Обнаружение метацеркариев описторхоза в рыбе методы

Обновлено: 11.05.2024

Цель исследования – разработка эффективных и энергосберегающих методов обеззараживания рыб и рыбной продукции от личинок описторхид как в промышленных, так и в домашних условиях.

Материалы и методы. В опыте использовали язей, спонтанно зараженных метацеркариями Opisthorchis felineus. Для обработки зараженной описторхидами рыбы применяли вакуумную обработку, электродинамический удар, ультразвуковую обработку и СВЧ-излучение. Метацеркарии O. felineus выделяли методом искусственного переваривания. Жизнеспособность метацеркариев определяли по сохранению морфологической структуры метацеркариев, их подвижности, эксцистированию личинок под действием трипсина, методом биологической пробы (экспериментальное заражение золотистых хомячков и белых беспородных мышей).

Результаты и обсуждение. Установлена устойчивость метацеркарий описторхисов к вакууму, электродинамическому удару и ультразвуковой обработке, что во многом определяется строением их капсулы. Только при использовании бытовой микроволновой печи происходило полное обеззараживание рыбы от метацеркарий описторхид.

Ключевые слова: описторхоз, СВЧ-излучение, вакуум, электрогидродинамический удар, ультразвуковое излучение, рыба.

Основным источником заражения населения описторхозом является рыба домашнего приготовления, отловленная самостоятельно или купленная с рук у рыбаков. Жизнеспособность метацеркарий Opisthorchis felineus Rivolta, 1884 широко известна [1].

Одним из важнейших направлений профилактики описторхоза у населения является обработка инвазированной рыбы, обеспечивающая обезвреживание метацеркариев, не только в промышленных масштабах, но и в домашних условиях.

По нормам СанПиН 3.2.569-96 [7] полное обеззараживание рыб и рыбной продукции (т. е. гибель метацеркарий описторхов) происходит при – 28 °С за 32 ч, а при посоле массовая доля соли в мясе рыб должна составлять 14 %, а продолжительность посола 40 сут.

Целью наших исследований был поиск новых эффективных и энергосберегающих методов обеззараживания рыб и рыбной продукции от личинок описторхид как в промышленных, так и в домашних условиях, для чего нами изучено влияние вакуумной обработки, электродинамического удара, ультразвуковой обработки и СВЧ-излучения на выживаемость метацеркарий описторхисов.

Такое воздействие проще всего организовать в виде электрического разряда (пробоя) промежутка, образованного двумя электродами, размещенными в сосуде с водой, создавая эффект Юткина, т. е. появление гидроудара или ударных волн со скачком давления на их фронтах с амплитудой свыше 1000 атм. (100 МПа).

С раскрытием эффекта Юткина во многих областях физики, электрохимии и нанотехнологий стали широко использовать электрический импульсный разряд в жидкостях как простейший источник ударных волн со скачками давления до 100-тен МПа (тысячи атмосфер) без нагрева с наложением мощного переменного электромагнитного поля.

Известно, что появление ударной волны сопровождается передачей электрической энергии в канал разряда. Внедрение в канал импульсного (даже микросекундного) разряда энергии около 1 Дж оказывается достаточным для 100%-ного обеззараживания водной среды. Этот эффект сейчас широко используют в мировой практике водоподготовки и очистки различных стоков промышленного, коммунального и сельскохозяйственного производств.

Физически ультразвуковое воздействие на биообъекты характеризуется возникновением колебаний рабочей среды. Для достижения режима максимального воздействия акустического излучения на объект необходимо, в первую очередь, подобрать режим излучения, при котором в объекте выделяется максимум энергии. Но поскольку сам объект, как любой живой организм на 80 % состоит из воды и, к тому же, размещается в воде с заданным коэффициентом поглощения, то рабочий режим выбирают по максимуму вкладываемой энергии, затрачиваемой на преобразование воды [5]. Иными словами, воздействие акустического излучения тождественно воздействию на объект ЭМП (электромагнитное поле).

Максимальная концентрация получаемых ионов и электронов на объект (вторичное воздействие на неоднородное по строению вещество) будет при условии резонанса, т. е. при частоте межмолекулярной связи в воде. Наличие ионов и электронов в объеме приводит к возникновению собственного ЭМП уже независимо от глубины проникновения звуковых волн в реакторе. В этом случае это собственное (вторичное) ЭМП будет максимально воздействовать на объект, осуществляя в нем процессы сонохимии по подобию радиохимии, только с максимально достижимой дозой поглощения.

При нагревании продукта токами высокой частоты и в поле СВЧ воздействие тепла на микроорганизмы происходит не только путем теплопередачи от окружающей среды (продукты), как это характерно для других методов нагрева, сколько в результате образования тепла в самом содержимом клетки под действием высокочастотного переменного поля. Колебательные движения частиц в клетках микроорганизмов (в нашем случае метацеркарии описторхид) в поле СВЧ сопровождается не только выделением тепла, но и поляризационными явлениями, влияющими на их жизненные функции. Поэтому при нагревании продукта в поле СВЧ гибель паразитов происходит значительно быстрее [8].

Материалы и методы

Для опытов брали язей, спонтанно зараженных метацеркариями O. felineus, которые были отловлены в районе Миссии (приблизительно в 100 км от г. Тобольск по течению р. Иртыш). Для обработки зараженной описторхидами рыбы применяли вакуумную обработку, электродинамический удар, ультразвуковую обработку и СВЧ-излучение. На вакуумной установке проведено 18 опытов при различных значениях вакуума, временных параметрах и скорости получения вакуума. В экспериментальную камеру помещали кусок мяса язя с метарцекариями описторхид. Предварительно проверяли жизнеспособность находящихся в нем метацеркарий на второй части этого куска методом искусственного переваривания.

При применении импульсно-разрядного комплекса (предоставлен Энергетическим институтом им. Г. М. Кржижановского) использовали следующие параметры воздействия – уровень напряжения U_N = 30 кВ, емкость в ударе 4 мкф, сила удара 1,8 кДж. Время обработки 1 ч, 1 удар в минуту. Было обработано 4 пробы.

Каждый кусок (150-200 г) из спинок язей, зараженных метацеркариями O. felineus, делили пополам. Одну часть обрабатывали в установке, вторая часть служила контролем. Из опытных и контрольных образцов выделяли метацеркарии. Белые мыши (беспородные) в каждом опыте получали по 30 метацеркарий. Метацеркарии O. felineus выделяли методом искусственного переваривания [3]. Жизнеспособность метацеркариев определяли по сохранению морфологической структуры метацеркарий, их подвижности, эксцистированию личинок под действием трипсина, методом биологической пробы (экспериментальное заражение белых беспородных мышей). Всего было заражено 16 мышей.

Работа была проведена на установке, разработанной в Энергетическом институте им. Г. Кржижановского РАН в лаборатории физики сильных электромагнитных полей.

Для опытов брали спинки зараженных язей, такие же, как и в опытах с электрогидродинамическим ударом. Опытные образцы (спинки язей) делили на две части – одну часть обрабатывали, другая часть служила контролем. Образцы размещали внутри камеры, заполненной ионизированной водой симметрично относительно оси конфузора излучателя, на расстоянии 50-60 мм от сопла диффузора Лаваля. После обработки в опытных и контрольных образцах определяли жизнеспособность метацеркарий описторхисов.

Результаты и обсуждение

Вакуумная обработка. Метацеркарии описторхид выдерживали практически полный вакуум (0,02 атм.) в течение 24 ч. До обработки вакуумом все выделенные 24 метацеркарии были подвижны и 19 эксцистировались. После обработки в вакуумной камере из опытного куска было выделено 18 метацеркарий, все были подвижны, 15 эксцистировались.

Однако, неясно, за счет чего метацеркарии описторхид выживают в глубоком вакууме: за счет того, что у них анаэробное дыхание (т. е. за счет специфической для паразитов биохимии) или за счет капсулы.

Электрогидродинамический удар. У 8 опытных белых мышей, которым задали по 240 метацеркарий, найдено 10 трематод (4,2 %), выделено 26 метацеркарий – эксцистирововалось 19 (69 %).

У 8 контрольных белых мышей, которым также задали по 240 метацеркарий, найдено 12 трематод (5 %), выделено 31 метацеркарий – эксцистировалось 22 (71 %). Разница статистически незначима.

Приведенные результаты показали, что воздействие гидроударом на образцы рыб не вызывает гибели метацеркарий описторхид, несмотря на сильное разрушение мышечной и костной тканей.

Ультразвуковая система обработки.

Опыт 1. При следующих параметрах: f₀ (резонансная частота) = 47 Гц, суммарная 16,2 кГц, f₁ (электромагнитнострикционная частота) = 15 кГц, экспозиции 1 ч, J_∑ (суммарная сила воздействия) = 0,3 кДж, в опытном образце найдено 39 метацеркариев – 24 подвижны; 17 эксцистировались (43 %). Отношение подвижные/исследованные составило 0,61. В контроле найдено 31 метацеркариев – 22 подвижны; 15 эксцистировались (48 %). Отношение подвижные/исследованные составило 0,70.

Опыт 2. При следующих параметрах: f₀ = 47 Гц, суммарная 16,2 кГц, f₁ = 36 кГц, экспозиции 1 ч, J_∑ = 0,72 кДж, в опытном образце найдено 24 метацеркариев – 12 подвижны; 7 эксцистировались (29 %). Отношение подвижные/исследованные составило 0,50. В контроле найдено 29 метацеркариев – 15 подвижны; 11 эксцистировались (37 %). Отношение подвижные/исследованные составило 0,52.

Разница в обоих опытах оказалась статистически незначимой.

Таким образом, полученные результаты показали отсутствие в данном диапазоне влияния ультразвуковой обработки на жизнеспособность метацеркарий описторхид, находящихся в мышечной ткани рыб.

СВЧ-излучение. Обработка рыбы СВЧ-излучением оказалась эффективной против метацеркарий описторхисов (табл.).

Таблица. Результаты экспериментального заражения золотистых хомячков метацеркариями O. felineus до и после обработки рыбы в микроволновой печи

РАСПРОСТРАНЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЯ ОПИСТОРХОЗА НА ТЕРРИТОРИИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF

На сегодняшний момент на территории России одной из наиболее значимых проблем является распространение заболеваний человека, возникающих в результате употребления в пищу зараженной рыбы, моллюсков, ракообразных и других гидробионтов. Одним из подобных заболеваний является описторхоз.

Описторхоз – это заболевание, вызываемое плоскими червями класса сосальщиков. Наиболее распространёнными возбудителями описторхоза животных и человека являются два вида трематод: Opistorchis felineus и Opisthorchis viverrini, паразитирующие во внутрипеченочных желчных протоках, желчном пузыре и протоках поджелудочной железы [22]. Промежуточный хозяин – моллюск Bythinialeachi, дополнительные хозяева – различные виды пресноводных рыб, семейства карповых: язь, карп, линь, плотва, вобла, красноперка, сазан, лещ, жерех, уклея и др. [17].

Половозрелый описторхис (марита) выделяет яйца, которые вместе с фекалиями попадают в окружающую среду, а затем в водоем [25].

Яйца описторхисов должны попасть в кишечник промежуточного хозяина — моллюска из рода Bithynia, в организме которого появляется первая личиночная стадия — мирацидий. В кишечнике моллюска мирацидий выходит из яйца, пробуравливает стенку кишечника и проникает в ткани моллюска, где образует следующую стадию — спороцисту. Примерно через 25—30 дней спороциста превращается в редии, которые локализуются в печени моллюска. Эта стадия личинки имеет множество зародышевых клеток, и каждая из них дает партеногенетически новых личинок — церкарий, имеющих орган передвижения — хвост. На все эти превращения требуется около 2 месяцев [33]. Затем церкарии выходят в воду и активно проникают через кожу в подкожную клетчатку или мышцы рыб семейства карповых, где превращаются в следующую стадию личинки описторхиса — метацеркарии, покрытые оболочкой. Из секрета цистогенных желез церкарий образуются оболочки цисты, а снаружи ее наслаиваются реактивные элементы тканей хозяина, образующие капсулу [13].

В настоящее время известно около 250 видов гельминтов, способных паразитировать в организме человека. По данным Всемирной Организации Здравоохранения, гельминтозы относят к одним из наиболее опасных заболеваний и общее число заболеваний и смертей от кишечных гельминтозов выше, чем от бактериальных, вирусных инфекций и других паразитарных болезней, вместе взятых. По ущербу, который они наносят здоровью населения земного шара, глистные инвазии занимают 4-е место, уступая лишь диарее, туберкулезу и ИБС [5].

Описторхоз неблагоприятно воздействует на здоровье населения, наносит значительный медико-социальный ущерб. Он поражает поджелудочную железу, является патогенетическим фактором в формировании брюшнотифозного носительства, которое в 13 раз чаще отмечается у больных. Во время заболевания в 10 раз увеличивается риск возникновения первичного рака печени; в 4 раза чаще встречается тяжелое течение бронхиальной астмы, в 5 раз - сахарного диабета [5].

Всего в мире описторхисами поражено не менее 20 млн. человек. При патологоанатомических вскрытиях иногда у одного человека можно обнаружить несколько десятков тысяч экземпляров этого паразита. Установлено, что хронический описторхоз может приводить к развитию рака желчных протоков печени — холангиокарциноме [20].

По данным ряда авторов заболеваемость населения описторхозом в Российской Федерации достаточно высока [22]. Ежегодно на территории РФ регистрируется около 35 тыс. больных описторхозом. На долю данного заболевания приходится 74,4% от других гельминтозов. Наиболее неблагополучными являются Ханты-Мансийский (614,1случай на 100 тыс.населения), Ямало - Ненецкий (279,8) автономные округа, Тюменская (211,6), Томская (222,2), Новосибирская (116,6), Омская (158,9) области [28]. Основные очаги описторхоза расположены в бассейнах рек Оби, Иртыша, Волги, Камы и рек Крайнего Севера [20]. Так, в Тюменской области эпидемиологическая ситуация остается довольно напряженной, показатель заболеваемости на 100 тыс. населения составил 437,7 в городе и 230,4 в селе [4]. По данным Чиглинцева В. М., на территории г. Нижневартовска и Нижневартовского района у взрослого населения описторхоз занимает ведущее место. Заражение достигало в 2010 году 98,6%, в 2011 - 86,81% и 2012 - 88,5% в структуре паразитарной заболеваемости населения. В Уральском регионе по данным на 2011 год заболеваемость описторхозом на 100 тыс. населения в Челябинской области составила 20,5, в Свердловской области – 15,5 [25]. Также описторхоз у населения регистрируется в Красноярском крае, у жителей Центральной России, Пермской области, Чечне, Татарстане, в странах Европы, таких как Украина, Австрия, Венгрия, Германия и другие [14, 22, 33].

Из диких плотоядных, природным резервуаром описторхоза являются лисица обыкновенная, бобр, норка, енотовидная собака, выдра [2, 29, 30, 32]. Так, в Воронежской области лисица заражена описторхозом с экстенсивностью инвазии 11,1%, американская норка – 33,4% [27]. В Рязанской области ЭИ O. felineus у лисицы обыкновенной составляет 6,25 % [2].

Основными промежуточными хозяевами возбудителя описторхоза являются рыбы семейства карповых. Представители данного семейства очень популярны у населения и употребляются в пищу в соленом, вяленом, копчёном и других видах. На территории Астраханской области в дельте реки Волга у красноперки отмечено инвазирование личинками возбудителя описторхоза с экстенсивностью инвазии (ЭИ) 30,77%, у леща - 8,33% [1]. Также заражение метацеркариями описторхид у красноперки и леща установлено в реках Липецкой области [32]. В Тайшетском районе Иркутской области изучен новый очаг описторхоза на реке Бирюса, установлена зараженность ельца (5,5%) и восточного леща (50%) [28]. В Новосибирской области в устье Оби наиболее инвазированы метацеркариями язь и верховка, экстенсивность инвазии (ЭИ) составляет 80,6% и 100% соответственно [6]. Исследовано инвазирование карповых рыб описторхидами в бассейнах рек Тара, Тартас, Кама и Урез, где у ельца, плотвы, верховки и пескаря зафиксировано поражение с ЭИ от 11,1 до 100% [16]. В реке Томь Кемеровской области у рыб уклейка и чебак отмечена ЭИ O. felineus 10,17% и 55,56% соответственно, рыбы в возрасте 3+-4+ показывали большую степень инвазированности по сравнению с молодью [20]. В реке Белой на территории Республики Башкортостан личинки описторхид обнаруживались у язя, леща, густеры, сорожки, плотвы, пораженность которых достигала 51,1; 48,4; 43,5; 39,6; 36,4% соответственно [22]. Рыбное население представителей карповых в водоемах Воронежской области, таких как плотва, уклея, красноперка, язь, лещь, инвазировано метацеркариями описторхид от 16,7 до 79,5% [27]. Описторхоз у рыб также зафиксирован в Западно-Казахстанской области, в различных водоемах экстенсивность инвазии у язя варьирует от 89,3 до 100%, у красноперки от 32,4 до 69,6% [15]. Установлена инвазированность метацеркариями кошачьей двуустки представителей карповых рыб в водоемах Томской, Курской, Курганской, Пензенской и Омской областей, образуя природные очаги описторхоза [7, 8 ,29,32].

На территории Тюменской области Обь-Иртышский бассейн входит в природный очаг описторхоза. Так, пораженность язя метацеркариями O. felineus в Нижней Оби составляет 95%, а плотвы и леща 30% и 15% соответственно. Тогда как в Средней Оби ЭИ язя составила 100%, плотвы – 55% и леща – 10% [13, 25]. В реке Иртыш заражение леща метацеркариями составляет 13,3% [25]. В реке Ишим плотва инвазирована личинками описторхид на 4,8%, а в реке Алабуга данный показатель равен 8,33% [12]. Лещ в р. Алабуга инвазирован метацеркариями на 5,9% [11]. Исследования проведенные в Тобольском и Уватском районах Тюменской области в 2002–2009 гг., выявили зараженность карповых рыб метацеркариями O. felineus в нижнем течении Иртыша: язь - 96,3%, елец - 98,0%, лещ - 36,2%, плотва - 31,7% [24]. На территории юга Тюменской области установлено заражение O. felineus плотвы и верховки в таких водоемах как о. Кривое, о. Андреевское и пруд Чистый [10]. Также зафиксированы очаги описторхоза в реках Тавда, Тобол, Тура и Исеть Тюменской области, где отмечено заражение карповых рыб метацеркариями описторхид [5]. Отмечено увеличение зараженности рыбы метацеркариями с возрастом, что повышает возможность инвазирования дефинитивных хозяев [19, 24].

У инвазированной метацеркариями O. felineus рыбы снижается пищевая и биологическая ценность, при этом повышается ее бактериальная обсеменённость, что может послужить причиной пищевой токсикоинфекции. Содержание белка, жира, золы и энергетическая ценность мяса у зараженной рыбы меньше, чем у неинвазированной. Так, у пораженной описторхисами рыбы количество белка снижается от 1,26 до 1,8%, жира от 0,35 до 0,55%, с повышением интенсивности инвазии содержание влаги у пораженной рыбы увеличивается на 2,18%, что приводит к уменьшению других химических показателей [3, 9, 18]. Снижается энергетическая ценность мяса рыбы, зараженной метацеркариями Opisthorchisfelineus, а также ее калорийность как продукта [1].

Таким образом, анализируя данные по распространению возбудителя описторхоза в карповых рыбах и среди населения, можно сделать вывод, что на территории Российской Федерации практически повсеместно существуют природные очаги описторхоза. Доступность данных видов рыб при любительском рыболовстве повышает риск заражения людей данным видом паразита. Решение проблемы описторхоза возможно лишь при комплексном подходе к ней со стороны специалистов различных профилей - экологов, рыбоводов, санитарных и ветеринарных врачей.

Важная роль в снижении заболеваемости принадлежит пропаганде знаний среди населения. В последние годы в силу ряда объективных причин такая пропаганда снизилась, и резко возросло количество заболевших. Ослаблено внимание и к контролю за поступающей в продажу рыбой, которой изобилуют рынки [22].

Список литературы:

Андреянов О.Н. Возбудитель описторхоза Opisthorchisfelineus на территории Рязанской области / О.Н. Андреянов, В.В. Горохов, Р.Т. Сафиуллин и др. // Российский паразитологический журнал. - 2013. - № 2. – С.6-9.

Балуева А.И. Определение процентного содержания белка и жира в рыбе, зараженной и незараженнойO.felineus/А.И.Балуева,С.В.Чернигова//Электронныйнаучныйжурнал. - 2016.-№10-1(13).– С. 13-15.

Беляева М. И. Заболеваемость описторхозом в Тюменской области / М. И. Беляева // Санитарная охрана территории. - 2012. - Т. 2. № 1. –. С.119.

Беляева М.И. Оптимизация эпидемиологического надзора и санитарно-паразитологического мониторинга на разных территориях гиперэндемичного очага описторхоза /М.И. Беляева// Медицинская наука и образование Урала. - 2015. - Т. 16, № 1 (81). - С.110-114.

Бонина О.М.. Выявление локальных очагов описторхозов в пойме реки Обь и в Новосибирском водохранилище. /О.М. Бонина, Е.А. Сербина // Экология и биология паразитов. - 2011. - № 2. - С.24-30.

Бочарова Т.А. Паразитофауна некоторых видов рыб водоемов бассейна средней Оби /Т.А. Бочарова, Т.С. Макарова, О.И. Герасимова// Паразитология в изменяющемся мире. (Материалы V Съезда Паразитологического общества при РАН: Всероссийской конференции с международным участием г. Новосибирск, 23–26 сентября 2013).- 2013. - С. 31.

Бутко М. П. Ветеринарно-санитарные показатели и безопасность рыбы, пораженной описторхозом / М. П. Бутко, И. Ф. Абиатулин // Ветеринария Кубани. - 2010. - №2. - С.4-7.

Вепрева В.В. Оценка зараженности карповых рыб метацеркариями трематод сем. Opisthorchidae в водоемах города Тюмени/В.В. Вепрева, Р.Г. Фаттахов// Вестник ОГУ. - 2008. - №85. - С.137-141.

Жукова Т.С. Биотические особенности инвазирования леща (AbramisbramaLinnaeus, 1758) трематодами / Т.С. Жукова, Л.А. Глазунова // Молодой ученый. - 2016. - № 23 (127). – С.165-169.

Зубков А.Л. Сравнительная характеристика зараженности гельминтами рыб малых рек (р. Алабуга, р. Ишим) на территории Казанского района / А.Л. Зубков, А.С. Осипов // Молодой ученый. - 2015.- № 6-5 (86). – С. 163-167.

Ильин В.С. Мышечные трематоды карповых рыб в различных водоемах Ямало- Ненецкого и Ханты-Мансийского автономных округов / В.С. Ильин, И.С. Пай, А.С. Осипов // Инновационное развитие АПК Северного Зауралья. - 2013. – Тюмень. - С.305-307.

Исханов И.В. Роль домашних животных в распространении описторхоза в бассейне реки Терек/И.В. Исханов // Экология и биология паразитов. - 2012. – С.39-42.

Кармалиев Р.С. Описторхоз рыб в Западно-Казахстанской области / Р.С. Кармалиев, Я.М. Кереев // Российский паразитологический журнал. - 2013. - № 3. – С.11-15.

Карпенко С.В. Характеристика очагов описторхоза юга Западной Сибири / С.В. Карпенко, А.И. Чечулин, Н.И. Юрлова, Е.А. Сербина, С.Н. Водяницкая, А.В. Кривопалов, К.П. Федоров // Сибирский экологический журнал. - 2008. - Т. 15, № 5. - С.675-680.

Красавцев Е.Л. Клинико-эпидемиологическая характеристика описторхоза в Гомельской области/Е.Л. Красавцев, В.М. Мицура// Проблемы здоровья и экологии. - 2014. - № 4 (42). - С.72-75.

Маниковская Н.С. Изучение зараженности метацеркариямиOpisthorchisfelineusRivolta,1884 (Trematoda) рыбсемейства карповые (Cyprinidae)/ Н.С.Маниковская,Е.О. Кориневская, Е.П.Расковалова// Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями. – Москва. - 2015. – С.243-246.

Мерзлова Н.Б. Медицинская география биогельминтозов – описторхоза / Н.Б. Мерзлова, А.А. Шепелева // Успехи современного естествознания. - 2006. - № 4. – С. 59-60.

Мусыргалина Ф.Ф. Изучение зараженности рыб сем. Карповые метацеркариямиописторхид на реке Белой Республики Башкортостан / Ф.Ф. Мусыргалина, Т.Г. Кудакаева // Общество XXI века: итоги, вызовы, перспективы, 2015. - № 4. – С.3-6.

Николаева Н. Описторхоз (эпидемиология, клиника, диагностика, лечение) / Н. Николаева, Л. Николаева, Н. Гигилева // Врач. - 2005. - № 7. – С.17-20.

Ратникова Л.И. Описторхоз – актуальная инвазия Уральского региона / Л.И. Ратникова, В.М. Борзунов // Известия высших учебных заведений. Уральский регион. - 2011. - № 2. – С.87-90.

Ромашова Е.Н. Карповые рыбы как источник заражения человека и домашних животных описторхозом в Воронежской области / Е.Н. Ромашова // Вестник Воронежского государственного аграрногоуниверситета, 2015. – № 3 (46). – С. 81-88.

Ромашова Е.Н. Некоторые аспекты морфологической изменчивости Opisthorchisfelineus / Е.Н. Ромашова, А.А. Кулешов, Б.В. Ромашов // Теория и практика борьбыс паразитарными болезнями. Материалы докладов научной конференции, Москва, 19-20 мая, 2015. – С. 370- 372.

Русинек О.Т. Изучение зараженности карповых рыб метацеркариями трематод в очаге описторхоза (Тайшетский район, Иркутская область, Россия) / О.Т. Русинек, Ю.Л. Кондратистов // Известия ИГУ. - 2010. – Т. 3, № 1. – С.132-142.

Стрельчик В.А. Гельминтофауна диких плотоядных животных /В.А. Стрельчик, А.М. Иванюшина, Ю.Н. Марач // Вестник ОмГАУ. - 2016.- № 3 (23). - С.125-127.

Фаттахов Р.Г. Инвазированность карповых рыб личинками возбудителя описторхоза в бассейне Иртыша на территории Омской области /Р.Г. Фаттахов, Т.Ф.Степанова,Е.С.Кряжнева,А.Н.Летюшев, 2016.-Т.7.-№ 1. - С.156-159.

Фаттахов Р.Г. Зараженность карповых рыб личинками описторхид в бассейнах рр. Тобол и Исеть в пределах Курганской области/Р.Г. Фаттахов, А.В. Ушаков // Паразитология в изменяющемся мире (материалы V Съезда Паразитологического общества при РАН: Всероссийской конференции с международным участием г. Новосибирск, 23–26 сентября). - 2013. – С.200.

Федотов А.А. Эпизоотическая ситуация по болезням рыб в Липецкой области / А.А. Федотов, Т.В. Гусева, И.В. Жуков // Ветеринарная патология. - 2008. - № 1. – С.194-196.

Чемидич Н.Д. Особенности описторхоза в природном очаге/Н.Д. Чемидич, Н.И. Ильина, В.В. Захлебаева и др. // Актуальная инфектология. - 2014 - № 2(3). – С.72-77.

Чиглинцев В. М. Современная эпидемиологическая обстановка распространенности описторхоза в г.Нижневартовске и Нижневартовском районе. // CETERIS PARIBUS, 2015. – №3. – С.14-16.

Описторхоз (opisthorchosis) - гельминтоз, поражающий желчные протоки печени, желчный пузырь и протоки поджелудочной железы. Отличается длительным течением, протекает с частыми обострениями и способствует возникновению рака печени и поджелудочной железы.

В 1884 г. С. Ривольта в северной Италии нашел у кошки гельминт, ранее неизвестный науке, и назвал его кошачьей двуусткой. Прошло всего 7 лет, и этот гельминт был найден у человека в Сибири. В 1891 г. профессор К. Н. Виноградов при патологоанатомическом исследовании печени человека обнаружил небольшого гельминта, описал его и назвал двуусткой сибирской. Последующие исследования показали, что двуустка кошачья и двуустка сибирская - один и тот же вид гельминта.

Основываясь на том, что описторхоз встречается не повсеместно, а вблизи пресных водоёмов, Браун в 1893 году высказал предположение, а Асканази в 1904 году экспериментально подтвердил, что заражение описторхозом происходит при поедании рыбы. В 1891 году К. Н. Виноградовым было сделано предположение о том, что первым промежуточным хозяином сибирской двуустки может быть пресноводный моллюск. Исследования немецкого учёного Ганса Фогеля подтвердили это: в 1932 году он экспериментально доказал, что в жизненный цикл этого гельминта входит моллюск 1 .

Описторхоз - природно-очаговый зооантропоноз. Распространен в виде очагов различной интенсивности. Формирование очагов определяется многими факторами: природно-климатическими - наличием водоемов, подходящих для обитания промежуточных хозяев; общесанитарными - определяющими возможность загрязнения водоемов нечистотами, а также пищевыми привычками людей, употребляющих сырую малосоленую рыбу. Возбудитель описторхоза обнаружен у кошек, собак, лисиц и других животных, а также у моллюсков и рыб семейства карповых во многих странах Европы: Австрии, Албании, Болгарии, Венгрии, Германии, Греции, Голландии, Испании, Италии, Польше, Румынии, Турции, Финляндии, Франции. Однако подавляющая часть современного мирового ареала описторхоза сосредоточена на территории России и Украины, в трех основных очагах - Обь-Иртышском, Волго-Камском и Днепровском. Эндемичной по описторхозу территорией в России является Западная Сибирь и Казахстан по Оби, Иртышу, Тоболу и их притокам, а также очаги по Волге, Каме и их притокам, по Неману, Северной Двине, Припяти, бассейну Дона 3 .

Обычно болезнь имеет сравнительно доброкачественное течение. Отдельные случаи летального исхода связаны с печеночной недостаточностью смешанного паразитарно-вирусного генеза. При развитии гнойных процессов в желчевыделительных путях, при желчных перитонитах и остром панкреатите прогноз серьезный 2 .

I. Трематоды Opisthorchisfelineus – возбудители описторхоза

Тип: Плоские черви (Plathelminthes)

Класс: Трематоды или дигенетические сосальщики (Digenea)

Отряд: Описторхиды (Opistorchida)

Представитель: Кошачий сосальщик, описторхис (Opisthorchis felineus)

Жизненный цикл. Описторхисы - биогельминты. В жизненном цикле, обеспечивающем их циркуляцию в природе, участвуют окончательный и два промежуточных хозяина. Окончательными хозяевами являются человек и 34 вида и один подвид млекопитающих, представители 7 отрядов 15 семейств: кошка, собака, свинья, лисица, песец, соболь, россомаха, бобер, выдра, хорек, хомяк, енот, горностай, норка, ласка, колонок, барсук, бурундук, заяц, землеройка, волк, бурый медведь, лев, тюлень и др. В лабораторных условиях заражают крыс, мышей, кроликов, морских свинок, обезьян.

Первый промежуточный хозяин - пресноводный моллюск рода Bithynia inflata, по современному определению Cadiella. Это переднежаберный моллюск, обитатель мелководных, хорошо прогреваемых, богатых растительностью водоемов со стоячей водой или слабым ее течением, особенно пойменных водоемов, пересыхающих стариц, глубиной максимально до 2 - 3 метров. Биотопы кадиелл возникают при рН воды не более 7,5, при содержании хлора не более 50 мг/л. Битинии мигрируют при высыхании грунта, за месяц они способны переместиться на 4 м, в анабиозе пребывают до 7 - 10 месяцев в году. Они хорошо переносят низкие температуры, зимуют в промерзающем грунте. Время пробуждения моллюска зависит от температуры воды не ниже 10 - 20°С. Половозрелость наступает на втором году жизни.

Второй промежуточный хозяин (или дополнительный) - рыбы семейства карповых (доказано Брауном в 1893 г.): язь, линь, плотва, елец, голавль, густера, лещ, красноперка, подуст, чехонь, уклел, синец, белоглазка, верховка, шиповка и др. У окончательного хозяина описторхи паразитируют в протоках печени (100%), желчном пузыре (43 -60%), в протоках поджелудочной железы (32 - 36%). Половозрелые особи выделяют яйца, которые с испражнениями инвазированного выходят во внешнюю среду и попадают в воду, на дно водоема. В яйце развивается мирацидий. Моллюск проглатывает яйцо, в его теле мирацидий превращается в спороцисту. В спороцисте из зародышевой массы формируется несколько десятков редий, в которых дальше образуются до 100 - 120 церкариев. Церкарии достигнув зрелости, выходят в воду, активно движутся, проявляя положительный гео- и фототаксис. В результате, плавая в нижних слоях воды, они нападают на проплывающую мимо рыбу, тень которой при ее движении активизирует хвостатую личинку. Попав на кожу рыбы, церкарии укрепляются, прилипают к ней, теряя хвост, вбуравливаются в ее толщу. Не исключается проникновение церкариев в тело рыбы через естественные отверстия боковой линии или при проглатывании моллюсков со зрелыми церкариями. В подкожной клетчатке и мышечной ткани зараженных рыб образуются метацеркарии - инцистированные личинки округлой или овальной формы (0,24 - 0,34 * 0,18 - 0,24 мм), локализующиеся в спинных наружных мышцах. Через 6 недель метацеркарии становятся инвазионными для окончательных хозяев. Дальнейшее их развитие происходит в организме окончательного хозяина 2 .

II. Пути заражения

Человек заражается описторхозом, при употреблении в пищу слабопровяленной, малосольной, подвергнутой недостаточной термической обработке или сырой (строганина) рыбы, которая инвазированна метацеркариями.

В двенадцатиперстной кишке под действием желудочного сока и пищеварительных ферментов ткани рыбы перевариваются и метацеркарии, освободившиеся от оболочки, по общему желчному протоку проникают в печень и желчный пузырь, по вирсунгову протоку - в ходы поджелудочной железы. Продвижение метацеркариев идет быстро (3-5 часов), а через 1,5 - 2 недели они достигают половой зрелости. Длительность паразитирования описторхов у человека составляет годы - 10-20-30 лет 2 .

III. Профилактика описторхоза

Методы борьбы и профилактики включают многоплановый комплекс мероприятий: лечебно-профилактические:

- контроль, обследование пролеченных; диспансерное наблюдение.

- охрана водоемов от фекальных загрязнений;

- контроль за соблюдением технологии обработки рыбы (засолки, копчения, вяления и др.).

санитарно-просветительная работа, особенно в неблагополучных по описторхозу местностях, которую необходимо проводить в сочетании с лечебными мероприятиями. Методы санитарного просвещения разнообразны: памятки, индивидуальные беседы, выступления в печати, радио, по телевидению. Особое внимание надо уделять группам риска, приезжих рабочих, служащих, демонстрируя препараты описторхов, таблицы, приводя примеры историй болезни. Большое значение в профилактике имеет работа по повышению настороженности и отказе населения от обычая употреблять сырую и полусырую рыбу. Необходимо разъяснять населению правила обработки рыбы в домашних условиях: Важно разъяснить, чтоличинки описторхов погибают только при варке или прожаривании рыбы небольшими кусками (не менее 20 мин), выпечке пирогов (не менее 45-60 мин), вялении (3 недели) с предварительным 2-3-дневным посолом. Для холодного копчения можно использовать только рыбу, обезвреженную вялением.Замораживание, даже длительное, эффекта не даст 2 .

Заключение

Описторх вызывает у человека заболевание — описторхоз.

В основе патогенеза лежат сенсибилизация с развитием аллергического состояния, особенно в ранней фазе болезни, рефлекторное влияние на функции желудочно-кишечного тракта, а также механическое поражение желчных ходов, застой желчи в связи с закупоркой сосудов паразитами, вторичное ее инфицирование 1 . Большое значение в повышении настороженности и отказе населения от обычая употреблять сырую и полусырую рыбу, имеет санитарно-просветительная работа. Лечение описторхоза проходит поэтапно и длительно.

Список литературы:

1. Беэр С. А. Биология возбудителя описторхоза. М., 2005. 336 с.

2. Генис Д.Е. Медицинская паразитология: Учебник. — 4-е изд., перераб. и доп. — М.: Медицина, 1991. — С. 62-66.

3. Инфекционные болезни: национальное руководство/Под ред. Н.Д.Ющука, Ю.Я.Венгерова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. – 1056 с.

Паразиты в рыбе и рыбопродуктах. Паразитологическое исследование

Среди всех классов паразитов, встречающиеся в рыбе и других гидробионтах, опасными для здоровья человека являются только личинки гельминтов:

цестод,
трематод,
нематод,
скребней.

К наиболее широко распространенным заболеваниям, передающимся через рыбу и другие гидробионы, относятся описторхоз, дифиллоботриозы и эндемичные для Дальнего Востока России метагонимоз, нанофиетоз и клонорхоз (рис. 1).

Рисунок 1 – Паразитологическое исследование: а – Opisthorchis felineus; б – Diphyllobothrium latum

Поэтому при обнаружении личинок гельминтов следует определить жизнеспособность выявленных плероцеркоидод, метацеркарий, акантел и личинок нематод (рис. 2).

Рисунок 2 – Обнаруженные личинки гельминтов: а – личинки описторхоз; б – плероцеркоиды (личинки) лентеца широкого в икре щуки

1. Отбор проб и подготовка проб к анализу

Для паразитологических исследований пробы берут отдельно от проб на микробиологические и физико-химические анализы. Отбор проб и объем рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки для исследования на соответствие требованиям безопасности для здоровья человека по паразитарным показателям осуществляется в соответствии с требованиями:

Отбор проб сырья (свежей, охлажденной и мороженой рыбы, морских беспозвоночных, молок, икры) и полуфабрикатов. Пробы отбирают в чистую посуду, полиэтиленовые мешки или плотную бумагу. Количество единиц упаковки, подлежащих вскрытию, установлены стандартами, нормативно-методическими документами. Если на продукт отсутствуют стандарты или научно-технические документы, то вскрывают 5 % единиц упаковки от общего их количества в партии [48, 49].

Для исследования на наличие метацеркарий Opisthorchis felineus и плероцеркоидов Diphyllobothrium latum целесообразнее отбирать рыб старших возрастов, так как личинки паразитов живут несколько лет, и их число увеличивается с возрастом рыб. Метацеркарий Metorchis bills (albidus) чаще встречается у сеголеток и рыб младших возрастов, а Echinochasmus perfoliatus – преимущественно у мальков.

Хранение и подготовка к исследованию рыбы проводится следующим образом.

Свежую или охлажденную рыбу сохраняют до исследования в холодильнике при температуре плюс 2–4 °С.
Мороженую рыбу перед исследованием размораживают до температуры не ниже 0 °С в толще тела рыбы.
Живых раков и крабов помещают в кипящую воду на 0,5–1,5 мин (в зависимости от размеров ракообразных) до прекращения движения.
Вяленую и копченую, соленую рыбу перед исследованием предварительно вымачивают в течение суток до размягчения мышц, меняя воду каждые 4–6 ч.
Соленую икру выдерживают в воде в течение 2–3 ч.

2. Гельминтологическое исследование рыбы

При исследовании используют два подхода: выявление личинок, видимых невооружённым глазом (плероцеркоиды, акнтелы, нематоды), и выявление личинок, невидимых вооружённым глазом с использованием оптических средств (трематоды). При этом проводят:

Наружный осмотр рыбы для выявления личинок.
Просмотр внутренних органов и полостей тела.
Исследование мускулатуры в зависимости от вида гельминта:

а) метод параллельных разрезов;
б) метод исследования мышечной ткани на просвете;
в) компрессорный метод (рис. 3).

Рисунок 3 – Компрессорий

Метод параллельных разрезов. Самый употребительный метод, позволяющий сравнительно быстро обследовать мясо рыб крупной и средней величины, пригоден для рыб всех видов разделки.

Обследуемую рыбу желательно вначале обесшкурить, чтобы проверить, нет ли под кожей паразитов или поражений. Метод применяется для обнаружения в мышечной ткани рыбы личинок гельминтов, видимых без использования увеличительных приборов (цестод, нематод, скребней). Мышечную ткань острым скальпелем разрезают на пластинки толщиной от 5 до 10 мм, которые затем раздвигают и просматривают в падающем свете невооруженным глазом. Разрезы можно делать как поперек, так и вдоль мышечных волокон.

Делая разрезы мускулатуры и встречая в ее толще крупных личинок или капсулы с личинками (величиной около 1 см и более), нужно извлечь несколько экземпляров паразитов целиком для определения вида. Выделенных личинок помещают в чашку Петри. При исследовании тихоокеанских лососей, кунджи и сахалинского тайменя на наличие плероцеркоидов Diphyllobothrium luxi (D. klebanovskii) разрезы проводят поперек мышечных волокон всей дорсальной части тела, большинство личинок локализуется между жировым и спинным плавниками [47, 48].

Метод исследования мышечной ткани на просвет. Это наиболее эффективный метод, позволяющий быстро обследовать большие количества рыбы и рыбной продукции. Используется для выявления личинок нематод, цестод, скребней. Для использования этого метода нужно иметь специальные приспособления – столик с прозрачной (лучше из молочного или матового стекла) крышкой и подсветкой снизу.

Рыба всех видов разделки перед обследованием должна быть обесшкурена, филе толщиной до 3–4 см просматривается целиком, сначала с одной, а потом с другой стороны. У рыбы других видов разделки мясо срезается с костей так, чтобы получившиеся куски или филейчики достигали в толщину не более 3–4 см. Слишком толстые куски соответствующим образом разрезаются.

Паразиты – личинки цестод, трематод и нематод, паразитические ракообразные и другие включения размером от нескольких миллиметров и более – обычно хорошо заметны на просвет, даже в довольно толстых филейчиках. Обнаруженных личинок гельминтов выделяют из мышечных тканей рыбы с помощью препаровальных игл. Выделенных личинок помещают в чашку Петри и определяют видовую принадлежность гельминта (рис. 4).

Рисунок 4 – Исследование мышечной ткани на просвет

Компрессорный метод. Метод применяется в основном для выявления метацеркарий трематод, им можно пользоваться лишь для выборочного контроля. Чаще всего метацеркарии поселяются в поверхностных слоях мышц на глубине до 2 мм и в подкожной клетчатке. Исследуются очень мелкие, незаметные или малозаметные невооруженным глазом объекты, поэтому для их обнаружения и дифференциации видовой принадлежности необходимы специальные микроскопические исследования. Используют метод при просмотре мышечной ткани и внутренних органов рыб, а также мышечной ткани ракообразных. Метод заключается в просмотре на просвет сдавленных между двух стекол кусочков мышечной ткани.

При компрессорном исследовании скальпелем удаляют чешую с одного бока под спинным плавником рыбы, затем надрезают кожу в двух направлениях. Первый разрез делают впереди спинного плавника перпендикулярно продольной оси тела до боковой линии, второй – от конца первого надреза по направлению к хвостовому плавнику вдоль боковой линии. Пинцетом поднимают край кожи и отпрепаровывают ее на площадки до 25 см 2 так, чтобы подкожная клетчатка осталась на поверхности мышц. После этого срезают поверхностный слой мышц толщиной 0,2–0,5 см, нарезают мелкими кусочками и размещают по всей поверхности нижнего стекла компрессора, покрывают верхним стеклом и сжимают винтами [48].

Просмотр осуществляется невооруженным глазом или при слабом увеличении бинокуляра микроскопа. Удобнее всего использовать кусочки мышечной ткани объемом около 2–5 см 3 и стекла размером около 9×20 см. Стекла должны быть толстыми, не менее 4–5 мм. Под малым увеличением микроскопа или под трихинеллоскопом просматривают все кусочки, взятые от одной рыбы. Личинки легко обнаруживаются (рис. 5).

Рисунок 5 – Компрессорный метод исследования

Обследование печени, молок и икры. Печень, молоки и икра обследуются отдельно от других частей рыбы. Вначале проводится внешний осмотр печени или ястыков. Снаружи, чаще всего на покрывающих их пленках или под ними, могут быть инкапсулированные личинки цестод и нематод. Особое внимание нужно обращать на личинок нематод, свернутых в плоские спирали; диаметр таких спиралей может составлять 2–6 мм.

Затем пленки надрезаются или разрываются, небольшие порции молок, икры или ткани печени помещаются на стекло и просматриваются компрессорным методом. При этом могут быть встречены личинки нематод или взрослые трематоды, хорошо видимые визуально, а также другие паразиты или включения [47, 49].

Компрессорным методом удобно просматривать лишь мелкую икру. Порции более крупной икры приходится разбирать препаровальными иглами в чашке Петри с небольшим добавлением воды. Замеченные паразиты или включения, а также имеющие необычный вид икринки, отбираются глазным пинцетом для последующего определения. Отбираются также участки тканей, имеющие ненормальный вид или консистенцию.

3. Жизнеспособность метацеркариев

Определяют следующим образом. Их изолируют от ткани, помещают в каплю физиологического раствора на предметном стекле, покрывают покровным и микроскопируют вначале под малым, а затем большим увеличением микроскопа. У погибших метацеркариев нарушена целостность оболочки, содержимое в состоянии зернистого распада, экскреторный пузырь разрушен, присоски слабо выражены. Живые метацеркарии в цисте подвижны. Подвижность вызывают механическим воздействием или подогреванием личинки (не выше плюс 40 °С).

Неподвижность личинки не свидетельствует о ее гибели. При исследовании свежевыловленной рыбы, а также при комнатной температуре, живые личинки бывают неподвижными. Поэтому исследуют большое количество личинок с применением тепла, а также учитывают степень выраженности присосок и экскреторного пузыря.

4. Критерии оценки условно годной и не пригодной в пищу рыбной продукции

Рыба и продукты её переработки, в которых не обнаружено живых личинок гельминтов, опасных для человека и животных, подлежат сертификации и реализации в установленном порядке. При обнаружении живых личинок гельминтов, опасных для человека и животных, рыба не допускается в реализацию и подлежит обезвреживанию.

5. Паразитологические методы исследования рыбы и рыбных продуктов

Исследование проводят в следующем порядке: кожа, плавники, ротовая полость, жабры, глаза, кровь, сердце, брюшная полость (печень, селезенка, плавательный пузырь, мочевой пузырь, желчный пузырь, почки, половые железы, кишечник), мышцы, головной и спинной мозг.

Для обнаружения трипаносом и криптобий у рыбы берут кровь из сердца и делают мазки. Для предотвращения свертывания крови добавляют 1 %-й раствор лимоннокислого натрия, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Чтобы мазок не высыхал, края покровного стекла смазывают вазелином. Одновременно несколько мазков крови высушивают на воздухе, фиксируют в метиловом спирте, окрашивают по Романовскому-Гимзе или гематоксилином и микроскопируют [47, 48, 49].

Раствор метиленовой сини перед употреблением разводят дистиллированной водой 1:10 и окрашивают мазки 30 с, затем промывают водой и дифференцируют в течение нескольких секунд 5–10 %-м раствором танина. Эритроциты окрашивают в красноватофиолетовый цвет, плазма простейших кровепаразитов – в яркоголубой, ядра лейкоцитов – в фиолетовый (рис. 6).

Рисунок 6 – Мазок крови рыб

Для изучения морфологии паразитических инфузорий их окрашивают железным гематоксилином по Гейденгайну, а также гематоксицилином Делафильда или квасцовыми кармином.

Паразитических жгутиконосцев окрашивают железным гематоксилином или по Романовскому-Гимзе (рис. 7).

Рисунок 7 – Паразитические жгутиконосцы

Слизистых споров окрашивают 1 %-м водным раствором метиленового синего 30–60 мин, затем препарат промывают в воде, последовательно проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96 %-й и абсолютный) и просветляют ксилолом.

Трематод и цестод окрашивают квасцовым кармином. Фиксированные в спирте препараты промывают в течение нескольких часов в проточной или часто сменяемой воде и помещают в краску от 1 мин до нескольких часов (в зависимости от толщины гельминта). Продолжительность окраски можно контролировать микроскопией препаратов.

Окрашенные препараты переносят в дистиллированную воду, где в течение нескольких минут их тщательно отмывают от краски. Отмытых паразитов осторожно сушат фильтрованной бумагой и проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96 %-м), выдерживая в них несколько часов. Обезвоженных паразитов просветляют маслом и ксилолом.

Мелких цестод можно окрашивать молочнокислым кармином по Блажину. Молочную кислоту разводят в 2 раза дистиллированной водой, добавляют небольшое количество кармина (в зависимости от желаемой степени окраски). Жидкость кипятят. Красить лучше свежие, нефиксированные объекты. Продолжительность окраски контролируют под микроскопом, а в случае перекрашивания объект переносят в цельную молочную кислоту для обесцвечивания. Окрашенный препарат промывают 20–60 мин водопроводной водой и помещают в бальзам (рис. 8).

Рисунок 8 – Сосальщики (трематоды)

При окраске крупных цестод этот способ модифицировали. Цестод промывают в проточной или часто сменяемой водопроводной воде при комнатной температуре летом один день, в холодное время года – 3–4 дня. Затем их помещают на 4–6 ч в краску (0,3 г кармина на 100 мл 30 %-й молочной кислоты).

Интенсивность прокрашивания контролируют под микроскопом. После этого на сутки их переносят в дистиллированную воду, в которую добавляют 3 капли раствора сернокислого железа и 2 капли 1 %-го раствора фенола.

Далее цестод переносят на чистое предметное стекло, расправляют и высушивают при температуре плюс 30–37 °С. Высохший, очень плотно приставший к стеклу препарат заливают канадским бальзамом или канифолью, растворенной в смеси, состоящей из равных частей хлороформа и абсолютного спирта [47].

Постоянные препараты для микроскопического исследования нематод готовят следующим образом. Фиксированных в 70 %-м спирте живых гельминтов через сутки помещают на несколько часов (в зависимости от величины нематод) в 96 %-й, а затем в абсолютный спирт на 3–5 мин. После этого их переносят в гвоздичное или хеноподиевое масло или карбоксилол на 2–5 мин, а затем кладут на чистое предметное стекло и заливают бальзамом (рис. 9).

Рисунок 9 – Нематоды

Скребней (акантоцефалов) для изучения хоботка и крючков просветляют. Для этого их из 70 %-го спирта переносят сначала в 50 %-й глицерин, а затем в чистый. Структуру других органов изучают после полного обезвоживания гельминтов путем постепенного проведения их через спирты возрастающей крепости. Из абсолютного спирта гельминтов переносят на предметное стекло в каплю кедрового масла, покрывают покровным стеклом и микроскопируют.

Паразитических рачков исследуют в той же жидкости, в которой хранят. Красить их не обязательно. Иногда прибегают к окраске борным кармином, эозином, сафранином и др.

Читайте также: