Какие инфекции можно выявить с помощью пцр-диагностики

Обновлено: 05.05.2024

Диагностика инфекционных заболеваний является одной из самых сложных проблем в клинической медицине. Лабораторные методы исследования при ряде нозологических форм играют ведущую, а в целом ряде клинических ситуаций решающую роль не только в диагностике, но и в определении конечного исхода заболевания.

Диагностика инфекционных заболеваний почти всегда предусматривает использование комплекса лабораторных методов.

бактериологические;
серологические;
метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для обнаружения ДНК или РНК возбудителя инфекционного заболевания в исследуемом материале.

У одних пациентов для диагностики этиологии инфекционно-воспалительного процесса достаточно провести бактериологическое исследование, в других клинических ситуациях решающее значение имеют данные серологических исследований, в третьих, предоставить полезную информацию может только метод ПЦР. Однако наиболее часто в клинической практике врачу-клиницисту необходимо использовать данные различных методов лабораторных исследований.

Бактериологические методы исследования

Бактериологические исследования наиболее часто проводят при подозрении на гнойно-воспалительные заболевания (составляют 40-60% в структуре хирургических заболеваний) с целью их диагностики, изучения этиологической структуры, определения чувствительности возбудителей к антибактериальным препаратам. Результаты бактериологических анализов способствуют выбору наиболее эффективного препарата для антибактериальной терапии, своевременному проведению мероприятий для профилактики внутрибольничных инфекций.

Возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний являются истинно-патогенные бактерии, но наиболее часто условно-патогенные микроорганизмы, входящие в состав естественной микрофлоры человека или попадающие в организм извне. Истинно-патогенные бактерии в большинстве случаев способствуют развитию инфекционного заболевания у любого здорового человека. Условно-патогенные микроорганизмы вызывают заболевания преимущественно у людей с нарушенным иммунитетом.

Бактериологические исследования при заболеваниях, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, направлены на выделение всех микроорганизмов, находящихся в патологическом материале, что существенно отличает их от аналогичных исследований при заболеваниях, вызванных истинно патогенными микроорганизмами, когда проводится поиск определенного возбудителя.

Для получения адекватных результатов бактериологического исследования при гнойно-воспалительных заболеваниях особенно важно соблюдать ряд требований при взятии биоматериала для анализа, его транспортировки в лабораторию, проведения исследования и оценки его результатов.

микроскопическое исследование мазка (бактериоскопия) из доставленного биоматериала;
выращивание культуры микроорганизмов (культивирование);
идентификацию бактерий;
определение чувствительности к антимикробным препаратам и оценку результатов исследования.

Доставленный в бактериологическую лабораторию биоматериал первоначально подвергается микроскопическому исследованию.

Микроскопическое исследование мазка (бактериоскопия), окрашенного по Граму или другими красителями, проводят при исследовании мокроты, гноя, отделяемого из ран, слизистых оболочек (мазок из цервикального канала, зева, носа, глаза). Результаты микроскопии позволяют ориентировочно судить о характере микрофлоры, ее количественном содержании и соотношении различных видов микроорганизмов в биологическом материале, а также дают предварительную информации об обнаружении этиологически значимого инфекционного агента в данном биоматериале, что позволяет врачу сразу начать лечение (эмпирическое). Иногда микроскопия позволяет выявить микроорганизмы, плохо растущие на питательных средах. На основании данных микроскопии проводят выбор питательных сред для выращивания микробов, обнаруженных в мазке.

Культивирование микроорганизмов. Посев исследуемого биоматериала на питательные среды производят с целью выделения чистых культур микроорганизмов, установления их вида и определения чувствительности к антибактериальным препаратам. Для этих целей используют различные питательные среды, позволяющие выделить наибольшее количество видов микроорганизмов. Оптимальными являются питательные среды, содержащие кровь животного или человека, а также сахарный бульон, среды для анаэробов. Одновременно производят посев на дифференциально-диагностические и селективные (предназначенные для определенного вида микроорганизмов) среды. Посев осуществляют на стерильные чашки Петри, в которые предварительно заливают питательную среду для роста микроорганизмов.

Микроскопия мазков, окрашенных по Граму

1 - стрептококки; 2 - стафилококки; 3 - диплобактерии Фридленда; 4 - пневмококки

Колонии отсевают на плотные, жидкие, полужидкие питательные среды, оптимальные для культивирования определенного вида бактерий.

Выделенные чистые культуры микроорганизмов подвергают дальнейшему изучению в диагностических тестах, основанных на морфологических, ферментативных, биологических свойствах и антигенных особенностях, характеризующих бактерий соответствующего вида или варианта.

Определение чувствительности к антибактериальным препаратам. Чувствительность к антимикробным препаратам изучают у выделенных чистых культур микроорганизмов, имеющих этиологическое значение для данного заболевания. Поэтому в направлении на бактериологические анализы требуется указать диагноз заболевания у больного. Определение чувствительности бактерий к спектру антибиотиков помогает лечащему врачу правильно выбрать препарат для лечения больного.

Оценка результатов исследования. Принадлежность условно-патогенных микроорганизмов к естественной микрофлоре организма человека создает ряд трудностей при оценке их этиологической роли в развитии гнойно-воспалительных заболеваний. Условно-патогенные микроорганизмы могут представлять нормальную микрофлору исследуемых жидкостей и тканей или контаминировать их из окружающей среды. Поэтому для правильной оценки результатов бактериологических исследований необходимо знать состав естественной микрофлоры изучаемого образца. В тех случаях, когда исследуемый биоматериал в норме стерилен, как, например, спинномозговая жидкость, экссудаты, все выделенные из него микроорганизмы могут считаться возбудителями заболевания. В тех случаях, когда исследуемый материал имеет собственную микрофлору, как, например, отделяемое влагалища, кал, мокрота, нужно учитывать изменения ее качественного и количественного состава, появление несвойственных ему видов бактерий, количественную обсемененность биоматериала. Так, например, при бактериологическом исследовании мочи степень бактериурии (число бактерий в 1 мл мочи), равная и выше 10 5 , свидетельствует об инфекции мочевых путей. Более низкая степень бактериурии встречается у здоровых людей и является следствием загрязнения мочи естественной микрофлорой мочевых путей.

Установить этиологическую роль условно-патогенной микрофлоры помогают также нарастание количества и повторность выделения бактерий одного вида от больного в процессе заболевания.

Врач-клиницист должен знать, что положительный результат бактериологического исследования в отношении биологического материала, полученного из в норме стерильного очага (кровь, плевральная жидкость, спинномозговая жидкость, пунктат органа или ткани), всегда тревожный результат, требующий немедленных действий по оказанию медицинской помощи.

Серологические методы исследования

В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела. Серологические реакции используются в двух направлениях.

2. Установление родовой и видовой принадлежности микроба или вируса. В этом случае неизвестным компонентом реакции является антиген. Такое исследование требует постановки реакции с заведомо известными иммунными сыворотками.

Серологические исследования не обладают 100%-й чувствительностью и специфичностью в отношении диагностики инфекционных заболеваний, могут давать перекрестные реакции с антителами, направленными к антигенам других возбудителей. В связи с этим оценивать результаты серологических исследований необходимо с большой осторожностью и учетом клинической картины заболевания. Именно этим обусловлено использование для диагностики одной инфекции множества тестов, а также применение метода Western-blot для подтверждения результатов скрининговых методов.

В последние годы прогресс в области серологических исследований связан с разработкой тест-систем для определения авидности специфических антител к возбудителям различных инфекционных заболеваний.

Авидность - характеристика прочности связи специфических антител с соответствующими антигенами. В ходе иммунного ответа организма на проникновение инфекционного агента стимулированный клон лимфоцитов начинает вырабатывать сначала специфические IgM-антитела, а несколько позже и специфические IgG-антитела. IgG-антитела обладают поначалу низкой авидностью, то есть достаточно слабо связывают антиген.

Затем развитие иммунного процесса постепенно (это могут быть недели или месяцы) идет в сторону синтеза лимфоцитами высокоспецифичных (высокоавидных) IgG-антител, более прочно связывающихся с соответствующими антигенами. На основании этих закономерностей иммунного ответа организма в настоящее время разработаны тест-системы для определения авидности специфических IgG-антител при различных инфекционных заболеваниях.

Высокая авидность специфических IgG-антител позволяет исключить недавнее первичное инфицирование и тем самым с помощью серологических методов установить период инфицирования пациента. В клинической практике наиболее широкое распространение нашло определение авидности антител класса IgG при токсоплазмозе и цитомегаловирусной инфекции, что дает дополнительную информацию, полезную в диагностическом и прогностическом плане при подозрении на эти инфекции, в особенности при беременности или планировании беременности.

Метод полимеразной цепной реакции

Полимеразная цепная реакция (ПЦР), являющаяся одним из методов ДНК-диагностики, позволяет увеличить число копий детектируемого участка генома (ДНК) бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Тестируемый специфический для данного генома отрезок нуклеиновой кислоты многократно умножается (амплифицируется), что позволяет его идентифицировать.

Сначала молекула ДНК бактерий или вирусов нагреванием разделяется на 2 цепи, затем в присутствии синтезированных ДНК-праймеров (последовательность нуклеотидов специфична для определяемого генома) происходит связывание их с комплементарными участками ДНК, синтезируется вторая цепь нуклеиновой кислоты вслед за каждым праймером в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы. Получается две молекулы ДНК. Процесс многократно повторяется. Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК, то есть одной бактерии или вирусной частицы.

Введение в реакцию дополнительного этапа - синтеза ДНК на молекуле РНК при помощи фермента обратной транскриптазы - позволило тестировать РНК-вирусы, например, вирус гепатита С. ПЦР - это трехступенчатый процесс, повторяющийся циклично: денатурация, отжиг праймеров, синтез ДНК (полимеризация). Синтезированное количество ДНК идентифицируют методом иммуноферментного анализа или электрофореза.

В ПЦР может быть использован различный биологический материал - сыворотка или плазма крови, соскоб из уретры, биоптат, плевральная или спинномозговая жидкость и т.д. В первую очередь ЦПР применяют для диагностики инфекционных болезней, таких как вирусные гепатиты В, С, D, цитомегаловирусная инфекция, инфекционные заболевания, передающиеся половым путем (гонорея, хламидийная, микоплазменная, уреаплазменная инфекции), туберкулез, ВИЧ-инфекция и т.д.

Скрытые инфекции — это заболевания, передающиеся половым путём, протекающие бессимптомно на протяжении длительного времени. Они медленно разрушают организм, в итоге став причиной серьёзных проблем со здоровьем. Анализы на скрытые инфекции — единственный метод выявления таких состояний.

Прием гинеколога, уролога — 1000 руб. Консультация по результатам УЗИ, анализов (по желанию) — 500 руб.

Причины появления скрытых инфекций у мужчин и женщин

Основной способ заражения ИППП — незащищённый половой контакт, хотя некоторые заболевания (например, вирус папилломы человека) могут передаться и при использовании презерватива.

Важно понимать, что заражение происходит не через семенную жидкость, а посредством контакта со слизистыми. Это значит, что даже если половой акт был прерван, и семяизвержение произошло не во влагалище женщины, обмен микрофлорой все-равно состоялся. Состав флоры у каждого человека индивидуален и далеко не всегда безобиден.

Заражённый партнёр может и не знать о наличии у себя ЗППП. Мало того, что болезнь долго не дает симптомов, ее тяжело выявить и с помощью обычных анализов типа мазка на флору или бактериальный посев. Также человек может быть просто носителем: его иммунитет не дает размножаться патогенному микроорганизму, но и не убивает его. При попадании на слизистые партнера с ослабленным местным иммунитетом, бактерия или вирус моментально образуют колонии.

Какие инфекции относятся к скрытым

Под скрытой инфекцией понимается возбудитель, поселившийся на слизистой поверхности органа (уретре, шейке матки, кишечнике) и паразитирующий за его счёт. Он не может самостоятельно продуцировать белки, необходимые для поддержания жизнедеятельности, поэтому некоторое время ведёт себя тихо и не проявляет симптомов. В 60% случаев носитель инфекции узнаёт о том, что болен, только когда происходит резкое ухудшение самочувствия, и симптомы проявляются бурно и активно.

К скрытым инфекциям относятся:

- Токсоплазмоз: половой путь и инфекция передаётся от матери ребёнку. : в острой форме мешает зачатию, способствует проникновению других инфекций.
- ВПЧ : является причиной рака шейки матки в 99,9% случаев. : часто развивается во время беременности по причине ослабления иммунитета, вызывает патологические изменения в строении плода. (бактериальный вагиноз): убивает молочнокислые полезные бактерии на поверхности влагалища и создают питательную среду для развития патогенной микрофлоры.
- Пиелонефрит: воспаление почек.
- Бактериурия: наличие бактерий в моче, которых быть не должно, указывает на заболевания мочеполовой системы. (неспособные оказать влияние на взрослого, но угрожающие жизни и здоровью плода).
В настоящее время существует 31 возбудитель скрытой инфекции. Каждый из них по-своему опасен.

Как развиваются скрытые инфекции

Проявления у женщин

Проявления у мужчин

Поражается поверхность влагалища и шейки матки, образуется эрозия

Поражается мочеиспускательный канал, головка пениса

Инфекция переходит на придатки и матку

Инфекция переходит на предстательную железу и почки

Инфекция охватывает весь организм, пациент жалуется на воспалительные процессы в слизистых оболочках — стоматиты, конъюнктивиты, язву желудка

Скрытые инфекции опасны тем, что приводят к хроническому воспалению. Например, у женщин эндометрий уже не может удерживать плодное яйцо, что приводит к выкидышу или воспалённые яичники не продуцируют яйцеклеток. А у мужчин в сперме содержится большое число неподвижных или ослабленных сперматозоидов. Именно скрытые инфекции являются причиной бесплодия у многих пар.

Группа риска

Человек может всю жизнь быть носителем инфекции, но не знать об этом. Лавинообразное распространение возбудителей провоцируют процессы, происходящие в организме. К ним относятся:
- изменения гормонального фона;
- ослабление иммунитета;
- беременность.
Часто ИППП проявляют себя параллельно с другой болезнью (гриппом, ангиной, воспалением лёгких). Особую опасность они представляют для беременных женщин. Их иммунитет ослаблен присутствием в организме новой жизни, поэтому возбудитель действует в организме беспрепятственно. Наибольшую опасность представляют TORCH-инфекции, получившие аббревиатуру от первых букв латинского написания болезней.

К ним относятся:
1. T — toxoplasmosis (токсоплазмоз). Особенно опасно проникновение инфекции в первом триместре беременности. Женщине в таком случае предлагают сделать аборт . На последнем триместре заражение не так опасно.
2. O — other, это общие заболевания, передающиеся бытовым и контактным путём (гепатит, микоплазмоз, хламидиоз, уреплазмоз, ветрянка, гонорея). . Если мама малыша переболела краснухой в детстве, у неё уже выработаны антитела. В противном случае есть большая угроза рождения ребёнка с полной глухотой, слепотой и параличом.
3. C — citomegalia (цитомегаловирус). Инфекция убивает плод, а также повреждает его головной и спинной мозг. Малыш рождается с глубокой инвалидностью.
4. H — herpes (генитальный герпес ). Малыш рождается слепым, глухим, с ДЦП, эпилепсией, если не произойдёт выкидыш на ранних сроках.
Все вышеперечисленные заболевания убивают плод либо приводят к врождённым патологиям и уродствам. Проникновение в организм на 2-12 неделе приводит к замиранию развития плода , 12-26 неделе — к аномальному развитию органов малыша, от 26 недели — к поражению ЦНС плода.

Что показывают анализы на скрытые TORCH-инфекции

При обнаружении TORCH-инфекции у женщины, ожидающей малыша, ей предлагают сделать аборт, потому что высока вероятность выкидыша или рождения ребёнка с серьёзными пороками развития. Вот почему анализы на TORCH-инфекции сдают на стадии планирования беременности за 2-3 месяца до наступления зачатия. В случае положительного результата будущая мама позаботится о своём здоровье и устранит проблемы, у неё хватит времени вылечиться и забеременеть будучи здоровой. TORCH-анализы — обязательная процедура при постановке в женской консультации на учёт.

TORCH-диагностика — это определение иммуноглобулинов (антител), способных противостоять ряду инфекций.
- IgM-антитела вырабатываются при проникновении инородных микроорганизмов первыми, и достигают пика концентрации в конце 3-го месяца инфицирования. Говорят об острой форме заболевания. После 4-го месяца они не определяются. Чтобы определить, как долго женщина заражена, у неё определяют IgG-антитела.
- IgG-антитела вырабатываются на повторное проникновение инфекции или на обострение хронической фазы. Эти иммуноглобулины защищают плод от болезней. Их наличие говорит о длительном нахождении инфекции в организме.
Женщина сдаёт 8 тестов на определение количества и качества антител IgM и IgG. При этом Ig — это международное обозначение чужеродного тела (инфекции).

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это современный инструмент диагностики разнообразных инфекций, отличающийся высокой точностью. Анализ ПЦР позволяет определять возбудителей инфекционных заболеваний, опираясь на их генетический материал (РНК или ДНК). Биологическим материалом для исследования может служить кровь, мазок из половых органов, слюна и прочее.

Метод ПЦР был открыт в 1983. Его создатель Кэри Мюллис (США), за это открытие получил Нобелевскую премию в области химии. Уже за первые десять лет методика стала обязательным лабораторным исследованием во всем мире, получив признание ученых и врачей.

Медицинский центр Диана предлагает провести исследование по методике полимеразной цепной реакции в кратчайшие сроки и с высочайшим уровнем точности. Наша диагностическая база соответствует всем международным стандартам и требованиям.

Какие инфекции можно диагностировать методом ПЦР

На диагностику отправляют гинеколог, уролог или дерматолог. Анализ ПЦР дает возможность диагностировать большое число разнообразных инфекций. В эту группу попадают и скрытые, бессимптомные заболевания, находящиеся в инкубационном периоде:

С помощью метода ПЦР можно обнаружить:
- гепатит C, B;
- уреаплазмоз половых органов;
- ИППП – уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез,;
- хламидиоз половых органов и дыхательных путей;
- микоплазмоз половых органов и дыхательных путей;
- бактериальный вагиноз;
- кандидоз половых органов;
- инфекционный мононуклеоз;
- туберкулез;
- сальмонеллез;
- туберкулез (легочные и внелегочные формы);
- листериоз, клещевые энцефалиты, болезнь Лайма;
- цитомегаловирусную, папилломавирусную, герпесную инфекцию;
- детские заразные болезни, выявляемые при беременности и до зачатия — краснуху, паротит, дифтерию, корь;
- ВИЧ.
При каждом из вышеперечисленных заболеваний, обнаруженным другим методом, желательно делать и ПЦР — исследование. Возбудители многих инфекций имеют несколько типов (штаммов), а более точная диагностика делает лечение эффективнее. Поскольку разные типы возбудителей обладают своими способами передачи инфекции, точное определение возбудителя помогает уберечь от заражения окружающих. Например, гепатитом А можно заразиться через общие предметы и посуду (болезнь грязных рук), а гепатитом С — только через кровь, медицинские инструменты и половые контакты. Это важно для тех, кто находится рядом с больным.

Суть метода полимеразной цепной реакции

Метод основан на выявлении возбудителя по участкам ДНК или РНК. ПЦР напоминает криминалистику, когда преступника находят по частичкам кожи или волосам, оставленным на месте преступления. Поскольку каждый живой организм имеет уникальную структуру ДНК или РНК. Метод позволяет безошибочно идентифицировать микроорганизм, даже если он присутствует в исследуемом материале в минимальных количествах.

ПРЦ подходит для выявления скрытого носительства, нетипичных, стертых и прочих форм заразных заболеваний. Диагностика отличается высокой точностью, поэтому практически не дает ошибок и ложных результатов. Анализ часто назначается, как дополнительное обследование, чтобы выявить конкретный тип вируса или микроба.

Достоинства и недостатки метода ПЦР

Анализ ПЦР – результативный диагностический инструмент, позволяющий врачу не только правильно определить тип инфекционного возбудителя в организме больного, но также и количество микробов. Эта особенность позволяет методу ПЦР эффективно обнаруживать и хронические инфекции, к примеру, вирусный гепатит.

Преимущества методики заключаются в следующих особенностях:

Недостатки ПЦР-диагностики – это необходимость в высокотехнологичном оборудовании и высококвалифицированных специалистах. Для анализа нужен специальный бокс-ламинар, где поддерживается необходимая температура и обеспечивается чистота эксперимента.

Как сдать анализ ПЦР правильно: подготовка

Чтобы понять, как именно следует подготовиться к предстоящему анализу ПЦР, пациент должен обязательно уточнить у своего врача, какой именно биологический материал планируется взять. От этого непосредственно зависит подготовка.
- Выделения из половых органов, мазок из шейки матки или мочеиспускательного канала, моча – посредством исследования данных вариантов материала методом ПЦР эффективно диагностируются инфекции половых органов.
- Вирусный гепатит C, ВИЧ инфекция требуют взятие крови на анализ ПЦР.
- С помощью мазка из зева можно подтвердить или опровергнуть факт наличия инфекционного мононуклеоза.
Мазок у женщин

Для диагностики половых инфекций методом ПЦР у женщин, как правило, берут мазок из влагалища . При беременности действуют стандартные правила подготовки к анализу ПЦР.
- За пару дней до проведения ПЦР нужно отказаться от спринцеваний, средств интимной гигиены.
- За неделю до анализа на инфекции стоит перестать применять любые виды лекарственных препаратов, разумеется, если они не входят в программу подготовки к анализу ПЦР, прописанную врачом.
- За пару дней до обследования нужно начать воздерживаться от полового акта.
- Подмывание в день анализа ПЦР не нужно, гигиена половых органов проводится накануне вечером, используется только теплая вода.
- За пару часов до сдачи анализа мочиться нельзя.
Мазок у мужчин

Подготовиться к забору мазка из мочеиспускательного канала для проведения ПЦР несложно. Достаточно соблюдать изложенные ниже правила.
- За 2 суток до ПЦР обследования нужно начать воздерживаться от сексуальных отношений.
- Прием лекарств прекращается приблизительно за 7 дней до проведения анализа, если, конечно же, они не были специально назначены врачом.
- Гигиена половых органов должна проводиться накануне вечером, в день анализа ПЦР это делать не стоит.
- Рекомендуется не мочиться примерно 2-3 часа перед сдачей анализа.
Анализ крови

Если в процессе ПЦР анализа объектом изучения станет кровь пациента, правила подготовки к нему следующие.
- Оптимальное время для сдачи крови – утро, анализ нужно обязательно сдавать натощак (минимум 8 часов отсутствия пищи). Воду можно пить свободно.
- Отказ от алкоголя за сутки до ПЦР анализа, отказ от курения за час до него.
- Если здоровье допускает такой вариант, от приема лекарственных средств рекомендуется на время отказаться.
- Перед сдачей проб крови в обязательном порядке следует отдохнуть около 20 минут.
- Накануне ПЦР исследования совершенно исключены эмоциональные и физические перегрузки, они могут сказаться на результатах анализа.
Как проводится тест ПЦР?

Для исследования берется любая среда, в которой может находиться возбудитель, но чаще всего используются:
- Кровь сыворотка или плазма – для выявления множества возбудителей – вирусов гепатита B, C, D, G, герпеса, ВИЧ, цитомегаловируса;
- Моча и сок простаты – при диагностике ЗППП;
- Мокрота, плевральная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж – для диагностики легочных и внелёгочных форм туберкулеза;
- Спинномозговая жидкость – для диагностики инфекций нервной системы;
- Околоплодная жидкость – для определения внутриутробных заражений;
- Мазок из зева – для выявления возбудителей инфекционного мононуклеоза и дифтерии;
  соскобы и мазки со слизистых для диагностики ЗППП;
  клетки слизистой желудка и желудочный сок — для выявления бактерии хеликобактер, вызывающей гастрит и язву.
ПЦР—реакция делает огромное число копий выявленного участка генной информации (репликацию). Важно, что реплицируются только участки ДНК и РНК, необходимые для проведения анализа. Поэтому так важны чистота эксперимента и умение персонала обращаться с аппаратурой и образцами.

Цепная реакция протекает очень быстро, уже через два часа участок ДНК увеличивается в миллионы раз, что позволяет обнаружить и точно идентифицировать инфекцию. Для работы с эталонами пробирки помещают в специальный прибор. При помощи программы задается алгоритм, несколько раз меняющий температуру среды и влияющий на протекание реакции. Результат ПЦР виден сразу после окончания исследования.

Как расшифровать ПЦР анализ

Проведение ПЦР исследования позволяет не просто установить тип инфекции, присутствующий в организме больного, но и оценить его с количественной точки зрения (количество микробов). Расшифровка результатов количественного анализа ПЦР играет важную роль в обнаружении и проверке эффективности лечения большого числа хронических заболеваний, скажем гепатита C.

Результатом анализа ПЦР могут стать положительный и отрицательный ответы.
- Отрицательный результат. Следы инфекции не были выявлены в биологическом материале, который являлся объектом исследования в процессе анализа ПЦР. Как правило, на основании отрицательного результата можно полагать, что в организме действительно отсутствует инфекция.
- Положительный результат. Такой результат анализа ПЦР свидетельствует о том, что следы инфекционного заболевания присутствуют в биологическом материале пациента. Положительный результат анализа ПЦР характеризуется большой степенью точности.
Иногда инфицирование выявляется на фоне полного здоровья и отсутствия признаков заболевания. Некоторые больные считают, что анализ сделан неправильно, но реальная ситуация другая. Если ПЦР показала, что возбудитель в организме есть, значит, он там действительно находится. Просто инфекционные болезни никогда не начинаются сразу после заражения, имея инкубационный период различной продолжительности.

Скрытый период может продолжаться очень долго, например, при СПИДе – несколько лет, пока какие-то механизмы не подтолкнут вирусы к размножению. Возбудитель определяется в организме носителей и тех, кто не долечился. Очень часто переходят в скрытую (латентную) форму различные ЗППП. В этом случае может понадобиться дополнительная лабораторная диагностика.

Точность расшифровки результатов ПЦР анализа

Метод ПЦР, позволяющий выявлять достаточно большое число инфекций, характеризуется повышенной точностью, чувствительностью и специфичностью. Эти характеристики говорят о том, что с помощью исследования ПЦР можно:
- Максимально точно установить отсутствие или присутствие инфекционного возбудителя.
- Максимально точно определить конкретную разновидность инфекционного возбудителя (специфичность).
- Выявить инфекцию даже в том случае, когда она имеет скрытый характер. Речь идет о низком уровне присутствия в подвергаемом исследованию биологическом материале пациента ДНК микробов (чувствительность).
Преимущества метода ПЦР над иммуноферментным анализом и прочими иммунологическими инструментами выявления инфекции заключается в том, что он реже дает ошибочные результаты. То есть расшифровка анализа ПЦР значительно реже показывает отсутствие инфекционных микробов, если они есть в организме больного.

Кроме того, почти не бывает, чтобы расшифровка анализа выявляла наличие в организме несуществующей инфекции, то есть давала ложноположительные результаты.Разумеется, стопроцентно правильными результаты ПЦР назвать все же нельзя, поэтому необходимо обязательно дополнять это исследование другими методиками.

Хламидии в человеческом организме — причина хронических и острых инфекций. У 70-80% пациентов, инфицированных хламидиями, выраженные симптомы отсутствуют. Обнаружить источник проблем со здоровьем можно только, сдав анализ на хламидии.

СТОИМОСТЬ ПРИЕМА ГИНЕКОЛОГА, УРОЛОГА (МУЖЧИНЫ, ЖЕНЩИНЫ) — 1000 руб. КОНСУЛЬТАЦИЯ ПО РЕЗУЛЬТАТАМ УЗИ или АНАЛИЗОВ — 500 руб.

Хламидиоз – опасная и очень распространенная инфекция. Согласно статистике, приблизительно 5-10% ведущих активную половую жизнь людей до 35 лет являются ее носителями. Болезнь вызывается хламидиями – внутриклеточными паразитами, в которых объединены признаки патогенных вирусов и бактерий. Исследование в лабораторных условиях – основное средство обнаружения хламидий в организме пациента.

Когда нужно сдать анализ на хламидии

На анализ на хламидии направляет гинеколог или уролог, но пройти его можно и по своей инициативе, без направления.
- Обследование на хламидии обязательно проходить всем супружеским парам, планирующим беременность. Хламидиоз негативно влияет на течение беременности и плод, вызывая выкидыши, задержку развития и внутриутробное заражение плода.
- Проверка на хламидии показана представителям обоих полов в связи с бесплодием, воспалением гениталий, болезнями суставов и дыхательных путей, конъюнктивитом, особенно если при этом присутствуют проблемы с мочеполовой сферой. Часто именно этот возбудитель становится причиной тяжелых заболеваний, но узкопрофильные врачи даже не предполагают такой вариант. В результате назначенное лечение не приносит результатов.
- Исследование на хламидии стоит пройти женщинам, у которых были преждевременные роды, внематочные беременности и самопроизвольная гибель плода.
Какие анализы нужно сдать: плюсы и минусы диагностики

Существуют три варианта анализов на хламидии: бактериальный посев, ИФА и ПЦР. Все они обладают плюсами, минусами и в разной степени точны, поэтому в идеале стоит проходить комплексную проверку.

В обязательном порядке проводится анализ крови на хламидии. Этот анализ считается более достоверным, чем бактериологическое изучение соскобов и мазков. Также проводится ПЦР анализ и ИФА.

ИФА на хламидии — достоверность 60%

ИФА — эффективный иммуноферментный анализ, при котором на предмет антител к хламидиям проверяют кровь пациента. Расшифровка анализа позволяет установить, был ли пациент заражен хламидиями, активна ли инфекция в его организме.

ИФА находит в крови антитела IgM, IgG, IgA к хламидиям. Организм вырабатывает эти иммуноглобулины в ответ на инфицирование. Основное достоинство анализа ИФА — возможность не только определить возбудителя болезни, но и установить стадию развития инфекции – хроническую или острую.

Первые антитела возникают в крови человека уже приблизительно на 10-20 день заболевания. Затем развиваются и другие иммуноглобулины, сообщающие о повторном заражении или хроническом хламидиозе. Основной минус ИФА – вероятность ошибки, так как точность этого анализа на хламидии составляет около 60%.

ПЦР-диагностика — 99%

Этот анализ наиболее эффективный и точный метод обнаружения хламидий. При ПЦР анализе изучается ДНК, приумноженная в несколько раз. Повышенная степень чувствительности реакции дает возможность определить как острый, так и латентный хламидиоз, развивающийся в хронической скрытой форме.

У метода ПЦР как средства выявления хламидий есть масса преимуществ. Анализ позволяет обнаружить бессимптомную инфекцию, характеризуется высокой точностью (99%). Однако ложноположительные результаты все-таки встречаются Поэтому при подозрении на хламидии следует комбинировать этот способ обследования с другими.

Культуральный метод (бактериальный посев) — достоверность 100 или 50%

Посредством этого анализа устанавливают чувствительность инфекции к антибиотикам. Для обнаружения хламидий в лабораторных условиях в специфической среде выращивается биологический материал, взятый у пациента. Исследуются особенности, присущие конкретному возбудителю.

Основные недостатки культурального способа – длительность ожидания результатов и высокая стоимость. В то же время эта методика гарантирует стопроцентную точность положительного результата. К сожалению, это не относится к хроническому хламидиозу. Он устанавливается с помощью культурального посева только в 50% случаях.

Комплекс анализов на хламидии позволит сформировать полную картину заболевания, подобрать индивидуальную программу лечения для конкретного пациента.

Подготовка к анализу на хламидии

Обнаружение хламидий в организме пациента несложная задача при достаточной оснащенности медицинского центра. От больного требуется всего лишь грамотно подготовиться к сдаче материала.

Мазок

Для проведения анализа ПЦР на хламидии у пациентов обоих полов в основном берется мазок. Ниже рассмотрены правила подготовки для мужчин и женщин. Особая подготовка к анализу на хламидии при беременности не требуется.

Подготовка к взятию мазка у мужчин:
- Приблизительно за пару дней до взятия мазка на хламидии мужчина должен начать воздерживаться от половых контактов.
- Вечером перед анализом ПЦР на хламидии нужно провести гигиену половых органов. Мыться в день обследования не нужно.
- Примерно за 2-3 часа перед проведением анализа не рекомендуется мочиться.
- Прием любых лекарственных медикаментов должен быть прекращен приблизительно за 7 дней до обследования. Если это не представляется возможным, нужно обсудить ситуацию с лечащим врачом.
Подготовка к взятию мазка у женщин:
- За пару дней до проведения ПЦР на хламидии отказаться от занятий сексом.
- Прекратить применять любые средства интимной гигиены, проводить спринцевания за 2-3 суток до сдачи мазка.
- Примерно за неделю до анализа стоит отказаться от лекарств в виде таблеток, вагинальных свечей или спреев, если их прием перед исследованием на хламидии не прописан врачом.
- Гигиена половых органов осуществляется вечером, используется только теплая вода. В день обследования она не нужна.
- За 2-3 часа до анализа ПЦР желательно не мочиться.
Правила подготовки к анализу крови ИФА на хламидии

Принципы подготовки к анализу крови ИФА на хламидии, одинаковы для мужчин и женщин.
- Кровь на хламидии рекомендуется сдавать натощак, воздерживаясь от употребления пищи в течение 6-8 часов. Вода может употребляться пациентом в любом количестве, однако сладкие напитки под запретом.
- От жирной пищи нужно отказаться примерно за сутки до анализа, чтобы результаты не искажались.
- Допустимость приема лекарственных препаратов за неделю до проведения ИФА анализа стоит обговорить с лечащим врачом. Если такая возможность есть, лучше воздержаться от этого.
- За день или два до сдачи крови на хламидии нужно отказаться от употребления алкогольных напитков, приблизительно за час до анализа нельзя курить.
Соблюдая эти простые правила, пациент может рассчитывать на получение корректных результатов анализов, их правильную расшифровку.

Расшифровка анализа на хламидии

Расшифровку анализов на хламидиоз проводят гинеколог и уролог. Эти же врачи занимаются лечением инфекции.

Прием гинеколога

Прием уролога

Расшифровка анализа ПЦР. При проведении анализа ПЦР на хламидии возможно два результата: отрицательный и положительный.
- Отрицательный результат ПЦР говорит о том, что следы хламидий не были обнаружены в биологическом материале. Следовательно, инфекция в организме отсутствует.
- Положительный результат анализа ПЦР говорит о том, что хламидии присутствуют в биологическом материале больного.
Метод ПЦР как средство выявления хламидий характеризуется более высокой точностью и надежностью, чем анализ крови ИФА. Поэтому расшифровке его результатов можно доверять, он сдается в обязательном порядке при подозрении на наличие хламидий в организме.

Результаты анализа крови ИФА

Основное преимущество анализа крови ИФА – возможность не только определять или опровергать присутствие хламидий в человеческом организме, но и контролировать динамику развития инфекции. Расшифровка анализа ИФА может дать один из приведенных ниже результатов.

Отсутствие антител IgM, IgG. Если в результате анализа ИФА на хламидии не были диагностированы антитела к ним, можно прийти к выводу, эта инфекция не знакома организму пациента.

Отсутствие антител IgM, наличие антител IgG. Если в крови пациента в результате проведения ИФА выявляются лишь иммуноглобулины IgG к хламидиям, это говорит о том, что заболевание было перенесено им в прошлом, а сейчас оно неактивно.

Наличие антител IgM и IgG. Если расшифровка ИФА говорит о том, что в крови больного присутствуют иммуноглобулины обеих групп, можно сделать два предположения. Первый вариант – хламидии были занесены в организм пациента несколько месяцев назад. Второй вариант – инфекция активизировалась в организме человека повторно.

Точность анализа ИФА на хламидии составляет приблизительно 60%. Следовательно, его следует применять лишь в комплексе с другими исследованиями, но не как самостоятельное средство обнаружения хламидиоза.

ПЦР – высокоточный метод диагностики и одно из самых главных открытий в области биологии за последние десятилетия. ПЦР-анализ применяется уже почти 40 лет и считается наиболее точным и чувствительным способом диагностики инфекционных заболеваний.

ПЦР – уникальный и универсальный метод, тест используется не только в клинической лабораторной диагностике, но также в биологии, криминалистике, археологии и многих других научных областях. Все, что нужно для проведения анализа – небольшое количество любого биоматериала пациента.

Суть метода ПЦР

ПЦР – полимеразная цепная реакция. Метод основан на обнаружении даже небольших концентраций искомого элемента диагностики. Для определения изначально крайне малых концентраций РНК или ДНК, которые необходимо определить в процессе проведения основного этапа исследования, используется метод искусственного увеличения количества РНК или ДНК. А поскольку они специфичны и строго индивидуальны для каждого микроорганизма или живого существа за счет уникальности последовательности нуклеотидов во фрагментах, ошибка в определении целевого ДНК или РНК исключена.

Генетическая информация любого живого организма записывается в ДНК. Эта молекула состоит из двух цепочек, сплетающихся в единую спираль. Некоторые вирусы (например, COVID-19) хранят свой код в РНК – одной нити нуклеотидов.

Преимущества метода ПЦР
1. Высокая специфичность. Метод ПЦР определяет заданную последовательность нуклеотидов, присущую конкретному патогену. Таким образом, специфичность теста стремится к 100%. Исключен риск ложноположительных результатов.
2. Чувствительность. Для ПЦР достаточно всего несколько молекул ДНК патогена (или даже уже неактивных – разрушенных вирусных частиц, сохранивших специфические участки ДНК в достаточном количестве), чтобы он был обнаружен в ходе исследования.
3. Скорость проведения. Лаборатория получает результат ПЦР-теста через несколько часов, клиент – уже на следующий день. Скорость диагностики имеет принципиально важное значение для своевременного лечения. Например, при диагностике бактериальных инфекций классический посев занимает от нескольких дней, а с ПЦР-анализом пациент сможет принять меры и начать лечение уже через сутки.
4. Универсальность. Для исследования подходит любой биоматериал: кровь, моча, сперма, мокрота, гной, жидкости из абсцессов и пр. Кроме этого, ПЦР применяется в самых разных областях науки и медицины, работая даже там, где другие методы бессильны.
5. Диагностика латентных инфекций. ПЦР-диагностика определяет возбудителя инфекции даже в инкубационном периоде и при скрытом течении заболевания.
Какие есть недостатки

Единственный серьезный недостаток, связанный с методом полимеразной цепной реакции, - его высокая технологичность. Исследования ПЦР требуют строжайших соблюдений правил и серьезной оснащенности лабораторного комплекса. Не каждая лаборатория может позволить себе все необходимое оборудование.

Показания к проведению ПЦР-анализа

Подготовка к проведению ПЦР-теста
- Анализ сдается утром натощак. При этом ряд генетических исследований проводится в произвольное время, удобное пациенту.
- При сдаче анализа по мазку из ротоглотки необходимо выдержать интервал с приемом пищи и воды в 3-4 часа перед тестом.
- Перед анализом на венерические инфекции необходимо воздержаться от половой активности в течение суток.
- Перед анализом нельзя использовать никакие противовирусные препараты.
Как проводится ПЦР-анализ

Результаты ПЦР-теста

Результаты анализов, проведенных методом ПЦР, известны уже через один день. Иногда возможно проведение экстренного теста – его часто используют при оказании срочной медицинской помощи при госпитализации. Тогда срок готовности результата сокращается до считанных часов.

Результаты ПЦР-теста дадут точную информацию о том, какая инфекция была обнаружена. При количественном тестировании анализ определит также вирусную или бактериальную нагрузку на организм. В этом случае в результатах будет значиться титр обнаруженного патогена (его количество в одном миллилитре пробы). Количественный анализ особенно важен при диагностике заболеваний, спровоцированных условно-патогенными микроорганизмами, которые присутствуют в норме практически у каждого человека. Такие микроорганизмы представляют угрозу только при большой численности, а в остальных случаях мирно сосуществуют с носителем.

Читайте также: