Набор для выявления антигена вируса чумы плотоядных иммуноферментным анализом ифа
Обновлено: 12.05.2024
Название (рус.) НАБОР ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНА ВИРУСА ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ АНАЛИЗОМ (ИФА) Состав и форма выпуска Набор состоит из 12 компонентов. Специфические компоненты: Специфический иммуноглобулин G(IgG) ВЧП, лиофилизированный - 1 флакон, 0,1 мл. Положительный контроль (K + ) - специфический антиген ВЧП, лиофилизированный - 1 флакон, 0,1 мл. Отрицательный контроль (K - ) - лизат клеток без вируса, лиофилизированный - 1 флакон, 0,1 мл. Конъюгат - меченый пероксидазой хрена специфический иммуноглобулин G к ВЧП, лиофилизированный - 1 флакон, 0,1 мл. Неспецифические компоненты: Карбонатно-бикарбонатный буфер (КББ): pH 9,4 - 9,6 жидкий - 1 флакон, 11 мл. 20-кратный концентрат фосфатно-солевого, содержащего твин 20, буферного раствора (ФСБТ), pH 7,2 - 7,4, жидкий - 2 флакона по 25 мл. Буферный раствор для разведения реагентов (БДР), pH 7,2 - 7,4, жидкий - 2 флакона по 20 мл. Субстратный раствор с перекисью водорода для разведения хромогена (СР), жидкий - 1 флакон, 5,1 мл. Хромоген - 3,3/, 5,5/ - тетраметилбензидин (ТМБ), жидкий - 1 флакон 5,1 мл. 1 М серная кислота, стоп-раствор, жидкий, 1 флакон, 5,1 мл. Плоскодонный полистироловый планшет 96-луночный - 1 шт. Компоненты набора выпускаются во флаконах. Набор содержит все необходимые для анализа компоненты. Дополнительно требуются микропипетки на 10, 100, 200 и 1000 мкл, мерная лабораторная посуда, дистиллированная вода, суховоздушный термостат с температурой 37 °C, спектрофотометр для иммуноферментного анализа со светофильтром на 450 нм. Фармакологические свойства Основан на взаимодействии иммобилизованного на поверхности лунок планшета специфического иммуноглобулина с антигеном ВЧП из исследуемой пробы и последующем выявлении полученного комплекса конъюгатом (меченым пероксидазой хрена специфическим иммуноглобулином G к антигену ВЧП). Связанная пероксидаза вызывает разложение находящейся в хромоген-субстратном растворе перекиси водорода и окисление хромогена. В лунках развивается окраска, интенсивность которой прямо пропорциональна количеству антигена в определяемой пробе. Показания Для выявления специфического антигена вируса чумы плотоядных (ВЧП) в биологическом материале от больных, подозреваемых на заболевание и экспериментально зараженных животных иммуноферментным анализом (ИФА). Набор рассчитан на проведение 45 анализов (в двух повторах). Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения нескольких серий анализов по мере поступления биоматериала. Дозы и способ применения Подготовка биологического материала. Для анализа используют пробы конъюнктивальных и назальных смывов от больных животных, дефибринизированную кровь или участки головного мозга (от павших или вынужденно убитых животных). Конъюнктивальные и назальные смывы исследуют в нативном виде. Из кусочков органов готовят 10 % суспензию на забуференном физрастворе (в набор не входит) и центрифугируют 10 минут при 2000 - 3000 об/мин. Анализируют полученный супернатант. Предназначенный для исследования материал можно хранить в морозильной камере бытового холодильника. Размораживать только перед анализом! Если животные были вакцинированы против чумы, исследования проводят не ранее, чем 10 дней после вакцинации. Подготовка рабочих растворов. Перед началом работы все компоненты выдерживают не менее 0,5 ч при комнатной температуре. Буфер для растворения специфического иммуноглобулина G - карбонатно-бикарбонатный буфер (флакон 5 - КББ) готов к употреблению. Рабочий раствор для промывки планшетов (ФСБТ). Содержимое флаконов 6 растворяют в 1000 мл дистиллированной воды. Готовый раствор стабилен 3 суток при 4 °С. Для более длительного хранения неиспользованный раствор замораживают и хранят при минус 20 °С. Раствор для блокировки свободной поверхности лунок и для растворения положительного (K + ) и отрицательного (K - ) контролей и конъюгата (флакон 7, БДР) готов к употреблению. Рабочий хромоген-субстратный раствор. Раствор хромогена (ТМБ - флакон 9) разводят субстратным раствором (флакон 8) в соотношении 1 к 1 и перемешивают. Для приготовления 5 мл рабочего раствора к 2,5 мл раствора ТМБ добавляют 2,5 мл субстратного раствора. Раствор готовят непосредственно перед использованием. Раствор специфического иммуноглобулина для сенсибилизации планшета. Содержимое флакона 1 растворяют в 11 мл КББ. Раствор готовят непосредственно перед использованием. Раствор положительного контроля (K + ). Содержимое флакона 2 - специфический антиген - растворяют в 2 мл БДР (флакон 7). Раствор готовят непосредственно перед использованием. Неиспользованный раствор фасуют в пробирки типа по 0,25 мл и хранят при температуре минус 20 °С и ниже до следующего исследования, избегая повторного замораживания. Раствор отрицательного контроля (K - ). Содержимое флакона 3 - лизат клеток без вируса ВЧП - растворяют в 2 мл БДР (флакон 7). Раствор готовят непосредственно перед использованием. Неиспользованный раствор фасуют в пробирки типа по 0,26 мл и хранят при температуре минус 20 °С и ниже до следующего исследования, избегая повторного замораживания. Раствор конъюгата. Содержимое флакона 4 - конъюгат-растворяют в 0,1 мл БМР (флакон 7) и доводят объем до 10 мл этим же буфером. Раствор готовят непосредственно перед использованием. Неиспользованный раствор фасуют в пробирки типа по 0,8 мл и хранят при температуре минус 20 °С и ниже до следующего исследования, избегая повторного замораживания. Раствор для остановки реакции (Стоп-раствор, флакон 10) готов к употреблению. Во все лунки планшета вносят по 100 мкл раствора специфического иммуноглобулина G. Планшет помещают в полиэтиленовый пакет и инкубируют 3 - 4 ч при 37 °С или 18 ч при 4 °С. Планшет промывают 4 раза буфером ФСБТ (300 мкл/лунка), каждый раз полностью удаляя жидкость из лунок постукиванием перевернутого планшета по фильтровальной бумаге. Во все лунки планшета вносят по 200 мкл буфера БДР. Планшет помещают в полиэтиленовый пакет и инкубируют 0,5 ч при 37 °C. Если количество образцов для исследования не позволяет использовать планшет полностью, то неиспользованные стрипы замораживают с раствором БДР. Стрипы помещают в полиэтиленовый пакет и хранят до момента использования при температуре от минус 20 до минус 40 0C, не допуская повторного замораживания. По мере необходимости стрипы размораживают, промывают раствором ФСБТ и используют в реакции. Планшет 2 раза промывают буфером ФСБТ. В Лунки A 1 - A 2 вносят по 100 мкл БДР - контроль конъюгата. В лунки C 1 - D 1 вносят по 100 мкл раствора отрицательного контроля (K - ). В лунки E 1 - F 1 вносят по 100 мкл раствора положительного контроля (K + ). В остальные лунки вносят по 100 мкл исследуемых образцов (по 2 лунки на каждый образец). Планшет помещают в полиэтиленовый пакет и инкубируют 1 ч при 37 °C. Планшет 4 раза промывают буфером ФСБТ. Во все лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего хромоген-субстратного раствора. Планшет инкубируют 20 минут при комнатной температуре в темном месте. Реакцию останавливают добавлением во все лунки планшета 50 мкл раствора 1 М серной кислоты. Визуальный учет. (Останавливать реакцию не рекомендуется). Лунки с положительным контролем должны иметь сине-голубое окрашивание до остановки реакции (желтое после остановки реакции). Лунки с отрицательным контролем и контролем конъюгата должны оставаться бесцветными (до и после остановки реакции). Лунки с исследуемыми образцами, в которых присутствует специфический антиген, имеют сине-голубое (желтое после остановки реакции) окрашивание различной интенсивности в зависимости от концентрации антигена. Реакцию считают положительной, когда заметна четкая разница в интенсивности окрашивания опытных и контрольных отрицательных (K - ) лунок планшета. Инструментальный учет. Результаты ИФА учитывают спектрофотометрически при длине волны 450 нм после остановки реакции кислотой. Положительной считают реакцию при соотношении величины оптической плотности в лунке с исследуемой пробой (P) к величине плотности в лунке с отрицательным контролем (N) (P/N) равном не менее 2,1. Величина оптической плотности для положительного контроля (K + ) должна быть не ниже 0,3 единиц. Особые указания В состав компонентов набора входят токсические консерванты - мертиолят и азид натрия. Не допускайте попадания их внутрь и на слизистые оболочки. Серная кислота вызывает раздражение при попадании на кожу и слизистые оболочки. Условия хранения В сухом, темном месте при температуре от 2 до 8 °С и относительной влажности не боле 80 %. Срок годности - 12 месяцев. Производитель НАРВАК НПО ЗАО, Россия
- Диагностические наборы ИФА
- Тест-системы ПЦР
- ИХМ
- Диагностические наборы РТГА
- Вакцины
- Противопаразитарные средства
Набор для выявления вируса африканской чумы свиней (АЧС) иммуноферментным методом
92 определения (46 в 2-х повторах)
Описание:
Набор предназначен для определения антигенов вируса африканской чумы свиней (АЧС ) в сыворотке крови, цельной крови, селезенке, печени и лимфатических узлах от инфицированных, больных и павших животных, а также в инфицированных культурах клеток.
Набор состоит из следующих компонентов:
1. Планшет для иммуноферментного анализа с адсорбированными в лунках моноклональными антителами к белку VP 73 вируса АЧС — 1 штука.
2. Положительный контроль (К +) – рекомбинантный белок VP 73 вируса АЧС, жидкость от розового до красного цвета, 1,0 см 3 -1 флакон.
3. Отрицательный контроль (К -) — буферный раствор, не содержащий антиген вируса АЧС, жидкость от голубого до синего цвета, 1,0 см 3 — 1 флакон.
4. 20-кратный концентрат фосфатно-солевого буфера с Твином 20 для промывания планшетов (ФСБТ ), прозрачная жидкость, бесцветная или с желтоватым оттенком, 25,0 с м³ — 2 флакона.
5. Буфер для разведения образцов и конъюгата (БР ), жидкость розового цвета, 25,0 см 3 – 1 флакон.
6. Конъюгат — моноклональные антитела к белку VP 73 вируса АЧС, меченные пероксидазой хрена, 50-кратный концентрат, прозрачная жидкость зеленого цвета, 0,3 с м³ — 1 флакон;
7. Субстратный раствор с перекисью водорода для разведения хромогена (СР ), бесцветная прозрачная жидкость, 5,1 см 3 -1 флакон.
8. Хромоген, тетраметилбензидин (ТМБ ), бесцветная прозрачная жидкость, 5,1 см 3 — 1 флакон.
9.1 М серная кислота (Стоп -раствор), бесцветная прозрачная жидкость, 5,1 см 3 — 1 флакон.
Набор рассчитан на проведение одновременного анализа 46 исследуемых проб биоматериала (в 2 повторах) и контрольных проб (в 2 повторах). Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения нескольких серий анализов по мере поступления биоматериала.
Время проведения анализа:
3–3,5 часа (не учитывая время подготовки материалов для исследования).
Принцип действия:
Специфические моноклональные антитела к белку VP 73 вируса АЧС, адсорбированные в лунках иммунологического планшета, образуют комплекс с антигеном вируса АЧС, содержащимся в пробе. Образующийся комплекс взаимодействует с конъюгатом (меченые пероксидазой хрена моноклональные антитела к белку VP 73 вируса АЧС). Связанная пероксидаза вызывает разложение находящейся в хромоген-субстратном растворе перекиси водорода и окисление хромогена. В лунках развивается окраска, интенсивность которой прямо пропорциональна количеству антигена в определяемой пробе.
Хранение:
Набор хранить в защищенном от света месте при температуре от 20 до 8°С. Не допускается замораживание компонентов набора.
Теоретические и практические достижения современной науки значительно расширили арсенал методов диагностики вирусных, паразитарных и бактериальных инфекций животных. Несмотря на то, что традиционные иммунологические методы по-прежнему широко используются для диагностики инфекционных болезней, метод иммуноферментного анализа (ИФА) занял ведущее место при проведении рутинных исследований во многих лабораториях мира.
Это обусловлено, во-первых, преимуществами ИФА как метода (высокая чувствительность и специфичность, доступность и стабильность реагентов, экспрессность, возможность инструментального учета результатов и автоматизации при проведении массовых исследований) и, во-вторых, появлением на рынке коммерчески доступных диагностических ИФА-наборов, обладающих вышеназванными преимуществами. В настоящее время ИФА, как основной метод диагностики, широко применяется в ряде Национальных программ борьбы с инфекционными болезнями животных во многих странах Западной Европы и Америки.
ИФА, в основе которого лежит высокоспецифическое взаимодействие антител с антигенами, широко используется для развития и совершенствования двух основных направлений современной лабораторной диагностики. К ним относятся методы, направленные на выявление антигена и методы, направленные на определение антител (табл.1).
Таблица 1. Применение ИФА в клинической практике
При этом ключевыми реагентами любой системы иммунологического анализа являются моноклональные антитела (МкА), специфичность и аффинность которых, во многом предопределяет основные аналитические параметры всех иммунохимических методов, и, прежде всего ИФА.
В последние годы специалистами НПО НАРВАК в сотрудничестве с ведущими отечественными и зарубежными учеными проводятся исследования направленные на разработку и внедрение в ветеринарную практику тест-систем на основе различных вариантов ИФА и с использованием МкА, предназначенных для иммунодиагностики этиологически и экономически значимых инфекционных болезней различных видов животных и птиц.
Основные показатели качества ИФА-наборов выпускаемых НПО НАРВАК
| Основные критерии, предъявляемые к диагностическим методам | Параметры тест-систем, производимых НПО НАРВАК |
| Специфичность | Использование моноклональных антител и рекомбинантных антигенов |
| Чувствительность | До 1-10 нг/мл |
| Воспроизводимость результатов | Коэффициент вариации 2-8 % (при сравнении результатов, полученных с использованием наборов разных серий) |
| Время проведения анализа | Время постановки реакции 3 – 4 часа с учетом всех необходимых процедур |
| Возможность автоматизированной обработки результатов и создания баз данных | Потребителям предоставляется программное обеспечение на все выпускаемые наборы |
| Комплектация наборов | Все компоненты наборов стандартизованы и готовы к применению |
| Срок годности наборов | Не менее 1 года при соблюдении условий хранения |
Перспективные разработки.
В настоящее время в НПО разрабатывается несколько диагностических иммуноферментных тест-систем, предназначенных для выявления антител к различным вирусным антигенам, в основе которых лежит использование моноклональных антител и рекомбинантных антигенов.
подробнее Купить
Сыворотка ящурная типо – и штаммоспецифическая для серологических реакций, используемая в диагностических целях (на типы А, О, Азия-1, Sat-1, Sat-2, Sat-3)
подробнее Купить
Набор для определения антител к аденовирусу птиц 4 серотипа группы 1 (синдром гидроперикардита) иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении
подробнее Купить
Набор для определения антител к вирусу инфекционного ларинготрахеита птиц иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении
подробнее Купить
подробнее Купить
Антиген ящурный штаммоспецифический сухой для серологических реакций (А, О, Азия-1, Sat-1, Sat-2, Sat-3).
подробнее Купить
подробнее Купить
Набор для определения антител к вирусу инфекционного энцефаломиелита птиц иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении
подробнее Купить
Набор для выявления антител к возбудителю реовирусной инфекции птиц иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении
подробнее Купить
Набор для выявления антител к Mycoplasma synoviae иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении
подробнее Купить
Набор для определения антител к пневмовирусу птиц иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении
подробнее Купить
Тест-система "Заразный узелковый дерматит ПЦР РВ скрининг-тест" ("lumpy skin disease PCR RT screening-test")
подробнее Купить
подробнее Купить
подробнее Купить
Тест-система для выявления генома вируса бешенства методом обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции "ВНИИЗЖ-бешенство-ОТ-ПЦР"
подробнее Купить
Набор для определения противоящурных антител в сыворотках крови животных в иммуноферментном анализе (тип О)
подробнее Купить
подробнее Купить
Набор для определения антител к Mycoplasma gallisepticum иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении
подробнее Купить
Набор для определения противоящурных антител в сыворотках крови животных в иммуноферментном анализе (тип Азия-1)
подробнее Купить
Набор для определения антител к вирусу инфекционного бронхита кур иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении
подробнее Купить
Набор для определения антител к вирусу инфекционной бурсальной болезни иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении
подробнее Купить
Набор для определения антител к вирусу синдрома снижения яйценоскости-76 иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении
подробнее Купить
Набор для определения противоящурных антител в сыворотках крови животных в иммуноферментном анализе (тип А)
подробнее Купить
Федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору (Россельхознадзор)
Диагностикумы ящура
Сыворотка ящурная типо – и штаммоспецифическая для серологических реакций, используемая в диагностических целях (на типы А, О, Азия-1, Sat-1, Sat-2, Sat-3)
подробнее Купить
Антиген ящурный штаммоспецифический сухой для серологических реакций (А, О, Азия-1, Sat-1, Sat-2, Sat-3).
подробнее Купить
Набор для определения противоящурных антител в сыворотках крови животных в иммуноферментном анализе (тип О)
подробнее Купить
Набор для определения противоящурных антител в сыворотках крови животных в иммуноферментном анализе (тип Азия-1)
подробнее Купить
Набор для определения противоящурных антител в сыворотках крови животных в иммуноферментном анализе (тип А)
подробнее Купить
подробнее Купить
подробнее Купить
Набор для обнаружения антител к неструктурным белкам вируса ящура иммуноферментным методом в сыворотках крови крупного и мелкого скота
подробнее Купить
Читайте также: