Молекулярный тест для диагностики туберкулеза

Обновлено: 13.05.2024

Туберкулез — распространенная болезнь, которая встречается у детей и взрослых вне зависимости от материального положения человека, профессии и образа жизни. Больной туберкулезом часто выглядит здоровым, однако иногда представляет опасность для окружающих. Поэтому для посещения детских садов и школ у детей и при устройстве на работу требуют тесты на исключения туберкулеза. Рассказываем о показаниях и противопоказаниях разных тестов и их отличиях.

Какие бывают

Есть проба Манту, Диаскинтест (проба с аллергеном туберкулезным рекомбинантным), квантифероновый тест (гамма-интерфероновый тест), тест T-SPOT TB. Эти тесты назначаются врачом согласно инструкции по применению и приказу 109 “О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации” .

Проба Манту — тест для определения противотуберкулезного иммунитета после вакцинации против туберкулеза (БЦЖ) и после встречи с больным туберкулезом, а также для определения наличия болезни. Отличительное от других тестов показание пробы: отбор детей на повторную вакцинацию против туберкулеза в 7 лет. Тест рекомендован детям после вакцинации БЦЖ с 1 года до 7 лет включительно ежегодно.

При отсутствии вакцинации против туберкулеза и при ряде хронических болезней рекомендован каждые пол года, начиная с 6-месячного возраста. При проведении пробы вводят внутрикожно убитые частички бактерий, которые не вызывают туберкулез. Результат оценивает врач, фельдшер или специально обученная медсестра через 72 часа после постановки пробы.

“В России детям пробу Манту проводят 1 раз в год. Но некоторым категориям детей – 2 раза в год, — говорит педиатр, неонатолог, инфекционист GMS Clinic Эмилия Гаврилова . — Это дети и подростки: с ВИЧ-инфекцией, сахарным диабетом, хроническими неспецифическими заболеваниями органов дыхания, желудочно-кишечного тракта, из числа мигрантов, беженцев, вынужденных переселенцев, невакцинированные от туберкулеза, получающие кортикостероидную, лучевую, цитостатическую и иммуносупрессивную терапию, проживающие в организациях социального обслуживания, состоящие на диспансерном наблюдении в наркологических и психиатрических специализированных медицинских организациях”.

Диаскинтест для определения наличия или отсутствия туберкулеза у детей и взрослых. Показан детям с 8 до 17 лет включительно, а также взрослым для исключения туберкулеза. Тест назначается детям и до 8 лет при наличии показаний, определяемых врачом для исключения активного туберкулеза.

Технически тест проводится также как и проба Манту, но внутрикожно вводят специальный белок, который реагирует только на активный туберкулез в организме. Поэтому на Диаскинтест возникает меньше реакций в виде покраснений и отека на коже. Результат оценивает врач, фельдшер или специально обученная медсестра через 72 часа после постановки пробы.

Квантифероновый тест (гамма-интерфероновый тест) и тест T-SPOT TB используются как альтернативные методы диагностики для выявления туберкулеза при наличии противопоказаний для проведения кожных проб. Оба теста проводятся в пробирке, однако для проведения тестов берут кровь из вены исследуемого. Эти тесты разрешены при беременности в отличии от внутрикожных тестов.

T-SPOT TВ — информативный тест в определении туберкулеза у ВИЧ-инфицированных, людей с онкологическими и аутоиммунными болезнями, в то время как внутрикожные тесты иногда показывают отрицательные результаты. Результат оценивается врачом фтизиатром. Каждый из перечисленных методов диагностики туберкулеза становится информативен через два месяца после контакта с больным туберкулезом. Поэтому нет смысла делать эти тесты раньше.

Пробу Манту и Диаскинтест не рекомендуют при острых и обострении хронических болезней, при аллергических реакциях, эпилепсии, при наличии карантина в детских коллективах, сразу после вакцинации. После снятия карантина и через месяц после исчезновения клинических симптомов острой или хронической болезни, а также через месяц после проведения вакцинации разрешается проведение проб.

У квантиферонового теста (гамма-интерфероновый тест) и теста T-SPOT TB нет никаких противопоказаний, так как проводятся внутри пробирки с той кровью, что берется из вены.

Чем отличаются

Тесты на туберкулез не дают 100% гарантии, что у человека нет болезни. В литературе российские и зарубежные исследователи приводят информацию с большим разбросом по точности методов. Несмотря на это, использование тестов снижает риски развития туберкулеза и помогает вовремя профилактировать или начать лечение болезни. Нельзя назвать единственный тест , который будет универсальным во всех ситуациях. Часто тесты дополняют друг друга и при наличии показаний назначаются врачом.

Преимущества пробы Манту : 100-летняя доказательная база безопасности и эффективности, недорогая процедура. Главное отличие пробы Манту от других тестов — единственный тест, который играет роль в решении вопроса о ревакцинации вакциной против туберкулеза в 7 лет, которая профилактирует тяжелые случаи туберкулеза, приводящие к смерти. При проведении пробы Манту выявляют инфицирование бактериями, вызывающими туберкулез, и в необходимых случаях проводят лекарственную профилактику болезни.

К минусам этого теста относят наличие временных противопоказаний, местные реакции в виде зуда, боли, отека, низкая информативность у людей с ВИЧ -инфекцией, низкая специфичность (показывают не только наличие туберкулеза, но и противотуберкулезный иммунитет после введения вакцины БЦЖ ребенку после рождения или встречу с больным туберкулезом без развития болезни).

Преимущества Диаскинтеста — недорогой для диагностики тест с меньшим количеством местных реакций по сравнению с пробой Манту с высокой чувствительностью и специфичностью (отсутствует реакция после вакцинации БЦЖ). Такой тест подходит тем для выявления болезни.

К минусам этого теста относят невозможность определения инфицирования микобактериями туберкулеза для проведения профилактики развития туберкулеза, невозможность решения вопроса о вакцинации БЦЖ, низкая информативность у людей с ВИЧ-инфекцией, наличие противопоказаний как и у пробы Манту, одобрен и используется не во всех странах.

“Проба Манту и Диаскинтест не тождественны, — добавляет Эмилия Гаврилова. — у них разный состав. В результате на пробу Манту чаще возникают ложноположительные реакции (туберкулеза нет, но проба положительная). Диаскинтест же не позволяет отобрать детей на введение вакцины БЦЖ в 7 лет”.

Преимущества квантиферонового (интерферонового) теста – отсутствуют противопоказания и местные реакции, присутствует международная доказательная база, проводится в пробирке (берут только кровь из вены), показывает наличие или отсутствие туберкулеза.

К недостаткам теста относят — возрастные ограничения до 5 лет, дороговизна теста (проводится за счет пациента, а не за счет государства), ложноотрицательные и ложноположительные результаты, как и при проведении других тестов, оценку теста и выдачу заключения об отсутствии туберкулеза выдает только врач — фтизиатр.

“Если возникают сомнения при оценке пробы Манту, — говорит педиатр, инфекционист, ревматолог детской клиники “Фэнтези” Рузанна Аванесян , — врач рекомендует провести Диаскинтест, квантифероновый тест или T-SPOT TB. Если проба Манту реагирует на все 4 вида туберкулезных бактерий, в том числе на ту, что входит в состав вакцины БЦЖ, то другие тесты будут положительными только при наличии в организме тех бактерий, которые уже вызвали болезнь“.

Преимущества теста T-SPOT TB — отсутствуют противопоказания для проведения, отсутствуют местные реакции, определяет туберкулез у людей с ВИЧ-инфекцией, международная доказательная база, тест проводится в пробирке (берут кровь из вены).

Среди минусов теста отмечают возрастные ограничения до 2 лет, дороговизна (за счет пациента), изменение результатов при неадекватной подготовке крови, транспортировке, оценку теста и выдачу заключения об отсутствии туберкулеза выдает только фтизиатр.

Мифы

После проведения пробы Манту возникает аллергия. На самом деле аллергия на пробу Манту крайне редкое явление. Поэтому применение антигистаминных препаратов не показано, кроме тех случаев, если у ребенка отмечаются аллергические реакции на продукты питания, животных и т.д.

Нельзя мыться после проведения пробы Манту и Диаскинтеста и до момента проверки реакции. Руку после проведения пробы можно мочить и принимать душ в этот день, потому что это никак не влияет на результат пробы. Не рекомендуется заматывать руку, обрабатывать и делать компрессы.

При проведении внутрикожных проб можно заразиться туберкулезом . На самом деле в предплечье вводятся белки, которые не вызывают болезнь, а только подсказывают о состоятельности противотуберкулезного иммунитета или о болезни.

“При проведении пробы Манту заразиться туберкулезом невозможно, — добавляет Рузанна Аванесян, — потому что внутрикожно вводят не туберкулезную бактерию, а маленький белок, который не может ни размножаться, и тем более оказывать какого-либо патологического действия на здоровье ребенка или взрослого”.

В данной статье приведены результаты исследования по оценке эффективности молекулярно-генетического метода GeneXpert MTB/RIF, проведено его сравнение с бактериологическим и микроскопическим методами для диагностики туберкулеза. В ходе исследования была подтверждена высокая эффективность молекулярно-генетического метода GeneXpert MTB/RIF.

Ключевые слова: туберкулез; множественная лекарственная устойчивость; GeneXpert MTB/RIF; чувствительность, специфичность, эффективность исследований.

Рис. 1. Заболеваемость населения РБ активным туберкулезом всех форм (число больных с впервые в жизни установленным диагнозом)

Рис. 2. Распространенность МЛУ-туберкулеза в Республике Беларусь по данным ВОЗ

Сложность эпидемиологической ситуации обуславливает необходимость повышения требований к качеству и сокращения времени лабораторной диагностики туберкулеза, обеспечения биологической безопасности персонала, проводящего тесты по выявлению микобактерии туберкулеза.

Цель данного исследования: определение эффективности молекулярно-генетического метода GeneXpert MTB/RIF для диагностики туберкулеза, его сравнение с бактериологическим и микроскопическим методами.

Материалы и методы. В ходе данной работы было проведено ретроспективное выборочное статистическое исследование. В качестве учетных бланков использовались медицинские карты стационарных пациентов.

Полученные научные результаты. На основании изучаемых учетных данных был произведен расчет показателей информативности диагностических методов (чувствительности, специфичности, прогностической ценности положительного и отрицательного результатов) (см. Табл. 1).

Чувствительность, специфичность, прогностическая ценность положительного и отрицательного результатов бактериологического, микроскопического методов и молекулярно-генетического метода GeneXpert MTB/RIF

Ключевые слова: туберкулез; множественная лекарственная устойчивость; GeneXpert MTB/RIF; чувствительность, специфичность, эффективность.

Рис. 1. Заболеваемость населения РБ активным туберкулезом всех форм (число пациентов с впервые в жизни установленным диагнозом)

Рис. 2. Распространенность МЛУ-туберкулеза в Республике Беларусь по данным ВОЗ

Туберкулёз (от лат. tuberculum — бугорок) – распространённое, социально зависимое заболевание человека. Болеют им и животные. Возбудитель туберкулёза открыт Р. Кохом в 1882 г. Это кислотоустойчивые аэробные бактерии (74 вида) рода Мycobacterium, широко распространённые в почве, воде и у животных. У человека чаще всего возбудителем является Mycobacterium tuberculosis. Второй по частоте является Mycobacterium bovis. Оба вида очень устойчивы ко многим факторам внешней среды, а в организме очень долго остаются жизнеспособными и могут вызвать заболевание через многие годы после заражения. Очень важно, что микобактерии туберкулёза могут образовывать так называемые L-формы. Сохраняясь в организме, они создают противотуберкулёзный иммунитет.

Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно, хотя нередко уже проявляются такие симптомы, как слабость, быстрая утомляемость, субфебрильная температура, ночная потливость, а в крови – анемия и лейкопения. В настоящее время, несмотря на все достижения антимикробной терапии, туберкулёз угрожает будущему нации. Поэтому все методы диагностики, особенно его латентных форм являются крайне важными.

Существует много методов лабораторной диагностики туберкулёза: микроскопия мазка (чаще всего для этого используют мокроту), классический культуральный метод, ИФА. Всем им присущи достоинства, но и определённые недостатки, в частности, обнаружение микобактерий только в случае их достаточного количества.

В последние годы для диагностики используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Её высокая чувствительность позволяет обнаружить в исследуемом материале единичные клетки и даже их фрагменты ДНК. Метод исключает перекрёстные реакции и специфичность достигает 100%. ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

определяемый фрагмент - специфичные участки ДНК микобактерий;
специфичность определения - 100%;
чувствительность определения- 100 копий ДНК микобактерий в образце.

Специальной подготовки к исследованию не требуется.С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться здесь >>

Лихорадка, характеризующаяся ежедневным двойным повышением и понижением температуры тела. На фоне туберкулиновой гиперчувствительности или туберкулиновой анергии.
Острые воспалительные заболевания верхних и нижних дыхательных путей с длительным контактом с туберкулёзным больным в анамнезе.
Ненормальная реакция на туберкулиновую пробу (гиперчувствительность или анергия) на фоне обострения какого-либо системного заболевания.
Подозрение на системную волчанку.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Туберкулез – инфекционное хроническое заболевание, вызываемое микобактериями туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis complex). Активный туберкулез развивается приблизительно у 10% людей, инфицированных M. tuberculosis. В остальных случаях благодаря иммунной системе происходит элиминация возбудителя из организма или развивается латентная туберкулезная инфекция (ЛТИ). При ЛТИ микобактерии персистируют в организме в неактивном состоянии, обуславливая стойкий иммунный ответ на антигены возбудителя при отсутствии клинических проявлений активной формы заболевания.

Диагностика активного туберкулеза основывается на изучении клинических и радиографических данных в совокупности с результатами прямого микроскопического исследования, выделения культуры Mycobacterium tuberculosis, ПЦР-исследований.

Диагностика латентной инфекции затруднена отсутствием клинических и рентгенологических признаков заболевания, а также отсутствием возбудителя в пробах доступного биоматериала. Однако ее выявление важно для определения лиц, нуждающихся в контроле и превентивной терапии.

in vivo: внутрикожные тесты с очищенным или рекомбинантным туберкулезным аллергеном (проба Манту, Диаскинтест);
in vitro: исследование проб крови для оценки ответа иммунных клеток обследуемого на антигены микобактерий туберкулеза по высвобождению гамма-интерферона (IGRA-тесты).

Оба подхода основаны на оценке характера иммунной реакции человека на антигены возбудителя, т. е. не являются методами прямого выявления инфекционного агента.

В соответствии с клиническими рекомендациями МЗ РФ и Российского общества фтизиатров по выявлению и диагностике туберкулеза у детей, поступающих и обучающихся в образовательных организациях (2017), квантифероновый тест является альтернативным внутрикожным пробам методом обследования на туберкулезную инфекцию.

Квантифероновый тест (QuantiFERON-TB Gold) основан на измерении продукции INF-γ (гамма-интерферона). Выработка гамма-интерферона осуществляется сенсибилизированными Т-клетками крови пациента, стимулированными in vitro специфическими для микобактерий туберкулеза антигенами: кодируемые регионом RD 1 (region of difference) – ESAT-6 (early secreted antigenic target – ранний секретируемый антиген), CFP-10 (culture filtrate protein – белок клеточного фильтрата) и пептид, кодируемый RD 11 – TB7.7 (p4). Указанные антигены отсутствуют в вакцинных штаммах M. bovis BCG и у большинства нетуберкулезных микобактерий (за исключением M. kansasii, M. szulagai, M. marinum), чем достигается высокая специфичность показаний теста.

высокая специфичность и чувствительность;
отсутствие противопоказаний;
отсутствие побочных реакций;
результат не зависит от предшествующей вакцинации BCG.

квантифероновый тест не позволяет дифференцировать латентный и активный туберкулез;
величина уровня гамма-интерферона не коррелирует со стадией и степенью инфицирования, уровнем иммунной реактивности или вероятностью перехода латентного туберкулеза в активный;
не используется для мониторинга ответа на лечение ЛТИ.

Отрицательные результаты тестов in vitro при отсутствии клинических симптомов заболевания (респираторного и интоксикационного характера, других локальных патологических проявлений) позволяют врачу-фтизиатру выдать справку об отсутствии у ребенка в настоящий момент активного туберкулеза. Специфичность и чувствительность данного метода не достигает 100% и может варьировать у пожилых людей, детей младше 5 лет и лиц с иммунодефицитом.

Читайте также: