Посев туберкулеза на жидких средах

Обновлено: 26.04.2024

Анализ проводится в Москве и регионах, вся информация — по телефону единой справочной службы. Сдавать его можно не только в лаборатории: доступно взятие материала на дому (уточняйте у администратора клиники). Стерильная емкость приобретается заранее.

Этот анализ принимается по сокращённому графику. Это связано с тем, что биоматериал должен попасть в лабораторию в очень короткий срок. Проверьте расписание сокращённого графика приёма на странице вашего отделения. При сдаче вне графика срок выполнения исследования может быть увеличен на 1-3 дня.

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Посев на туберкулез (Mycobacterium tuberculosis)?

Симптомы, связанные с поражением легких и бронхов;
подтвержденный контакт с инфицированным лицом, в том числе совместное пребывание в закрытом сообществе;
дифференциальная диагностика между заболеваниями, проявляющихся лихорадкой и поражением легких.

Подробное описание исследования

Посев на туберкулез относится к бактериологическим методам исследования. Данный вид диагностики дает возможность наиболее точно подтвердить наличие заболевания.

Микобактерии туберкулеза (mycobacterium tuberculosis) представляют собой прямые или изогнутые палочки, не имеющие жгутиков (неподвижные) и не образующие спор. Достаточно устойчивы к воздействию внешних факторов: в воде сохраняются до полугода, при обработке дезинфектантами жизнеспособны несколько часов. Тем не менее чувствительны к ультрафиолету и высоким температурам.

После поглощения особыми иммунными клетками, макрофагами, могут бессимптомно персистировать внутри них на протяжении нескольких лет. Способны к образованию L-форм — бактерий, у которых полностью или частично отсутствует клеточная мембрана. Благодаря такой особенности они не провоцируют выраженный иммунный ответ, длительно сохраняясь в организме и вызывая повторное инфицирование после завершения лечения.

Заболевание, которое вызывают mycobacterium tuberculosis, — одна из наиболее распространенных инфекционных болезней в мире. Всего в настоящее время в мире инфицировано — без клинических признаков заболевания — примерно 25-30 % населения. Путь передачи — воздушно-капельный, иногда контактно-бытовой, при использовании общих предметов обихода.

Туберкулез поражает в первую очередь легкие, хотя может затрагивать и прочие внутренние органы: кости и суставы, кишечник, почки, структуры центральной нервной системы, кожу. На долю легочной формы приходится примерно 80-90 % от всех случаев заражения. Проявления внелегочного туберкулеза разнообразны и зависят от локализации патологического процесса.

Симптомы при туберкулезе неспецифические, заболевание может быть заподозрено при наличии следующих симптомов:

Прогрессирующее снижение массы тела;
Проявления умеренной интоксикации: субфебрильная температура, утомляемость при привычных нагрузках, ночная потливость, отсутствие аппетита;
Упорный кашель (с мокротой или без) различной интенсивности;
Дискомфорт в грудной клетке, заложенность, тупая боль.

Лица с иммунодефицитом, врожденным или приобретенным, в том числе носители ВИЧ;
Люди, находящиеся в ежедневном контакте с больным (коллеги, члены семьи, участники закрытых групп);
Дети младшего возраста, проживающие в неблагоприятных социально-бытовых условиях.

Важным механизмом защиты от инфекций является иммунный ответ организма. При туберкулезе легких он проявляется развитием воспаления с формированием специфической гранулемы. Это позволяет ограничить распространение инфекции.

Важным при диагностике туберкулеза является проведение посева мочи. Внелегочные формы заболевания могут поражать мочеполовую систему и долго протекать бессимптомно или с признаками воспалительного процесса, мочекаменной болезни.

В распознавании и дифференциальной диагностике туберкулеза, а также в эффективности проводимого лечения очень важную роль играют лабораторные методы исследования. На наиболее распространенные вопросы о лабораторной диагностике туберкулеза отвечает заведующий бактериологической лабораторией Ольга Стебловская.

- Ольга Евгеньевна, расскажите, что такое МБТ?

Это туберкулёзные палочки - Микобактерии туберкулеза (МБТ).

- Где же находят эти туберкулёзные палочки?

При туберкулезе легких М икобактерии туберкулеза (МБТ) чаще всего находят в мокроте. Как много туберкулезных палочек выделяет больной и как долго зависит от формы туберкулезного процесса. Часто и много выделяют МБТ больные инфильтративным и фиброзно-кавернозным туберкулезом , особенно , если есть полости распада. Реже и гораздо меньше выделяют МБТ больные очаговым и диссеминированным туберкулезом легких. Если мокроты у больного много, МБТ находя т в больше м количестве, а в скудной мокроте МБТ встречается реже и в виде единичных экземпляров.

Второе место по эффективности выделения МБТ у больных, не выделяющих мокроту, занимаю т исследования промывных вод бронхов.

Также можно искать МБТ в плевральной жидкости при плеврите, в моче - при туберкулезе мочеполовых органов, и в других выделениях организма больного.

- Как обнаруживают туберкулёзные палочки в лаборатории?

Частота обнаруж ения МБТ зависит от способа исследования биоматериала :

1. Бактериоскопический метод - поиск МБТ на стекле под микроскопом. Среди бактериоскопических методов больше всего МБТ обнаруживает люминесцентная микроскопия, когда мазок окрашивают светящимися красителями и изучают в люминесцентном микроскопе. Бактериоскопическим методом МБТ обнаруживается чаще при обильном бактериовыделении- 100 000 МБТ в 1 мл материала .

2. Бактериологический способ - посев выделений больного на искусственные питательные среды и получение культуры МБТ с последующим изучением ее свойств. По частоте обнаружения МБТ посев материала на плотные или жидкие питательные среды занимает первое место. Для получения культуры МБТ достаточно всего 20-100 микробов в материале от больного.

При бактериологическом способе исследования удается не только выявить туберкулезные палочки, но и подсчитать их количество, а также изучить лекарственную чувствительность к противотуберкулезным препаратам и составить схему лечения боль ного.

Бактериологический метод ( посев материала на специальные среды) обнаружения МБТ очень высокоточный, но имеет существенный недостаток: для получения культуры требуется 4-12 недель.

Применение жидких питательных сред и специального оборудования (бактериологических анализаторов) позволяет определить рост МБТ уже через 5дней.

3. Молекулярно-генетические методы (ПЦР) - поиск в биоматериале генетических маркеров МБТ. Метод ПЦР очень точен, позволяет проводить исследование небольшого количества материала и обнаружить 5-20 клеток МБТ. По оценкам специалистов метод ПЦР превосходит бакте риоскопический и бактериологический методы, особенно при диагностике внелегочных форм туберкулеза.

В бактериологической лаборатории Республиканского противотуберкулезного диспансера представлен полный спектр методов для диагностики туберкулеза:

- бактериоскопические методы; кл ассический посев и определение л екарственной чувствительности МБТ на плотных средах;

- ускоренная методика на жидких средах с применением бактериологического анализатора BACTEC MGIT 960 ;

- молекулярно-генетические методики: ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ и методика HAIN TEST .

В соответствии с современными программами ВОЗ, основой выявления туберкулёза за рубежом считают проведение микроскопии мазков мокроты, полученной от кашляющих больных, обратившихся к врачам общей практики; мазки окрашивают по Цилю-Нильсену. Эта методика входит в отечественный поликлинический и клинический минимум обследования пациента, выделяющего мокроту. В 1995 г. Минздравмедпром России в приказе № 8 "О развитии и совершенствовании деятельности лабораторной клинической микробиологии (бактериологии) лечебно-профилактических учреждений" подтвердил эту обязанность клинико-диагностических лабораторий. Обязательное бактериологическое исследование мокроты на М. tuberculosis должно быть организовано для нетранспортабельных больных, больных хроническими заболеваниями органов дыхания и мочевыводящей системы, а также для работников неблагополучных по туберкулёзу животноводческих хозяйств. Этот старейший метод полностью сохраняет свое значение вследствие доступности для практических клинико-диагностических лабораторий, низкой стоимости и быстроты выполнения.

При бактериоскопии мазка, окрашенного по Цилю-Нильсену, микобактерии туберкулеза могут быть обнаружены при наличии не менее 100 000 - 1 000 000 бактериальных клеток в 1 мл патологического материала (мокроты). Такое большое количество микобактерий встречается у больных с далеко зашедшими прогрессирующими формами заболевания (диссеминированными и фиброзно-кавернозными). У значительно большего числа больных количество выделяемых ими микобактерий ниже предела метода бактериоскопии, что и является большим минусом этого метода. Только при идеальном выполнении всех требуемых условий, указанных в Приказе № 109 МЗ РФ,-исследование не менее трех проб диагностического материала, правильный сбор мокроты, наличие современного бинокулярного микроскопа и высококачественных реактивов, просмотр до 300 полей зрения - возможно повышение чувствительности до 10000 микробных клеток.

Микобактерии туберкулёза имеют вид тонких, слегка изогнутых палочек различной длины с утолщениями на концах или посередине, располагаются группами и поодиночке (рисунок 1,а) Окрашенные по Цилю-Нильсену мазки микроскопируют с иммерсионной системой не менее 10 мин.

Люминесцентная микроскопия

Метод основан на проникновении в микробную клетку карболового производного флюоресцентного красителя (аурамина, родамина). При окраске флюоресцентным красителем аурамином-родамином микобактерии можно видеть при неиммерсионном 100-кратном увеличении. Более точен результат при окраске по Цилю-Нильсену карболфуксином и иммерсионной микроскопии при 1000-кратном увеличении. Именно окраска мазка по Цилю-Нильсену рекомендована при применении технологий DOTS. Микобактерии в этом случае выглядят светящимися желтыми палочками (рисунок 1, б). Метод имеет неоспоримые преимущества, так как позволяет при меньшем увеличении микроскопа просмотреть фактически весь мазок, так же этот метод экономически более эффективен, так как уменьшается время, затрачиваемое на просмотр мазков.

К недостаткам метода ЛМ следует отнести значительно более высокую стоимость люминесцентного микроскопа, при процедуре окрашивания- соблюдение и коррекция pH мазка, а также освобождение микобактерий в диагностическом материале (особенно в мокроте) от окружающей их слизи, которая препятствует проникновению флуоресцентного красителя в микробную клетку. Поэтому нецелесообразно использование ЛМ для нативной мокроты, но применять этот метод рекомендуется при исследовании мазков, приготовленных после центрифугирования из осадка материала, обработанного для культурального исследования и нейтрализованного после деконтаминации. Поэтому метод ЛМ следует применять в бактериологических лабораториях, где культуральное и микроскопическое исследование может быть произведено из одной и той же порции диагностического материала.

При гистологическом или цитологическом исследовании иногда можно обнаружить характерные для туберкулёза клетки, являющиеся результатом защитной реакции организма на внедрение туберкулёзной палочки. Наличие в цитограмме гигантских клеток Лангханса с несомненностью решает диагноз туберкулёза. Эти клетки имеют очень большие размеры (80 - 90 мкм и более в диаметре). Цитоплазма окрашена в серо-голубой цвет. По её периферии расположено в ряд большое количество ядер (до 20), расположенных в форме кольца (рисунок 1, в).

Другим признаком туберкулёза является присутствие в препарате так называемых эпителиоидных клеток, из которых и развиваются клетки Лангханса. Это происходит при увеличении количества ядер без разделения цитоплазмы, которая только увеличивается в размерах (рисунок 1, г).

Микроскопия позволяет быстро получить результат, но обладает низкой чувствительностью и специфичностью, невозможностью дифференциации кислотоустойчивых микобактерий.

Рисунок 1

Микобактерии туберкулеза
а - метод окраски по Цилю-Нельсену
б - метод люминисцентной микроскопии
в - клетки Лангхаса
г - эпителиоидные клетки

Культуральный метод

Исторически сложилось, что питательные среды на яичной основе (Левенштейна-Йенсена, Финна-2, Огавы, Аникина, "Новая", Попеску) получили наибольшее распространение среди плотных питательных сред, применяемых для выделения МБТ. Посев материала на среду Левенштайна-Йенсена проводят в бактериологической лаборатории. Рост первых колоний на классических средах отмечают через 4 - 8 недель. Однако появившиеся в последние годы агаровые среды Миддлбрука (7Н10, 7Н11) позволяют быстрее обнаружить рост микобактерий (от двух до четырех недель) и обеспечивают лучшие возможности для изучения морфологии колоний, чем на яичных средах. Недостатком агаризованных питательных сред является необходимость инкубации посевного материала в термостате с углекислым газом, поэтому агаризованные среды в России практически не применяются.

Следует отметить, что в связи с высокой избирательностью различных штаммов микобактерий и потребностью в полноценных белках до сих пор нет универсальной питательной среды, способной заменить все остальные. В Приказе № 109МЗ РФ для посева диагностического материала на МБТ рекомендуется использовать по одной пробирке международной питательной среды Левенштейна-Йенсена и Финна-2. Однако практика показывает, что кроме указанных сред целесообразно использовать и какую-либо из дополнительных, а посев на три пробирки питательной среды также повышает эффективность культуральной диагностики.

Для полноценной культуральной диагностики туберкулеза необходимо иметь соответствующие помещения и оборудование. Особенно важно наличие центрифуги и антиаэрозольной защитой и способностью обеспечить ускорение 3000g. А также шкафов биологической безопасности для предотвращения внутрилабораторного инфицирования.

Основным недостатком культуральной диагностики туберкулеза является длительность исследования - от трех недель до трех месяцев. Поэтому остаются актуальными дальнейшие исследования по разработке методов ускорения роста микобактерий.

Системы BACTEC

Культуральная диагностика туберкулеза переживает в настоящее время принципиальные изменения, связанные с внедрением в практику полностью автоматизированных систем культивирования МБТ. Главное отличие этих методов - применение жидких питательных сред для культивирования с последующей радиометрической (BACTEC 460), колорометрической (Mb-Bact, Вас- tALERT) и люминесцентной детекцией роста (BACTEC MGIT 960). Рост МБТ на жидкой питательной среде в этих системах удается обнаружить уже через 1 - 2 недели в зависимости от их исходного количества в диагностическом материале. Частота выявления микобактерий так же несколько выше, чем на плотных питательных средах. Автоматизированные системы BACTEC с использованием соответствующих флаконов, содержащих различные противотуберкулезные препараты, позволяют сократить время исследования лекарственной устойчивости микобактерий до 10 - 14 суток.

Из перечисленных автоматизированных систем наиболее эффективна в настоящее время система BACTEC MGIT 960BD. Флаконы MGIT с жидкой питательной средой 7Н9 содержат в придонной части под силиконом флуоресцентный индикатор, "погашенный" высокими концентрациями кислорода. При наличии роста микобактерий в процессе поглощения кислорода индикатор начинает светиться, регистрация флуоресценции в сисиеме BACTEC MGIT производится автоматически. Использование флаконов MGIT возможно и "вручную", тогда регистрацию свечения производят с помощью трансиллюминатора на флаконах MGIT составляет 11 суток.

Основным недостатком BACTEC MGIT, как и других систем BACTEC, является высокая стоимость оборудования (до 100000 долларов США) и флаконов с питательной средой - посев одной пробы диагностического материала стоит до 400 рублей.

Посев на L -формы микобактерий

Так называемые дефектные по клеточной стенке L-формы микобактерий и других инфекционных патогенов являются результатом изменчивости и основным видом персистирования, то есть переживания в неблагоприятных условиях. Посев на L-формы особенно эффективен при внелегочном туберкулезе, поскольку вегетация МБТ в очагах ВЛТ при повышенном ацидозе и анаэробиозе приводит к снижению их жизнеспособности и ферментативной активности.

Диагноз не может быть поставлен только на основании выявления L-форм микобактерий, но их обнаружение, особенно при верификации методом ПЦР, является весомым аргументом в пользу туберкулезной природы заболевания. В очагах внелегочного туберкулеза наблюдается ранняя L-трансформация микобактерий, поэтому их обнаружение позволяет поставить диагноз на начальных стадиях заболевания.

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Посев на туберкулез (Mycobacterium tuberculosis)?

Симптомы, связанные с поражением легких и бронхов;
подтвержденный контакт с инфицированным лицом, в том числе совместное пребывание в закрытом сообществе;
дифференциальная диагностика между заболеваниями, проявляющихся лихорадкой и поражением легких.

Подробное описание исследования

Прогрессирующее снижение массы тела;
Проявления умеренной интоксикации: субфебрильная температура, утомляемость при привычных нагрузках, ночная потливость, отсутствие аппетита;
Упорный кашель (с мокротой или без) различной интенсивности;
Дискомфорт в грудной клетке, заложенность, тупая боль.

Лица с иммунодефицитом, врожденным или приобретенным, в том числе носители ВИЧ;
Люди, находящиеся в ежедневном контакте с больным (коллеги, члены семьи, участники закрытых групп);
Дети младшего возраста, проживающие в неблагоприятных социально-бытовых условиях.

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Посев на туберкулез (Mycobacterium tuberculosis)?

Симптомы, связанные с поражением легких и бронхов;
подтвержденный контакт с инфицированным лицом, в том числе совместное пребывание в закрытом сообществе;
дифференциальная диагностика между заболеваниями, проявляющихся лихорадкой и поражением легких.

Подробное описание исследования

Прогрессирующее снижение массы тела;
Проявления умеренной интоксикации: субфебрильная температура, утомляемость при привычных нагрузках, ночная потливость, отсутствие аппетита;
Упорный кашель (с мокротой или без) различной интенсивности;
Дискомфорт в грудной клетке, заложенность, тупая боль.

Лица с иммунодефицитом, врожденным или приобретенным, в том числе носители ВИЧ;
Люди, находящиеся в ежедневном контакте с больным (коллеги, члены семьи, участники закрытых групп);
Дети младшего возраста, проживающие в неблагоприятных социально-бытовых условиях.

Читайте также: