Определение титра вируса в крови

Обновлено: 26.04.2024

Источник антигенов респираторно-синцитиального вируса - лизат BSC-клеток инфицированных линией респираторно-синцитиального вируса "Long".

Показатель текущей или имевшей место в прошлом инфекции респираторным синцитиальным вирусом.

Респираторный синцитиальный вирус (RSV) принадлежит к семейству парамиксовирусов. Вирусная частица содержит одноцепочечную РНК, окруженную спиральным капсидом и внешней оболочкой с шипами. Шипы образованы двумя поверхностными функционально важными гликопротеидами: белком слияния F и белком прикрепления G. Белок F обеспечивает проникновение вируса в клетку и слияние инфицированной клетки с соседними клетками, что приводит к образованию синцития. Белок G обеспечивает прикрепление вируса к клетке-мишени.

Респираторный синцитиальный вирус распространён повсеместно, вспышки инфекции наблюдаются в холодное время года. Инфекция передаётся воздушно-капельным путем.

Инкубационный период заболевания составляет 2 - 4 суток. Вирус больным человеком выделяется в течение 5 - 7 дней от начала болезни. RSV - наиболее частый возбудитель вирусных инфекций нижних дыхательных путей у детей первых двух лет жизни (характерное и клинически наиболее важное проявление инфекции RSV – бронхиолит). У более старших детей и взрослых RSV может вызывать гриппоподобный синдром, бронхопневмонию или обострение хронического бронхита. Характерно возникновение гипоксемии. Обычно инфекция RSV у взрослых людей носит лёгкий характер, хотя на фоне иммунодефицита и у пожилых людей она может приводить к тяжёлой пневмонии. Иммунитет после перенесённой инфекции слабый и нестойкий, часты повторные инфекции, но эти инфекции редко бывают тяжёлыми.

Вирусологические методы (выделение вируса из отделяемого носоглотки возможно на некоторых культурах клеток) требуют длительного времени выполнения (от 3 до 14 суток). К более оперативным методам диагностики данной инфекции относится выявление антигенов вируса в пробах, взятых из дыхательных путей, методами иммунофлюоресценции или ИФА. Определение вирусной РНК ПЦР-методом, в связи с присущей данному вирусу нестабильностью генома, не имеют широкого применения.

При использовании серологических тестов (исследовании крови для выявления антител к RSV) следует учитывать особенности иммунного ответа на RSV. При данной инфекции IgM-ответ иногда не регистрируется или является слишком слабым для клинической интерпретации результатов. Присутствие в однократно взятой пробе IgG антител не является свидетельством острой инфекции, поэтому для серологической диагностики острой инфекции респираторным синцитиальным вирусом рекомендуют исследование парных сывороток для оценки роста титров IgG .

Антитела класса IgG к респираторному синцитиальному вирусу появляются через 1 - 2 недели заболевания и сохраняются в течение длительного времени. Стойкого иммунитета к этой инфекции не обеспечивают, часто наблюдается повторное инфицирование. При реинфицировании наблюдается значительный прирост концентрации IgG. В отличие от IgM антител, IgG антитела способны проникать через плаценту из крови матери в кровь ребёнка. Такие пассивно переданные антитела могут выявляться в течение нескольких месяцев после рождения в крови ребёнка, обеспечивая некоторую защиту от вируса, не свидетельствуя о перенесённой инфекции. Поскольку респираторный синцитиальный вирус распространён повсеместно, и часто наблюдаются случаи первичного и повторного инфицирования этим возбудителем, большинство людей уже в раннем детском возрасте имеют в крови приобретённые в результате активного иммунного ответа организма на возбудитель IgG антитела. Поэтому выявление в однократно взятой пробе крови антител класса IgG к вирусу не является признаком острой инфекции. Подтвердить то, что RSV является возбудителем острого заболевания, позволяет рост титров IgG в 3 - 4 раза в парных сыворотках, взятых с интервалом в 10 - 14 дней.

Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи. С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться здесь >>.

Антитела (другое название – иммуноглобулины) – это специальные белки, которые вырабатываются и (или) продуцируются плазматическими клетками.

Что делают иммуноглобулины?

Иммуноглобулины образуются в ответ на попадание в организм чужеродных бактерий или вирусов. Они взаимодействуют с антигеном (специфическим участком вредителя) и обезвреживают его.

Таким образом наш иммунитет стоит на страже нашего здоровья.

Какие классы иммуноглобулинов существует?

Выделяют 5 классов иммуноглобулинов, некоторые из которых содержат подклассы.

IgA – секретируются на поверхности эпителия и присутствуют в слюне, слезе, на поверхности слизистых.

IgM – обнаруживается при первичном попадании антигена. Указывает на острый инфекционный процесс у человека.

IgG – основной класс иммуноглобулинов, защищающий от вирусов, бактерий, токсинов.

IgD – обнаруживают на поверхности развивающихся B-лимфоцитов. Функция не установлена.

IgE – секретируются при аллергической реакции немедленного типа.

Методы определения антител к коронавирусу

Существуют два метода определения иммуноглобулинов к коронавирусу в организме человека – ИФА и ИХА.

Иммуннохроматографический анализ – это качественный метод определения иммуноглобулинов классов М и G.

Качественный метод – это метод, позволяющий только определить наличие антител в организме. Иными словами, ответить на вопрос – есть они или нет.

Иммуноферментный анализ – это количественный метод определения иммуноглобулинов.

Количественный метол – не просто говорит о наличии антител, но и показывает их количество в единице объема крови.

Для анализов проводят забор венозной крови, следовательно, подготовка к процедуре стандартная:

Проводить исследование на пустой желудок (не есть за 8 часов до процедуры).

Воздержаться от питья воды за час до забора крови.

Для курильщиков – не курить за 2 часа до процедуры.

Что выбрать – качественный или полуколичественный анализ?

Для чего проводится качественный и количественный анализ?

Качественный анализ позволяет ответ на 2 вопроса:

Как давно болел?

Полуколичественный тест позволяет ответить на эти вопросы, а также определить количество иммуноглобулинов в организме.

Для чего определять количество иммуноглобулинов?

Определение количества антител позволяет определить, сформирован ли долговременный иммунитет. Именно он защищает на организм от повторного заболевания коронавирусом.

Показания к проведению исследования

Показаниями к проведению анализа является:

Наличие симптомов общего недомогания. В этом случае тестирование проводится для подтверждения диагноза.

Выявление противовирусных антител ( AT ) в сыворотке крови. РТГА. РСК. РИФ. Иммуносорбционные методы выявления противовирусных антител.

Более простой и доступный подход — выявление противовирусных антител ( AT ) в сыворотке. Образцы крови необходимо отбирать дважды: немедленно после появления клинических признаков и через 2~3 нед. Чрезвычайно важно исследовать именно два образца сыворотки. Результаты однократного исследования нельзя считать окончательными из-за невозможности связать появление AT с настоящим случаем. Вполне возможно, что эти AT циркулируют после предшествующей инфекции. В подобной ситуации роль исследования сыворотки, полученной в период рекон-валесценции, трудно переоценить. На наличие заболевания в период отбора первой пробы указывает не менее чем четырёхкратное увеличение титра AT, выявленное при исследовании второй пробы.

Перечисленные ниже методы не позволяют дифференцировать антитела ( AT ), образующиеся во время болезни и циркулирующие после выздоровления (продолжительность этого периода вариабельна для различных инфекций). Поскольку для адекватной диагностики необходимо подтвердить достоверное увеличение титров AT в двух пробах, то первую пробу исследуют в острой фазе, а вторую — в период выздоровления (через 2-3 нед). Полученные результаты носят ретроспективный характер и более пригодны для проведения эпидемиологических обследований.

РТГА выявляет AT, синтезируемые против гемагглютининов вирусов (например, вируса гриппа). Метод позволяет легко выявлять подобные антитела ( AT ) в сыворотке больного.

РСК — основной метод серодиагностики вирусных инфекций (среди доступных). Реакция выявляет комплементсвязывающие IgM и IgG, но не дифференцирует их; для оптимизации получаемых результатов постановка реакции требует определённых навыков персонала.

РИФ. При возможности получить биоптат инфицированной ткани и доступности коммерческих наборов AT, меченных флюоресцеином, диагноз может подтвердить реакция прямой иммунофлюоресценции. Постановка реакции включает инкубацию исследуемой ткани с AT, их последующее удаление и люминесцентную микроскопию образца.

Иммуносорбционные методы выявления противовирусных антител

Иммуносорбционные методы (например, ИФА и РИА) более информативны, поскольку выявляют IgM и IgG по отдельности, что позволяет делать определённые выводы о динамике инфекционного процесса или состоянии реконвалесценции. Для выявления AT известный Аг сорбируют на твёрдом субстрате (например, на стенках пробирок, пластиковых микропланшетах, чашках Петри) и вносят различные разведения сыворотки пациента. После соответствующей инкубации несвязавшиеся AT удаляют, вносят антисыворотку к Ig человека, меченную ферментом, повторяют процедуру инкубирования и отмывания несвязанных AT и вносят какой-либо хромогенный субстрат (чувствительный к действию фермента). Поскольку изменение окраски пропорционально содержанию специфических AT, то вполне возможно определение их титра спектрофотометрическим способом. В диагностике ВИЧ-инфекции наи- большее распространение нашёл метод иммуноблотннга.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Количественное определение вирусов. Определение инфекционности вирусов. Выявление вирусных антигенов ( Аг ). Выявление вирусных частиц. Морфология вирусов.

Количественное определение вирусов проводят двумя путями — изучением инфекционности и количественным определением вирусных Аг. Определение титра инфекционности вирусов в значительной степени зависит от метода количественного исследования; у бактериофагов отношение инфекционность-частица составляет приблизительно 1 (то есть каждая вирусная частица способна вызвать инфекцию), для вирусов животных данное отношение составляет 1:10 (иногда выше из-за вирусингибирующего действия факторов резистентности).

Определение инфекционности вирусов

Выявление вирусных антигенов ( Аг ). Выявление вирусных частиц

Наиболее распространённый метод - реакция количественной гемагглютинации. Метод основан на способности вирусов сорбироваться на поверхности эритроцитов животных и человека. Количественную электронную микроскопию применяют для подсчёта общего числа вирусных (но не инфекционных) частиц в исследуемом объекте (например, культуральной жидкости).

Морфология вирусов

Изучение морфологии вирусов возможно лишь при помощи электронной микроскопии, однако чаще всего этот метод недоступен из-за отсутствия столь дорогого и сложного прибора. Более того, многие возбудители морфологически сходны, что снижает ценность этого метода. Наиболее распространён метод микроскопии содержимого везикул и тканевых экстрактов, обработанных красителями (негативное контрастирование), с последующим подсчётом ДНК- или РНК-содержащих вирусов. Электронная микроскопия позволяет быстро обнаружить орто- и парамиксовирусы в отделяемом дыхательных путей, герпесвирусы в жидкости везикул и рота-вирусы в фекалиях.

Лабораторные методы при диагностике вирусных инфекций включают:
• выделение и идентификацию возбудителя;
• обнаружение и определение титров противовирусных AT;
• обнаружение Аг вирусов в образцах исследуемого материала;
• микроскопическое исследование препаратов исследуемого материала.

Забор материала для выявления вирусов

При заборе материала для исследований необходимо выполнять следующие условия:
• образцы следует отбирать как можно раньше либо с учётом ритма циркуляции возбудителя;
• материал следует отбирать в объёме, достаточном для всего комплекса исследований;
• образцы следует доставлять в лабораторию незамедлительно (!), при относительно кратковременной транспортировке (не более 5 сут) образцы сохраняют на льду, при более длительной — при температуре -50 С.

Выделение и культивирование вирусов

Выделение и идентификация возбудителя — золотой стандарт в диагностике вирусных инфекций.

Культуры клеток для выявления вирусов

Вирусы размножаются только в живых клетках, и выделение возбудителя в заражённой культуре клеток — один из основных методов диагностики вирусных инфекций. Поскольку большинство патогенных вирусов отличает тканевая и типовая специфичность, то почти к каждому вирусу можно подобрать соответствующие клеточные или тканевые чультуры, а также создать стандартные условия культивирования (наличие клеток одного типа). Размножение вируса обеспечивают чувствительные (пермиссивные) клетки. Поэтому при выделении неизвестного возбудителя проводят одномоментное заражение 3~4 культур клеток, предполагая, что одна из них может оказаться пермиссивной. Культуры клеток получают диспергированием соответствующих органов и тканей, но чаще используют эмбриональные ткани (человека и животных) либо трансформированные опухолевые клетки. При помещении на соответствующую плоскую поверхность клеточные культуры обычно растут в виде монослоя. Первично-трипсинизированные культуры. Суспензии клеток получают гомогенизированием соответствующих тканей, предварительно обработанных трипсином. Культуры часто представлены клетками смешанного типа и не подлежат повторному культивированию. Жизнеспособность таких культур составляет 2-3 нед.

Полуперевиваемые линии клеток представлены диплоидными клетками человека и животных. Культуры ограниченно пригодны к повторному диспергированию и росту (как правило, не более 20-30 пересевов), сохраняя при этом жизнеспособность и не подвергаясь спонтанной трансформации.

Перевиваемые линии клеток (гетероплоидные культуры) представлены клетками, подвергнутыми длительному культивированию и спонтанным трансформациям. Культуры способны к многократному диспергированию и перевиванию. Работа с ними менее трудоёмка по сравнению с приготовлениями первичных культур; перевиваемые клетки относительно одинаковы по своей морфологии и стабильны по свойствам.

Читайте также: