашки 1-2 колонии), инкубируют при 22-25°С в течение 24 ч и затем проводят изучение морфологических, тинкториальных и биохимических свойств выделенных культур.

Читайте также: