Мазок из глаз на инфекции у кошек

Обновлено: 14.05.2024

Метод определения Исследование проводят методом посева на плотные питательные среды. Идентификацию микроорганизмов проводят методом масс-спектрометрии с помощью прибора Microflex Brucker Daltonik MALDI Biotyper, BRUKER, Германия. Определение чувствительности к антимикробным препаратам проводят диско-диффузионным методом с использованием анализатора ADAGIO, BIO-RAD, Франция.

Бактериологическое исследование отделяемого из глаза с целью выделения и идентификации этиологически значимых микроорганизмов − возбудителей инфекций глаз (конъюнктивит, кератит, блефарит и др.) − с определением чувствительности выделенных патогенов к стандартному спектру антимикробных препаратов (антибиотиков, АМП).

Синонимы: Eye Culture, Routine. Aerobic Bacteria Identification and Antibiotic Susceptibility testing.

Основными клиническими формами глазных инфекций по локализации являются конъюнктивит (66,7% общего числа пациентов с воспалительными заболеваниями глаз) и блефарит (23,3%), реже встречается кератит (4,2%).

На долю заболеваний роговицы приходится не менее 25% всей глазной патологии. Кератиты чаще встречаются у пациентов с ослабленным иммунитетом (вне зависимости от возраста и пола). Постоянное наличие микрофлоры в конъюнктивальной полости часто оказывается опасным даже при минимальной травме роговицы. Первое место (до 70–80%) принадлежит вирусным кератитам. Язва роговицы относится к разряду тяжелых глазных заболеваний, трудно поддающихся лечению и почти всегда заканчивающихся нарушением зрения, вплоть до слепоты. Среди воспалительных заболеваний глаз наибольшие трудности в лечении представляют кератиты и язвы роговицы бактериальной этиологии, составляющие 12,9% среди патологии роговицы. Тяжелые случаи бактериальных язв могут приводить к перфорации роговицы, эндофтальмиту и потере глаза.

Данный тест включает в себя полуколичественное бактериологическое исследование отделяемого из глаза с целью выделения и идентификации этиологически значимых бактерий – возбудителей конъюнктивита, кератита, блефарита и других гнойно-воспалительных заболеваний глаз с определением их чувствительности к стандартному спектру антимикробных препаратов (антибиотиков, АМП).

Важно! Определение вида грибов и постановка чувствительности к антимикотическим препаратам в этот анализ не входят (при подозрении на грибковую инфекцию следует заказать тест № 442).

Антибиотики относятся к лекарственным препаратам, эффективность которых является наиболее очевидной для лечения бактериальной инфекции. Основным ограничением эффективности антимикробных препаратов является способность микроорганизмов формировать устойчивость (резистентность) к их действию. Этот естественный процесс многократно ускоряется при необоснованном и избыточном применении антимикробных препаратов в качестве средств профилактики в медицине, средств самолечения широкими кругами населения. Учитывая наличие указанных проблем, антимикробный препарат следует назначать только при наличии обоснованных показаний (подтвержденная или предполагаемая бактериальная инфекция) и с учетом результатов определения чувствительности к нему выделенного возбудителя.

Выделяемые микроорганизмы и возбудители:

стафилококки (Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis и др.);
стрептококки (Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus viridans);
гемофильная палочка (Haemophilus influenza);
моракселлы (Moraxella lacunata, Moraxella (Branhamella) catarrhalis);
синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa);
грамотрицательные бактерии семейства Enterobacteriaceae (Escherichia coli, Proteus, Klebsiella pneumonia и др.);
нейссерии (Neisseria spр.);
коринебактерии (Corynebacterium xerosis, Corynebacterium pseudodiphtheriticum и др.);
дрожжеподобные грибы (Candida spp.), скрининговое обнаружение.

Внимание! Данное исследование не предусматривает выявление таких значимых возбудителей инфекций глаза, как вирусы, хламидии, некоторые виды патогенных грибов (кроме Candida spp.), клещи Demodex и др.

Посев отделяемого из глаза на микрофлору и определение чувствительности к антимикробным препаратам проводят с целью установления причины гнойно-воспалительных воспалительных глаза, имеющих инфекционное происхождение, а также для обоснования рациональной антибиотикотерапии.

В данном профиле представлены три основных возбудителя, которые могут вызвать у кошек заболевания глаз ( конъюнктивит, секвестрацию роговицы, стромальный кератит, эозинофильный кератит, передний увеит и др.).

Герпесвирус кошек FHV-1 (Feline Herpes Virus type 1) – это крупный оболочечный ДНК-содержащий вирус, который встречается у животных повсеместно. Существует только один серотип FHV-1, изоляты вируса генетически сходны, однако разные штаммы отличаются вирулентностью. По результатам исследований методом вирусологического посева, вирус обнаруживается у 39% кошек, хотя в некоторых питомниках его распространенность может быть выше. Его встречаемость у кошек с острой инфекцией верхних дыхательных путей может достигать почти 100%. У клинически здоровых кошек выделение вируса наблюдается в 10% случаев. Практически у всех заболевших животных развивается латентная инфекция, первоначально поражающая тройничный ганглий. ДНК FHV-1 также обнаруживается в роговице и тканях носовой полости.

Хламидии – облигатные внутриклеточные бактерии рода Chlamydiales, которые вызывают главным образом конъюнктивит у кошек, но также могут играть роль в развитии системных и репродуктивных патологий у собак и кошек, которые до настоящего времени недостаточно хорошо изучены. Наиболее значимым патогеном у кошек по всему миру является Chlamydophila felis, вызывающая острый и хронический конъюнктивит. Инфекция чаще всего наблюдается в условиях группового содержания кошек, особенно в питомниках. ДНК C. felis редко обнаруживается в мазках с конъюнктивы от клинически здоровых кошек. Имеются данные, согласно которым хламидии обнаруживаются у 30% кошек с конъюнктивитом. Инфекция C. felis чаще встречается у молодых кошек, главным образом, в возрасте от 2 до 12 месяцев. Защита от инфекции котят до двух месяцев обеспечивается материнскими антителами, хотя сообщалось о случаях неонатальных инфекций. У кошек старше 5 лет развитие инфекции C. felis очень маловероятно. Часто наблюдаются коинфекции с другими респираторными патогенами, такими как герпесвирус кошек 1 (FHV-1) и калицивирус кошек (FCV).

Микоплазмы – бактерии из класса Mollicutes, у которых отсутствует клеточная стенка. Существует более 120 видов микоплазм, однако ввиду сложности видовой идентификации, не до конца ясно, какие из них вызывают инфекции у собак и кошек. Микоплазмы являются комменсальными микроорганизмами, населяющими слизистые оболочки практически всех видов млекопитающих. Ввиду того, что микоплазмы часто обнаруживаются в верхних дыхательных путях и половых путях здоровых животных, иногда сложно установить их роль в патологиях верхних дыхательных путей и мочеполовой системы. Микоплазмы могут вызывать вторичные инфекции при нарушении функции иммунной системы вследствие таких факторов, как неоплазия или использование иммуносупрессивных препаратов. Mycoplasma felis считается одним из основных патогенов при конъюнктивите кошек. Основные симптомы заболевания – отек и гиперемия конъюнктивы, серозно-гнойные выделения из конъюнктивального мешка.

Исследуемый аналит: эпителий конъюнктивы.

Метод исследования: ПЦР – Real-time.

Подготовка пациента: биоматериал отбирается до применения местных и системных лекарственных препаратов; при наличии гнойного отделяемого необходимо предварительно его удалить при помощи чистой марлевой салфетки, смоченной 0,9% физиологическим раствором (NaCl).

наличие истечений из конъюнктивальных мешков (слизистых или гнойных);
гиперемия конъюнктивы;
боль в глазах (блефароспазм, животное трет лапой глаз);
выявление объемных образований или гиперплазии конъюнктивы.

Противопоказания: наличие тяжелой патологии роговицы может приводить к ее перфорации во время процедуры.

Метод отбора биоматериала: соскоб эпителиальных клеток коньюнктивы.

Преаналитические требования

Порядок действий:

Урогенитальный зондом набрать клеточный материал с конъюнктивы.

Перенести зонд в микропробирку 2 мл с транспортной средой, вращательными движениями "смахнуть" биоматериал в жидкость, зонд утилизировать.

Микропробирку плотно закрыть крышкой до щелчка.

Микропробирку маркировать Ф.И.О. владельца, кличкой животного, указать локализацию.

Заполнить направительный бланк, указав код клиента.

Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Форма выдачи результата: качественный метод.

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК С. felis , ДНК Mycoplasma felis, ДНК Feline, Herpes Virus (FHV -1).

Синонимы: Eye Culture, Routine. Aerobic Bacteria Identification and Antibiotic Susceptibility testing.

Выделяемые микроорганизмы и возбудители:

стафилококки (Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis и др.);
стрептококки (Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus viridans);
гемофильная палочка (Haemophilus influenza);
моракселлы (Moraxella lacunata, Moraxella (Branhamella) catarrhalis);
синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa);
грамотрицательные бактерии семейства Enterobacteriaceae (Escherichia coli, Proteus, Klebsiella pneumonia и др.);
нейссерии (Neisseria spр.);
коринебактерии (Corynebacterium xerosis, Corynebacterium pseudodiphtheriticum и др.);
дрожжеподобные грибы (Candida spp.), скрининговое обнаружение.

Исследование проводят методом посева на плотные питательные среды. Идентификацию микроорганизмов проводят методом масс-спектрометрии с помощью прибора Microflex Brucker Daltonik MALDI Biotyper, BRUKER, Германия. Определение чувствительности к антимикробным препаратам проводят диско-диффузионным методом с использованием анализатора ADAGIO, BIO-RAD, Франция; определение чувствительности к бактериофагам – путем посева бактериальной культуры на плотную питательную среду с последующим нанесением бактериофага.

Синонимы: Eye Culture, Routine. Bacteria Identification. Antibiotic Susceptibility and Bacteriophage Efficiency testing.

В ряде случаев, в условиях растущей антибиотикорезистентности, а также для пациентов, имеющих противопоказания к приему антибиотиков, актуальной альтернативой антибактериальным препаратам служат бактериофаги. В медицине используют их способность разрушать клетки болезнетворных микроорганизмов. Литическое действие бактериофагов строго специфично. В производстве фаговых препаратов учитывают специфичность бактериофагов и готовят поливалентные фаговые препараты – смеси бактериофагов, активных в отношении различных типов возбудителей. При применении бактериофаги не нарушают нормального биоценоза человека, могут применяться в комплексной терапии с другими лекарственными средствами. Бактериофаги не вызывают дисбиоз, аллергию, не подавляют иммунную систему; разрешены к применению у детей с нуля месяцев, у беременных и в период лактации. При необходимости использования бактериофагов в лечебных и/или профилактических целях необходимо проводить оценку чувствительности к ним возбудителя.

Выделяемые микроорганизмы и возбудители:

стафилококки (Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis и др.);
стрептококки (Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus viridans);
гемофильная палочка (Haemophilus influenza);
моракселлы (Moraxella lacunata, Moraxella (Branhamella) catarrhalis);
синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa);
грамотрицательные бактерии семейства Enterobacteriaceae (Escherichia coli, Proteus, Klebsiella pneumonia и др.);
нейссерии (Neisseria spр.);
коринебактерии (Corynebacterium xerosis, Corynebacterium pseudodiphtheriticum и др.);
дрожжеподобные грибы (Candida spp.), скрининговое обнаружение.

Метод ПЦР был разработан сравнительно недавно, но к настоящему времени успел занять передовые позиции как в медицинской, так и в ветеринарной лабораторной диагностике инфекционных и инвазионных заболеваний. Основные принципы ПЦР открыл в 1983 году американский химик Кэри Б. Мюллис, за что и был удостоен Нобелевской премии.

Рис. 1. Стадии ПЦР

Следует отметить, что для получения достоверного результата ПЦР-анализа необходимым условием является соблюдение правил отбора, хранения и транспортировки клинического материала. Несмотря на то, что ПЦР является очень чувствительным методом, желательно наличие определенного количества возбудителя в пробе.

Взятие материала для ПЦР-исследования следует проводить в одноразовых неталькованных перчатках (так как тальк угнетает ПЦР). При взятии соскобов и смывов следует пользоваться одноразовыми стерильными зондами с повышенной адсорбцией (имеющими на конце щеточку), так как они отбирают оптимальное количество материала.

Соскобы и смывы со слизистых оболочек носа, ротовой полости, влагалища, конъюнктивы отбирают в одноразовые пластиковые микропробирки - эппендорфы - объемом 1,5 мл, в которые разлито по 0,5 мл стерильного физиологического раствора. Желательно не использовать зонды с ватными наконечниками. Следует также избегать отламывания кончика зонда в пробирку с физиологическим раствором, так как это затрудняет дальнейшую обработку и повышает риск перекрестной контаминации проб. Для получения необходимого количества материала достаточно вращать зонд в пробирке в течение 1-2 минут, избегая разбрызгивания жидкости. Проба должна быть мутной на вид, а при отстаивании в ней должен образовываться небольшой осадок.

Сперму отбирают в стерильные одноразовые пробирки или флаконы.

Моча. Отбирают первую порцию утренней мочи в количестве не менее 20-40 мл в стерильный сухой флакон или пробирку.

Фекалии. Отбирают пробы массой 1-3 грамма из предварительно продезинфицированного и вымытого лотка, одноразовыми лопаточками переносят в стерильный флакон.

Кусочки пораженных органов от павших животных отбирают в стерильные одноразовые контейнеры или в чистые стеклянные или пластиковые емкости.

Следует строго соблюдать температурные режимы хранения и транспортирования отобранного материала. Транспортирование осуществляют в термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом. При хранении материала более суток его необходимо заморозить при Т минус 20°С.

Наиболее часто встречающимися заболеваниями у кошек и собак являются конъюнктивит, ринотрахеит, а также энтерит. Для того чтобы выяснить этиологию заболевания, требуется провести качественную лабораторную диагностику.

Причиной коньюнктивитов или инфекций верхнего респираторного тракта у кошек может быть инфицирование следующими микроорганизмами: герпесвирус типа 1 (FHV1), калицивирус кошек, Chlamediapcittaci. Mycoplasma felis, Bordetella bronchiseptica, Feline reovirus, Staphylococ-cuc aureus, Brohaemolytic streptococcic и Salmonella tephimurium.

Наиболее частой причиной, по данным различных авторов и методов исследования, являются герпес-вирус типа FHY1 (от 10% до 34%) и калицивирус кошек (от 20% до 53%). Chlamydia pcittaci (от 10% до 35%).

Герпесвирусная инфекция, ассоциирована абортами, высокой смертностью новорожденных (инфицирование почти 60% случаев) с признаками интерстициальной пневмонии.
Калицивирус - тяжело протекает у котят, в то же время 25-80% переболевших взрослых животных становятся носителями и являются источником заражения, передавая вирус через слюну.

Панлейкопения - контагиозное вирусное заболевание кошек, характеризующееся резким падением уровня лейкоцитов, гастроэнтеритом, ринитами с конъюнктивитами, высокой смертностью (30-90 % заболевших котят).

Настоящим бичом для питомников является инфекционный перитонит кошек - тяжелое заболевание, возбудителем которого является РНК-содержащий высокопатогенный вирус. Вирус реплицируется в миндалинах и энтероцитах тонкого кишечника, рассеиваясь по организму через макрофаги и моноциты. Коронавирусы с низкой вирулентностью вызывают энтериты средней тяжести, чаще всего у котят после отъема от матери. Высоковирулентный коронавирус может привести к развитию сухого или выпотного перитонита. Перитонит часто сопровождается почечной недостаточностью, печеночными и неврологическими симптомами.

При инфицировании аденовирусами обоих типов и вирусом чумы плотоядных у собак проявляется общий комплекс симптомов: лихорадка, конъюнктивиты и ринотрахеиты, расстройство желудочно-кишечного тракта, поражение нервной системы.

При чуме плотоядных клинические признаки могут включать серозно-слизистые назальные и конъюнктивальные выделения, кашель, одышку, пневмонию, рвоту и понос, а также лихорадку и гиперкератоз.

Аденовирус плотоядных. Возбудитель - ДНК-содержащий аденовирус плотоядных первого типа (вызывает инфекционный гепатит плотоядных) и второго типа (вызывает аденовироз собак). Наблюдаются лихорадка, апатия, анорексия, жажда, рвота и понос, болезненность брюшной стенки при пальпации. Иногда развиваются конъюнктивит, кератит, светобоязнь. Могут быть точечные кровоизлияния на слизистой оболочке и коже. Редко наблюдаются неврологические нарушения.

Все перечисленные заболевания имеют высокий индекс контагиозности и ассоциированы с высокой смертностью среди щенков, от парвовирусного энтерита погибает 10-50% заболевших щенков, при инфицировании не вакцинированных щенков вирусом чумы плотоядных смертность доходит до 100%.

Токсоплазмоз. Возбудитель - простейшее Toxoplasma gondii. Размножение возбудителя происходит у кошек на стенках кишечника. С калом они выделяют во внешнюю среду ооцисты.

Тканевые цисты могут вызывать анорексию, угнетение, кератиты, желтуху, рвоту, понос и неврологические симптомы в зависимости от пораженных органов. У собак клинические симптомы зависят от пораженных органов: могут наблюдаться неврологические нарушения (тремор, атаксия, паралич) или токсоплазмозный миозит (нарушение походки, атрофия мышц, ригидность), а также миокардит и гепатит.

Хламидиоз и орнитоз. Возбудители у кошек - Chlamydophila felts, у собак - Chlamydophila abortus, Ch. pecorum, у тех и у других заболевание может вызывать Ch. psittaci. У птиц - Ch. psittaci.
У кошек заболевание проявляется в основном в форме гнойных и негнойных конъюнктивитов и кератитов, также могут наблюдаться ринит, пневмония, вагинит, аборты и бесплодие. У котят встречается неонатальныи хламидиозный конъюнктивит. У собак симптомы разнообразны и проявляются воспалительными заболеваниями конъюнктивы, половых органов, гастритами, артритами, абортами и бесплодием. Есть данные о роли хламидий в патогенезе атеросклероза у собак.

Микоплазмоз. Возбудители - микроорганизмы рода Mycoplasma. Протекает с признаками бронхопневмонии, кератоконъюктевитов и кератитов.

Вирусный иммунодефицит кошек. Иммунодефицит кошек - тяжелое заболевание, вызываемое вирусом из семейства Retrovoridae, рода Lentivirus. Вирус поражает иммунную и нервную системы. Обладает тропизмом к Т-лимфоцитам. В результате иммунодепрессии организм становится беззащитным против бактерий, грибов, вирусов и погибает от вторичной инфекции.
Клинические признаки развиваются медленно, и заболевание чаще регистрируется среди кошек 6-10 лет.

Встречаются у домашних животных и такие заболевания как: лептоспироз собак, листериоз кошек и собак, иерсиниоз щенков, бруцеллез, ротовирусный энтерит, бешенство.

Правильность постановки ПЦР-анализа и качественное выделение инфекции зависит, в первую очередь, от правильности взятия материала, во-вторых, от соблюдения температурного режима хранения и транспортирования проб. Поступившая в лабораторию проба регистрируется, проходит все стадии ПЦР, подвергается электрофоретической детекции с последующей выдачей конечного результата.

Таким образом, высокая чувствительность и специфичность ПЦР-метода позволяет гарантированно обнаруживать единичных возбудителей в биологическом материале за короткий промежуток времени, что позволяет поставить точный диагноз, назначить адекватное лечение и разработать профилактические мероприятия.

И.М. Донник, член-корреспондент РАСХН, д.б.н., профессор, Н.А. Пелевина, м.н.с, О.Г. Бодрова, м.н.с,
ГНУ Уральский государственный научно-исследовательский ветеринарный нститут РАСХН

Читайте также: