Метод пцр диагностики пироплазмоза

Обновлено: 12.05.2024

Простейшие паразиты Babesia spp. (семейство Babesiidae) поражают эритроциты домашних и диких животных и вызывают заболевание бабезиоз, клинические проявления которого зависят от вида и штамма бабезий, а также от возраста, иммунного статуса и наличия сопутствующих инфекций или других заболеваний зараженного животного.

Бабезиоз кошек изучен недостаточно. Известно, что кошки заражаются малыми бабезиями, включая Babesia felis, B. cati и B. leo. Инфекция обычно встречается у животных в возрасте до трех лет, породной или половой предрасположенности не наблюдается. Описаны единичные случаи, когда представители группы больших бабезий вызывали болезни у кошек.

Жизненный цикл бабезий в организме теплокровных протекает в эритроцитах, что приводит к их разрушению за счет образования дочерних форм паразита и освоению новых эритроцитов. Гемолитическая анемия и тромбоцитопения (иммуннообусловленные нарушения) в процессе развития инфекции появляются в результате опсонизации собственными антителами здоровых клеток крови с прикрепленными к ним растворимыми антигенами бабезий.

На характер клинической картины при бабезиозе оказывают влияние наличие коинфекций других трансмиссивных заболеваний и штамм микроорганизма. У собак при бабезиозе основными клиническими признаками являются лихорадка, анорексия, летаргия, слабость, спленомегалия. Лабораторные изменения картины крови включают тромбоцитопению, гемолитическую анемию. В начале заболевания возможна лейкопения, однако по мере развития осложнений, картина белой крови меняется в сторону значительного лейкоцитоза. Изменение цвета мочи с соломенного (в норме) до бурого связано с гемоглобинурией. В случае тяжелой формы бабезиоза возможно развитие острой почечной недостаточности, дисфункции ЦНС, коагулопатии (ДВС), гепатопатии с развитием желтухи, шок. У кошек при бабезиозе наблюдаются летаргия, анорексия, слабость, выраженная анемия, являющаяся причиной других клинических симптомов, диарея. Лихорадка и желтуха являются менее распространенными симптомами. Заболевание часто протекает в хронической форме, клинические признаки могут отсутствовать до достижения поздней стадии. У кошек отмечается адаптация к анемии, и клинические проявления, связанные с анемией, бывают выражены слабо до стрессовой ситуации, например, до осмотра или диагностического обследования. Осложнения, наблюдаемые при гемолитической анемии, включают гепатопатию, отек легких, почечную недостаточность, неврологические симптомы, развитие вторичных инфекций.

Ввиду того, что частота встречаемости бабезий в мазках крови может варьировать, ПЦР наиболее чувствительный и специфичный инструмент диагностики. ДНК бабезий выявляют в образцах крови. В целях скрининговых исследований используют тест-системы, детектирующие ДНК без выявления вида возбудителя. При необходимости можно провести идентификацию паразита до вида с помощью секвенирования.

Исследуемый аналит: костный мозг.

Метод исследования: ПЦР- Real-time.

Подготовка пациента: небольшой дискомфорт, который может возникнуть при данной манипуляции, рекомендуется устранять путем введения препаратов для местной анестезии, сильнодействующих препаратов или с помощью общей анестезии легкой степени.

Перед проведением аспирации шерстный покров сбривают, кожу обрабатывают антисептическим раствором.

Показания: анемия (обычно регенеративная), тромбоцитопения, гиперглобулинемия, спленомегалия, желтуха и пигментурия.

Противопоказания: непереносимость препаратов для местного обезболивания и противопоказания к общей анестезии, согласно протоколу оценки степеней риска.

Метод отбора биоматериала: аспирация костного мозга.

Преаналитика:

Провести процедуру взятия костного мозга (КМ).

Перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА).

После внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом.

Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.

Пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию.

Заполнить направительный бланк, указав код клиента.

Сохранность образца при -17°С…-23°С 2 недели.

Температурный режим транспортировки в лабораторию -17°С…-23°С (красный пакет).

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ КОСТНОГО МОЗГА ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ

Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Анализ мочи для обнаружения гемоглобина - косвенный метод.

Мазок крови для обнаружения пироплазм в эритроцитах - прямой метод.

Общий клинический анализ крови для оценки количества тромбоцитов - косвенный метод.

ПЦР анализ крови на пироплазмоз (полимеразная цепная реакция на обнаружение антигена пироплазм) - прямой метод.

Надо учитывать, что отрицательные анализы не гарантируют отсутствие болезни. Но и положительные анализы не означают, что у собаки разовьется пироплазмоз. При диагностике следует проводить комплексную оценку анализов и клинического состояния собаки.

Анализ мочи для обнаружения гемоглобина

Моча может быть внешне от немного более концентрированной, до бурого или даже черного цвета. При анализе обнаруживается гемоглобин, может быть билирубин. В самом начале пироплазмоза моча может быть нормального цвета и не содержит гемоглобина - как правило, повторный анализ через 12-24 часа уже показывает появление гемоглобина, а цвет при своевременном лечении пироплазмоза может не изменится.

Мазок крови для обнаружения пироплазм в эритроцитах

Исследование мазков крови под микроскопом и обнаружение бабезий в эритроцитах. Это наиболее часто используемое исследование для подтверждения пироплазмоза собак. К сожалению не всегда наличие паразитов доказывает развитие пироплазмоза, (это может быть хроническая форма болезни или носительство после предыдущего заболевания пироплазмозом или у природно устойчивых животных) и наоборот даже при яркой форме болезни не во всех мазках крови обнаруживаются пироплазмы. Причем капиллярная или венозная используется кровь не очень важно, важнее в этой ситуации сделать несколько мазков из вены и из уха (или когтя).

Общий клинический анализ крови для оценки количества тромбоцитов

Бабезиоз (пироплазмоз), вызванный Babesia gibsoni, является трансмиссивным (переносится клещами) протозойным заболеванием, которое характеризуется гемолитической анемией, тромбоцитопенией (снижением количества тромбоцитов в крови), вялостью и спленомегалией (увеличением селезенки).

ПЦР анализ крови на пироплазмоз (полимеразная цепная реакция на обнаружение антигена пироплазм)

В проведенных учеными исследованиях диагноз на бабезиоз ставился в основном методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР), гораздо реже методом прямой микроскопии мазков крови окрашенных по Гимзе. Как утверждают авторы, серологические тесты менее чувствительны и уступают в специфичности, поэтому не подходят для видовой диагностики возбудителей бабезиоза (пироплазмоза).

Исследование мазка крови является полезным диагностическим методом клинической диагностики пироплазмоза собак. Микроскопическая оценка продолжает быть самым простым и наиболее доступным диагностическим тестом для большинства ветеринаров. Однако чувствительность этого метода ниже, чем методов молекулярной диагностики для постановки диагноза на пироплазмоз и в большей степени зависит от вида бабезий, вызвавших заражение собаки. Две формы бабезий, большие (Рис. 2) и малые (Рис. 3, 4), можно дифференцировать с помощью мазка крови. Хотя световая микроскопия высокоспецифична и может быть использована для диагностики большинства больных собак, зараженных большими формами бабезий (например, B. canis) [4,84], она реже выявляет инфекции, вызываемые B. vogeli [84]. Для диагностики этой инфекции более чувствительны молекулярные , основанные на ПЦР-методы, [93]. Мелкие пироплазмы (В. gibsoni, В. microti-СП.) трудно наблюдать с помощью световой микроскопии, которая имеет относительно плохую до умеренной чувствительность [35], и необходима экспертиза.

Фото 2 . Микрофотография, демонстрирующая большую форму бабезий (B. Canis) в эритроцитах собаки.Scale-bar: 10 μm

Фото 3 . Микрофотография, демонстрирующая малую форму бабезий (B. gibsoni, стрелка) в эритроцитах собаки.Scale-bar: 10 μm

Фото 4 . Микрофотография, демонстрирующая малую форму бабезий ((B. microti-like, стрелка) в эритроцитах собаки.Scale-bar: 10 μm

Поэтому наблюдение мазка должно быть “первым шагом” диагностической оценки , с отрицательными результатами, требующими переоценку методом ПЦР, используя кровь или ткань селезенки (Изобр. 5). Кроме того, чтобы определить вид пироплазмморфологического наблюдения недостаточно, и необходимы молекулярные методы, такие как ПЦР и секвенирование. Свежая кровь всегда рекомендуется для мазков.

Кроме того, наблюдение за большими бабезиями в капиллярных мазках крови , таких, как полученные из уха или когтя, по видимому, более информативно, благодаря большей численности паразитов в этом типе образцов.[10, 88]. Предел обнаружения паразитов в тонком мазке крови , по видомому, соответствует паразитемии 0,5 % [88].

Собаки с клиническими симптомами и клиникопатологическими нарушениями, совместимыми с пироплазмозом собак.

1 Важно различить большие и малые формы, вследтствие того факта, что клинический подход, лечение и прогноз сильно различаются.

Какие серологические методы могут быть использованы для диагностики бабезиоза?

Как мы должны интерпретировать положительный серологический результат при диагностике пироплазмоза собак? Существуют ли серологические перекрестные реакции между различными видами пироплазм?

Интерпретация положительного результата при диагностике пироплазмоза собакс использованием серологического метода осложняется перекрестной реактивностью между различными видами. В целом, существует значительная перекрестная реактивность между различными видами пироплазм, особенно более филогенетически родственных видов. Например, перекрестная реактивность для больших видов пироплазм (B. canis и B. vogeli)) может привести к совпадению уровня антител для разных видов. Перекрестные реакции также могут существовать между мелкими видами пироплазм (В. gibsoni) и крупными видами (B. canis) [96] , а также между мелкими видами пироплазм (B. gibsoni и B. microti-like) или между крупными пироплазмами.( B. canis, B. vogeli и B. rossi) [28]. По этой причине положительный результат будет свидетельствовать о контакте с пироплазмами,но не может точно указать на разновидность пироплазм. Положительный серологический результат тоже может свидетельствовать о прошлой или текущей инфекции. Несмотря на нечастое использование в клинической практике, молекулярные методы обеспечивают более информативную диагностику.

Может ли серонегативная собака быть инфицированной пироплазмами?

Вполне возможно для собаки быть серонегативной и зараженной пироплазмозом, поскольку инфекции видов, таких как B. canis, проявляются остро [4, 97]. Следовательно, трех- четырехнедельное отставание в постинфекционном антителообразовании будет создавать серологически негативное окно. Поэтому, сероконверсия может быть использована в качестве скринингового метода для подтверждения острой инфекции, вызываемой пироплазмами.. В этих случаях исходные количественные серологические тесты должны быть выполнены при первичном приеме пациентас клиническими признаами и/или лабораторными нарушениями. Впоследствии, количественная серологии должна быть выполнена еще раз через 4-8 недель (см. изобр 5). Средне-высокий положительный уровень антител во время фазы выздоровления (минимум 3-4 недели после заражения) может подтвердить заражение пироплазмозом на момент первичного приема [35]. Однако имеющиеся данные о пользе сероконверсия при пироплазмозе собак ограничены. Сероконверсия нечасто используется в клинической практике.

Почему амплификация ДНК с помощью ПЦР полезна при диагностике пироплазмоза собак? Какие биологические образцы следует выбирать для проведения молекулярной диагностики пироплазмоза собак?

В целом, ПЦР является очень полезной при диагностике пироплазмоза. Во-первых, ПЦР диагностика пироплазмоза более чувствительна, чем прямое исследование мазка крови. Во-вторых, обнаружение ДНК конкретного возбудителя в клинических условиях можно рассматривать как доказательство активной - и, следовательно, продолжающейся - инфекции. Кроме того, в отличие от прямого обнаружения с помощью световой микроскопии или серологического исследования, ПЦР позволяет более надежного идентифицировать вид пироплазм, вызывающий инфекцию у собаки [4]. "ПЦР с генотипированием по методу обратного линейного блоттинга [99, 100] и ПЦР -анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов[101].

Кроме того, различные гены часто используются для дифференциации между различными видамиBabesia. Как правило, сюда относятся ядерные гены рибосомной РНК [7, 8] и два внутренних транскрибируемых спейсера (ITS1 и ITS2) [7]. Эти молекулярные технологии позволяют нам уточнить диагноз на видовом уровне и тем самым обеспечить более точный прогноз. Наконец, ПЦР-амплификация ДНК может быть полезным методом для мониторинга лечения [102]. В идеале, для проведения молекулярного анализа с использованием ПЦР должна использоваться периферическая кровь, буферизированная этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА. Кроме того, ткань селезенки также может быть полезной, хотя, как указано ниже, этот вид образцов обычно не используется, потому что он предполагает более инвазивную процедуру [4].

Как часто встречаются сопутствующие инфекции у собак, зараженных пироплазмозом ? Какова клиническая значимость сопутствующей инфекции для прогрессирования заболевания?

Сопутствующие инфекции при пироплазмозе не подтверждены документально и редко встречаются у собак. Однако секвенирование и филогенетический анализ наводят на мысль о том, что разнообразие видов пироплазм, которые сопутствующе заражают собак, может быть большим, чем считалось ранее [15, 21]. Исследование, проведенное с 120 испанскими собаками из Галисии и Астурии, с клиническими признаками, совместимыми с пироплазмозом, продемонстрировало наличие B. microti-like у 75 собак (62.5 %), с 15 собаками, положительным на наличие других видов (12 с B. canis и 3 с B. gibsoni) [35]. [35]. Сопутствующие инфекции с другими агентами не были обнаружены, возможно, указывая, что сопутствующие инфекции с другими патогенами не распространены [35]. Кроме того, интересное исследование показало высокий процент сопутствующих инфекций с различными штаммами B. canis у собак из Франции [39].

Как уровень антител меняется после лечения?

В целом, уровень антител к пироплазмам . начинает уменьшаться через три недели после начала лечения и постепенно снижается примерно в течение 160 дней [133]. Результаты титров антител всегда следует интерпретировать с осторожностью, поскольку повышенные уровни антител постоянно коррелируют с персистирующей инфекцией. [134]. Для некоторых видов пироплазм (например, B. gibsoni),), нормально обнаруживать положительные уровни антител после лечения, что затрудняет интерпретацию положительных результатов [111]. Взятые вместе, эти ограничения, наряду с уже описанными для серологических анализов, делают нецелесообразным использование этих методов приемы при последующем наблюдении за болезнью.

Почему применение ПЦР полезно после лечения?

ПЦР является полезной стратегией скрининга учитывая, что многие собаки остаются хронически инфицированы пироплазмами. Их статус хронически инфицированного животного предрасполагает этих собак к рецидиву или к сохранению хронически ненормального - а значит вредного - клинического состояния. При таких обстоятельствах, ПЦР может быть использована для того, чтобы установить, сохраняется ли инфекция или скорее всего устранена. [4, 10]. ПЦР следует проводить до прерывания лечения и приблизительно через 2 мес после завершения лечения, особенно при наличии мелких видов бабезий. Кроме того, поскольку чувствительность ПЦР по выявлению пироплазм в цельной крови менее 100 %, может быть целесообразным выполнение двух последовательных ПЦР-тестов, разделенных, по меньшей мере, 15 днями [102, 111]. Кроме того, паразитарное очищение может быть строго продемонстрировано только если ПЦР проводится с использованием нескольких аспиратов тканей, например, из селезенки, а не только периферической крови [10]. Высокая стоимость несколько тестов селезеночной ПЦР, как правило, ограничивает ее использование в научно-исследовательской сфере и в качестве доказательства в исследованиях терапевтического ответа.

Можно ли вылечить пироплазмоз собак ?

Клиническое излечение и хороший терапевтический ответ с большей вероятностью достигается при наличии бабезий большого размера, чем при наличии мелких видов, последние, как правило, более устойчивы к классическим методам лечения [4]. Используются несколько терапевтических протоколов, направленных на лечение инфекций, вызванных мелкими видами бабезий, хотя паразитологическое выздоровление считается редким. Сохранение B. gibsoni у собак после лечения различными протоколами с использованием клиндамицина, метронидазола, доксициклина, диминазена, имидокарба дипропионата, atovaquone и азитромицина является свидетельством устойчивости этот паразита [111, 112,116, 119].

Могут ли собаки повторно заражаться пироплазмозом ?

Одна и та же собакаможет быть повторнозаражена идентичным видом бабезий или одновременно вторым видом. Хотя клинические последствия повторной инфекции достаточно не определены, в эндемических регионах это возможно у хронически инфицированных собак, всостоянии премуниции, безклинических последствий; это состояние может быть даже полезным в плане защиты от инфекции в будущем[133].

Какую меры контроля клещей могут быть реализованы, чтобы предотвратить пироплазмоз у собак?

Преобладающий акцент в профилактикепироплазмоза собак сделан на контроле клещей. Однако такой подход осложняется экологической природой, связанной с человеком, по крайней мере, некоторых из клещей, участвовующих в передаче пироплазм. Эффективная трансовариальная передача пироплазм в клещах означает, что популяции клещей в эндемичных районах могут оставаться зараженными в течение длительного времени и что собаки в зонах с клещами будут часто становиться повторно инвазированными и в геометрической прогрессии увеличивать популяцию клещей.
Клещевая профилактика должна охватывать весь период, в течение которого клещи активны, в зависимости от уровня риска и образа жизни собак. Эта профилактика может состоять из регулярной проверки собак на наличие клещей владельцами и ветеринарами и регулярного применения акарицидных обработок.

поэтому важно использовать подходящие акарициды,чтобы убивать клещей как можно быстрее, прежде чем выпускаются возбудители заболевания. Для пироплазмоза, даже лучше предотвратить клещей от прикрепления (отпугивание клещей в узком смысле) [137].

Табл 5. Акарициды с доказанной профилактической эффективность против трансмиссии видов Babesia клещами D. reticulatus и R. sanguineus у собак.

a Диагнозом, поставленным молекулярным методом, был пироплазмоз собак .Идентификация на видовом уровне не была проведена. Однако, исследования были выполнены в Южной Италии, поэтому, наиболее вероятным видом Babesia , заразившем собак была B. vogeli

Согласно регистрации этих препаратов в Европе, все они могут убивать уже питающихся клещей до оценки спорогонии видов Babesia в течение 48 часов [138], необходимой для трансмиссии пироплазм собакам, которая начинается после того, как клещ начинает питаться. Различные отчеты документировали эффективность и скорость гибели клещей при естественной инфестации или после экспериметальной инфестации, когда собаки лечились различными доступными эктопаразицидами. В общем, все они полезны, и ветеринар должен делать наилучший выбор для каждой индивидуальной собаки ( стиль жизни, активность вне помещения, работающие собаки, связь собака – человек).

Существуют ли вакцины для профилактики бабезиоза у собак?

Существует несколько коммерчески доступных вариантов вакцин для профилактики пироплазмоза у различных видов животных. Для европейского рынка, вакцина для защиты собак против B. canis доступна и называется Pirodog® (Мериал). Эта вакцина, в состав которой входят растворимые антигены паразита, полученные из супернатанта культуры [140, 141, 142,143, 144], индуцирует частичную защиту для собак, первично вступивших в контакт с B. canis, которая как сокращает продолжительность болезни, так и и уменьшает выраженность клинических признаков. Вакцинация не предотвращает инфицирование, но, по видимому, блокирует начало многих патологических процессов, вовлеченных при этом заболевании; более того, ее применение может привести к более низкой паразитемии. Эту вакцину можно вводить с 5-месячного возраста и требуется ежегодная ревакцинация, но она не защищает перекрестно от других видов пироплазм. В настоящее время вакцины против других видов пироплазм, таких как B. gibsoni, разрабатываются [145, 146].

Имеются ли другие доступные способы предотвращения пироплазмоза собак ?

Заключение

Количество информации о пироплазмозе собак в Европе значительно возросло в последние годы. Настоящее руководство призвано ответить на наиболее распространенные вопросы об этиологии, эпидемиологии и путях передачи, клинических признаках, лабораторных исследованиях, диагностике, лечении и профилактике инфекций, вызванных различными видам пироплазм. Мы также надеемся, что данный обзор будет способствовать пониманию текущего статуса этих заболеваний в Европе. Важно подчеркнуть, что пироплазмоз собак представляет собой группу заболеваний и что многие виды могут заражать собак в Европе. Таким образом, точное обнаружение и распознавание видов имеет решающее значение для выбора правильного лечения и определения наиболее точного прогноза.

Babesia gibsoni – паразит интраэритроцитарного апикомплекса семейства Babesiidae, вызывающий пироплазмоз собак.

Установлено, что заражение B. gibsoni в природе происходит через слюну присосавшегося иксодового клеща. Основные переносчики бабезий этого вида клещи Haemaphysalis bispinosa (встречается в Индии, Шри-Ланка, Пакистане, Непале, Австралии, Индонезии), H. longicornis (Восточная и Центральная Азия, включая Китай, Корею и Японию, Австралия, Новая Зеландия, Фиджи, Гаваи), Rhipicephalus sanguineus (Европа, Азия, Африка). Также показано, что возбудитель передается при попадании крови зараженных животных в раны здоровым. Феномен такой передачи B. gibsoni зафиксирован во время проведения собачьих боев с участием американских питбулей и тоса-ину. Описаны случаи заражения при переливании крови и трансплацентарно от зараженной матери плоду. Острая форма заболевания обычно приводит к серьезным клиническим проблемам, таким как лихорадка, тромбоцитопения, регенеративная анемия, спленомегалия. Нередко при остро протекающем заболевании регистрируется летальный исход животного. Как правило, заболевание принимает хроническую форму и животные становятся источниками бабезий для здоровых особей.

Постановка клинического диагноза при заражении B. gibsoni затруднена, так как до сих пор не разработаны четкие стандарты диагностики. Гематологические нарушения при заражении B. gibsoni схожи с таковыми, выявляемыми у собак с опосредованной идиопатической иммунной гемолитической анемией и тромбоцитопенией. Также отмечают хрупкость эритроцитарной оболочки, непосредственная травма эритроцитов бабезиями, мощные процессы окисления. Окисление липидов поверхностной оболочки эритроцитов снижает их эластичность, что препятствует их прохождению по сосудистому руслу. Усиление выработки фибриноподобных белков влечет за собой осаждение эритроцитов на стенках сосудов и развитию острой анемии. Наблюдается снижение выработки тромбоцитов, не приводящее к кровотечениям. Нарастающая гипоксия тканей приводит к развитию анемии, шоку, сосудистому гипостазу. Выделение молочной кислоты, как результат гипоксии, основная причина метаболического ацидоза. Наблюдается снижение выработки тромбоцитов, не приводящее к кровотечениям.

При проведении лабораторной диагностики заражения B. gibsoni важно учитывать, что высокочувствительные в данном случае серологические тесты, позволяющие выявить антитела к возбудителю, не выявляют латентно протекающее заболевание. Один из наиболее точных и высокочувствительных методов детекции бабезий мультиплексная ПЦР позволяет выявить одновременно при проведении скрининговых исследований несколько видов бабезий в крови одного животного. Рекомендуется анализ нуклеотидных последовательностей с последующим секвенированием. Метод гибридизации используется для детекции B. gibsoni, ДНК которой выделена из материала с мазков и фиксированных тканях.

Исследуемый аналит: костный мозг.

Метод исследования: РТ- ПЦР.

лихорадка;
тромбоцитопения;
регенеративная анемия;
спленомегалия.

Метод отбора биоматериала: аспирация костного мозга.

Преаналитика:

Провести процедуру взятия костного мозга (КМ).

Перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА).

Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.

Пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию.

Заполнить направительный бланк, указав код клиента.

Сохранность образца при -17°С…-23°С 2 недели.

Температурный режим транспортировки в лабораторию -17°С…-23°С (красный пакет).

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ КОСТНОГО МОЗГА ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ

Отрицательный результат не всегда исключает присутствие инфекции.

На сегодняшний день не существует теста, полностью исключающего присутствие бабезий в организме животного; интерпретировать результаты следует на основании клинических признаков. В некоторых случаях положительная ответная реакция на лечение может являться способом постановки правильного диагноза. Наиболее надежным методом выявления бабезий является ПЦР.

Форма выдачи результата: качественный метод. Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК Babesia gibsoni.

Подготовка пациента: взятие проб крови рекомендовано до введения антипротозойных препаратов во избежание получения ложноотрицательных результатов по ПЦР- исследованию.

Показания: анемия (обычно регенеративная), тромбоцитопения, гиперглобулинемия, спленомегалия, желтуха и пигментурия, скрининг при выборе донора крови или при подборе животных для разведения.

Противопоказания: не известны.

Метод отбора биоматериала: венепункция.

Преаналитика:

Провести процедуру взятия крови.

После внесения биоматериала в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА) осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом.

Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.

Контейнер маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного.

Заполнить направительный бланк, указав код клиента.

Срок хранения образца при -17°С…-23°С две недели.

Температурный режим транспортировки в лабораторию -17°С…-23°С (красный пакет)

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ КРОВИ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ

Отрицательный результат не всегда исключает присутствие инфекции.

Форма выдачи результата: качественный метод. Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК Babesia spp.

Читайте также: