Лабораторная диагностика классической чумы свиней

Обновлено: 25.04.2024

5.2. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ

УТВЕРЖДЕНЫ 8 июня 1978 г., б/н

1. Общие положения

1.1. Лабораторная диагностика классической чумы свиней заключается в обнаружении в патологическом материале специфического антигена методом иммунофлуореоценции, реакции связывания комплемента (РСК), а также в постановке биологической пробы.

1.2. Лабораторный диагноз на классическую чуму свиней ставят на основании получения положительных результатов ИФ и РСК.

Окончательный диагноз устанавливается на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных с учетом результатов лабораторного исследования.

1.3. Для лабораторной диагностики КЧС в лабораторию направляют патологический материал (кусочки печени, селезенки, подчелюстных, мезентеральных лимфоузлов), взятый от вынужденно убитых в агональном состоянии животных, у которых в течение 4. 5 дней отмечалось повышение температуры тела. Патологический материал в свежем или замороженном состоянии доставляют в лабораторию. Его можно хранить в замороженном состоянии в течение 8. 10 дней, материал от павших животных к исследованию не пригоден.

1.4. Метод иммунофлуоресценции и реакцию связывания комплемента для обнаружения специфического антигена в патологическом материале применяют при исследовании материала от невакцинированных свиней или от свиней, привитых вирус-вакциной против чумы за 30 и более дней до вынужденного убоя. В связи с этим в сопроводительной описи к патологическому материалу указывают дату последней вакцинации свиней.

2. Индикация антигена вируса классической чумы свиней в патологическом материале

2.1. Индикация антигена проводится с помощью реакции ИФ (прямой вариант и с применением контрастирующего красителя). Из патологического материала готовят мазки-отпечатки или гистологические срезы. Препараты подсушивают на воздухе и фиксируют метиловым спиртом в течение 3. 4 мин при комнатной температуре или смесью (1:1) метилового спирта и ацетона, предварительно охлажденной до -10. -20°С.

2.2.1. Оценка результатов. ИФ считается положительной при наличии в препаратах округлых клеток с ярко-зеленым свечением цитоплазмы или цитоплазмы и ядра. Специфическое свечение должно быть обнаружено в препарате не менее чем в трех полях зрения при наличии в каждом из них 3. 5 и более светящихся клеток.

Не учитывают свечения дегенеративно измененных клеток и лейкоцитов, которые отличают по структуре ядра и выраженной гранулярной флуоресценции цитоплазмы.

2.2.2. Для контроля специфичности свечения наносят на препараты специфическую к вирусу сыворотку с последующей окраской флуоресцирующей сывороткой, а также окрашивают препараты нормальной меченой сывороткой. В контрольных препаратах свечение не отмечается.

2.3. Реакция ИФ с применением контрастирующего красителя. На препараты наносят смесь флуоресцирующей сыворотки и раствора Эванса голубого (3 части сыворотки и 1 часть 0,25%-ного раствора синьки Эванса) и выдерживают при комнатной температуре во влажной камере в течение 10. 12 ч. Затем препарат погружают в подогретый до 60. 70°С 20%-ный раствор триэтиленгликоля на 30. 90 с до появления нежно-голубого оттенка, промывают, подсушивают, заключают в забуференный глицерин под покровное стекло и просматривают под люминесцентным микроскопом.

2.3.1. Оценка результатов. Реакция ИФ считается положительной, если на оранжево-красном фоне препарата наблюдается светло-зеленое свечение цитоплазмы. Контрольные препараты дают красное свечение. Некротические участки ткани, клеточный детрит светятся зеленовато-желтым цветом, но они отличаются от специфического свечения отсутствием у них клеточной структуры.

2.4. Реакция связывания комплемента. Для обнаружения в патологическом материале КС-антигена готовят из растертых в ступке органов 20%-ную суспензию на забуференном физиологическом растворе с рН 7. Суспензию экстрагируют при комнатной температуре в течение 2 ч, затем трехкратно замораживают при температуре -20°С, центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость вновь центрифугируют при 10000. 15000 об/мин в течение 30 мин. Полученную надосадочную жидкость используют в РСК как испытуемый антиген.

2.4.1. Титрование гемолизина. Для титрования готовят основное разведение гемолизина 1:100 (0,2 мл гемолизина и 9,8 мл физиологического раствора), а затем готовят все последующие разведения по схеме 1.

5. БОЛЕЗНИ СВИНЕЙ

5.1. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ

УТВЕРЖДЕНЫ 30 декабря 1996 г., N 13-4-2/809

1. Общие положения

1.1. Лабораторная диагностика классической чумы свиней (КЧС) основана на:

- обнаружении антигена вируса КЧС реакцией прямой иммунофлуоресценции в клетках мазков-отпечатков проб органов;

- выделении эпизоотического вируса КЧС из патологического материала инокуляцией перевиваемой культуры клеток почки поросенка (РК-15) и его идентификации реакцией прямой иммунофлуоресценции;

- обнаружении специфических антител в сыворотках крови переболевших классической чумой свиней реакцией нейтрализации флуоресцирующих микробляшек или реакцией непрямой иммунофлуоресценции;

- выделении и идентификации вируса КЧС биопробой на животных.

Для постановки иммунофлуоресцентных реакций используют "Набор препаратов для иммунофлуоресцентной диагностики классической чумы свиней".

1.2. При проведении лабораторной диагностики руководствуются "Правилами работы и охраны труда в ветеринарных лабораториях", утвержденными Министерством сельского хозяйства СССР 14 января 1975 г.

2. Схема проведения лабораторных исследований

2.1. Отбор проб органов и подготовка патологического материала для исследования.

2.2. Приготовление мазков-отпечатков для постановки реакции прямой иммунофлуоресценции и экстрактов проб исследуемых органов для инокуляции культуры клеток (проводится одновременно).

2.3. Постановка реакции прямой иммунофлуоресценции (РПИФ) с целью обнаружения специфического антигена вируса КЧС в мазках-отпечатках из проб органов. По положительным или отрицательным результатам реакции ставят предварительный диагноз.

2.4. Инокуляция культуры клеток РК-15 экстрактами суспензий проб исследуемых органов с последующей постановкой РПИФ для обнаружения и идентификации эпизоотического вируса КЧС.

2.5. Исследование сывороток крови свиней в реакции нейтрализации флуоресцирующих микробляшек (РНФМ) или реакции непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ). Серологические исследования проводят в тех случаях, когда пробы крови получены от свиней, подозреваемых в переболевании классической чумой (ретроспективные исследования из хозяйств, не применяющих вакцинацию против КЧС в течение последних 2 лет.

2.6. Постановку биопробы проводят только по указанию Департамента ветеринарии, когда при подозрении на КЧС на основании эпизоотологического обследования получены отрицательные результаты лабораторных исследований.

3. Отбор и подготовка проб к исследованию

3.1. Для исследования берут лимфатические узлы (подчелюстные и мезентериальные), части миндалин, селезенки, легкого, почки, кровь и костный мозг (из грудной или трубчатой кости) от 3. 5 животных, убитых в стадии агонии, или не позже чем через 2. 3 ч после гибели.

3.2. Пробы отбирают в стерильные флаконы массой 5. 10 г каждый, герметически укупоривают резиновыми пробками.

Флаконы снаружи обрабатывают 5%-ным раствором едкого натра или осветленным 20%-ным раствором хлорной извести, обертывают марлей, смоченной тем же раствором, укладывают в полиэтиленовый пакет и помещают в термос со льдом. В случае длительной транспортировки (более 2 сут) пробы органов замораживают. Термос помещают в металлический контейнер, опечатывают и доставляют с нарочным в лабораторию с сопроводительным документом.

3.3. При ретроспективной диагностике направляют 5. 10 проб крови (по 5. 8 см) от свиней, подозреваемых в переболевании классической чумой. Кровь берут не ранее чем через 15. 20 сут после установления признаков болезни.

3.4. В лаборатории пробы селезенки, лимфатических узлов, легкого, почки каждого животного очищают от жировой и соединительной тканей и готовят по 2 мазка-отпечатка каждого органа для РПИФ. Для этого обезжиренные спирт-эфиром (1:1) покровные стекла укрепляют в расщепах деревянных палочек с условными номерами и делают мазок-отпечаток, прикладывая стекло к поверхности среза исследуемого органа (каждый отпечаток делается новым срезом органа). Мазки-отпечатки высушивают на воздухе при комнатной температуре (30. 60 мин) и помещают в химический стакан с холодным (2. 4°С) ацетоном. Фиксацию проводят в камере бытового холодильника при (4±2)°С в течение 10. 15 мин. Затем мазки-отпечатки извлекают из ацетона, высушивают и используют для постановки РПИФ. Хранят мазки-отпечатки при (4±2)°С не более 3 сут.

Контрольные отрицательные мазки-отпечатки готовят заранее, используя пробы органов от здоровых животных.

3.5. Навески каждого органа (примерно по 2 г) отдельно растирают в ступке со стерильным порошком из стекла или песком и готовят 20%-ную суспензию на стерильном 0,85%-ном растворе хлористого натрия. Приготовленные суспензии дважды замораживают при -10. -12°С, оттаивают при 30. 37°С и центрифугируют в рефрижераторной центрифуге при 2500. 3000 об/мин в течение 10. 15 мин. Надосадочную жидкость (экстракт) отсасывают, вносят 100 ЕД/см пенициллина и 100 мг/см стрептомицина (конечная концентрация), выдерживают 1 ч при (37±0,5)°С и готовят разведения 1:5 и 1:10 на стерильном 0,85%-ном растворе хлористого натрия. Для инокуляции культуры клеток используют как исходные (неразведенные) экстракты, так и разведенные.

3.6. Для получения сыворотки пробы крови выдерживают 1 ч в термостате при (37±0,5)°С или при комнатной температуре до образования сгустка. Сгусток обводят и пробы переносят в камеру бытового холодильника на 10. 14 ч. Сыворотку отсасывают и используют для исследования.

4. Обнаружение антигена вируса КЧС реакцией прямой иммунофлуоресценции в мазках-отпечатках.

4.1. Содержимое ампулы ФИТЦ-иммуноглобулинов КЧС растворяют 0,5 см дистиллированной воды и готовят рабочее разведение препарата на 0,01 М фосфатно-солевом буферном растворе - ФСБ (приготовление буферного раствора в Приложении, п.1), указанное на ампуле.

4.2. Препараты мазков-отпечатков, приготовленные по п.3.4, помещают на капли ФИТЦ-иммуноглобулинов КЧС, нанесенные в рабочем разведении на края предметных стекол, находящихся во влажной камере, и выдерживают при (37±0,5)°С в течение 30 мин.

4.3. Препараты снимают с предметных стекол, ополаскивают ФСБ и свободными концами спичек укрепляют в гнездах отмывочного штатива. Штатив помешают в цилиндрическую банку с раствором ФСБ, установленную на магнитную мешалку. Отмывание мазков-отпечатков от несвязавшихся или неспецифически связавшихся ФИТЦ-иммуноглобулинов ведут в течение 20 мин в темном месте, сменяя буферный раствор через 10 мин.

4.4. После отмывания препараты ополаскивают дистиллированной водой, подсушивают на воздухе и помещают на капли нефлуоресцирующего глицерина, разведенного раствором ФСБ в соотношении 9:1, нанесенные на прозрачные обезжиренные предметные стекла. Края препаратов заливают расплавленным парафином.

4.5. Люминесцентную микроскопию препаратов проводят в сине-фиолетовом свете при освещении их сверху, через объектив на микроскопах типа "ЛЮМАМ". Возбуждающий светофильтр ФС-1-2 или СС-15-2; запирающий ЖС-18+ЖЗС-19. Препараты последовательно просматривают при увеличении 7x10, 7x40 ("сухая" микроскопия), затем при необходимости в иммерсионной системе при увеличении 7x90, используя неразведанный нефлуоресцирующий глицерин.

4.6. Специфическую флуоресценцию учитывают в лимфоидных клетках паренхимы селезенки, лимфатических узлов, легкого, расположенных группами, а также в эпителиальных клетках миндалин и клетках эпителия почечных канальцев, расположенных группами. Флуоресценцию обнаруживают в виде яркого, зеленого, диффузного свечения цитоплазмы антигенсодержащих клеток.

4.7. Учет и оценка результатов.

Проводят по условной четырехкрестовой шкале при увеличении 5x40: (++++, +++, ++, +) обнаружение во всех полях зрения множества групп клеток с яркой зеленой цитоплазматической флуоресценцией - результат положительный; (±) обнаружение в 5. 10 полях зрения единичных групп, состоящих из 3. 5 клеток с зеленой цитоплазматической флуоресценцией - результат сомнительный; отсутствие в мазках-отпечатках клеток с цитоплазматической флуоресценцией. Свечение клеток тускло-зеленое - результат отрицательный.

Отдельно расположенные клетки с флуоресценцией цитоплазмы или ядра не учитывают.

Отбор проб для вирусологических исследований. Для обнаружения вируса африканской чумы свиней, антигена или генома от павших или убитых с диагностической целью свиней отбирают массой 5-10 г - селезёнку (1/3 часть), портальные, желудочные и подчелюстные (или мезентериальные) лимфоузлы (целиком), лёгкое (5х5 см) и почку (1/3 часть), 3-5 мл крови (или сгусток). Кроме того, рекомендуется в случае аутолизиса трупа отбирать грудинную или трубчатую кость.

Отбор проб для серологических исследований. Минимальное количество проб, которые должны быть отобраны для серологических исследований, рассчитывают с учётом 10%-ой серопревалентности заболевших с 95%ой достоверностью для обследования каждого помещения.

Пробы крови отбирают их полой вены не менее 10 мл от каждой свиньи [3].

Для лабораторных исследований применяют следующие методы: реакцию гемадсорбции (РГАд) в культурах клеток, реакцию прямой иммунофлюоресценции (РПИФ), полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в формате электофорезной детекции, ПЦР в формате реального времени, применяют твёрдофазный иммуноферментный анализ (ТФ – ИФА) (сэндвич-вариант). В сомнительных случаях окончательный диагноз устанавливают заражением подозрительным материалом (кровь, суспензия селезенки и лимфатических узлов) свиней, вакцинированных против классической чумы. Заражение свиней (биопроба) проводят в специализированной лаборатории с соблюдением особых мер предосторожности. Серологические типы вируса определяют в реакции преципитации (РП), реакции связывания комплемента (РСК), реакции задержки геамадсорбции (РЗГАд) и другими методами. [2]

Реакция прямой иммунофлуоресценции (РПИФ) ставят в вирусологических лабораториях для прямого обнаружения вирусного антигена в клетках органов свиней, подозреваемых в заражении вирусом африканской чумы свиней. Внутриклеточный антиген обнаруживают люминесцентной микроскопией препаратов мазков-отпечатков, окрашенных ФИТЦ-иммуноглобулинами (специфические антитела к вирусу африканской чумы свиней, меченные флуоресцеинизотиацианатом). Лучшими органами для РПИФ являются селезёнка и лимфоузлы. Исследование может быть выполнено в течение 2-4 час [2].

Оценку результатов микроскопии проводят по условной четырех крестовой шкале при окуляре 10х20-объективе 10. В положительных случаях наблюдают сверкающую, желто-зеленого цвета флуоресценцию клеток с включениями или очаговыми флуоресцирующими комплексами диффузного и гранулярного антигена, в одном из 10-50 полей зрения.

При визуальном учёте реакцию считают положительной при окрашивании хромогенного субстратного раствора в лунках, в которых предварительно инкубировали исследуемые и специфический антиген в сине-зеленый цвет и отсутствии окрашивания субстрата в лунках, в которых предварительно инкубировали нормальный антиген.

Анализ по выявлению вируса АЧС включает выделение ДНК и амплификации специфического фрагмента в полимеразной цепной реакции и электрофорез в агарозном геле [3].

Реакция считается положительной, если полоса в соответствующем треке располагается в геле точно на таком же расстоянии от старта, что и полоса положительного контроля амплификации. Размер апликонов после проведения ПЦР- 485 п.н.

Реакция считается отрицательной, если в соответствующих треках полос не обнаружено или полосы не соответствуют по размеру фрагменту в контрольной пробе (т. е. располагаются на другом расстоянии от старта) [4].

Учёт результатов проводят по анализу кривых накопления флуоресцентного сигнала по каналу FAM с помощью программного обеспечения используемого прибора.

Положительными считают результаты реакции при значениях Ct, не превышающих 35.

Образцы, для которых не определено значение Ct (кривая флуоресценции не пересекает пороговую линию) – результаты считают отрицательными [4].

Белоусова Л.В., Троценко Н.И., Преображенская Э.А. Практикум по ветеринарной вирусологии. М.: КолосС, 2006. — 248 с [Текст] с.131-140.

Госманов Р.Г., Колычев Н.М. Ветеринарная вирусология М.: KoлoсC, 2006. — З04 c. [Текст] с.151-153.

Инфекционные болезни животных / Б.Ф. Бессарабов, А.А., Е.С. Воронин и др.; Под ред. А.А. Сидорчука. - М.: Колосс, 2007.-671с [Текст] с.206-275.

Шевченко А.А., Шевченко Л.В., Черных О.Ю., Шевкопляс В.Н. Лабораторная диагностика инфекционных болезней животных. Учебное пособие. Краснодар. – 2009. – 575 С. [Текст] с.340-402

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ: ДОСТОИНСТВА И НЕДОСТАТКИ

Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF

Классическая чума свиней (КЧС) – высококонтагиозная вирусная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, поражением кровеносной и кроветворной систем, крупозным воспалением легких и крупозно-дифтеритическим воспалением толстого кишечника [1].

Болезнь встречается более чем в 60 странах на всех континентах (за исключением США, Канады, Австралии, Скандинавских стран). Более других от этой инфекции страдают страны Европы, Азии, Южной и Центральной Америки, где хорошо развито свиноводство. Классическая чума свиней относится к списку А особо опасных инфекций и наносит большой экономический ущерб свиноводству как в развивающихся, так и в развитых странах с хорошо организованным ветеринарно-санитарным надзором [2]. В связи с вышеизложенным, разработка современных методов диагностики является актуальной проблемой современной науки и практики.

Лабораторная диагностика КЧС основывается на выявлении вирусного антигена, специфических антител, обнаружении вирусного генома и выделении вируса [5].

Обнаружение вирусной нуклеиновой кислоты. Методы ПЦР и ДНК-зонда позволяют дифференцировать пестивирусы (КЧС и вирусы диареи КРС) [1].

ПЦР. Выделяют рибонуклеиновую кислоту из образцов тканей животных фенольным методом, подвергают обратной транскрипции и амплифицируют [1].

Метод ДНК-зондов. В качестве гибридизационного зонда используют копмлементарную ДНК к участку гена белка Pl 25, меченную ³²Р [1].

Обнаружение вирусного антигена (белка).

РИФ. Из лейкоцитарного концентрата проб крови больных или подозрительных по заболеванию животных, а также костного мозга грудной кости делают мазки, а из органов - срезы [1]. Специфическое свечение в цитоплазме указывает на наличие вируса КЧС. В контрольных препаратах подобного свечения не должно быть [4].

РНГА с антительным эритроцитарным диагностикумом. Вирус считается обнаруженным при наличии гемагглютинации в суспензии из патологического материала в разведениях не менее чем 1:8 [1].

ИФА. В иммуноферментных конъюгатах используют иммуноглобулины баранов, инфицированных ВКЧС. Метод позволяет при постмортальной диагностике выявлять вирус со 100%-ной эффективностью без биологического накопления [1].

РДП слабочувствительна, дает положительный результат в 50 % случаев [1].

РИОЭФ (реакция иммуноэлектроосмофореза), в которой антигены и антитела движутся строго навстречу друг другу под действием электрического поля. РИЭОФ значительно чувствительнее, чем РДП, и скорее (за 30 мин) выявляет вирус в мезентериальных лимфоузлах и суспензии ткани поджелудочной железы [1].

Обнаружение вируса биопробой. Биопробу при диагностике ставят в сомнительных случаях. Из благополучного по инфекционным болезням хозяйства берут иммунизированных и неиммунизированных против КЧС поросят в возрасте 2-3 мес. массой 20-30 кг. В качестве материала для заражения используют 10%-ную суспензию органов (селезенки, лимфоузлов, костного мозга) или кровь от павших животных. Материал вводят подкожно. Диагноз на КЧС считают установленным, если неиммунизированные животные на 2–5-й день заболевают и в течение 7–10 дней погибают, а иммунизированные остаются здоровыми[1].

Выделение вируса в культуре клеток. Выделение вируса проводят на перевиваемой линии культуры клеток РК-15 (почки поросенка), выращенной на покровных стеклах в пробирках. Вирус КЧС в культуре РК-15 не вызывает ЦПД; поэтому индикацию его проводят с помощью серологических реакций РИФ и РНГА [1].

Гистологические исследования. Проводят с целью обнаружения специфических изменений нервных тканей. От павших или убитых свиней берут полушария головного мозга, мозжечка, аммоновых рогов, спинного мозга в различных участках. Препараты окрашивают гематоксилин-эозином. В большинстве случаев (70-93%) в ЦНС обнаруживают негнойный лимфоцитарный энцефаломиелит. В срезах, приготовленных из лимфоузлов, сердечной мышцы и печени, можно обнаружить присутствие ацидофильных внутриядерных телец-включений, несколько меньших, чем ядрышки [4].

Ретроспективная серологическая диагностика. В настоящее время в лабораторной диагностике КЧС используются три метода обнаружения специфических антител к ВКЧС:

непрямой метод РИФ [1]. Используют зараженные вирусом перевиваемые клетки (РК-15) на стеклышках. Титром AT к КЧС считают последнее разведение сыворотки, обеспечивающее зеленое свечение (на 2 креста) диффузного цитоплазматического АГ вируса при отсутствии подобного свечения в контролях [4].

Реакция нейтрализации (РН) в сочетании с РИФ. Ставят в культуре клеток РК-15, выращенной на покровных стеклах в пробирках. Учет реакции проводят через 48 ч. Присутствие вируса обнаруживают в люминесцентном микроскопе [1]. Отсутствие флюоресцирующих микробляшек (при наличии их в контроле вируса) в препаратах ВКЧС указывает на наличие в материалах специфических AT. Титром AT считают то предельное разведение сыворотки, при котором наблюдается полное подавление образования флюоресцирующих микробляшек [4].

ИФА в непрямой модификации. На миллипоровские фильтры, смоченные раствором АГ ВКЧС, наносят свиные сыворотки. Затем фильтры инкубируют в растворе кроличьего IgG (против IgG свиньи), меченого пероксидазой хрена. Опытные образцы окрашиваются в коричневый цвет, контрольные остаются бесцветными [4].

К ВКЧС восприимчивы свиньи всех пород и возрастных групп, особенно чистопородные, а также дикие кабаны [4]. Болезнь возникает в любое время года, протекает в виде эпизоотии [3].

Очень важно своевременно провести лабораторную диагностику классической чумы свиней, поскольку смертность достигает от 80 до 100 % [3].

Библиографический список

Белоусова, Р.В. Ветеринарная вирусология: учебник / Р.В. Белоусова, Э.А. Преображенская, И. В. Третьякова. – М.: КолосС, 2007. – 424 с.

Бессарабов, Б.Ф. Инфекционные болезни животных: учебник / Б.Ф. Бессарабов, А.А. Вашутин, Е.С. Воронин. – М.: КолосС, 2007. – 671 с.

Госманов, Р.Г. Ветеринарная вирусология: учебник / Р.Г. Госманов, Н. М. Колычев. – М.: КолосС, 2006. – 304 с.

Сюрин, В.Н. Вирусные болезни животных: учебник / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьёв, Н.В. Фомина. – Москва: ВНИТИБП. – 928 с.

Wenswoort, G. Topographical and functional mapping of epitopes on hog cholera virus wich monoclonal antibodies // J. gen. Virol. – 1989. – V. 70. – P. 2865-2876.

К ВОПРОСУ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ

В связи с вышеизложенным профилактика и лечение классической чумы свиней является актуальной проблемой ветеринарной науки и практики.

Вирус классической чумы свиней (ВКЧС) относится к семейству Flaviviridae, род Pestivirus, вид Classical swine fever virus [6]. Геном вируса - односпиральная РНК положительной полярности. Вирионы вируса диаметром 40-60 нм, с суперкапсидной оболочкой [1].

Источник возбудителя инфекции – больные животные, выделяющие вирус во внешнюю среду с мочой, фекалиями и секретами слизистых оболочек глаз и носа, а также реконвалесценты. Заражение происходит через пищеварительный тракт с инфицированными кормами и водой, а также через дыхательные пути и поврежденную кожу [4].

К ВКЧС восприимчивы свиньи всех пород и возрастных групп, особенно чистопородные, а также дикие кабаны [4]. Болезнь возникает в любое время года, протекает в виде эпизоотии; летальность – 80-100% [3].

Инкубационный период в зависимости от вирулентности вируса и резистентности животного длится 3–9 дней, иногда до 20 дней. Болезнь может протекать сверхостро, остро, подостро и хронически [1].

Сверхострое течение болезнинаблюдают редко и у молодых животных. Оно характеризуется повышением температуры тела до 41–42°С, угнетением, отсутствием аппетита и рвотой, появлением ярко-красных пятен на коже. Гибель наступает через 1–2 дня [1].

Острое течение сопровождается запором, затем поносом, а также слизисто-гнойным ринитом. На коже живота, внутренней поверхности бедер, шеи и основании ушных раковин появляются пустулы, заполненные желтоватым экссудатом. Позже на коже можно видеть точечные кровоизлияния, сливающиеся затем в темно-багровые пятна. Дыхание затрудненное, учащенное; ушные раковины, кожа живота и конечностей приобретает синюшную окраску. Больные животные погибают на 7–10-й день [1].

Подострое течениенередко бывает после острого переболевания. При этом болезньдлится до трех недель. Состояние свиней отягощается наслоением вторичных бактериальных инфекций: сальмонеллеза и пастереллеза. В случае осложнения чумы сальмонеллезом вторичные поражения наблюдают в желудочно-кишечном тракте (кишечная форма чумы). Запор сменяется поносом. Животные худеют и гибнут. Осложнение чумы пастереллезом ведет к развитию легочной формы чумы, сопровождаемой кашлем, признаками бронхопневмонии [1].

Хроническое течениеболезни наблюдается в течение нескольких месяцев.Проявляется оно тяжелым крупозно-дифтероидным поражением желудочно-кишечного тракта, гнойно-фибринозным воспалением легких и плевритом. Поносы сменяются запорами, прогрессирует исхудание [1]. Часто отмечаются некрозы кончиков ушей и хвоста [3]. Возможны аборты, мертворождаемость [1].

Лабораторная диагностика КЧС основывается на выявлении вирусного антигена, специфических антител, обнаружении вирусного генома и выделении вируса [7].

Профилактика.Общие профилактические меры должны быть направлены на защиту свиноводческих ферм и хозяйств от заноса вируса. С этой целью фермы комплектуют только здоровыми животными из благополучных хозяйств. Вновь ввезенных свиней переводят в основное стадо после 30-суточного карантинирования. Свиноводческие хозяйства должны функционировать по закрытому типу (быть огорожены, при въезде оборудуются дезинфекционные барьеры и ветсанпропускники и т. д.). Все поступающие для кормления свиней отходы пищевых предприятий подвергают обеззараживанию высокой температурой на кормокухне. На фермах поддерживают ветеринарно-санитарный порядок, систематически проводят профилактические дезинфекции помещений и транспорта [2].

Животные-реконвалесценты приобретают стойкий иммунитет, продолжающийся несколько лет. Пассивный иммунитет непродолжителен - до 10-12 дней [1].

Иммунитет при КЧС обусловлен вируснейтрализующими антителами. С 1980г. специфическая профилактика КЧС с успехом осуществляется живыми вакцинами из штаммов К и ЛК-ВНИИВВиМ. С помощью живой вакцины ЛК-ВНИИВВиМ можно создавать специфическую защиту от заболевания свиней уже через 48 ч после однократного внутримышечного ее введения. Новорожденных поросят вакцинируют перорально тотчас после рождения до приема молозива. Получена живая вакцина пероральной иммунизации диких кабанов. Инактивированные вакцины в настоящее время не применяют. Разработаны генно-инженерные вакцины против КЧС, но они пока не имеют широкого применения [1].

Лечение больных свиней нецелесообразно, так как выздоровевшие животные длительное время остаются вирусоносителями и вирусовыделителями. Больных свиней необходимо немедленно убивать на мясо. В неблагополучных фермах все свиноголовье подлежит убою на санитарных фермах или специально оборудованных убойных площадках. Трупы павших свиней сжигают [5].

Библиографический список

Белоусова, Р.В. Ветеринарная вирусология [Текст]: учебник / Р.В. Белоусова, Э.А. Преображенская, И. В. Третьякова. – М.: КолосС, 2007. – 424 с.

Бессарабов, Б.Ф. Инфекционные болезни животных [Текст]: учебник / Б.Ф. Бессарабов, А.А. Вашутин, Е.С. Воронин. – М.: КолосС, 2007. – 671 с.

Госманов, Р.Г. Ветеринарная вирусология [Текст]: учебник / Р.Г. Госманов, Н. М. Колычев. – М.: КолосС, 2006. – 304 с.

Сюрин, В.Н. Вирусные болезни животных [Текст]: учебник / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьёв, Н.В. Фомина. – Москва: ВНИТИБП. – 928 с.

Ханников, А.А. Справочник ветеринарного специалиста [Текст]: справочное пособие / А.А. Ханников. – СПб.: Литагент Мельников, 2011. – 455 с.

Wenswoort, G. Topographical and functional mapping of epitopes on hog cholera virus wich monoclonal antibodies // J. gen. Virol. – 1989. – V. 70. – P. 2865-2876.

Читайте также: