Выявление антител к вирусу болезни ауески
Обновлено: 26.04.2024
Успешное выполнение намеченной ХХVII съездом КПСС широкой программы развития в нашей стране агропромышленного комплекса в немалой степени зависит от хорошей организации ветеринарного обслуживания животноводства, четко налаженной работы ветеринарных диагностических лабораторий. Проводимые в лабораториях исследования позволяют правильно организовать мероприятия по предупреждению инфекционных и инвазионных болезней, а в случаях возникновения заболевания своевременно поставить диагноз и принять целенаправленные меры по его быстрейшей ликвидации.
В работе ветеринарных лабораторий все большее применение находят современные методы исследований, одновременно идет совершенствование диагностики многих заболеваний, предлагаются новые более чувствительные и достоверные методы, позволяющие полнее и на ранних стадиях выявлять заболевших животных и тем самым способствовать быстрейшему оздоровлению хозяйств.
Специалисты лабораторий постоянно расширяют перечень показателей и болезней, на которые проводятся исследования.
За последнее время утверждено значительное количество инструктивных документов по проведению лабораторных исследований, что позволило более четко организовать работу специалистов, улучшить качество исследований, получать сопоставимые результаты.
Оснащение лабораторий современным оборудованием позволяет внедрять в работу более точные инструментальные методы.
В своей работе ветеринарные лаборатории не могут использовать всего многообразия предлагаемых методов исследования из-за того, что они или недостаточно апробированы, или из-за сложности используемого оборудования. Имеют место случаи, когда предлагаемые различными авторами методы при определении одних и тех же показателей дают несовпадающие результаты. Поэтому в настоящий справочник включены методы лабораторных исследований патологического материала, полученного от больных, убитых или павших сельскохозяйственных животных, апробированные Центральной ветеринарной лабораторией и утвержденные в разные годы бывшим Министерством сельского хозяйства СССР.
Книга содержит методические указания по диагностике вирусных, риккетсиозных, хламидиозных болезней, а также методические указания по лабораторной диагностике паразитарных болезней животных и пчел.
Методики излагаются по единой схеме: взятие и пересылка патологического материала, методы его обработки, микроскопические исследования, включая световую и люминесцентную микроскопию, выделение возбудителей на куриных эмбрионах и культурах клеток, заражение лабораторных животных, гистологические исследования, идентификация и дифференциация возбудителей с использованием различных методов, определение биологической активности вакцин и исследования на напряженность иммунитета.
Методы лабораторных исследований, представленные в справочнике, унифицированы и стандартизированы, что создает возможность для стандартизации аппаратов, приборов, инструментов, посуды, реактивов, биопрепаратов и другого специального имущества, определения объема подготовки специалистов и степень оснащения ветеринарных диагностических лабораторий. Таким образом, стандартизация методов исследования является способом наведения строгого порядка в ветеринарной лабораторной работе.
Методические указания по лабораторной диагностике
болезни Ауески животных
(Рекомендованы 18 мая 1978 г.)
обнаружении и идентификации вируса этой болезни в патологическом материале методами непрямой гемагглютинации (РНГА) или иммуноосмофореза;
выявлении специфических антител в сыворотке крови больных и переболевших животных в РНГА или в реакции нейтрализации (PH) на культуре клеток (ретроспективная диагностика);
постановке биологической пробы.
1.2. РНГА, реакцию иммуноосмофореза и PH применяют для исследования патологического материала и сывороток крови только от невакцинированных против болезни Ауески животных.
1.3. Лабораторный диагноз на болезнь Ауески ставят при получении положительного результата хотя бы по одному из методов исследования, указанных в п. 1.1.
Окончательный диагноз на болезнь Ауески устанавливают на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных с учетом результатов лабораторного исследования.
2.1. В качестве исследуемого материала отбирают пробы патологического материала из разных участков головного мозга (полушарий, мозжечка, продолговатого мозга), заглоточных и бронхиальных лимфоузлов, легких, печени, селезенки, почек свиней, павших или вынужденно убитых в агональном состоянии.
Патологический материал измельчают, растирают в ступке и готовят суспензию (1:5) на физиологическом растворе для РНГА и суспензию (1:5) на веронал-мединаловом буферном растворе (pH 8,6) для метода иммуноосмофореза.
2.2.1. Компоненты реакции:
эритроцитарный диагностикум (эритроциты барана, сенсибилизированные антителами к вирусу болезни Ауески);
контрольный положительный антиген (вакцинный штамм вируса болезни Ауески) в рабочем разведении;
контрольный отрицательный антиген в рабочем разведении;
нормальная лошадиная сыворотка.
2.2.2. Подготовка исследуемого материала. Суспензию из органов (1:5) выдерживают одни сутки при температуре минус 20 °С в холодильнике, затем центрифугируют при 4 тыс. об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость очищают хлороформом, добавляя его в количестве 1/4 части объема жидкости, затем вновь центрифугируют при 4 тыс. об/мин в течение 20 мин.
Надосадочную жидкость используют в РНГА в качестве испытуемого антигена.
Испытуемые и контрольные антигены разводят 1:2 и выше в объеме 0,05 мл 1 %-ным раствором нормальной лошадиной сыворотки. Затем добавляют по 0,025 мл эритроцитарного диагностикума. Смесь встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 2 - 3 ч.
контрольный положительный антиген + эритроцитарный диагностикум;
контрольный отрицательный антиген + эритроцитарный диагностикум;
эритроцитарный диагностикум + 1 %-ный раствор нормальной лошадиной сыворотки.
2.2.4. Учет реакции. Учет РНГА проводят при полном оседании эритроцитов в контроле с отрицательным антигеном. Положительными считают те пробы антигенов, которые в разведении 1:8 и выше вызывают агглютинацию эритроцитов при положительном результате в контроле со специфическим антигеном и отрицательном результате с контрольным отрицательным антигеном.
2.3. Реакция иммуноосмофореза.
2.3.1. Компоненты реакции:
специфическая к вирусу болезни Ауески иммуноасцитическая жидкость белых крыс (ИАЖ);
контрольный положительный антиген;
контрольный отрицательный антиген;
Для постановки реакции необходимо иметь камеру из плексигласа для электрофореза, универсальный источник питания УИП-1, агар Дифко, веронал-мединаловый буфер с pH 8,6, стекла обезжиренные (9×12), металлический штамп, пробирки, центрифугу.
2.3.2. Подготовка исследуемого материала. Суспензию из органов (1:5) подвергают однократному замораживанию (при минус 15 - 20 °С) с последующим оттаиванием. Затем суспензию центрифугируют при 4 тыс. об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость используют в качестве испытуемого антигена.
2.3.3. Приготовление агаровой среды. Для постановки реакции готовят 1,5 %-ный гель из агара Дифко на веронал-мединаловом буфере с pH 8,6. Пропись буфера: веронал - 1,66 г, мединал - 10,51, молочнокислый кальций - 1,536 г, дистиллированная (слегка подогретая) вода - 1 л. В качестве антибактериального средства в агаровую среду вносят мертиолят из расчета 1:10000 и хранят в холодильнике.
Для постановки реакции агар, расплавленный и остуженный до 50 - 56 °С, наносят пастеровской пипеткой на стекла размером 9×12 см. Толщина агаровой пластинки 4 - 5 мм. Расход агара около 15 мл. В затвердевшем агаре выштамповывают лунки диаметром 5 мм, с расстоянием между лунками 5 мм.
2.3.4. Постановка реакции. В лунки, которые расположены ближе к катоду, вносят исследуемые антигены; в лунки, расположенные ближе к аноду, вносят специфическую асцитическую жидкость в рабочем разведении. Иммуноосмофорез проводят в камере для электрофореза на бумаге при напряжении тока 200 - 220 В в течение 1 - 2 ч. В качестве контроля используют положительный антиген со специфической асцитической жидкостью.
2.3.5. Учет реакции. Результаты иммуноосмофореза учитывают через - 2 ч с момента включения камеры в сеть.
Реакция считается положительной при образовании линии преципитации между лунками с исследуемыми антигенами и специфической асцитической жидкостью при положительном результате в положительном контроле (контрольный положительный антиген + ИАЖ) и отрицательном результате в отрицательном контроле (контрольный отрицательный антиген + ИАЖ).
3.1. Ретроспективная диагностика основана на обнаружении специфических к вирусу болезни Ауески антител в сыворотке крови больных и переболевших животных в реакции непрямой гемагглютинации, а также в реакции нейтрализации на культуре клеток.
3.2. Реакция непрямой гемагглютинации.
3.2.1. Компоненты реакции:
эритроцитарный диагностикум (эритроциты барана, сенсибилизированные вакцинным штаммом вируса болезни Ауески);
контрольная положительная иммуноасцитическая жидкость;
3.2.2. Подготовка исследуемых и контрольных сывороток. Перед постановкой РНГА исследуемые и контрольные сыворотки разводят 1:2 забуференным раствором, инактивируют в водяной бане при температуре 56 °С в течение 30 мин и истощают эритроцитами барана.
В 1 мл сыворотки вносят 0,1 мл 5 %-ной взвеси отмытых эритроцитов барана, выдерживают в термостате при температуре 37 °С в течение 30 - 40 мин и удаляют эритроциты центрифугированием. При массовых исследованиях сыворотки после истощения можно выдерживать в течение 12 - 24 ч при 4 °С, затем их исследуют в РНГА в разведении 1:2 и выше.
3.2.3. РНГА проводят по методике, описанной в п. 2.2.
3.2.4. Учет реакции. Результаты реакции учитывают при полном оседании эритроцитов в контроле с отрицательной асцитической жидкостью.
Положительными к вирусу болезни Ауески считают те пробы сывороток, в которых при разведении 1:8 и выше наблюдают агглютинацию эритроцитов.
3.3. Реакция нейтрализации.
3.3.1. Реакцию нейтрализации проводят на культуре клеток ПП, СПЭВ и первично-трипсинизированной культуре куриных фибробластов.
3.3.2. Компоненты реакции:
вирус болезни Ауески (вакцинный штамм);
исследуемые сыворотки крови (инактивированные);
контрольная положительная сыворотка.
3.3.3. Для постановки реакции необходимо предварительно провести пассаж вакцинного штамма вируса болезни Ауески на культуре клеток и определить его титр.
3.3.4. Чтобы провести пассаж вакцинного штамма вируса, содержимое ампулы разводят до нативного состояния (1:1), затем готовят разведение вируса 1:10 на питательной среде. Разведенный вирус в дозе 1 мл вносят в культуру клеток, выращенную в пенициллиновых флаконах, и инкубируют при температуре 37 °С. Через 24 ч клетки сморщиваются, округляются, монослой нарушается и образуются островки клеток. Через 72 ч монослой полностью нарушается и на стекле остаются единичные клетки.
Культуральный (вакцинный) штамм вируса хранят в холодильнике при температуре 4 °С и освежают один раз в 3 мес.
3.3.5. Для титрования вируса готовят десятикратные разведения вируса (от 10 -1 до 10 -8 ) на питательной среде без сыворотки. Каждым разведением в объеме 1 мл заражают отмытую раствором Хенкса культуру клеток (по 4 пенициллиновых флакона). Культуру клеток инкубируют при 37 °С, ежедневно просматривая ее под микроскопом. Окончательный учет результатов проводят через 72 ч.
Титром вируса считают наибольшее его разведение, вызывающее цитопатическое действие (ЦПД) в 50 % культур клеток. Титр вычисляют по методу Рида и Менча и выражают количество ЦПД в 1 мл.
3.3.6. Постановка реакции нейтрализации. PH ставят с дозой вируса, равной 100 ТЦД50 в 0,1 мл. Исследуемые сыворотки разводят 1:2 и выше в объеме 0,5 мл. К каждому разведению сыворотки добавляют равный объем (0,5 мл) вируссодержащей культуральной жидкости. Пробирки со смесью встряхивают и оставляют при температуре 37 °С в течение 60 мин. После инкубации смесь вируса с сывороткой вводят во флаконы с культурой клеток и результаты учитывают через 72 ч.
Для контроля заражают культуру клеток смесью вируса с контрольной положительной сывороткой, вирусом без сыворотки и одновременно в одном флаконе с культурой клеток сменяют питательную среду (контроль культуры клеток).
3.3.7. Учет реакции нейтрализации. Подавление цитопатического действия вируса специфической (контрольной) сывороткой и исследуемыми сыворотками при наличии ЦПД в контроле (культура клеток, зараженная вирусом без сыворотки) указывает на наличие специфических антител к вирусу болезни Ауески в сыворотке крови свиней.
4.1. Для постановки биопробы патологический материал (селезенку, печень, головной мозг, легкие) растирают в ступке с физиологическим раствором в соотношении 1:10. Полученную суспензию вводят внутримышечно кролику или кошке в дозе 1 мл. Через 2 - 3 сут после заражения при наличии вируса в патологическом материале животное заболевает.
Болезнь характеризуется беспокойством, зудом, расчесами на месте инъекции. Если зараженные животные погибают на 3 - 6-й день, но у них не наблюдалось зуда и расчесов, то патологический материал от павшего кролика (или кошки) пассируют еще раз на таких же животных.
Болезнь Ауески (лат. - MorbusAujeszky; англ. - Pseudorabies, Aujeszky'sDisease; псевдобешенство, инфекционный бульбарный паралич, инфекционный менингоэнцефалит) - остро протекающая болезнь многих видов домашних и диких млекопитающих животных, но чаще она регистрируется среди свиней, собак, кошек и синантропных грызунов. Описаны отдельные случаи болезни у человека. Плотоядные животные и свиньи в основном заражаются алиментарным путем, вирус также может проникать через кожу и видимые слизистые оболочки, у жвачных – при укусе кровососущими насекомыми. Синантропные грызуны являются основным резервуаром вируса болезни Ауески в природе [1].
Источником возбудителя инфекции являются больные животные, выделяющие вирус с истечениями из носа, глаз и влагалища, с мочой и молоком. У животных наиболее чувствительных видов (крупный рогатый скот, овцы, козы, собаки, кошки) болезнь протекает тяжело, почти всегда заканчивается летально, а поэтому среди них нет широкого носительства, эпизоотические вспышки не имеют тенденции к распространению и быстро обрываются. Свиньи и синантропные грызуны менее чувствительны к вирусу, среди них болезнь нередко заканчивается выздоровлением с длительным носительством вируса (у свиней до 2,5 года и более). Поэтому грызуны и свиньи - носители вируса Ауески - являются не менее опасными источниками возбудителя, чем больные животные [2].
Возбудителем заболевания является герпесвирус Suid herpesvius 1.
Family/ Семейство – Herpesviridae
Subfamily/ Подсемейство – Alphaherpesvirinae
Genus/ Род – Varicellovirus
Species/ Вид - Suid herpesvirus 1
Возбудитель—ДНК-содержащий вирус, репродуцируемый в ядре клетки.
Впервые установил и описал болезнь Ауески в Европе венгерский ученый А. Ауески в 1902 г. Вирионы содержат 2-спиральную линейную ДНК.
Установлено, что генетическая карта этого вируса циркулярна. Показано влияние пассирования этого вируса. Идентифицировано 2 клона, различающихся по картам рестрикции по сравнению с исходным штаммом ВБА. ВБА состоит из одетого нуклеокапсида, который окружает линейный геном из ДНК мол.м. 145 кД. Геном вируса составляет 30-кратный размер самого маленького известного ДНК-содержащего патогена свиней (например, парвовируса свиней) и является настолько большим, чтобы быть достаточным для кодирования около 100 протеинов [3].
Вирус чувствителен к эфиру и хлороформу. Быстро (за 15-20 мин) инактивируется дезинфицирующими растворами: горячим 3%-ным раствором гидроксида натрия, 20%-ной взвесью свежегашеной извести, 1%-ным раствором формальдегида. Растворы креолина и карболовой кислоты обладают слабым вирулицидным действием. В навозной жиже летом вирус сохраняет активность в течение 1 мес, зимой - около 3 мес, в гниющих трупах - до 1 мес. Ультрафиолетовые лучи обезвреживают ВБА за 1 мин. При гниении вирус разрушается самое позднее через 11 дней. По отношению к высокой температуре вирус нестоек. Так, при нагревании до 60°Сон погибает в 30 минут, при 70° - в 10 - 15 минут, при 80° - в 3 минуты и при 100° - моментально [4].
В организме вирус индуцирует образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и преципитирующих антител. Антигенных вариантов у него не обнаружено, но в культуре клеток установлены вирусы двух типов: крупнобляшечные (вызывают у восприимчивых животных характерную клиническую картину) и мелкобляшечные (непатогенны для животных.
Болезнь Ауески следует дифференцировать от классической чумы свиней, болезни Тешена, бешенства, гриппа, сальмонеллеза, отечной болезни, листериоза, стрептококкоза, кормовых токсикозов, А- и Д-авитаминозов, у других видов животных - преимущественно от бешенства [5].
1.Бессарабов, Б.Ф Инфекционные болезни животных [Текст]: учебник / Бессарабов Б.Ф. - М.: КолосС, 2007,с 186
2.Букринская, А.Г. Вирусология [Текст]: учебник / Букринская А.Г. - М.: Медицина, 2004,с 113
3.Белоусова, Р.В. Ветеринарная вирусология [Текст]: учеб.пособие / Белоусова Р.В. Преображенская Э.А., Третьякова И.В., - КолосС, 2007,с 178
4.Богомолов, Б.П. Дифференциальная диагностика инфекционных болезней [Текст]:учебник / Богомолов Б.П.-М.: ДизайнПресс, 2004; 18–25
5. Пруцаков, С. В. Инфекционные болезни животных [Текст]:учебник / Пруцаков С.В.-М.:КолосС,2009,С. 19
Болезнь Ауески - острая вирусная болезнь всех видов сельскохозяйственных, домашних, диких и других животных; характеризуется поражением центральной нервной системы, сильным зудом и глубокими расчесами (у различных видов животных, кроме свиней).
Болезнь вызывает ДНК-содержащий вирус семейства герпесвирусов. Возбудитель имеет высокую патогенность для различных видов животных.
К болезни восприимчивы различные виды животных, в том числе сельскохозяйственные (свиньи, крупный и мелкий рогатый скот, лошади), домашние (собаки, кошки, куры, утки), лабораторные (кролики, морские свинки, белые крысы, мыши), пушные звери (песцы, норки, соболи и др.), грызуны (крысы, мыши) и другие животные. Однако наиболее восприимчивы к болезни свиньи, которые являются основным резервуарным хозяином возбудителя псевдобешенства. При этом у взрослых свиней болезнь протекает обычно доброкачественно, но у новорожденных поросят летальность составляет 70-100%. Человек маловосприимчив к заболеванию [1].
Для активной специфической иммунизации болезни Ауески используются:
Сухая культуральная вирус-вакцину ВГНКИ против болезни Ауески.
Вакцину применяют для профилактической иммунизации животных в неблагополучных и угрожаемых по болезни Ауески хозяйствах. В неблагополучных хозяйствах свинопоголовье вакцинируют с двухнедельного возраста двукратно с интервалом 20-25 дней:
- поросят-сосунов в возрасте 2-15 дней при первой прививке вакцинируют подкожно, при второй - внутримышечно. Поросят-сосунов, привитых в возрасте 15 дней, после второй прививки ревакцинируют через 2 месяца однократно.
- поросятам старше 20-дневного возраста и взрослым свиньям при первой и второй прививках вакцину вводят внутримышечно.. Иммунитет у животных после первой вакцинации наступает через 5-7 дней и у двукратно привитых сохраняется 15-16 месяцев. Вакцину выпускают в стеклянных флаконах.по 4 см3, содержащих 25, 50 иммунизирующих доз.
Вакцину хранят в сухом, темном помещении при температуре не выше 100С или при минусовой температуре. Срок годности18 месяцев со дня изготовления [2].
Вакцина ИНГЕЛЬВАК АУЕСКИ MLV
Вакцина Ингельвак Ауески MLV состоит из двух компонентов: лиофилизированная таблетка (антигенный компонент), растворитель. Вакцина содержит антигенный компонент - маркированный по гликопротеину gЕ аттенуированный штамм Bartha К-61 вируса болезни Ауески, растворитель (стерильная дистиллированная вода). По внешнему виду вакцина представляет собой сухую пористую массу белого цвета, растворитель - бесцветную прозрачную жидкость. Вакцина предназначена для профилактики болезни Ауески у свиней всех возрастных групп в угрожаемых и неблагополучных по данной болезни хозяйствах. Вакцина вызывает формирование иммунного ответа у свиней к болезни Ауески, через 2-3 недели после применения, который сохраняется не менее 4-6 месяцев. Поросята, полученные от вакцинированных свиноматок, имеют колостральный иммунитет в течение первых 7-10 недель жизни. Вакцину можно вводить животным, начиная с трёхдневного возраста, однократно внутримышечно в область шеи за ухом в объеме 2 мл с соблюдением общепринятых правил асептики и антисептики или 2 мл интраназально (по 1 мл в каждую ноздрю). Вакцину разводят растворителем непосредственно перед введением и тщательно встряхивают. В неблагополучных по болезни Ауески хозяйствах поросятам раннего возраста рекомендуется интраназальная вакцинация. Поросята, полученные от иммунных к вирусу болезни Ауески свиноматок и привитые в первые дни жизни, должны быть повторно вакцинированы через 30-90 дней, когда снизится уровень колостральных антител. Вакцинацию поросят, предназначенных для откорма, проводят не ранее 9-10-недельного возраста с ревакцинацией через 3-4 недели. Ремонтные свинки должны быть вакцинированы не позднее, чем за две недели до осеменения и ревакцинированы не позднее, чем за три недели перед опоросом. Ревакцинация супоросных свиноматок проводится однократно не позднее трёх недель до опороса. В случае возникновения болезни в неблагополучных хозяйствах супоросные свиноматки вакцинируются без ограничений. Хряки вакцинируются без ограничений не реже двух раз в год. Вакцина АУСКИПРА-GN.
Вакцина предназначена для специфической профилактики болезни Ауески в благополучных, угрожаемых и неблагополучных хозяйствах.
Вакцинации подлежат только здоровые животные.
Вакцину вводят внутримышечно в область шеи в объеме 2,0 мл. Поросята на откорме: в благополучных хозяйствах – в возрасте 12-13 недель внутримышечно однократно, в угрожаемых и неблагополучных – в возрасте 21 дня – интраназально, затем в возрасте 10-11 и 13-14 недель двукратно одной дозой внутримышечно. Племенные не иммунные свиноматки и хряки: внутримышечно дважды с интервалом 3-4 недели, затем ревакцинируют каждые 4 месяца. Супоросные свиноматки: за 4-6 недель до опороса внутримышечно. При вынужденной (экстренной) вакцинации одномоментно иммунизируют все стадо (свиноматок, хряков и поросят) внутримышечно [4].
Набор для выявления антител к антигену gB вируса болезни Ауески иммуноферментным методом
184 определения (92 в 2-х повторах)
Описание:
Набор рассчитан на проведение на одном планшете одновременного анализа 46 исследуемых проб сыворотки крови и двух контрольных проб (в 2-х повторах). Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения нескольких серий анализов по мере поступления биоматериала.
В состав набора входят:
- 2 планшета для иммуноферментного анализа с адсорбированным в лунках гликопротеином gB ВБА;
- положительный и отрицательный контроли;
- Моноклональные антитела к антигену gB вируса болезни Ауески, меченные пероксидазой хрена (Конъюгат )
- неспецифические химические компоненты.
Время проведения анализа:
Принцип метода:
Метод основан на конкурентном взаимодействии конъюгированных с пероксидазой моноклональных антител к эпитопу gB гликопротеина ВБА и сывороточных специфических антител с иммобилизованным на поверхности иммунологического планшета гликопротеином gB.
При отсутствии в исследуемой сыворотке специфических антител моноклональный конъюгат свободно взаимодействует с иммобилизованным gB, и после добавления субстрата и хромогена в лунке развивается окраска. Если исследуемая сыворотка содержит специфические антитела, то происходит их взаимодействие с иммобилизованным gB, его частичная или полная блокировка, в результате чего связывание антител конъюгата с антигеном не происходит, или происходит частично и, соответственно, окрашивание отсутствует или интенсивность окраски снижается. Таким образом, интенсивность окраски обратно пропорциональна количеству антител в исследуемой сыворотке.
Хранение:
Набор хранят в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°С.Замораживание реагентов набора не допускается.
Y.V. Shemelkov, A.P. Kotelnikov, T.S. Koulikova,
A.M. Mishin, O.A. Verkhovsky
Institute for Diagnosis and Prevention of Human and Animal diseases
T.I. Aliper
Болезнь Ауески (БА ) – острая вирусная инфекция, протекающая в виде эпизоотии или спорадических случаев. К ней восприимчивы многие виды домашних и диких млекопитающих. Характеризуется признаками поражения головного и спинного мозга, легких, сильным зудом и расчесами (у всех видов животных кроме свиней), а также септицемией. Наносит свиноводству значительный экономический ущерб, обусловленный большим отходом молодняка, низкой эффективностью откорма и непригодностью использования для племенного разведения выживших животных. Заражение свиноматок приводит к резкому нарушению воспроизводства стада из-за абортов и рождения неполноценных поросят. Вирус часто является первичной причиной пневмонии свиней [1, 2, 6, 7].
Возбудителем БА является ДНК-содержащий вирус из рода Varicellovirus семейства Herpesviridae, вызывающий характерное цитопатогенное действие при культивировании в первичных и перевиваемых культурах клеток. Патоген относится к пантропным, хотя склонен к нейро- и пневмотропизму, кроме того он способен поражать клетки иммунной системы, вызывая иммунодефицитное состояние [6, 7]. У переболевших свиней БА переходит в латентную форму, при которой возбудитель может пожизненно персистировать в клетках центральной нервной системы, миндалин и лимфатических узлов. Его геном интегрируется в ДНК клетки хозяина и при определенных обстоятельствах он реактивируется и инициирует новый цикл размножения агента, провоцируя возникновение заболевания и выделение вируса во внешнюю среду, что сопровождается заражением восприимчивых животных. Провоцирующим фактором, в данном случае выступают различные стрессовые ситуации [2, 5].
Диагностика БА направлена на обнаружение антигена или ДНК вируса, выделение возбудителя в культуре клеток, а также выявление инфицированных животных серологическими методами, среди которых основным и утвержденным OIE является иммуноферментный анализ (ИФА ) [2, 4, 11].
До появления маркированных вакцин специфическая профилактика БА базировалась на применении инактивированных или живых аттенуированных вакцин, обладающих своими достоинствами и недостатками [2, 3]. С их помощью удается существенно снизить инфекционный фон и сократить экономические потери от заболевания, но они не решают проблему инфицирования поголовья и распространения вируса среди свиней. Эффективно и экономически целесообразно ликвидировать БА можно лишь сочетанием вакцинации, диагностики и выбраковки инфицированных животных [2].
В настоящее время в мире широко используются две стратегии искоренения БА. Первая предусматривает полное отсутствие вакцинации и постоянный серомониторинг с последующей выбраковкой положительно реагирующих животных. Вторая, основанная на стратегии DIVA (от англ. Differentiating Infected from Vaccinated Animals – дифференциация инфицированных и вакцинированных животных), реализуется применением маркированных вакцин. Вирусы, из которых изготавливают такие вакцины, должны иметь генетические и, соответственно, антигенные отличия от полевых штаммов возбудителя, которые легко установить серологическими методами. Как правило, с этой целью используют вакцинный вирус, маркированный по гликопротеину gE. В последующем иммунизированных им животных легко отличить от естественно инфицированных по отсутствию антител к гликопротеину gE при наличии антител к другому гликопротеину (gВ ) вируса БА или специфических вируснейтрализующих антител. Серопозитивных к гликопротеину gE свиней выбраковывают как естественно инфицированных [2, 3, 6]. Несмотря на то, что в настоящее время многие страны свободны от БА или контролируют ее посредством стратегии DIVA, не исключены случаи появления новых высоко патогенных штаммов возбудителя болезни. К примеру, в 2012 – 2013 гг. подобная вспышка БА произошла в южных регионах Китая, следствием ее стали значительные экономические потери [9]. Кроме того, существует достаточно активная циркуляция возбудителя БА в популяции дикой фауны, что способствует поддержанию природного резервуара инфекции [6].
В нашей стране вакцинация против БА является обязательной, для чего используют широкий спектр отечественных и зарубежных препаратов, в том числе и немаркированных, после применения которых невозможно дифференцировать поствакцинальный иммунный ответ от постинфекционного [1, 3, 8].
Полученную вируссодержащую суспензию лиофилизировали с добавлением защитной среды высушивания.
Полученные данные статистически обрабатывали общепринятыми методами с использованием программ Microsoft Office Excel 2010, Stat Plus 2009.
Результаты исследований и обсуждение. На первом этапе работы установили, что введение разработанной вакцины в разных дозах стимулирует формирование гуморального иммунного ответа уже после первой инъекции, но уровень специфических антител зависит от инфекционного активности вируса (табл . 1, рис. 1). В этом же эксперименте подтвердили сохранение делеции гена, кодирующего синтез gE, маркированным вирусом независимо от его концентрации и проводимых манипуляций (табл . 1).
Читайте также: