Насколько эффективен микроскопический метод при диагностике микозов

Обновлено: 01.05.2024

Грибковые заболевания кожи (дерматомикозы) являются самыми распространёнными среди кожных болезней. Грибки известны с глубокой древности, это особый вид микроорганизмов, сочетающий черты и растений, и животных, а питаются грибы органическими веществами. Они живучие, способны образовывать споры и сохраняться в окружающей среде длительное время, очень медленно растут. Поэтому грибковые заболевания могут долгое время протекать без проявлений, а их обнаружение – непростая задача для врачей.

Преимущественно грибы- дерматофиты являются возбудителями поверхностных грибковых заболеваний, в частности таких, как микроспория, трихофития (стригущий лишай), эпидермофития. Они постоянно обитают на коже и волосах человека и животных, некоторые – в почве. Контакт человека с грибками происходит. Однако кожа в норме является мощным защитным барьером, и не позволяет грибам проявлять патогенные свойства.

Развитию грибковых заболеваний кожи способствуют следующие факторы:

механическое повреждение защитного барьера кожи: трещины, микротравмы, в том числе полученные в результате косметических процедур.
несоблюдение правил личной гигиены дома и при посещении общественных саун и бань, фитнес-залов, если не используются индивидуальные полотенца, тапочки, шапочки.

Эти факторы не являются ведущими, кожа не позволит проникнуть врагу, если хорошо работает иммунная система. Снижение местного и общего иммунитета организма является решающим пусковым механизмом. Этому способствуют:

Генетические причины (врождённые иммунодефициты)
Недостаток витаминов и микроэлементов
Хронические заболевания кожи
Эндокринные заболевания: сахарный диабет в первую очередь, нарушения функции щитовидной железы, ожирение, другие гормональные проблемы
Давние хронические заболевания (желудочно-кишечного тракта, лёгких, сердца; туберкулёз, СПИД)
Длительное применение антибиотиков, глюкокортикоидов, противоопухолевых препаратов.

Если грибок преодолел все преграды на своём пути, развивается заболевание. Особенность грибков кожи – поражение рогового (поверхностного) слоя. Грибки питаются кератином, входящим в его состав. Поражаются кожа, ногти и волосы.

Как проявляются грибковые заболевания кожи?

Поскольку вовлекаются только поверхностные слои кожи, проявления могут быть следующими:

Зуд и шелушение кожи без пятен
Образование красных пятен с чёткими краями в виде одного или множественных очагов, как правило, сопровождаются шелушением и зудом
Ногти утолщаются, деформируются, расслаиваются
Выпадение волос при трихофитии
Воспаление волосяных фолликулов с образованием корочек и шелушением

Проявления характерны для многих кожных заболеваний. Данные осмотра не позволяют определить, грибковое поражение кожи или нет.

Для установления диагноза используются следующие лабораторные методы:

Микроскопическое исследование кожи, ногтевых пластинок и волос на наличие патогенных грибов (срок выполнения 2 дня)

Важным моментом для правильности исследования является взятие материала на границе здоровых и поражённых тканей, где выше вероятность выявления активного роста грибков. Микроскопический метод позволяет увидеть патологический грибок под микроскопом или исключить его наличие, но не позволяет определить тип возбудителя. Выявление мицелия гриба является критерием подтверждения активного микоза. Наличие только спор требует детального изучения и подтверждения другими методами.

Посев на грибы (возбудители микозов) (срок до 30 дней) является более точным исследованием. Соскобы кожи, ногти и волосы помещаются в специальные среды, обогащенные питательными веществами специально для грибков кожи. Врач наблюдает за ростом грибков до месяца, поскольку они растут очень медленно и именно этот срок позволяет адекватно провести исследование и не пропустить заболевание. Благодаря посеву определяется конкретный тип грибков дерматофитов, что даёт возможность назначить правильный противогрибковый препарат.

Обращаем внимание, что грибок малацезия (Malasezia furfur) – возбудитель перхоти у животных и человека, в посеве не вырастает. Вот такая у него особенность!

При грибковых заболеваниях определение чувствительности к противогрибковым препаратам проводится только с научной целью, чтобы внедрить новое лекарство, поскольку это долгий, трудоёмкий процесс и он нецелесообразен в лечебной практике. Дело в том, что известные противогрибковые препараты воздействуют на определенные виды грибов и врач при подтверждении грибкового заболевания не станет ждать дальнейшего прогрессирования процесса ещё месяц, а назначит препарат в зависимости от типа грибка, определенного в результате анализа.

Как правильно подготовиться к исследованиям?

Соскобы кожи выполняются только врачом. Волосы и ногти допускается собрать самостоятельно и поместить в специальный контейнер, по возможности на границе здоровых и поражённых тканей. Исследование проводится до начала приёма противогрибковых препаратов или через 2 недели после окончания.

Диагностика микозов - методы исследования, критерии

Прецизионная диагностика инвазивных микозов нелегка. Это объясняется не только трудностями в получении культуры грибов, но и в интерпретации результатов исследований, поскольку грибами, как дрожжевыми, так и мицелиальными, возможны колонизация слизистых оболочек, контаминация исследуемых образцов. В связи с этим диагностика инвазивных микозов базируется на комплексном подходе, включающем не только результаты микологических (культуральных) и серологических (определение антигена грибов) исследований, но и клинические симптомы грибковой инфекции, данные вспомогательных методов исследований (компьютерная или магнитно-резонансная томография, ультразвуковое исследование).

Европейско-американской кооперированной группой по изучению инвазивных микозов у иммунокомпрометированных больных разработаны критерии диагностики инвазивных микозов. Они представлены в 2001 г. на Международной конференции по антимикробным препаратам и химиотерапии (ICAAC, Chicago), а в 2002 г. в печати. Определены критерии доказанного, вероятного и возможного инвазивного микоза, которые рекомендуется использовать при клинических и эпидемиологических исследованиях

Доказанный инвазивный микоз, вызванный мицелиальными грибами: обнаружение мицелия грибов в биоптатах либо аспиратах при гистологическом или цитологическом исследовании или выделение культуры из образцов, полученных в асептических условиях из стерильного в норме очага, который по результатам клинического и радиологического исследований связан с инфекцией, за исключением исследований мочи и со слизистых оболочек.

Доказанный инвазивный микоз, вызванный дрожжевыми грибами: обнаружение дрожжевых клеток (грибы рода Candida могут формировать псевдомицелий или истинный мицелий) в биоптатах или аспиратах, за исключением образцов со слизистых оболочек, или выделение культуры из образцов, полученных в асептических условиях из стерильного в норме очага, который по результатам клинического и радиологического исследований связан с инфекцией, за исключением исследований мочи, образцов из пазух носа и со слизистых оболочек, или обнаружение при микроскопии и специфическом окрашивании (в капле туши, окраска муцикармином) дрожжевых клеток либо положительного антигена Cryptococcus spp. в цереброспинальной жидкости.

Фунгемия, обусловленная мицелиальными грибами: выделение гемокультуры грибов, за исключением Aspergillus spp. и Penicillium spp., включая Penicillium marneffei, в сочетании с клиническими симптомами инфекционного процесса, совместимыми с выделенным возбудителем.

Фунгемия, обусловленная дрожжевыми грибами: выделение гемокультуры грибов рода Candida или иных дрожжевых грибов у пациентов с клиническими признаками инфекции, связанными с данным возбудителем.

Комплекс диагностических исследований при инвазивных микозах

При микологическом исследовании стерильных аспиратов или биоптатов принимают во внимание выделение не только культуры грибов, но и обнаружение при микроскопии мицелия или псевдомицелия. В гистологических препаратах аспергиллы трудно дифференцировать от Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum и некоторых других мицелиальных грибов. Для дифференциальной диагностики следует проводить иммуногистохимическое исследование с антителами к аспергиллам.

Иная интерпретация результатов в случае обнаружения мицелиальных грибов в крови. Высокая частота выделения мицелиальных грибов характерна для Fusarium spp. и составляет 40—60 %. Aspergillus обнаруживают крайне редко, в большинстве случаев это рассматривается как контаминация, за исключением Aspergillus terreus.

Выделение Aspergillus terreus из крови больных с гемобластозами может свидетельствовать об истинной аспергиллемии, а при наличии клинических симптомов инфекции является основанием для назначения антимикотиков.

Критерии инвазивного микоза

При выявлении в крови или иных стерильных биосубстратов дрожжевых грибов обязательно следует проводить идентификацию до вида и определять чувствительность к противогрибковым препаратам, при выделении мицелиальных (плесневых) грибов — только идентификацию до вида, чувствительность не определяют.

В клинической практике чувствительность мицелиальных грибов не исследуют по причине несовершенства стандартов по определению чувствительности таких грибов к антимикотикам. Более того, только в одном исследовании продемонстрирована корреляция между чувствительностью Aspergillus spp. и результатами лечения инвазивного аспергиллеза у больных с гемобластозами. Ни в одном из исследований, проведенных в последующем, не получено подобных результатов.

Идентификация грибов до вида, особенно полученных из стерильных локусов, необходима прежде всего для выбора антимикотика и проведения адекватной противогрибковой терапии. Так, Candida krusei устойчивы к флуконазолу и менее чувствительны, чем дрожжевые грибы другого вида, к амфотерицину В; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. резистентны к амфотерицину В; Mucorales резистентны к итраконазолу, вориконазолу, Candida glabrata проявляет дозозависимую чувствительность к флуконазолу, и при выделении этого вида гриба, даже чувствительных штаммов, дозу флуконазола следует увеличить (взрослым назначают 800 мг вместо 400 мг); Candida lusitaniae устойчивы к амфотерицину В.

Идентификация грибов до вида также важна для проведения эпидемиологического анализа в стационаре — определения возбудителей вспышек инфекции и по возможности источника инфекции. Описаны вспышки инфекции, вызванные такими редкими грибами, как С. lusitaniae, С. krusei, С. lipolytica.

На основании видовой идентификации грибов можно предположить инвазивный микоз или колонизацию грибами слизистых оболочек. Например, Aspergillus niger существенно реже, чем Aspergillus fumigatus, являются причиной инвазивного аспергиллеза у больных острыми лейкозами. Выделение из жидкости бронхоальвеолярного лаважа Aspergillus niger чаще всего расценивается как колонизация дыхательных путей, а из мокроты — как контаминация из воздуха и требует дополнительных исследований при подтверждении диагноза инвазивного аспергиллеза.

Выделение Cryptococcus neoformans у иммунокомпрометированных больных из респираторного тракта (смывы, лаваж) является диагностически значимым. Если идентификация дрожжевых грибов из жидкостей, полученных из дыхательных путей (смывы из трахеи, бронхов, бронхоальвеолярный лаваж) иммунокомпрометированных больных, не относится к обязательным исследованиям, то проведение скрининга по выявлению Cryptococcus neoformans из этих образцов является необходимым.

Обнаружение кандид в моче у больных с нейтропенией и лихорадкой, как правило, считается проявлением диссеминированной кандидозной инфекции.

В своевременной диагностике инвазивного аспергиллеза успешно пользуются коммерческим тестом по выявлению циркуляции специфического антигена грибов Aspergillus spp. галактоманна (полисахаридный водорастворимый компонент клеточной стенки гриба).

Галактоманн может быть определен двумя методами: методом латекс-агглютинации (Pastorex Aspergillus, фирмы BioRAD) и методом иммуноферментного анализа (Platelia Aspergillus, фирмы BioRAD).

Преимуществом иммуноферментного метода является более низкий порог чувствительности определения уровня галактоманна в крови — 1 нг/мл и менее, а с помощью латекс-агглютинации — 15 нг/мл. Диагностическое значение имеет определение галактоманна в крови (не менее чем в 2 образцах), цереброспинальной жидкости, бронхоальвеолярном лаваже. Чувствительность метода иммуноферментного анализа составляет около 90 %, специфичность 90—99 %, у реципиентов аллогенного костного мозга данные показатели ниже и равны соответственно 60—70 % и 80—90 % вследствие профилактического применения противогрибковых препаратов (антимикотики снижают пороговый уровень галактоманна).

В 40 % случаев выявление галактоманна в крови опережает проявления инвазивного аспергиллеза, определяемые при компьютерном исследовании легких, а в 70 % опережает клинические симптомы инфекции.

Диагностическую значимость тест по выявлению антигена Aspergillus имеет в том случае, если исследование проводят неоднократно. Определение антигена Aspergillus в крови следует проводить при лихорадке на фоне лечения антибиотиками широкого спектра действия у больных с нейтропенией 2 раза в неделю; при пневмониях, которые возникают или сохраняются на фоне антибактериальной терапии; при обнаружении очагов в легочной ткани (компьютерная томография).

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

ИФА. В настоящее время уже появились коммерческие наборы для выявления Аг некоторых возбудителей, позволяющие их идентифицировать в течение 5-10 мин. Для выявления Аг на твёрдой фазе сорбируют известные AT и добавляют сыворотку, содержащую Аг; после инкубирования несвязанный Аг декантируют, систему промывают и вносят меченые AT, специфичные к сорбированным AT. Повторяют процедуру инкубирования и отмывания, вносят хромогенный субстрат, положительный результат фиксируют при изменении окраски системы.

Гибридизация ДНК — высокоспецифичный метод, позволяющий идентифицировать геном вируса после его гибридизации комплементарными молекулами ДНК. В качестве маркёра применяют ферменты и изотопы. Метод определяет способность вирусной ДНК гибридизиро-ваться с меченой комплементарной ДНК; специфичность метода прямо пропорциональна длине комплементарной цепочки. Перспективен метод гибридизации нуклеиновых кислот in situ. Для постановки реакции меченую ДНК наносят на биоптаты тканей (в том числе на фиксированные формалином или заключённые в парафиновые блоки) и регистрируют взаимодействие с комплементарной ДНК. Метод используют для выявления вирусов простого герпеса, папилломы человека, Эпстайна-Барр и др.

ПЦР. Метод значительно увеличивает чувствительность метода гибридизации, повышая содержание вирусной ДНК в материале, полученном от больного, а также ускоряет время получения результата.

Методы диагностики микозов ( грибковых заболеваний )

Микроскопия — один из основных методов выявления возбудителей микозов. Позволяет проводить экспресс-диагностику микозов и получать результат в течение 1—2 ч, тогда как для выделении культуры возбудителя необходимы недели. Для экспресс-диагностики препараты часто необходимо окрашивать специальными красителями, так как простая окраска гематоксилином и эозином часто не позволяет выявить клетки грибов.

Неокрашенные препараты грибов

Микроскопия методом висячей или раздавленной капли. Метод позволяет выявить структуры грибов в клинических образцах без предварительного окрашивания.

Обработка 10% едким калием (КОН). Метод используют в первую очередь для визуализации структур возбудителей в фрагментах кожи и её придатках (ногти, волосы), отделяемом очагов поражения и влагалища. В указанных образцах содержится большое количество клеток, в которых КОН разрушает кератин, оставляя неизменёнными клетки грибов.

Окрашенные препараты грибов. Окраска мазка грибов.

• Окраска мазка грибов по Граму. В мазках из клинического материала грибы представлены грамположительными клетками. Клетки Cryptococcus neoformans плохо воспринимают красители, что можно использовать как дифференциально-диагностический признак при микроскопии окрашенных мазков СМЖ.

• Окраска мазка грибов нигрозином или тушью по Бурри мазков СМЖ позволяет выявить капсулированные клетки Cryptococcus neoformans. Для идентификации этого микроорганизма можно использовать муцикармин или конго красный.

• Окраска мазка грибов по Романовскому-Гимзе или Райту мазков крови и костного мозга позволяет выявить дрожжевую форму Histoplasma capsulatum в цитоплазме фагоцитов.

• Окраска мазка грибов метенаминовым серебряным по Гомори. Метод включает предварительную обработку гистологических препаратов хромовой кислотой с последующим нанесением красителя (клетки грибов тёмно-серые или чёрные).

• Окраска мазка грибов по Гридли. Метод включает предварительную обработку препаратов хроматом лейко-фуксина с последующим нанесением фуксинового альдегида и метанилового жёлтого (клетки грибов розово-пурпурные на жёлтом фоне).

• Окрашивание перйодной кислотой и реактивом Шиффа (по Мак-Манусу). 1,2-Гликольные группировки полисахаридов клеточных стенок грибов сначала окисляются перйодной кислотой до альдегидов, реагирующих с сульфитом лейкофуксина реактива Шйффа; клетки окрашиваются в насыщенно розовый или красный цвет.

Иммунофлюоресцентная микроскопия грибов

Наибольшее распространение нашла РИФ. Применяют AT, меченные флюоресцеинами; для выявления грибковых Аг реагент наносят на гистологический препарат, инкубируют и проводят люминесцентную микроскопию.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Рабочие листы и материалы для учителей и воспитателей

Более 300 дидактических материалов для школьного и домашнего обучения

Онлайн
формат
Диплом
гособразца
Помощь в трудоустройстве

Государственное автономное образовательное учреждение

среднего профессионального образования Республики Крым

План занятия (практическое) № 52

Тема занятия: Проведение микробиологической диагностики поверхностных микозов.

Дисциплина (МДК) 04.01. Теория и практика лабораторных микробиологических и иммунологических исследований

Специальность: 31.02.03. Лабораторная диагностика

Цели занятия:

Образовательные:

Изучить микробиологическую диагностику поверхностных микозов

Рассмотреть свойства грибов

Рассмотреть патогенез поверхностных микозов

Развивающие:

Развивать навыки самообразования, творческие способности студентов

Продолжить развитие учебно-интеллектуальных умений;

выделять главное и существенное

устанавливать причинно-следственные связи

Воспитательные:

продолжить формирование эволюционных представлений о развитии органического мира, передачи наследственного материала

воспитывать уважение к людям, науки, их достижениям

продолжить формирования умения работать в коллективе, принимать совместные решения

продолжить формирования здорового образа жизни

Междисциплинарные связи:

Физико-химические методы исследования и техника лабораторных работ

Анатомия и физиология человека

Проведение лабораторных санитарно-гигиенических исследований

Проведение лабораторных биохимических исследований

Основы латинского языка с медицинской терминологией

Внутридисциплинарные связи:

Место проведения: лаборатория 407

Тип занятия: практическое

Количество часов: 4 академических

Обеспечение занятия: методическая разработка

Основные источники:

2. Камышева К.С. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии / Ростов н/Д: Феникс, 2015. – 281 с.

Дополнительные источники:

Медицинская микробиология, вирусология и иммунология : в 2 т. / под ред. В. В. Зверева, М. Н. Бойченко. – Том 1. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.- 448 с.

Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований: учебник. Сбойчаков В.Б. 2011. – 608 с

Интернет- ресурсы:

Студент должен знать:

- задачи, структуру, оборудование, правила работы и техники безопасности в микробиологической лаборатории .

– общие характеристики микроорганизмов, имеющие значение для лабораторной диагностики

- требования к организации работы с микроорганизмами III – IV групп патогенности

- механизм иммунологических реакций

Студент должен уметь:

- принимать, регистрировать, отбирать клинический материал, пробы объектов внешней среды и пищевых продуктов;

- готовить исследуемый материал, питательные среды, реактивы и оборудование для проведения микроскопических, микробиологических и серологических исследований;

- проводить микробиологические исследования клинического материала, проб объектов внешней среды и пищевых продуктов;

- оценивать результат проведенных исследований;

- вести учетно-отчетную документацию;

- проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию, используемой в лаборатории посуды, инструментария, средств защиты рабочего места и аппаратуры;

Общие компетенции

ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.

ОК 3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.

ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения возложенных на него профессиональных задач, а также для своего профессионального и личностного развития.

ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в профессиональной деятельности.

ОК 6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.

ОК 7. Брать ответственность за работу членов команды (подчиненных), за результат выполнения заданий.

ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать и осуществлять повышение своей квалификации.

ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности.

Профессиональные компетенции

ПК 4.1. Готовить рабочее место и аппаратуру для проведения лабораторных микробиологических исследований.

ПК 4.2. Проводить лабораторные микробиологические и иммунологические исследования биологических материалов, проб объектов внешней среды и пищевых продуктов; участвовать в контроле качества.

ПК 4.3. Регистрировать результаты проведенных исследований

ПК 4.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.

Структура занятия:

Организационный момент 10 мин.

Мотивация (цели) занятия 3 мин.

Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний) 37 мин.

Практическая часть 120 мин.

Подведение итогов занятия, оценка работы студентов 8 мин.

Задание на дом 2 мин.

Ход занятия

Организационный момент

Инструктаж по охране труда ( роспись в журнале по технике безопасности )

Мотивация (цели) занятия :

Изучение микробиологической диагностики особо поверхностных микозов является обязательным разделом профессионального модуля в связи с высокой контагиозностью и распространенностью. Диагностика поверхностных микозов представляет собой неотъемлемый элемент микробиологического исследования при диагностике грибковых инфекций.

а) проверка знаний :

б) проверка внеаудиторной самостоятельной работы

таблицы, рефераты, рисунки по темам.

в) подведение итогов контроля:

Оценивание, замечания по работе.

Практическая часть:

а) подготовка студентов к самостоятельной работе ( проведение инструктажа по выполнению заданий):

Преподаватель инструктирует студентов по выполнению практического задания

б) самостоятельная работа студентов:

Провести посев исследуемого материала (чешуйки кожи) на питательную среду Сабуро.

Микроскопировать препараты (по Граму, Романовскому, с 10% щелочью)

Зарисовать препараты в дневник

Сделать выводы

в) подведение итогов самостоятельной работы

Оформление в рабочей тетради выводов о проделанной работе

Итоговый контроль

Проверка преподавателем работ студентов

Задание на дом

Подведение итогов занятия, оценка работы студентов

Преподаватель оценивает работу студентов, корректирует ошибки, отвечает на вопросы студентов

Преподаватель Гончарова А.И.

Текст задания:

Насколько эффективен микроскопический метод при диагностике микозов?

Как приготовить микропрепарат для микроскопии?

Какие группы противогрибковых препаратов Вы знаете?

К низшим грибам относят :

5. К высшим грибам относят :

6. Заболевания, вызванные патогенными грибами,относятся к следующей группе микозов :

Исследуемым материалом для лабораторной диагностики микроспории служит:

Основными методами лабораторной диагностики глубоких микозов являются :

-микроскопический (обнаружение овальных дрожжей,ИФ)

Питательными средами, наиболее часто применяемыми для культивирования грибов, являются :

Условиями культивирования грибов являются :

Основными структурными элементами клеток грибов являются :

Источником инфекции при дерматомикозах является :

Кандидомикоз у человека развивается :

Эталон ответа:

1.Микроскопический метод , который следует рассматривать как основной.

Причины – существенные морфологические особенности разных видов грибов, простота и быстрота исполнения исследования.

2.Для приготовления препарата плесневых грибов очень осторожно (чтобы не разрушить органов спороношения) специальной иглой (можно препаровальной) или ботаническим пинцетом снимают кусочек пленки гриба и переносят его в каплю воды, предварительно нанесенную на предметное стекло. Препарат осторожно, слегка придавливая, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом с объективом 8Х. При этом увеличении хорошо различается строение органов спороношения плесневых грибов. Для подробного изучения отдельных деталей строения (гиф, сумок и т.д.) препарат рассматривают с объективом 40X. При этом обязательно следует регулировать освещение с помощью диафрагмы для получения более четкого изображения рассматриваемых деталей.

3.Азолы: клотримазол, флуконазол ; нистатин, леварин

6. -глубокие (системные): кокцидиоидоз,бластомикоз,гистоплазмоз,споротрихоз,хромомикоз

-поверхностные : кератомикоз, эпидермомикоз, трихомикоз

8. -микологический (среда Сабуро ,кровяной агар)

-серодиагностика (РСК,РПГА с частицами латекса,реакция иммунодиффузии,иммуноэлектрофореза(ИЭФ)

10. рН=6,5, Т-25-28С, влажность

-пожилые люди и дети

ДИАГНОСТИКА МИКОЗОВ

Микроскопический метод , который следует рассматривать как основной.

Результат может быть получен через 1-2 часа. Микроскопия может быть проведена в нативных препаратах (висячая или раздавленная капля) без окрашивания. Для визуализации возбудителя в малопрозрачном биологическом материале (волосы, кожа, ногти и др.) производится обработка 10-20% щелочью (КОН), которая разрушает кератин и не влияет на морфологию клеток грибов. Фиксированные мазки окрашивают по Граму (грибы грамположительны), Романовскому-Гимзе, специальными методами. Диморфные грибы в биологическом материале находятся в дрожжевой форме. Возможна микроскопия гистологических препаратов, позволяющая помимо изучения морфологии гриба изучить патоморфологические процессы в пораженных тканях макроорганизма.

Серологический метод: РИФ, которая рассматривается как экспресс-метод серологической идентификации грибковых антигенов.

РПГА, латекс-агглютинация, РП, РСК, ИФА, РИФ. Используется для выявления грибковых антигенов и противогрибковых антител в крови, СМЖ, моче.

Серологические реакции не всегда высоко специфичны из-за групповых антител, но дают результаты ранее, чем их можно получить культуральным методом.

Культуральный (микологический) метод. Большинство патогенных грибов являются мезофилами (растут в интервале 20-45 0 С) и не требовательны к питательным средам, рН сред от 4,0 до 6,5. Время выращивания – в зависимости от вида гриба: от несколько суток до 2-3 недель. Наиболее часто используется среда Сабуро (пептонный агар с мальтозой или глюкозой). Кислотность среды и высокое содержание углевода ингибирует рост бактерий. На питательных средах диморфные грибы (возбудители подкожных, глубоких микозов) растут в мицелиальной форме при 20-25 0 С.

Идентификация чистой культуры проводится по морфологическим и биохимическим признакам.

Аллергический метод . Проводятся кожные пробы с аллергенами грибов (например – кандид), Метод недостаточно специфичен из-за групповых антигенов грибов разных видов.

Биологический метод . Биопробы на лабораторных животных позволяют оценить вирулентность патогена, получить культуру гриба в тканевой (дрожжевой) форме.

Молекулярно-генетический метод . Используют молекулярную гибридизацию и ПЦР. Достоинство – возможность применения на ранних стадиях болезни.

1► Приготовление мазков из агаровой культуры дрожжеподобных грибов, окраска водным раствором фуксина, микроскопия.

2► Изучение морфологии плесневых грибов.

Candida albicans

Окраска по Граму

Увеличение х 630

Обозначьте на рисунке:

1- дрожжевая клетка;

Препарат культуры плесневых грибов

Окраска по по Граму

Увеличение х 630

Обозначьте на рисунке:

1- конидии (спорангии);

3- конидиеносец (спорангиеносец);

- Готовый фиксированный препарат из смеси бактерий и дрожжеподобных грибов окрасить по Граму. Промикроскопировать. Зарисовать.

Для приготовления препарата плесневых грибов очень осторожно (чтобы не разрушить органов спороношения) специальной иглой (можно препаровальной) или ботаническим пинцетом снимают кусочек пленки гриба и переносят его в каплю воды, предварительно нанесенную на предметное стекло. Препарат осторожно, слегка придавливая, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом с объективом 8Х. При этом увеличении хорошо различается строение органов спороношения плесневых грибов. Для подробного изучения отдельных деталей строения (гиф, сумок и т.д.) препарат рассматривают с объективом 40X. При этом обязательно следует регулировать освещение с помощью диафрагмы для получения более четкого изображения рассматриваемых деталей.

На обезжиренное предметное стекло прокаленной петлей наносят каплю стерильной воды, в которую той же петлей вносят небольшое количество исследуемой культуры микроорганизма (дрожжей или бактерий), взятой с твердой питательной среды.

Из жидкой среды культуру берут вместе с каплей жидкости, а при надобности добавляют каплю стерильной воды. Суспензия культуры микробов на стекле должна давать лишь слабую муть.

При микроскопировании дрожжей в каплю жидкости на стекле добавляют петлей небольшое количество метиленовой сини (до голубого окрашивания) и всю эту смесь тщательно размешивают. Прижизненная окраска дрожжей метиленовой синью применяется для того, чтобы выявить мертвые клетки, легко окрашивающиеся в синий цвет. Живые клетки остаются неокрашенными, так как не пропускают краску через свою оболочку. Приготовленный на предметном стекле препарат дрожжей накрывают покровным стеклом и рассматривают с объективом 40Х. В таком препарате обычно хорошо видны прозрачные овальные или круглые клетки дрожжей с ядрами и оболочками, которые хорошо заметны в клетках живых дрожжей. Мертвые клетки, как правило, более мелкие по сравнению с живыми и окрашены в синий цвет.

Препарат живых бактерий готовится подобно препарату дрожжей, но бактерии можно рассматривать и без добавления краски. На поверхность покровного стекла наносится капля иммерсионного масла, и препарат рассматривается с иммерсионным объективом 90 X, лучше всего в затемненном поле (т.е. с прикрытой диафрагмой). Если культура бактерий подвижная, то хорошо видны быстрые разнохарактерные движения отдельных клеток.

При приготовлении препаратов в раздавленной капле нужно помнить следующее:

1. При опускании покровного стекла на каплю следует прикоснуться его ребром к краю капли и, постепенно наклоняя, опустить стекло.

2. Капля не должна быть большой, чтобы жидкость не переливалась за края и не попадала на верхнюю сторону покровного стекла. Избыток воды снимают кусочком фильтровальной бумаги.

3. Одиночные пузырьки воздуха, оставшиеся под покровным стеклом, обычно не мешают наблюдению. Но если пузырьков много, препарат следует приготовить заново.

4. Препарат не должен быть слишком густым, чтобы микроорганизмы не заслоняли друг друга.

5. Приготовленные препараты рассматривают немедленно (особенно живых бактерий), так как в противном случае вода высыхает и клетки бактерий теряют подвижность.

6. Бактериологическую петлю (или иглу) перед каждым очередным пассажем и после него (нанесение капли воды на стекло, снятие культуры с агара и ее размешивание, взятие краски и т.д.) следует обязательно докрасна прокаливать в пламени горелки.

После прокаливания петлю быстро охлаждают на воздухе (держат 2-3 сек, ни к чему не прикасаясь) и приступают к выполнению очередного этапа работы.

Диагностика грибковых заболеваний. Лечение инфекционных болезней

Многообразие клинических проявлений при грибковых заболеваниях обусловлено поверхностным и глубоким расположением вызываемых ими очагов поражения, острым и хроническим течением болезни, а также постоянным присутствием некоторых грибов в микробных ассоциациях при поражениях кожи, слизистых оболочек, висцеральных органов, дисбиозах (дисбактериозах), при генерализованных инфекциях, включая сепсис.

Кроме того, некоторые из грибов (дрожжеподобные грибы рода Candida, дрожжи, эпидермофитоны, отчасти актиномицеты) постоянно присутствуют на коже и слизистых оболочках у переболевших различными инфекционными болезнями и у здоровых лиц. Широкое распространение грибов, включая окружающую человека внешнюю среду, требует всякий раз подтверждения их этиологической принадлежности.

Для этого, помимо прямых микроскопических и культуральных находок грибов, требуется доказательство их участия в патологическом процессе, что достигается применением дополнительного обследования больного серологическими и аллергологическими методами

Материалом для исследования на грибы служат кожные чешуйки, волосы и ногти, гной, кровь, спинномозговая жидкость, мокрота, желчь, моча, испражнения, пунктат лимфатических узлов, костной ткани и др. Забор материала следует проводить в асептических условиях, чтобы исключить внешнюю контаминацию грибами исследуемого материала от больного.

При диагностике грибковых заболеваний проводится прямая микроскопия материала от больного в нативном и окрашенном виде специальными способами (окраска по Сабуро, по Адамсону), а также по Граму, Цилю-Нильсену и др. Используют культуральный метод выращивания грибов на специальных питательных средах с определенным рН среды для различных грибов. Для серологических исследований применяют реакции агглютинации, преципитации, РСК. В качестве антигена используются взвеси из растертой грибницы

Наиболее специфичными аллергическими пробами являются реакции на грибковые аллергены: кокцидоидин, гистоплазмин, отчасти бластомицин. Данные о диагностическом значении аллергических проб при актиномикозе и некоторых других микозах разноречивы.

Лечение инфекционных болезней

В лечении инфекционных больных медицина достигла огромных успехов. Существенно снизилась летальность от таких тяжелых болезней, как чума, менингит, столбняк, сепсис, рожа, практически сведена до нуля внутригоспитальная летальность при холере, уменьшилось количество осложнений и сократилась длительность лечения острых форм инфекционных болезней. Впервые по-настоящему уделено внимание восстановлению здоровья переболевших инфекционными болезнями, так называемой послеинфекционной реабилитации.

Все это достигнуто благодаря введению в практику лечения инфекционных больных этиотропных лекарственных средств, химиопрепаратов и антибиотиков, разработки схемы их рационального применения, новым организационным формам дифференцированного диспансерного наблюдения за переболевшими и созданию системы реабилитации переболевших. В последние годы с невероятной быстротой идет наращивание количества различных лекарственных средств новейшие антибиотики четвертого поколения, интерфероны, средства общего воздействия, стимуляторы, множество симптоматических препаратов, влияющих на болевой синдром, седативные препараты и многие другие.

Читайте также: