Что такое референтный вирус

Обновлено: 13.05.2024

Поверхностный антиген гепатита В в сыворотке крови в норме отсутствует.
Обнаружение поверхностного антигена (HBsAg) гепатита В в сыворотке подтверждает острое или хроническое инфицирование вирусом гепатита В.

При остром заболевании HBsAg выявляется в сыворотке крови в последние 1-2 недели инкубационного периода и первые 2-3 недели клинического периода. Циркуляция HBsAg в крови может ограничиваться несколькими днями, поэтому следует стремиться к раннему первичному обследованию больных. Метод ИФА позволяет выявить HBsAg более чем у 90% больных. Почти у 5% больных самые чувствительные методы исследования не обнаруживают HBsAg, в таких случаях этиология вирусного гепатита В подтверждается наличием анти-HBсAg JgM или ПЦР.

Концентрация HBsAg в сыворотке крови при всех формах тяжести гепатита В в разгар заболевания имеет значительный диапазон колебаний, вместе с тем имеется определенная закономерность: в остром периоде существует обратная связь между концентрацией HBsAg в сыворотке и тяжестью болезни.

Высокая концентрация HBsAg чаще наблюдается при легких и среднетяжелых формах болезни. При тяжелых и злокачественных формах концентрация HBsAg в крови чаще низкая, причем у 20% больных с тяжелой формой и у 30% со злокачественной антиген в крови может вообще не обнаруживаться. Появление на этом фоне у больных антител к HBsAg расценивается как неблагоприятный диагностический признак; он определяется при злокачественных формах гепатита В.

При остром течении гепатита В концентрация HBsAg в крови постепенно снижается вплоть до полного исчезновения этого антигена. HBsAg исчезает у большинства больных в течение 3 месяцев от начала острой инфекции.

Снижение концентрации HBsAg более чем на 50% к концу 3-й недели острого периода, как правило, свидетельствует о близком завершении инфекционного процесса. Обычно у больных с высокой концентрацией HBsAg в разгар болезни он обнаруживается в крови в течение нескольких месяцев.
У больных с низкой концентрацией HBsAg исчезает значительно раньше (иногда через несколько дней после начала заболевания). В целом срок обнаружения HBsAg колеблется от нескольких дней до 4-5 мес. Максимальный срок обнаружения HBsAg при гладком течении острого гепатита В не превышает 6 месяцев от начала заболевания.

HBsAg может быть обнаружен у практически здоровых людей, как правило, при профилактических или случайных исследованиях. В таких случаях исследуют другие маркеры вирусного гепатита В – анти HBсAg JgM, анти- HBсAg JgG, анти HBеAg и изучают функцию печени.

При отрицательных результатах необходимы повторные исследования на HBsAg.
Если повторные исследования крови в течение более 3 месяцев выявляют HBsAg, такого пациента относят к хроническим больным вирусным гепатитом В.
Наличие HBsAg – довольно распространенное явление. В мире насчитывается более 300 млн. носителей, а у нас в стране – около 10 млн. носителей.
Прекращение циркуляции HBsAg с последующей сероконверсией (образование анти-HBs) всегда свидетельствует о выздоровлении - санации организма.

Исследование крови на наличие HBsAg применяется в следующих целях:

для диагностики острого гепатита В:

инкубационный период;
острый период заболевания;
ранняя стадия реконвалесценции;

для диагностики хронического вирусного гепатита В;

персистирующем хроническом гепатите;
циррозе печени;

для скрининга и выявления больных в группах риска:

больные с частыми гемотрансфузиями;
больные с хронической почечной недостаточностью;
больные с множественным гемодиализом;
больные с иммунодефицитными состояниями, в том числе СПИДом.

Оценка результатов исследования

Результаты исследования выражаются качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBsAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBsAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В, а также при хроническом вирусном гепатите В.

Антитела к ядерному антигену вируса гепатита В JgG (анти- HBcAg JgG )

В норме анти-HBcAg JgG в сыворотке отсутствует.
У больных анти-HBcAg JgG появляются в острый период вирусного гепатита В и сохраняются на протяжении всей жизни. Анти-HBcAg JgG – ведущий маркер перенесенного ВГВ.

Исследование крови на наличие анти-HBcAg JgG применяются для диагностики:

Оценка результатов исследования

Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие анти-HBcAg JgG в сыворотке крови. Положительный результат – выявление анти-HBcAg JgG свидетельствует об острой инфекции, реконвалесценции или ранее перенесенном вирусном гепатите В.

В норме HBeAg в сыворотке крови отсутствует.
HBeAg можно обнаружить в сыворотке крови большинства больных острым вирусным гепатитом В. Он обычно исчезает в крови раньше HBs-антигена. Высокий уровень HBeAg в первые недели заболевания или обнаружение его на протяжении более 8 недель дает основание заподозрить хроническую инфекцию.

Этот антиген часто обнаруживается при хроническом активном гепатите вирусной этиологии. Особый интерес к определению HBeAg связан с тем, что его обнаружение характеризует активную репликативную фазу инфекционного процесса . Установлено, что высокие концентрации HBeAg соответствуют высокой ДНК-полимеразной активности и характеризуют активную репликацию вируса.

Наличие HBeAg в крови свидетельствует о высокой ее инфекциозности, т.е. присутствии в организме обследуемого активной инфекции гепатита В, и обнаруживается только в случае присутствия в крови HBs-антигена. У больных хроническим активным гепатитом противовирусные препараты применяются только при обнаружении в крови HBeAg. HBeAg – антиген – маркер острой фазы и репликации вируса гепатита В.

Исследование крови на наличие HBe-антигена применяется для диагностики:

Оценка результатов исследования

Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBeAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В или продолжающейся репликации вируса и инфекциозности больного.

Анти-HBeAg в сыворотке в норме отсутствует. Появление анти-НВeAg антител указывает обычно на интенсивное выведение из организма вируса гепатита В и незначительное инфицирование больного.

Эти антитела появляются в острый период и сохраняются до 5 лет после перенесенной инфекции. При хроническом персистирующем гепатите анти-НВeAg обнаруживаются в крови больного вместе с НВsAg. Сероконверсия, т.е. переход HBeAg в анти-НВeAg, при хроническом активном гепатите, чаще прогностически благоприятна, но такая же сероконверсия при выраженной цирротической трансформации печени прогноза не улучшает.

Исследование крови на наличие анти-НВeAg применяются в следующих случаях при диагностике вирусного гепатита В:

Оценка результатов исследования

Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител к HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление антител к HBeAg, которые могут свидетельствовать о начальной стадии острого вирусного гепатита В, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции, реконвалесценции, перенесенном недавно вирусном гепатите В или персистирующем вирусном гепатите В.

Критериями наличия хронического гепатита В являются:

Обнаружение вируса гепатита В методом ПЦР (качественно)

Вирус гепатита В в крови в норме отсутствует.
Качественное определение вируса гепатита В методом ПЦР в крови позволяет подтвердить наличие вируса в организме больного и тем самым устанавливает этиологию заболевания.

Данное исследование дает полезную информацию для диагностики острого вирусного гепатита В в инкубационном и раннем периоде развития заболевания, когда основные серологические маркеры в крови у пациента могут отсутствовать. Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Аналитическая чувствительность метода ПЦР составляет не менее 80 вирусных частиц в 5 мкл, прошедшей выявление ДНК пробы, специфичность – 98%.

Этот метод имеет важное значение для диагностики и мониторинга течения хронического ВГВ. Примерно 5-10% случаев цирроза и других хронических заболеваний печени обусловлены хроническим носительством вируса гепатита В. Маркерами активности таких заболеваний является наличие HBeAg и ДНК вируса гепатита В в крови.

Метод ПЦР позволяет определять в крови ДНК вируса гепатита В как качественно, так и количественно. Определяемым фрагментом в обоих случаях служит уникальная последовательность ДНК гена структурного белка вируса гепатита В.

Обнаружение ДНК вируса гепатита В в биоматериале с помощью ПЦР необходимо для:

Исчезновение ДНК вируса гепатита В из крови – признак эффективности терапии

Обнаружение вируса гепатита В методом ПЦР (количественно)

Этот метод дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к активным препаратам.
Для диагностики вирусного гепатита методом ПЦР в сыворотке крови применяются тест-системы, чувствительность которых составляет 50-100 копий в пробе, что позволяет детектировать вирус при его концентрации 5 Х 10^3 -10^4 копий/мл. ПЦР при вирусном гепатите В безусловно необходима для суждения о вирусной репликации.

Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Материалом для выявления ДНК вируса гепатита В могут служить сыворотка крови, лимфоциты, гепатобиоптаты.

Оценку уровня виремии осуществляют следующим образом:
менее 2.10^5 копий/мл (менее 2.10^5 МЕ/мл) – низкая виремия ;
от 2.10^5 копий/мл (2.10^5 МЕ/мл) до 2.10^6 копий/мл (8.10^5 МЕ/мл) – средняя виремия;
более 2.10^6 копий/мл – высокая виремия.

Существует зависимость между исходом острого вирусного гепатита В и концентрацией ДНК ВГВ в крови больного. При низком уровне виремии процесс хронизации инфекции близок к нулю, при средней – хронизация процесса наблюдается у 25-30% больных, а при высоком уровне виремии острый вирусный гепатит В чаще всего переходит в хронический.

Показаниями для лечения хронического ВГВ интерфероном-альфа следует считать наличие маркеров активной репликации вируса (выявление HBsAg, HBeAg и ДНК ВГВ в сыворотке крови в течение предшествующих 6 месяцев.).

Критериями оценки эффективности лечения служат исчезновение HBeAg и ДНК ВГВ в крови, что обычно сопровождается нормализацией уровня трансаминаз и долговременной ремиссией заболевания, ДНК ВГВ исчезает из крови к 5-му месяцу лечения у 60%, к 9-му месяцу – у 80% больных. Снижение уровня виремии на 85% и более к третьему дню от начала лечения по сравнению с исходным служит быстрым и достаточно точным критерием для прогнозирования эффективности терапии.

В этой статье описано, что такое нормы анализов, как проводится расшифровка анализов, почему говорить "норма" несовременно и что такое референсные значения и референсный интервал.

Нормы для расшифровки анализов. Понятие референсных значений и референтного интервала.

Нормальные показатели анализов (норма) — это показатели, выявляемые у здоровых людей. Однако в группах последних они могут иметь различные величины, то есть норма индивидуальна. Это обусловлено как индивидуальными физиологическими особенностями человеческого организма (особенностями обмена веществ, суточных биологических ритмов, функционального состояния тех или иных органов и их систем), так и различиями по полу, возрасту, физиологическому состоянию. Например, при беременности многие биохимические показатели организма женщины изменяются, поэтому для беременных женщин определены соответствующие индивидуальные нормы.

Расшифровка анализов. Норма или патология?

С другой стороны, нередко заболевание развивается незаметно, проявляясь постепенным переходом от небольших отклонений величин лабораторных показателей к более высоким их значениям по мере нарастания дисфункции и тяжести течения заболевания. В связи с этим при расшифровке анализов в интерпретации результатов лабораторных анализов очень важной становится оценка врачом-клиницистом динамики изменения конкретного лабораторного показателя у конкретного пациента. В сомнительных случаях основным критерием наличия или отсутствия заболевания выступает клиническая симптоматика или степень её выраженности. При наличии симптомов болезни для диагностики используют дополнительные лабораторные исследования с применением высокочувствительных и специфичных тестов, наиболее выраженно меняющих свои значения на фоне предполагаемого заболевания.

И, наконец, не всегда показатель, лежащий в референтном интервале, может считаться нормальным, поскольку диапазон многих из них довольно широк. Например, в норме величина гематокрита (Ht) у мужчин варьирует от 42 до 52 %. Массивная кровопотеря может привести к падению этого показателя с 52 до 42 %, при этом значение 42 % остаётся в рамках диапазона референтных величин, а потому может не вызвать тревоги врачей. Однако в определённой ситуации, для конкретного пациента подобное снижение величины гематокрита может быть не только клинически значимым, но и явиться критическим.

Диапазоны референтных значений

Влияние возраста и пола на диапазон референтных значений является значимым для многих лабораторных тестов. К примеру, концентрация щелочной фосфатазы – ключевого фермента, секретируемого клетками костной ткани, увеличивается соразмерно скорости образования её новых клеток. Поэтому у детей и подростков высокий уровень этого фермента не только является нормальным, но и желательным, поскольку связан с активным формированием и ростом костей. Напротив, высокий уровень щелочной фосфатазы у взрослого человека может свидетельствовать о развивающемся остеопорозе, метастазах опухолей костной ткани или других патологических процессах. Исключение составляют беременные женщины, для которых характерно физиологическое повышение активности этого фермента, особенно в третьем триместре беременности.

Почему диапазоны референсных значений могут отличаться у разных лабораторий?

Факторы, влияющие на результаты лабораторных исследований

Современные методы клинических лабораторных исследований характеризуются высокой чувствительностью и специфичностью, а потому их результаты, отражая состояние здоровья пациента, могут служить основанием для принятия лечащим врачом важных клинических решений. В то же время и врачи-клиницисты, и пациенты должны понимать, что существует целый ряд непатологических факторов, способных в определённой степени влиять на результаты лабораторных тестов, искажая объективную картину состояния здоровья пациента. Некоторые из этих факторов можно контролировать только усилиями лабораторных специалистов, сведя к минимуму их возможное негативное влияние на конечный результат лабораторного исследования. В числе таких факторов, например, условия и способ взятия биологического материала, доставки и хранения проб, правильность их идентификации в лаборатории. Однако минимизировать негативное влияние множества других факторов, сказывающихся на точности конечного результата лабораторного исследования, может только сам пациент или его лечащий врач, который должен проинформировать пациента о правильной подготовке к определённому виду лабораторного исследования. Соблюдение указаний врача позволит провести анализ максимально близко к общим требованиям, например, необходимости сдачи крови натощак, и тем самым максимально приблизить полученные результаты исследования к референтным для данной группы пациентов.

Какие же факторы могут оказать влияние на результаты лабораторных исследований? Прежде всего, следует отметить чувствительность многих лабораторных тестов к временному интервалу, связанному с приёмом пациентом пищи вообще или отдельных продуктов в частности, а также с особенностями его пищевого поведения, например, придерживаемой диеты (мясная или вегетарианская), употребления кофе и алкоголя. Например, высокий уровень сахара в крови может быть связан с недавним приёмом пищи, а не с диабетом. Приём пищи незадолго до исследования скажется на результатах тестов липидного профиля, уровне инсулина и С-пептида. В связи с этим для получения точных результатов исследования рекомендуется сдавать кровь с утра натощак, обычно, не менее чем через 8 и не более 14 часов после последнего приёма пищи. Накануне исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Высокий уровень ферментов печени может быть следствием употребления алкоголя - недавнего или частого. Кофеин может вызвать повышение концентрации катехоламинов и ренина в плазме. Курение иногда обуславливает пограничное повышение уровня некоторых онкомаркёров.

На результатах лабораторных тестов может сказаться приём витаминов и пищевых добавок, а также лекарственных препаратов. При этом воздействие медикаментов может быть разнонаправленным. Они не только могут изменять физиологические процессы в организме, но и химически интерферировать (взаимодействовать) с исследуемым аналитом в условиях in vitro. Примером влияния лекарственных средств на физиологическом уровне может служить повышение печёночных ферментов под действием гепатотоксических препаратов. Лекарства, влияющие на объём плазмы, могут вызывать изменение концентрации белков, азота мочевины, железа и кальция. Пример другого влияния - неспецифические реакции связывания некоторых метаболитов лекарственных средств с отдельными компонентами реакционной смеси, например, поликлональными антителами при иммуноисследованиях, вследствие чего может быть получен ошибочный результат. В связи с этим пациенту, принимающему какие-либо лекарственные препараты, следует проконсультироваться с врачом о целесообразности проведения лабораторного исследования на фоне приёма лекарств или возможности отмены их приёма перед исследованием.

В числе факторов, влияющих на результаты лабораторных тестов, - физическая нагрузка. Физическое напряжение приводит к объёмному сдвигу между сосудистым руслом и межклеточным пространством, потере жидкости с потом и, как следствие - к изменению концентрации некоторых аналитов: гормонов или ферментов. Поэтому посещение, к примеру, тренажёрного зала накануне проведения лабораторного исследования является нежелательным. Тяжёлая физическая нагрузка может вызвать повышение уровня некоторых ферментов (АЛТ, АСТ, ЛДГ, креатинкиназы), изменение уровня различных субстратов крови (глюкоза, мочевина и др.), увеличить выделение белка с мочой. Кроме того у людей, на протяжении длительного времени активно занимающихся спортом, например, бегом на длинные дистанции или тяжелой атлетикой, несколько увеличенным может быть уровень тестостерона и лютеинизирующего гормона (ЛГ).

Общей рекомендацией для подготовки к исследованию может служить совет после прихода в лабораторию отдохнуть (лучше посидеть) в течение 10 – 20 минут перед взятием проб крови. Это связано ещё и с тем, что на результаты некоторых лабораторных тестов может оказывать влияние положение тела обследуемого в момент его проведения, а также эмоциональное состояние человека до и во время исследования. Так, например, изменение положения тела из положения лёжа в положение сидя или стоя вызывает сокращение сосудов, а изменение положения из сидячего в положение лёжа, вызывает сдвиг воды и электролитов в ткани, приводя к концентрированию крови. В результате этого изменяются в сторону повышения в сыворотке или плазме крови уровни общего белка, альбумина, липидов, железа и кальция.

Эмоциональный стресс может стать причиной значительного повышения уровня кортизола, АКТГ и глюкозы. Помимо прочего стресс сочетается с увеличением концентраций альбумина, фибриногена, инсулина, лактата и холестерина. Вот почему так важно, по возможности, исключить накануне исследования психоэмоциональные нагрузки и постараться не волноваться в процессе взятия биологической пробы.

Временное изменение некоторых лабораторных параметров могут вызвать физиопроцедуры и инструментальные обследования (например, биопсия предстательной железы перед исследованием ПСА). В таких случаях рекомендуется отложить лабораторное обследование на несколько дней.

Для ряда гормональных исследований важно учитывать фазу менструального цикла у женщин, а потому следует заранее уточнить у врача оптимальные дни для сдачи крови для определения уровня ФСГ, ЛГ, ингибина В, пролактина, прогестерона, эстрадиола и некоторых других гормонов.

Приведённые примеры свидетельствуют о том, что для адекватной оценки результатов лабораторных тестов, а также последующего принятия врачом на их основе верных клинических решений в отношении пациента, необходим комплексный подход, учитывающий всё то многообразие факторов, которые могут влиять на точность и правильность полученных данных. Клинические выводы и решения, принимаемые по результатам лабораторных анализов, будут верными лишь в том случае, когда различные преаналитические и аналитические факторы в достаточной мере стандартизованы и наиболее полно учтены. Очень важно, чтобы пациент смог соблюсти все необходимые рекомендации по подготовке к лабораторным исследованиям, а лечащий врач, интерпретируя полученные данные, учёл бы возможное влияние на результат исследования имевших место непатологических факторов, а также комплексно оценил полученные результаты с учётом клинической картины и данных других видов исследований.

Специалисты лабораторной диагностики, в случае необходимости, всегда готовы ответить на вопросы по полученным результатам, дать дополнительную специальную информацию и разъяснения или проконсультировать в сложных случаях.

Нормы для расшифровки анализов. Понятие референсных значений и референтного интервала.

Расшифровка анализов. Норма или патология?

Диапазоны референтных значений

Почему диапазоны референсных значений могут отличаться у разных лабораторий?

Факторы, влияющие на результаты лабораторных исследований

Антитела к вирусу гепатита С в сыворотке в норме отсутствуют
Суммарные антитела к вирусу гепатита С представляют собой антитела классов IgM и IgG, направленные к комплексу структурных и неструктурных белков вируса гепатита С.
Это исследование является скрининговым для выявления пациентов с ВСГ. Суммарные антитела к вирусу гепатита С можно выявить в первые 2 недели заболевания, и их присутствие свидетельствует о возможной инфицированности вирусом или перенесенной инфекции.

Однозначный ответ на основании результатов данного теста получить невозможно, так как тест определяет суммарные антитела IgM и IgG. Если это ранний период острого вирусного гепатита С, то об этом свидетельствуют антитела IgM, а если это период реконвалесценции или состояние после перенесенного ВГС, то на это указывают антитела IgG.

Оценка результатов исследования

Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие суммарных антител (JgM и JgG) к ВГС в сыворотке крови. Положительный результат – выявление суммарных антител (JgM и JgG) к ВГС свидетельствует о начальной стадии острого вирусного гепатита С, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции, перенесенном вирусном гепатите С или хроническом вирусном гепатите С.

Однако обнаружение суммарных антител к ВГС недостаточно для постановки диагноза ВГС и требует подтверждения для исключения ложноположительного результата исследования. Поэтому при получении положительного результата скринингового исследования на суммарные антитела к ВГС в лаборатории проводится подтверждающий тест. Окончательный результат определения суммарных антител к ВГС выдается совместно с результатом подтверждающего теста.

Антитела к вирусу гепатита С JgM

Антитела к вирусу гепатита С JgM в сыворотке в норме отсутствуют. Наличие антител класса JgM к ВГС в крови пациента позволяет верифицировать активную инфекцию. Антитела класса JgM могут выявляться не только при остром ВГС, но и при хроническом гепатите С.

Антитела класса JgM к ВГС появляются в крови пациента спустя 2 недели после развития клинической картины острого вирусного гепатита С или обострения хронического гепатита и обычно исчезают спустя 4-6 месяцев. Снижение их уровня может свидетельствовать об эффективности лекарственной терапии.

Оценка результатов исследования

Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител JgM к ВГС в сыворотке крови. Положительный результат – выявление антител JgM к ВГС свидетельствует о начальной стадии острого вирусного гепатита С, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции или активном хроническом вирусном гепатите С.

Обнаружение вируса гепатита С методом ПЦР (качественно)

Вирус гепатита С в крови в норме отсутствует.
В отличие от серологических методов диагностики ВГС, где обнаруживают антитела к ВГС, ПЦР позволяет выявить наличие непосредственно РНК ВГС в крови как качественно, так и количественно. Определяемым фрагментом в обоих служит консервативный участок генома гепатита С.

Обнаружение только антител к ВГС подтверждает лишь факт инфицирования пациента, но не позволяет судить об активности инфекционного процесса (о репликации вируса), о прогнозе заболевания. Кроме того, антитела к вирусу ГС обнаруживают как в крови больных острым и хроническим гепатитом,так и у тех пациентов, кто болел и выздоровел, а нередко антитела в крови появляются только спустя несколько месяцев после появления клинической картины заболевания, что затрудняет диагностику. Обнаружение вируса в крови методом ПЦР – более информативный метод диагностики.

Качественное выявление ВГС методом ПЦР в крови свидетельствует о виремии, позволяет судить о размножении вируса в организме и является одним из критериев эффективности противовирусной терапии.

Аналитическая чувствительность метода ПЦР составляет не менее 50-100 вирусных частиц в 5 мкл, прошедшей выделение ДНК-пробы, специфичность – 98%. Обнаружение РНК вируса гепатита С с помощью ПЦР на ранних этапах развития вирусной инфекции (возможно уже через 1-2 недели после заражения) на фоне полного отсутствия каких-либо серологических маркеров может служить самым ранним свидетельством инфицирования.

Однако изолированное выявление РНК вируса гепатита С на фоне полного отсутствия каких-либо других серологических маркеров не может полностью исключить ложноположительный результат ПЦР. В таких случаях требуется всесторонняя оценка клинических, биохимических и морфологических исследований и повторное неоднократное подтверждение наличия инфекции ПЦР.

Согласно рекомендациям ВОЗ для подтверждения диагноза вирусного гепатита С необходимо троекратное выявление РНК вируса гепатита С в крови пациента.

Обнаружение РНК вируса гепатита С методом ПЦР используется в целях:

Обнаружение вируса гепатита С методом ПЦР (количественно)

Количественный метод определения содержания РНК вируса гепатита С в крови дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к антивирусным препаратам. Аналитическая чувствительность метода составляет от 5.102 копий/мл вирусных частиц в сыворотке крови, специфичность – 98%.

Уровень виремии оценивают следующим образом: при содержании РНК ВГС от 10^2 до 10^4 копий/мл – низкий; от 10^5 до 10^7 копий/мл – средний и выше 10^8 копий /мл – высокий.

Количественное определение содержания РНК ВГС в сыворотке крови методом ПЦР имеет важное значение для прогноза эффективности лечения интерфероном-альфа. Показано, что наиболее благоприятный прогноз заболевания и наибольшую вероятность положительного ответа на противовирусную терапию имеют лица с низким уровнем виремии. При эффективном лечении уровень виремии снижается.

Генотипирование вируса гепатита С - определение генотипа

Метод ПЦР позволяет не только выявить РНК ВГС в крови, но и установить его генотип. Наиболее важное значение для клинической практики имеют 5 субтипов ВГС – 1а, 1b, 2а, 2b и 3а. В нашей стране наиболее часто встречается субтип 1b, далее идут 3а, 1а, 2а.

Определение генотипа (субтипа) вируса имеет важное значение для прогноза течения ВГС и подбора пациентов с хроническим ВГС к проведению лечения интерфероном-альфа и рибавирином.

При инфицировании пациента субтипом 1b хронический ВГС развивается примерно в 90% случаев, при наличии субтипов 2а и 3а – в 33-50%. У пациентов с субтипом 1b заболевание протекает в более тяжелой форме и часто заканчивается развитием цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. При инфицировании субтипом 3а у больных более выражен стеатоз, поражение желчевыводящих путей, активность АЛТ и менее выражены фиброзные изменения в печени, чем у пациентов с субтипом 1b.

Показаниями к лечению хронического ВГС интерфероном–альфа являются:

При лечении интерфероном-альфа больных вирусным гепатитом С с субтипом 1b эффективность терапии отмечается в среднем в 18% случаев, у инфицированных другими субтипами – в 55%. Использование комбинированной схемы лечения (интерферон-альфа + рибавирин) повышает эффективность терапии. Стойкий ответ наблюдается у 28% больных с субтипом 1b и у 66% - с другими субтипами ВГС.

Как работает ПЦР-анализ?

У каждого болезнетворного микроорганизма есть свой, уникальный порядок построения цепочки ДНК, поэтому его невозможно спутать с ДНК человека.

При проведении теста ПЦР используют фрагмент чужеродного генетического материала, добытый из образца, и размножают много раз с помощью белка-фермента. За несколько часов количество копий увеличивается в несколько миллиардов раз. Это позволяет получить такое количество ДНК, которого достаточно для успешного определения его природы.

В лабораториях используют определенный набор реактивов для каждого конкретного микроорганизма, поэтому пациентам назначают не общий ПЦР-анализ, а тест на конкретный микроорганизм (например, на вирус гепатита С).

Полимеразная цепная реакция проводится качественно и количественно. Качественный тест позволяет определить, есть ли в образце генетический материал микроорганизма (вируса или бактерии), который ищет врач. Количественный тест дает информацию о том, в каком количестве содержится материал.

Преимущества ПЦР-анализа

К достоинствам этого диагностического метода относят:

Универсальность. ПЦР-тест обнаруживает любые ДНК и РНК, даже в тех случаях, если другие диагностические методы не дали результата.
Эффективность. Полимеразная цепная реакция позволяет диагностировать некультивируемые, трудно культивируемые и латентно существующие формы патогенных микроорганизмов.
Высокую чувствительность. Даже если в исследуемом материале присутствует всего один фрагмент генетического материала возбудителя, тест все равно показывает его.
Высокую специфичность метода, достигающую 100%. В ходе диагностики выявляют уникальную последовательность нуклеотидов в цепочке ДНК, характерную только для конкретного патогенного микроорганизма, провоцирующего развитие заболевания.
Высокую скорость выполнения. Для установки реакции достаточно несколько часов. Пациент получает результаты анализа на следующий день после сдачи.

ПЦР-тест направлен на определение возбудителя заболевания, а не на реакцию на его проникновение со стороны организма.

Показания к проведению ПЦР-теста

Анализ проводят при инфекционных заболеваниях для определения природы их возбудителя. Также его назначают при:

необходимости точно установить конкретный болезнетворный микроорганизм;
диагностике лейкоза и других злокачественных новообразований;
диагностике некоторых генетически обусловленных заболеваний;
исследовании образцов биопсии, которые невозможно изучить с помощью других методов.

С помощью ПЦР-анализа выявляют различные заболевания:

инфекционные (ВИЧ, гепатит, ТОРЧ-инфекции и т.д.);
передающиеся половым путем (хламидии, микоплазмы, кандиды);
внутриутробные инфекции (вирусы краснухи, герпеса, токсоплазмы);
респираторные (в настоящее время ПЦР-тест является золотым стандартом в диагностике вируса Ковид-19);
генетические.

С помощью ПЦР можно провести тест на определение отцовства.

Типы ПЦР

Диагностика на основе полимеразной цепной реакции имеет несколько разновидностей. Она может быть:

инвертированной;
с обратной транскрипцией;
количественной;
вложенной;
ступенчатой.

Наиболее надежный метод — ПЦР в режиме реального времени. Это количественный или полуколичественный способ диагностики, который предусматривает постоянное наблюдение образца генетического материала датчиком. Последний регистрирует сигналы на каждом цикле реакции.

Подготовка к анализу

При подготовке к ПЦР-анализу нужно соблюдать несколько правил:

За 10-14 дней до назначенного теста прекратить прием любых препаратов и отказаться от проведения лечебных процедур, включая физиотерапевтические. Если прием лекарственных средств жизненно необходим, об этом нужно предупредить врача заранее.
В случае забора мазка на выявление заболеваний, передающихся половым путем, нужно в течение суток перед исследованием отказаться от спринцеваний, использования тампонов и лечебных суппозиториев, применения антисептических средств. Также в этот период необходимо воздерживаться от половых актов. За 2 часа до забора мазка нельзя мочиться.
Если выполняется забор мазка из зева, за 3 часа до анализа нельзя чистить зубы, пить, полоскать рот (даже простой водой).
За трое суток до сдачи материала на ПЦР-исследование нужно полностью отказаться от употребления алкоголя.
За двое суток до проведения теста нужно исключить повышенные физические нагрузки.

Материалы для ПЦР-анализа

В зависимости от направленности теста ПЦР, в качестве материала для исследования используют:

кровь (сыворотка или плазма);
соскобы эпителиальных клеток (с кожных покровов, слизистой оболочки уретры, цервикального канала);
различные биологические жидкости (околоплодная, суставная, спинномозговая жидкости, секрет предстательной железы);
мазок из зева;
различные биологические выделения (слюна, моча, мокрота);
биоптат (материал, полученный путем проведения биопсии).

Расшифровка результатов ПЦР-тестирования

Результат ПЦР-анализа либо положительный, либо отрицательный. Положительный указывает на то, что у человека присутствуют фрагменты ДНК возбудителя заболевания, то есть, что человек заражен и ему необходимо лечение. Отрицательный результат ПЦР-анализа свидетельствует об отсутствии следов ДНК патогена. В таком случае человек здоров.

В некоторых случаях ПЦР-тест дает положительный результат, хотя человек не ощущает недомогания и специфических симптомов заражения. Это значит, что заболевание выявлено на ранней стадии развития. Для уточнения диагноза назначают дополнительные исследования, а затем, с учетом их результата, начинают курс лечения.

Читайте также: