Вирусологические методы исследования гриппа
Обновлено: 25.04.2024
Клиника и диагностика гриппа. Современное лечение гриппа
Болезнь чаще всего начинается внезапно, ознобом и быстрым повышением температуры до высоких цифр, головной болью с локализацией в области лба и глазниц, мышечной болью, резкой слабостью. Ведущим синдромом является общая интоксикация, катаральные явления со стороны верхних дыхательных путей менее выражены. Интоксикация достигает апогея в первые-вторые сутки. В тяжелых случаях появляются головокружение, тошнота, возможны рвота, носовые кровотечения, нарушения сна, сознания, судороги.
Объективные данные обычно скудные: легкая одутловатость и гиперемия лица, глаза блестящие, кожа горячая и влажная. В первый день-тахикардия, а затем брадикардия; тоны сердца приглушены, АД вначале повышено, а позднее понижено. Несколько позднее присоединяются катаральные воспаления слизистых оболочек верхних дыхательных путей: насморк со скудным отделяемым, заложенность носа, першение в горле, болезненность за грудиной (трахеит), сухой болезненный кашель, охриплость, чувство стеснения в груди, одышка. Слизистые оболочки носа, глотки, гортани, особенно трахеи отечны и гиперемированы, иногда с кровоизлияниями.
В неосложненных случаях температура постоянного или ремитирующего характера длится 3-4 дня, реже 6-7 дней и снижается литически. Иногда температурная кривая имеет двугорбый характер.
Клинические проявления могут варьировать, что наиболее полно отражено в классификации, предложенной Ф.Г. Эпштейном. В зависимости от типа вируса, возраста больных и иммунитета формы гриппа могут быть бессимптомными (афебрильная форма гриппа), без выраженных катаральных явлений (акатаральная форма), тяжелые гиперпиретические с быстрым летальным исходом.
Наиболее частыми осложнениями гриппа являются бактериальные суперинфекции (пневмонии, другие очаговые инфекции).
В практике используют чаще всего серодиагностику, применяя метод исследования парных сывороток (кровь у больного берется в первые дни и спустя 5-7 дней); осуществляют постановку РТГА, РСК и др. Возможна экспресс-диагностика: берут мазки-отпечатки со слизистой носа и проводят иммунолюминес-центное исследование - свечение вируса гриппа наблюдается в цитоплазме, тогда как при аденовирусных инфекциях- в ядре. Для определения циркулирующего штамма вируса в данном эпидемическом сезоне проводят вирусологические исследования смывов из ротоглотки и материала, полученного тампоном из носа. Проводят заражение куриных эмбрионов и культур тканей.
Современное лечение гриппа
Во время лихорадки и спустя 2 дня больной гриппом должен соблюдать постельный режим. При гриппе, независимо от тяжести течения, работающим выдают лист нетрудоспособности на 5 дней, при необходимости его продлевают. Лечение основной массы больных проводится на дому. Показанием для госпитализации является тяжелое течение гриппа, наличие сопутствующих заболеваний легких, сердечнососудистой системы и др., при которых высока степень их обострений.
Рекомендуется молочно-растительная витаминизированная (особенно витамином С) диета, обильное питье теплой подкисленной жидкости (чай с лимоном, клюквенный морс, фруктовые соки без консервантов). Показано горячее питье из плодов малины, калины, эвкалипта, цветов ромашки и др., а также горячее молоко с медом.
Назначение противовирусных препаратов показано при тяжелом течении гриппа и больным гриппом с сопутствующими заболеваниями, обострение которых может представлять угрозу для жизни больного. При гриппе А хорошо зарекомендовали препараты этиотропного действия: ремантадин внутрь по схеме. В самом начале болезни показано применение человеческого лейкоцитарного или рекомбинантного интерферона по 3-5 капель в каждый носовой ход через 1-2 ч в течение 2-3 дней. Для лечения ринита используют оксалиновую мазь. При затрудненном носовом дыхании галазолин, нафтизин, эфедрин в виде капель в носовые ходы. Жаропонижающие препараты назначают только при гиперпирексии (аскофен, аспирин, парацетамол и др.); при температуре до 38,5°С назначение их нецелесообразно, так как лихорадочная реакция носит защитно-приспособительный характер (усиливается, в частности, выработка эндогенного интерферона).
Всем больным гриппом показано назначение поливитаминов, особенно аскорбиновой кислоты до 1,0 г в сутки. При мучительном кашле - кодтерпин, коделак, либексин и др. При нарушении сна - микстуру Бехтерева, валокордин.
Проводят дезинтоксикационную терапию: полиглюкин, реополиглюкин, 5% раствор глюкозы, гемодез, плазму в объеме парентерально вводимой жидкости не более 500-800 мл в сутки. Назначают сердечно-сосудистые препараты (коргликон, кордиамин, солюкамфокаин и др.); оксигенотерапию, при геморрагических проявлениях - аскорутин.
Антибактериальные средства назначают только при осложненных формах гриппа; назначение антибиотиков с целью профилактики осложнений недопустимо, так как они профилактическим действием не обладают.
Известно более 200 разновидностей вирусов, избирательно поражающих респираторный тракт человека (возбудителей ОРВИ).
У большинства возбудителей ОРВИ первичное размножение вирусов происходит в слизистой оболочке дыхательной системы, поэтому клиническая картина сходная, заболевание протекает в виде ринита, ринофарингита, как правило, в легкой форме. У детей раннего возраста вирусы могут поражать нижние отделы респираторного тракта, и болезнь протекает в более тяжелой форме в виде бронхитов, бронхиолитов, пневмоний. Наиболее тяжело протекающей острой вирусной респираторной инфекцией является грипп, который часто принимает эпидемическое распространение, характеризуется явлениями общей интоксикации, лихорадкой, поражением дыхательного тракта, нервной и сердечно-сосудистой систем. Максимальное число тяжелых форм течения инфекции наблюдается в период пандемий, обусловленных новым вариантом вируса гриппа.
Лаборатория оуществляет диагностику с помощью экспресс-методов, вирусологических и серологических методов исследования. Быстрая (экспресс) диагностика гриппа и ОРВИ:
1)метод флюоресцирующих антител (МФА) - основан на выявлении вирусных антигенов в клетках эпителия носовых ходов, конъюнктивы (при явлениях конъюнктивита). Исследуемый материал: мазки из носа, конъюнктивы, взятые в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни. Определяемые возбудители: - вирусы сезонного гриппа типа А (H1N1) - вирусы сезонного гриппа типа А (H3N2) - вирусы гриппа типа В - вирусы парагриппа 1, 2, 3 типов - аденовирусы - респираторно-синцитиальный вирус;
2) метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)- основан на обнаружении в клинических пробах генетического материала вирусов (РНК или ДНК)- является наиболее современным, высокочувствительным методом.
Исследуемый материал: мазки из носа и зева, взятые в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни, секционный материал. Определяемые возбудители:
- вирусы пандемического высокопатогенного гриппа типа А (H1N1)
- вирусы гриппа типа А
- вирусы гриппа типа В - вирусы парагриппа 1, 2, 3,4 типов
- аденовирусы - респираторно-синцитиальный вирус;
Вирусологическая диагностика - выделение вируса на чувствительной клеточной культуре с последующей идентификацией в реакции нейтрализации или ПЦР.
Этот метод отличается трудоемкостью и длительностью и используется, главным образом, для эпидемиологических и научных целей (изучается изменчивость вирусов, что помогает прогнозировать эпидемические подъемы гриппа, отбираются актуальные штаммы, пригодные для изготовления вакцин) Исследуемый материал: мазки из носа и зева (в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни).
- вирусы гриппа типа А (разные серотипы)
- вирусы гриппа типа В Серологическая диагностика является ретроспективной. Она выявляет прирост титров антител к возбудителям заболевания в парных сыворотках крови, что позволяет установить точную этиологию даже при отрицательных результатах других методов лабораторной диагностики, а также при бессимптомном или атипичном течении гриппа, широко применяется и для эпидемиологических целей. Исследуемый материал: сыворотки крови, взятые в начале заболевания и через 10- 14 дней.
Возбудители к которым определяется прирост титров антител:
- вирусы сезонного гриппа типа А (H1N1)
- вирусы сезонного гриппа типа А (H3N2) - вирусы гриппа типа В
- вирусы парагриппа 1, 2, 3 типов
В период подьема заболевамости гриппом и ОРВИ (в октябре- декабре 2009г.) вирусологической лабораторией обследовано методом флюоресцирующих антител (МФА) 432 человека. У 27% заболевших был выявлен аденовирус, у 8,3% - вирус парагриппа 3 типа, у 8% - респираторно-синцитиальный вирус, у 2% - вирусы парагриппа 1, 2 типов, у 0,2% - вирус сезонного гриппа типа А (H1N1).
При обследовании методом ПЦР 565 больных с подозрением на высокопатогенный грипп типа А (H1N1) РНК вируса обнаружена у 213 человек (в 38% проб). По даннным серологического обследования 67 больных ( в октябре и ноябре) заболевания гриппозной этиологии составили 4,3 % (грипп А(H1N1) сезонный - 2 человека), парагрипп 3 типа — 4,5% ( 3 человека), парагрипп 2 типа — 1,5% ( 1человек).
Важнейшим этапом исследований является получение полноценного клинического материала, в котором должно содержаться большое количество эпителиальных клеток, которые выстилают глубокие отделы нижних носовых ходов и служат местом размножения вирусов.
Правила забора мазка из носа для изоляции вирусов и люминесцентной микроскопии (РИФ).
Перед взятием материала полость носа больного очищается тампоном, освобождается от слизи, лейкоцитов, слущенных клеток (провести высмаркивание). Больной при взятии материала должен сидеть, откинувшись на спинку стула, с приподнятой кверху головой и дышать ртом. Детей до 7 лет, во избежании травм, необходимо посадить на колени ассистента, который будет удерживать руки и голову ребенка. Приподняв кончик носа левой рукой, в полость носа вводят сухой велюр-тампон (зонд на пластиковом аппликаторе) легким движением по наружной стенке носа. При этом палочку держат правой рукой как писчее перо, тампон вводят на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем велюр-тампон слегка опускают книзу, вводят в нижний ход под нижнюю раковину, делают легкое вращательное движение на пол-оборота и удаляют тампон вдоль наружной стенки носовой полости. Велюр-тампон сразу погружают в пробирку с 2 мл транспортной средой (палочку обломить так, чтобы флакон закрылся пробкой).
При необходимости практические навыки и консультацию можно получить у сотрудников вирусологической лаборатории.
Взятие материала от больного для ОТ-ПЦР исследования.
Исследования проводятся с целью мониторинга за циркуляцией вирусов гриппа и ОРВИ на территории Астраханской области по распоряжению или предписанию Управления Роспотребнадзора по Астраханской области.
Образец направления на лабораторное исследование:
на группу респираторных вирусов (грипп, парагрипп, РС-, аденовирусы)
на выделение вируса гриппа/ иммунофлюоресцентное исследование -РИФ / / ПЦР исследование _______________________________________________________________
Возраст (число, месяц, год)
ЛПУ, доставившее материал, отделение
Заболевания сердечно-сосудистой системы
Заболевания легочной системы
Вакцинация против гриппа (дата, серия)
Прием противовирусных препаратов (название, сколько дней)
Прибыл из зарубежной страны (указать страну)
Дата госпитализации в ЛПУ
Дата и время забора материала
Дата и время отправки в лабораторию
Дата и время доставки материала в лабораторию
Ф.И.О. лица проводившего забор клинического материала
(c) Управление Федеральной службы по надзору
в сфере защиты прав потребителей и благополучия
человека по Астраханской области, 2006-2022 г.
Список сокращений
Биобезопасность – биологическая безопасность
ЛПУ - лечебно-профилактические учреждения
МФА - метод иммунофлуоресцирующих антител
ОТ-ПЦР – метод обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции
Содержание
3. Координация деятельности учреждений, осуществляющих диагностику ВГА ………………………………………….. ………….
4. Правила сбора клинического (секционного) материала ………….
5. Упаковка и транспортирование образцов…………………….………
6. Порядок проведения лабораторных исследований …………………..
7. Обеспечение биобезопасности при проведении лабораторных диагностических исследований ………………………………………….
8. Библиографические источники ………………………………………
Приложение 1 (обязательное). Координаты референс-лаборатории, осуществляющей дополнительное подтверждающее тестирование ВГА ……………………………………………………………………….
Приложение 2 (обязательное).Способы взятия, условия хранения и транспортирования клинического материала для лабораторной диагностики ВГА ………………………………………………………
Приложение 3 (обязательное). Перечень вирусологических лабораторий и лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора, проводящих первичный скрининг на ВГА ……….
Приложение 4 (справочное).Стабилизирующая среда для хранения и транспортирования материала
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
Дата введения: с момента утверждения
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа типа А (ВГА), у людей
Временные методические рекомендации
1.1. В настоящих методических рекомендациях определены порядок сбора, упаковки, хранения, транспортирования и выполнения лабораторных исследований биологического материала от больных (и умерших) пациентов при лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа типа А (ВГА).
1.2 Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы лечебно-профилактическими и другими организациями, независимо от организационно-правовой формы.
2. Общие требования
3. Координация деятельности учреждений, осуществляющих диагностику ВГА
4 Правила сбора клинического (секционного) материала
- смывы из полости носа и ротоглотки (для ОТ-ПЦР-анализа);
- мазки из полости носа (для ОТ-ПЦР-анализа) и ротоглотки (для ОТ-ПЦР-анализа);
- носоглоточное отделяемое (для выделения вируса, ОТ-ПЦР-анализа).
5. Упаковка и транспортирование образцов
6. Порядок проведения лабораторных исследований
6.1 При отсутствии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей на данной территории лабораторные исследования с целью диагностики ВГА следует проводить у пациентов с респираторными заболеваниями тяжелого течения и неясной этиологии при наличии как минимум двух из перечисленных симптомов:
- фебрильная лихорадка с температурой тела выше 380C;
- насморк или заложенность носа;
- боль в горле;
- кашель;
- затрудненное дыхание или дыхательная недостаточность.
в комбинации хотя бы с одним из следующих эпидемиологических признаков в период 1-7 дней перед появлением симптомов :
- посещение мест регистрации заболевания ВГА у людей;
- тесный контакт (в радиусе 1 метра) с лицом, являющимся подозрительным, вероятным или подтвержденным случаем ВГА;
- контакт с погибшими или больными свиньями, уход, убой, разделка, подготовка к употреблению свинины, или контакт с их останкам или объектами окружающей среды на территории, где в течение последнего месяца были заподозрены или подтверждены случаи инфекции ВГА у животных или людей;
- манипуляции с образцами клинического материала (от животных или людей), подозрительным на зараженность ВГА в лаборатории или в иной обстановке;
- употребление сырых или недостаточно приготовленных продуктов из свинины на территории, где в течение последнего месяца были заподозрены или подтверждены случаи инфекции ВГА у животных или людей.
- тесный контакт с лабораторно подтвержденными инфицированными ВГА животными. Данный случай расценивается как подозрительный случай ВГА.
Вероятный случай ВГА - лицо, умершее от необъясненного острого респираторного заболевания, которое расценивается как эпидемиологически связанное по времени, месту и экспозиции с вероятным или подтвержденным случаем ВГА, а также лицо, отвечающее критериям для подозрительного случая, и одному из дополнительных критериев:
- инфильтраты или признаки острой пневмонии на рентгенограмме грудной клетки плюс признаки дыхательной недостаточности (гипоксемия, выраженное тахипноэ) или
- положительный результат лабораторного подтверждения инфекции, вызванной вирусом гриппа А, но недостаточное лабораторное подтверждение инфекции.
6.2. При наличии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей ВГА на данной территории показанием к обследованию являются клинические симптомы, приведенные в п.6.1. Дополнительные эпидемиологические признаки являются необязательными.
6.3. Исследование секционного материала от умерших на наличие вируса ВГА проводят при:
- сходстве клинической картины заболевания, приведшего к летальному исходу, с описанной в п. 6.1 или невозможности исключения такой клинической картины в анамнезе и при наличии в анамнезе хотя бы одного из перечисленных в п.п. 6.1 дополнительных эпидемиологических признаков.
6.4. Исследования проводят с использованием диагностических тест-систем, разрешенных к применению в установленном порядке.
6.5. При проведении первичного тестирования на наличие вируса ВГА должны исследоваться не менее 2 видов клинического материала (например: мазки из полости носа и из ротоглотки) с использованием метода - ОТ-ПЦР.
6.6. При получении отрицательных результатов исследования всех образцов выдается окончательный отрицательный ответ.
При отсутствии регистрации заболевания людей, вызванных ВГА, на данной территории при получении хотя бы одного положительного результата при использовании ОТ-ПЦР выдается предварительный положительный ответ и образцы направляют для подтверждающего тестирования в референс-лабораторию.
В период регистрации заболевания людей, вызванных ВГА на данной территории, обязательное подтверждающее тестирование не проводят, и при получении хотя бы одного положительного результата при использовании ОТ-ПЦР выдается окончательный положительный ответ.
6.7. При подтверждении в референс-лаборатории положительного результата первичного тестирования, при исследовании хотя бы одного вида клинического материала выдается окончательный положительный ответ.
При получении в референс-лаборатории отрицательных результатов исследования двух видов клинического материала проводится повторное тестирование. При получении аналогичного результата выдается окончательный отрицательный ответ.
7. Обеспечение биобезопасности при проведении лабораторных диагностических исследований
8 Библиографические источники:
Приложение 1 (обязательное)
РЕФЕРЕНС-лаборатории, осуществляющие ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ подтверждающее тестирование ВГА
По этим телефонам можно получить любую дополнительную разъясняющую информацию.
Приложение 2 (обязательное)
Способы взятия, условия хранения и транспортирования клинического материала для лабораторной диагностики ВГА
1. МАЗКИ ИЗ РОТОГЛОТКИ
1.1. Сбор материала
Мазки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки после предварительного полоскания полости рта водой.
После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.
1.2. Предобработка проб
Не требуется.
1.3. Метод исследования
1.4. Условия хранения материала
При температуре от 2 до 8°С – в течение трех суток.
При температуре минус 70°С или в жидком азоте – длительно.
Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала. Температура хранения минус 200С не допускается.
1.5. Условия транспортирования материала
В специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом:
- при температуре 0-4 0С – не более трех суток;
- при температуре минус 700С или в жидком азоте – длительно.
Температура транспортировки минус 200С допускается только с учетом однократного замораживания и транспортировки без размораживания не более 4 дней.
2. Мазки из полости носа
2.1. Сбор материала
Мазки (слизь) берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами. Зонд с ватным тампоном вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа.
Для ПЦР-анализа. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую микропробирку с 500 мкл стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.
Диагностика гриппа. Лечение гриппа. Профилактика гриппа.
Материалы для исследования при гриппе — смывы и мазки из носоглотки, мазки-отпечатки из носовой полости и кровь.
Основные методы диагностики гриппа — вирусоскопические, вирусологические и серологические. К методом экспресс-диагностики гриппа относят определение Аг вируса в мазках-отпечатках из носа и смывов носоглотки в РИФ и ИФА.
Выделение возбудителя гриппа проводят заражением 10-11-суточных куриных эмбрионов или, реже, различных клеточных культур. Вирусы гриппа проявляют слабый цитопатический эффект и чаще определяют феномен гемадсорбции. Типовую принадлежность вирусов идентифицируют в РСК; подтип гемагглютинина — в РТГА (вирусы гриппа агглютинируют эритроциты человека и различных животных); подтип нейраминидазы — в реакции ингибирования активности фермента.
Лечение гриппа
Препараты выбора при лечении гриппа —- амантадин или ремантадин, ИФН и его индукторы, противогриппозный у-глобулин. Терапевтические мероприятия следует начинать как можно раньше.
Профилактика гриппа. Иммунопрофилактика гриппа.
Разработаны методы активной и пассивной иммунопрофилактики гриппа. Для пассивной иммунизации применяют противогриппозный иммуноглобулин человека, приготовленный из крови доноров, иммунизированных гриппозными вакцинами.
Для активной иммунизации против гриппа применяют живые и инактивированные вакцины. Живые аттенуироеанные вакцины проявляют большую иммуногенность. Инактивированные вакцины включают вирионные (приготовлены из высоко-очищенных культур вирусов), субвирионные или расщеплённые (получают обработкой высоко-очищенных культур вирусов детергентами), субъединичные (содержат только гемагглютинин и нейраминидазу) препараты. Вакцинацию осуществляют в периоды наибольшего риска развития эпидемий. Она в большей степени показана лицам младшего и преклонного возраста, страдающим обструктивными лёгочными и сердечно-сосудистыми заболеваниями, а также сотрудникам ЛПУ.
Применение убитых вакцин от гриппа требует ежегодной ревакцинации; их эффективность не превышает 60-70%. Поскольку антигенные вариации возбудителя наблюдают часто, то набор Аг соответствующего вируса для иммунизации может быть определён только после начала вспышки заболевания.
Читайте также: