Белки бактерий туберкулеза cfp10 esat6

Обновлено: 12.05.2024

Туберкулиновая проба Манту, в просторечье “пуговка” - это специфический диагностический тест (не путать с прививкой!), применяемый при массовом обследовании населения на туберкулез.

Для проведения туберкулиновых проб используют туберкулин, который по своему составу является сложным соединением. Он не содержит живых или убитых микобактерий туберкулеза, а только продукты их жизнедеятельности, элементы микробной клетки и часть среды, на которой росли микобактерии туберкулеза.

На введение туберкулина возникает ответная аллергическая реакция (положительная туберкулиновая проба) у привитых вакциной БЦЖ против туберкулеза (поствакцинальная аллергия) и у инфицированных микобактериями туберкулеза (инфекционная аллергия). В обоих случаях в организме обследуемого находятся туберкулезные палочки. Только в первом случае они внесены с вакциной BCG и поддерживают иммунитет к туберкулезу, а в другом попали в организм из окружающей среды и являются вирулентными, т.е. в определенных условиях могут вызвать заболевание.

Учитывая такую низкую специфичность (то есть проба положительная и у здоровых, и у больных людей), сама по себе положительная реакция Манту не является 100% доказательством инфицирования туберкулезом.

Чаще всего врачу приходится решать, что стоит за положительной реакцией - вакцинация или инфицирование. В случае неверной интерпретации он может либо необоснованно назначить профилактическую противотуберкулезную терапию, либо недооценить положительную реакцию, принять ее за проявления поствакцинальной аллергии – и опоздать с выявлением и лечением имеющегося туберкулеза.

В настоящее время разработаны более эффективные тесты, которые могут определять наличие в организме именно микобактерий туберкулеза, способных вызвать болезнь.

Внутрикожный диагностический тест с аллергеном туберкулезным рекомбинантным – ДИАСКИНТЕСТ®

Диаскинтест® (Аллерген туберкулезный рекомбинантный в стандартном разведении) - инновационный внутрикожный иммунологический диагностический тест, который представляет собой рекомбинантный белок, содержащий два связанных между собой антигена — ESAT6 и CFP10, характерных для патогенных штаммов микобактерий туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis) 1 . Данные антигены отсутствуют в вакцинном штамме Mycobacterium bovis BCG и у большинства нетуберкулезных микобактерий, поэтому Диаскинтест® вызывает иммунную реакцию только на микобактерии туберкулеза и не дает ложной реакции, связанной с вакцинацией БЦЖ.

То есть Диаскинтест выявляет состояния, когда человек действительно нуждается в более тщательном дообследовании и проведении профилактической терапии для предупреждения развития заболевания, не зависимо от результатов вакцинации БЦЖ.

Диаскинтест® обладает практически 100% чувствительностью и специфичностью 2 , сводя к минимуму вероятность развития ложноположительных реакций 3 , и позволяет диагностировать и латентную (скрытую) инфекцию, и активный туберкулезный процесс, в том числе на ранних этапах развития.

Техника постановки Диаскинтеста и учета результатов идентичны пробе Манту с туберкулином 4 . Постановка теста не требует наличия специально оснащенной лаборатории и исключает необходимость внутривенных манипуляций, что очень важно при обследовании детей, особенно младшего возраста!

С 2017 года применение Диаскинтеста в скрининге туберкулеза у детей старше 7 лет и подростков регламентировано Приказом Минздрава России №124н от 21 марта 2017 года 5 .

Диагностические лабораторные тесты: T-SPOT.TB

T-SPOT.TB является in vitro иммунологическим диагностическим тестом, направленным на определение специфического гамма-интерферона в крови пациента, который вырабатывается, если в организме человека есть антигены ESAT-6 и CFP-10, которые характеры только для Mycobacterium tuberculosis. В тесте определяется число Т-клеток, отвечающих на стимуляцию антигенами ESAT-6 и CFP-10. Эти антигены не выявляются во всех штаммах БЦЖ и у представителей семейства нетуберкулезных микобактерий. Чувствительность и специфичность Т-SPOT.TB, так же как и Диаскинтеста, по данным исследователей превышает 90,0% 6 .

Лабораторный тест позволяет диагностировать и латентную (скрытую) инфекцию, и активный туберкулезный процесс.

Обзор

Автор

Редакторы

Спонсором приза зрительских симпатий выступил медико-генетический центр Genotek.

Тем не менее диагностика — это еще не диагноз, и результат любого теста не является истиной в последней инстанции. Диагноз же по-прежнему ставят, исходя из нескольких составляющих:

клинической картины;
наличия контакта с туберкулезным больным;
рентгенографии легких, флюорографии или компьютерной томографии;
результатов диагностических тестов.

Однако большинство этих методов диагностируют туберкулез постфактум — только скрининговые тесты помогают выделить лиц с высоким риском развития заболевания или с только зарождающимся процессом. И уже более 100 лет основным методом массовой диагностики туберкулеза является туберкулиновая проба Манту 2 ТЕ (содержащая 2 туберкулиновые единицы). Тест спорный, со множеством ложноположительных результатов, но именно его используют во всем мире и отказываться пока не собираются.

Проба Манту

В мире используют 3 вида туберкулина (рис. 1): датский препарат PPD (purified protein derivative) RT 23, американский PPD-S и российский — PPD-L. Различаются они видами микобактерий, из которых были получены: при производстве датского и американского препаратов используют только M. tuberculosis, а при производстве российского — смесь из M. tuberculosis и M. bovis (микобактерии, вызывающей туберкулез у крупного рогатого скота; на основе этого штамма была разработана вакцина БЦЖ). Различие в составах туберкулина обусловливает разные границы положительного результата: 15 мм для детей, привитых БЦЖ, и не более 10 мм для непривитых детей до 5 лет у датского препарата, не более 10 мм у американского и 5 мм у российского [4].

Рисунок 1. Препараты туберкулина

Диагностику с помощью пробы Манту проводят следующим образом: небольшое количество туберкулина вводят под кожу чуть выше запястья и через 72 часа оценивают реакцию, которую считают положительной, если в месте введения появляется припухлость (папула) более 5 мм в диаметре. В зависимости от ее размера, различают степень реакции от отрицательной (0–1 мм) до резковыраженной, или гиперергической (17 мм и более у детей и подростков, 21 мм и более у взрослых) [5]. И тут начинаются трудности, потому что у привитых БЦЖ реакция Манту положительна [6]! Мало того, чем больше поствакцинальный рубец, тем выше чувствительность к туберкулину [7]. Поэтому у привитых БЦЖ оценивают не только диаметр папулы, но и размер поствакцинального рубчика (табл. 1).

Таблица 1. Соотношение размера папулы и рубчика после прививки БЦЖ. [8]

Срок, прошедший с момента вакцинации БЦЖ	Размер рубчика после БЦЖ	Привитый иммунитет (мм)	Неясная причина	Подозрение на инфицирование
1 год	6–10 мм	5–15 мм	16 мм	Более 17 мм
	2–5 мм	5–11 мм	12–15 мм	Более 16 мм
	0 мм	2–4 мм	5–11 мм	Более 12 мм
2 года	Вне зависимости от размера	Уменьшение размера папулы или прежний ее размер	Увеличение размера на 2–5 мм от предыдущего положительного результата	Реакция изменяется на положительную или папула увеличивается более чем на 5 мм
3–5 лет	Вне зависимости от размера	5–8 мм либо уменьшение размера папулы	Увеличение размера на 2–5 мм за последний год или отсутствие тенденции к уменьшению	Изменение на положительную (5 мм) реакцию или увеличение папулы на 6 мм; 12 мм при впервые поставленной пробе; изменение предыдущего размера на 2–4 мм или размер в 12 мм
6–7 лет	Вне зависимости от размера	0–4 мм	5 мм	6 мм и более
7–9 лет	Если в 7 лет ребенку была сделана ревакцинация БЦЖ, реакция Манту вновь становится положительной и нормы повторяются	0–4 мм	5 мм	6 мм и более
Взрослые	Отрицательная реакция, покраснение любого диаметра; папула до 4 мм	Более 5 мм

Безусловно, метод оценки результата довольно субъективный. Но главное, папулу надо еще правильно измерить, зафиксировав только размер выпуклой части и игнорируя покраснение вокруг нее (рис. 2).

Рисунок 2. Правильная и неправильная оценки диаметра папулы

Еще одна трудность с диагностическими возможностями пробы Манту связана с тем, что они зависят от нижней границы положительного результата: чем ниже граница, тем больше будет наблюдаться ложноположительных реакций. К примеру, в России пороговым значением является папула в 5 мм. Это приводит к гипердиагностике — большому количеству зафиксированных реакций, но в итоге к низкому проценту реально выявленных случаев инфицирования [4].

В общем, не удивительно, что в последнее время информативность туберкулиновой пробы постоянно ставится под сомнение. Мало того, она может вызывать не связанные с туберкулезом аллергические реакции, поэтому все больше здоровых, но склонных к аллергии детей вынуждены идти в тубдиспансер в надежде выяснить причину положительной реакции. И наконец, на результат пробы может влиять множество факторов: недавно перенесенные инфекции, хронические заболевания, прием медикаментов, изменение гормонального фона или иммунитет к нетуберкулезным микобактериям [7].

Если говорить о достоинствах пробы Манту, то кроме низкой себестоимости, ими будут возможность выявления туберкулеза на ранних стадиях развития (за исключением лиц с иммуносупрессией и маленьких детей до двух лет [7]) и более высокая диагностическая ценность у непривитых БЦЖ по сравнению с привитыми (от 50% и ниже против 65,4% [6], [9]).

Мифы о пробе Манту

Рисунок 3. Антигены ESAT-6 и CFP-10

Что нужно знать о кожных пробах?

Анализы крови на туберкулез: плюсы и минусы

в ранние сроки инфицирования;
при иммунодефицитных состояниях;
при неправильном заборе крови или ее транспортировке;
из-за ошибок во время расшифровки результатов.

Добавлю, что тесты IGRA требуют наличия качественного оборудования, специальных реактивов и квалифицированного персонала, поэтому себестоимость у них довольно высока.

Кроме того, по сравнению с кожными тестами существенным недостатком этих анализов является определение in vitro только образования гамма-интерферона или активности Т-клеток. Поэтому в странах с высокой заболеваемостью (а Россия, несомненно, в их числе с показателем более 50 больных на 100 000 населения [13]) у IGRA-анализов нет никаких дополнительных преимуществ [12]. Тем более что их способность диагностировать туберкулезный процесс колеблется в районе 42–90% для разных возрастных групп, к тому же они не маркируют латентное носительство [12]. Другими словами, для жителей нашей страны анализы крови на туберкулез в общем-то напрасная трата денег, хотя в странах с низкой заболеваемостью (США, Канада, Западная Европа) они более информативны и рекомендованы к замене туберкулиновых проб для привитых БЦЖ [14].

В мире живет более полумиллиарда латентных носителей M. tuberculosis. Причем, далеко не каждый из них в итоге заболевает, потому что размножение микобактерии сдерживает иммунная система. Например, из 100 инфицированных палочкой Коха детей, лишь у одного развивается активная форма туберкулеза, поэтому диагностические тесты направлены не только на выявление латентных носителей, но и на оценку риска развития заболевания [15].

Анализы крови vs кожные тесты: сравнение эффективности

При оценке эффективности тестов для диагностики туберкулеза чаще всего учитывают два параметра: чувствительность (sensitivity) и специфичность (specificity). Под чувствительностью понимают способность метода выявлять лиц с заболеванием или носителей с высоким риском развития туберкулеза. Под специфичностью — способность теста правильно идентифицировать людей, у которых нет туберкулеза (то есть этот параметр характеризует риск появления ошибочных ложноположительных результатов) [12].

Какой тест все-таки выбрать?

Как говорится, при всем богатстве выбора альтернатив немного. К сожалению, при выборе теста многие руководствуются не его диагностическими характеристиками, а безвредностью для здоровья, потому что фенол в составе кожных проб пугает многих. И существует даже движение против пробы Манту, группа поддержки которого периодически предлагает заменить ее анализами крови IGRA. Но, как было отмечено выше, у подобных страхов нет никаких оснований. В придачу, являясь продуктом жизнедеятельности организма, фенол не накапливается, а выводится вместе с мочой. Поэтому главными критериями все-таки являются чувствительность и специфичность тестов.

Микобактерия туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis, палочка Коха, туберкулезная палочка) - главный возбудитель туберкулеза.

Данный микроорганизм устойчив к неблагоприятным условиям, например, присутствует в высушенной мокроте, в почве, на загрязненных предметах.

Передается туберкулез легких воздушно-капельным путем. Люди с легочным туберкулезом выделяют в воздух микобактерии во время кашля, чихания или отхаркивания мокроты.

Специалисты не исключают возможность заражения через пищевые продукты или при контакте с предметами, которые заражены возбудителем туберкулеза.

Согласно данным ВОЗ: в 2014 году 9,6 миллионов человек заболели туберкулезом, один миллион среди которых составили дети в возрасте от 0 до 14 лет.

Рекомендуется пройти обследование на вероятность заражения туберкулезом, при наличии следующих симптомов:

Длительном кашле (более 3 недель), сопровождающимся мокротой и кровью.
Боль в области груди.
Температура тела 37-38˚С.
Слабость, сильная потливость по ночам.

Имеют латентную (скрытую) форму туберкулеза или являются инфицированными микобактериями туберкулёза приблизительно около трети всего населения. Больные с латентной формой туберкулёза не заразны, но при этом существует риск перехода носительства в активную форму. Он может составлять 10%.

К группе риска относятся люди с ослабленным иммунитетом, страдающие сахарным диабетом, курильщики и дети.

Поэтому ранее для диагностики латентной туберкулезной инфекции использовались такие тесты, как проба Манту и Диаскинтест, которые имеют ряд ограничений.

Острые и хронические инфекционные заболевания, за исключением подозрений на туберкулез;
Период обострения соматических заболеваний;
Кожные заболевания;
Аллергия;
Эпилепсия.

Основным методом диагностики и лечения латентной туберкулёзной инфекции в 2015 году был утверждён иммунологический способ диагностики туберкулеза - T-SPOT.TB.

В отличии от других тестов данный метод чувствителен (около 98%) и специфичен (около 100%), что исключает возможность ложноположительных реакций.

Как достигается высокая специфичность T-SPOT

T-SPOT.TB - диагностический тест in vitro, в основе которого лежит выявление секреции интерферона-гамма лимфоцитами, стимулированными специфическими антигенами Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 и CFP-10.

В результате иммунологического ответа подсчитывается число Т-клеток, которые ответили на эту стимуляцию.

Антигены ESAT-6 и CFP-10 присущи только патогенным штаммам (M.tuberculesis, M.bovis, M.africanum, M.microti, M.canetti) и как правило отсутствуют в образцах вакцины БЦЖ.

Таким образом, вакцинация от туберкулёза не оказывает влияние на результат данной диагностики и только у больных, инфицированных патогенными туберкулезными микобактериями в крови определяются Т-клетки, которые и распознают эти антигены.

Преимущества теста T-SPOT.TB перед кожными пробами

Высокая специфичность и чувствительность.
Полная безопасность теста и отсутствие побочных проявлений.
Исключает ложноположительные результаты, даже при вакцинации БЦЖ.
Тест используется при наличии противопоказаний к проведению кожных проб.
Короткие сроки выполнения.

Когда предпочтительно использовать тест T-SPOT.ТВ

В случае противопоказаний к проведению кожных тестов (аллергические заболевания, заболевания кожи, эпилепсия, период обострения хронических заболеваний).
При вероятности токсико-аллергических реакций на туберкулин.
У пациентов, привитых БЦЖ и показавших ложноположительный ответ на Манту.
У людей, побывавших в странах с высоким риском заболеваемости туберкулезом.
У беременных (при вероятности контакта с больным туберкулезом или наличия клинической картины).
У контактирующих с больным активной формы туберкулеза.
У больных на ФНО-ɣ терапии.
У ВИЧ-инфицированных.
При подозрении на наличие вне легочных форм туберкулеза.

Как подготовится к сдаче анализа на туберкулез

Забор крови производится из вены на локтевом сгибе, натощак.
Образцы биоматериала забирают у пациентов в пробирки Vacutainer с антикоагулянтом Гепарин.
После взятия крови, в первые 2-3 секунды, пробирку необходимо перевернуть 3-4 раза. Но сделать это необходимо аккуратно, без пенообразования.
На пробирку наносится маркировка: ФИО пациента, возраст, дата и время забора материала.

Взрослые и дети (от 10 лет и старше): одна пробирка 6 мл или две пробирки по 4 мл;
Дети (возраст 2-9 лет): одна пробирка 4 мл;
Дети возрастом до 2 лет: одна пробирка 2 мл;
Пациенты с подтвержденным иммунодефицитом: пробирка 10 мл.

Образцы хранятся в вертикальном положении, строго при температуре от 18 до 25 °С не более 8 ч. Материал для проведения исследования не охлаждают и не замораживают.

Как правильно подготовиться к анализу крови по методу Т-SPOT.TB: Специальной подготовки не требуется. Для проведения исследования проводится забор крови из вены натощак.
Сколько времени требуется для получения результатов анализа: для проведения теста Т-SPOT.TB необходимо 2 рабочих дня.
Может ли повлиять вакцинация БЦЖ на результат анализа: вакцинация БЦЖ не оказывает влияния на результат теста. Используемые в тесте Т-SPOT.TB специфические антигены M. Tuberculosis (ESAT-6 и CFP 10) не дают перекрестную реакцию с вакциной БЦЖ.
Есть ли ограничения по возрасту для проведения теста Т-SPOT.TB: возрастных ограничений по тесту нет. Его можно проводить даже детям с рождения.
Существуют ли ограничения в проведении теста Т-SPOT.TB во время карантина в ДОУ: данный тест разрешается проводить даже во время карантина в детском коллективе. Это одно из преимуществ анализа по сравнению с кожными тестами, которые требуется проводить не ранее чем через 30 дней после снятия карантина.
При каких состояниях не проводятся кожные тесты: аллергия, заболевания кожи, обострения хронических заболеваний, острые инфекционные болезни, эпилепсия.
После контакта с больным туберкулезом через какое время можно пройти тест Т-SPOT.TB: тест Т-СПОТ можно провести через 1 месяц после контакта с больным туберкулезом.
Можно ли сделать тест Т-СПОТ вместо кожной пробы Манту, чтобы оформить медкарту в детское учреждение: Не исключено. Тест Т-СПОТ входит в Федеральные клинические рекомендации главного детского фтизиатра.
Как часто нужно проводить исследование методом Т-SPOT.TB: детям анализ можно проводить один раз в год, пациентам из групп риска тестирование проводится 2 раза в год.
После кожного теста Диаскин можно ли проводить тест T-SPOT.TB: Проводить можно, но только спустя 2 месяца, чтобы исключить ложноположительный результат.
Кому запрещается проводить диагностику тестом T-SPOT.TB: Данный тест может использоваться для пациентов с любым заболеванием и при любом состоянии иммунитета.
Кому противопоказана диагностика с помощью теста T-SPOT.TB: Таких категорий пациентов нет.
Как влияет ранее проведенная вакцинация на результат теста T-SPOT.TB: Данный тест может использоваться в любое время, независимо от вакцинации.

Ранее нами был сконструирован штамм E.coli Rosetta 2 (DE3), содержащий рекомбинантную плазмиду pET36b (+) /p38 и продуцирующий химерный полипептид с молекулярной массой ~ 60 кДа. Химерный полипептид содержал в N-концевой области аминокислотную последовательность CBD_CenA, в С-концевой области - полноразмерную аминокислотную последовательность зрелого белка P38 Mtb [2]. На долю синтезированного химерного белка приходилось ~ 25 % от общего содержания белков в клетке.

Рисунок 1

Сконструированными рекомбинантными плазмидами, содержащими химерные гены, трансформировали клетки E.coli BL21 (DE3). Клоны, отобранные методом ПЦР колоний, исследовали на способность продуцировать целевые химерные белки, а также определяли и внутриклеточную локализацию этих белков. По данным электрофоретического анализа белков в ПААГ клоны, содержащие рекомбинантные плазмиды pETm/cbd-cfp10 и pETm/cbd-esat6, продуцировали полипептиды с молекулярными массами, соответствующими расчётным для белков CBD-CFP10 и CBD-ESAT6, соответственно. На долю синтезированных белков CBD-CFP10 и CBD-ESAT6 приходилось, соответственно, 45 % и 50 % от суммарного белка клеток. Рекомбинантные белки были очищены с помощью аффинной хроматографии на колонках с Ni 2+ -NTA-сефарозе 6B-CL. Степень очистки составляла 90 – 95 %. Очищенные белки были использованы в дальнейшей работе по исследованию их антигенных свойств.

Во всех образцах сывороток крови (n=729) с помощью непрямого варианта ИФА были определены уровни IgG-антител (ПТА) против всех антигенов. C целью определения оптимального порогового значения был проведен ROC-анализ. На основании полученных данных были построены характеристические ROC-кривые, выбраны пороговые значения при фиксированной специфичности 80 %, и проведен анализ частоты выявляемости патологических результатов (> порогового значения). Результаты представлены в таблице 1. У 44 % здоровых лиц были обнаружены ПТА хотя бы к одному антигену. Из 275 больных ТБ с бактериовыделением лишь у 13,5 % результат ИФА ко всем исследуемым антигенам был отрицательным, в то время как у больных без бактериовыделения процент отрицательных результатов составил 30 %. Достоверные различия между группой БЛ с бактериовыделением и с БЛ без бактериовыделения вне зависимости от стадии ТБ процесса обнаружены при определении ПТА только к PPDN-3, CBD-P38 и CBD-CFP10 (p<0,0001). Кроме того, использование PPDN3 позволяет достоверно различить группы БЛ и КЛ (p<0,0001). Следовательно, PPDN3 может применяться для выявления активного ТБ. Важно отметить, что БЛ по сравнению с КЛ, имеющими высокий риск инфицирования, не отличаются между собой (p>0,05) по содержанию ПТА против ESAT6-CFP10 и CBD-CFP10. Для этих антигенов нет значимых различий и при сопоставлении БЛ с бактериовыделением (n=271) и БЛ без бактериовыделения (n=50). Следовательно, ESAT6-CFP10 и CBD-CFP10 могут использоваться для выявления ТБ инфицирования (в независимости от наличия клинических проявлений ТБ и наличия бактериовыделения). У лиц с заболеваниями нетуберкулезной этиологии также были обнаружены достоверные различия по сравнению с группой БЛ при определении ПТА к PPDN-3, ESAT6-CFP10 и CBD-CFP10 (p<0,05).

Таблица 1. Частота положительных результатов в группах обследованных.

Группа	Статус	Число образцов	Частота положительных результатов, %
Группа	Статус	Число образцов	ESAT6-CFP10	CBD-CFP10	CBD-ESAT6	PPDN-3	CBD-P38
Пороговое значение*, OD450	0,52	0,74	1,11	0,36	0,50
Здоровые доноры	366	20	20	20	20	20
Больные ТБ	ВП БК+	128	25	37	14	57	37
	ВП БК-	39	13	21	21	16	10
	ХР БК+	147	20	30	26	78	43
	ХР БК-	7	29	14	58	58	59
	Всего	321	21	32	22	62	36
Контактные по ТБ	42	29	38	12	4	21
Саркоидоз легких	40	3	0	0	3	5
Пневмония	28	25	18	11	4	4

Примечание:
ВП – впервые выявленные больные ТБ до начала лечения;
ХР – больные хроническим ТБ;
БК+/- – с наличием/отсутствием бактериовыделения, подтвержденного микроскопией или микробиологическим методом (посев мокроты);
* – пороговое значение установлено при построении ROC-кривой при фиксированной специфичности 80 % для каждого антигена.

Для того чтобы выяснить роль каждого антигена в составе антигенных композиций для диагностических тест-систем, был проведен корреляционный анализ данных об уровнях антител против каждого антигена. Проведенные расчеты выявили наличие достоверной положительной корреляции между уровнями антител против всех антигенов (CBD-P38, ESAT6-CFP10, CBD-CFP10, CBD-ESAT6, PPDN-3), которые сравнивались попарно. Это говорит о том, что у значительной части больных уровень антител к любому из пяти антигенов, по всей видимости, определяется общим уровнем гуморального иммунного ответа против Mtb. Но поскольку во всех случаях коэффициент корреляции Спирмена (R) не превышал 0,67 (т.е. выявленная корреляция между уровнями антител к изучаемым антигенам не была абсолютной), то данные антигены отличаются в значительной степени по своим антигенным и иммунобиологическим свойствам и, вероятно, не могут заменить друг друга в составе антигенных диагностических композиций.

Поскольку чувствительность и специфичность связаны между собой обратной связью, то мы не можем вводить бесконечное количество антигенов в композицию, так как после добавления каждого последующего антигена помимо увеличения чувствительности мы наблюдаем уменьшение специфичности. Так, при совместном использовании PPDN-3, CBD-P38 и ESAT6-CFP10, чувствительность выявления БЛ, в независимости от наличия бактериовыделения, стремилась к 95 %, при этом специфичность составила всего 65 %. В ходе проведенного анализа было установлено, что сочетание двух антигенов PPDN-3 и CBD-P38 наименее снижает специфичность выявления ЗЛ (76 %), при этом чувствительность в разных группах возрастает, достигая 90 % в группе БЛ хроническим ТБ процессом (МБТ+), 74 % у БЛ впервые выявленным ТБ (МБТ+) и 60 % у БЛ (МБТ-) в независимости от характера процесса. Специфичность диагностики лиц с НЗЛ остается прежней в группе БЛ пневмонией (96 %) и немного уменьшается в группе БЛ саркоидозом легких, составляя 92 %. Таким образом, белки PPDN-3 и CBD-P38 могут найти применение в ИФА тест-системах для выявления лиц с активным ТБ процессом и проведения дифференциальной диагностики ТБ с другой легочной патологией. ESAT6-CFP10 и CBD-CFP10 могут быть использованы для разработки тестов для выявления инфицирования Mtb, однако необходимо решить вопрос об увеличении специфичности проведения анализа, в том числе и за счет изменения условий синтеза данных белков.

Работа частично поддержана грантом молодых ученых ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера.

Диаскинтест® (Аллерген туберкулезный рекомбинантный в стандартном разведении) - инновационный внутрикожный диагностический тест, который представляет собой рекомбинантный белок, содержащий два связанных между собой антигена — ESAT6 и CFP10, характерных для патогенных штаммов микобактерий туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis) 1 . Данные антигены отсутствуют в вакцинном штамме Mycobacterium bovis BCG и у большинства нетуберкулезных микобактерий, поэтому Диаскинтест® вызывает иммунную реакцию только на микобактерии туберкулеза и не дает реакции, связанной с вакцинацией БЦЖ. Благодаря данным качествам, Диаскинтест® обладает практически 100% чувствительностью и специфичностью 2 , сводя к минимуму вероятность развития ложноположительных реакций, которые в 40–60% случаев наблюдаются при использовании традиционного внутрикожного туберкулинового теста (проба Манту) 3 . Техника постановки Диаскинтеста и учета результатов идентичны пробе Манту с туберкулином 4 .

В России использование Диаскинтеста утверждено в 2009 году Приказом МЗ РФ 855 от 29 октября 2009 г. 4

Диаскинтест высоко чувствителен и высоко информативен: он позволяет исключить ложноположительные реакции, которые проявляются при проведении пробы Манту у вакцинированных лиц (поствакцинальный иммунитет). По разным оценкам и в разных регионах России чувствительность Диаскинтеста составляет около 96%.

КАК ДОСТИГАЕТСЯ ВЫСОКАЯ ТОЧНОСТЬ ДИАСКИНТЕСТА

Диаскинтест является диагностическим тестом, основанным на формировании реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЧЗТ), проявляющейся в виде уплотнения (папулы) в месте введения при наличии в организме патогенной для организма человека микобактерии туберкулеза с наличием в своей структуре двух антигенов ESAT-6 и CFP-10. Этих антигенов нет у вакцинных микобактерий (БЦЖ) и нетуберкулезных бактерий.

Если человек болен туберкулезом (активная или латентная (скрытая) туберкулезная инфекция), то в месте введения Диаскинтеста формируется уплотнение (папула) – положительный тест. В данном случае необходимо тщательное дообследование для исключения активного туберкулезного поражения. При отсутствии достоверных признаков болезни положительный тест свидетельствует о том, что у человека латентная (скрытая) туберкулезная инфекция и существует высокий риск перехода болезни в активную форму в ближайшее время. Поэтому необходимо проведение специального профилактического лечения противотуберкулезными препаратами.

Если человек здоров, при этом имеет иммунитет от туберкулеза после вакцинации БЦЖ (поствакцинальный иммунитет), то Диаскинтест будет отрицательный.

Для оценки эффективности любой тестовой пробы учитывают две основные характеристики: чувствительность и специфичность. Чем выше эти показатели, тем более качественно тест выявляет инфекцию.

Чувствительность теста – это наличие положительных реакций у лиц с достоверно подтвержденным диагнозом.

Чувствительность Диаскинтеста 96,0% 6 .

Специфичность же теста – это отрицательная реакция на пробу у абсолютно здоровых людей.

Специфичность Диаскинтеста 99,0% 6 .

Все это позволило Диаскинтесту стать надежным и высокоинформативным методом диагностики как латентного, так и активного туберкулеза. Высокая точность диагностики позволяет избежать ненужных и зачастую вредных лечебных курсов и исследований.

ПРЕИМУЩЕСТВА ДИАСКИНТЕСТА ПЕРЕД ДРУГИМИ ТЕСТАМИ

Высокая специфичность и высокая чувствительность;
Отсутствие ложноположительных результатов в случае вакцинации БЦЖ;
Не требуется специального лабораторного оборудования;
Малотравматичен для детей любого возраста;
Эффективен в любом возрасте: дети, подростки, взрослые.

КОГДА ИСПОЛЬЗУЕТСЯ ДИАСКИНТЕСТ

У детей до 7 лет:

дифференциальная диагностика поствакцинальной и инфекционной аллергии;
оценка активности туберкулезного процесса (при обнаружении кальцинатов и следов ранее перенесенной инфекции) в комплексе с другими клинико-лабораторно-рентгенологическими методами;
дифференциальная диагностика туберкулеза в комплексе с другими клинико-лабораторно-рентгенологическими исследованиями;
оценка эффективности противотуберкулезного лечения в комплексе с другими методами.

У детей старше 7 лет и подростков:

диагностика туберкулеза и выявление лиц с высоким риском развития активного туберкулеза (скрининг) 7 ;
оценка активности туберкулезного процесса;
дифференциальная диагностика туберкулеза в комплексе с другими клинико-лабораторно-рентгенологическими исследованиями;
оценка эффективности противотуберкулезного лечения в комплексе с другими методами.

У взрослых:

диагностика туберкулеза и выявление лиц с высоким риском развития активного туберкулеза;
оценка активности туберкулезного процесса;
дифференциальная диагностика туберкулеза в комплексе с другими клинико-лабораторно-рентгенологическими исследованиями;
оценка эффективности противотуберкулезного лечения в комплексе с другими методами;
Внимание! Вакцинация БЦЖ не влияет на результаты Диаскинтеста.

КАК ПОДГОТОВИТЬСЯ К ПОСТАНОВКЕ ДИАСКИНТЕСТА

Проба проводится по назначению врача детям, подросткам и взрослым специально обученной медицинской сестрой, имеющей допуск к проведению внутрикожных тестов.

Лицам, у которых в анамнезе имелись проявления неспецифической аллергии, пробу рекомендуется проводить на фоне приема десенсибилизирующих препаратов в течение 7 дней (5 дней до постановки пробы и 2 дня после нее).

УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ ДИАСКИНТЕСТА

Результат пробы оценивает врач или обученная медсестра через 72 ч (3 суток) от ее постановки.

Критерии оценки ответной реакции на пробу Диаскинтеста:

Отрицательная

Сомнительная

Наличие гиперемии без уплотнения (папулы).

Положительная

Наличие уплотнения (папулы) любого размера.

Внимание! Лица с сомнительной и положительной реакцией на Диаскинтест® подлежат комплексному обследованию на туберкулез.

НОРМАТИВНЫЕ ДОКУМЕНТЫ, РЕГЛАМЕНТИРУЮЩИЕ ПРИМЕНЕНИЕ ДИАСКИНТЕСТА:

1 Киселев В.И., Барановский П.М., Пупышев С.А. и др. Новый кожный тест для диагностики туберкулеза на основе рекомбинантного белка ESAT-CFP. Мол. мед. -2008. — № 4. — С. 28–34

2 Киселев В.И., Барановский П.М., Рудых И.В. и др. Клинические исследования нового кожного теста «ДИАСКИНТЕСТ ® " для диагностики туберкулеза. Пробл. туб. и болезней легких. — 2009. — № 2.- С. 1–8

3 Лебедева Л.В., Грачева С. Г. Чувствительность к туберкулину и инфицированность микобактериями туберкулеза у детей. Пробл. туб. и болезней легких. — 2007. — № 1.- С. 43–49

5 Приказ Министерства здравоохранения РФ от 21 марта 2017 г. № 124н “Об утверждении порядка и сроков проведения профилактических медицинских осмотров граждан в целях выявления туберкулеза”

6 Слогоцкая Л.В., Сенчихина О.Ю., Никитина Г.В., Богородская Е.М. Эффективность кожного теста с аллергеном туберкулезным рекомбинантным при выявлении туберкулеза у детей и подростков Москвы в 2013 г. // Педиатрическая фармакология, 2015. – N 1. – С.99-103

7 Приказ Министерства здравоохранения РФ от 21 марта 2017 г. № 124н “Об утверждении порядка и сроков проведения профилактических медицинских осмотров граждан в целях выявления туберкулеза”

Читайте также: